二维凝胶电泳和质谱技术剖析
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蛋白质分离首选技术：
双向凝胶电泳技术
目前唯一能分离上千种蛋白的技术
人肾脏细胞
细胞系K562
小鼠肝细胞
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主要内容
1. 双向凝胶电泳的原理 2. 双向凝胶电泳的流程 3. 双向凝胶电泳的局限性和进展 4. 双向凝胶电泳的应用 5. 质谱的定义 6. 离子源（ESI和MADLI） 7. 质量分析器（四级杆，离子阱，TOF,FT-ICR) 8. 质谱图的意义和解析
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双向凝胶电泳和质谱技术
刘东 TEL: 68771960 E-mail: liudong@163.com 全军免疫学研究所
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导课
Human Proteome Organization,HUPO
蛋白质组：阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式， 其内容包括鉴定蛋白质的存在方式（修饰形式），研究其结 构、功能、定量和相互作用等
CTCTCTOHOHOHLLIILRLIRLRLDEDEDEGGMMGMEEEIIILOLOLOIIIFFTTFTABABABRARARAYSYSYSIIIMCMMCC EMEMEMDDDEEEIIDIDDCCCIIAIAACCCLLLAAAULLULUNSNNSSCICCIVIIVIVIEEEEEENRNNRRSCSCISCETIEIESTTYSSYY
1.1.1电泳的基本知识
• 电泳的定义：带电粒子在直流电场中向着所带电 性相反的电极移动的现象。
• 影响电泳的因素： 1． 带电粒子的带电状态（电量和电性）。 2． 带电粒子的分子量大小和分子形状。 3． 电场强度。 4． 缓冲液的PH 值，组成成分及离子强度。 5． 支持介质的吸附和电渗作用。
1.1.2 蛋白质电泳的基本知识 CTCTCTOHOHOHLLIILRLIRLRLDEDEDEGGMMGMEEEIIILOLOLOIIIFFTTFTABABABRARARAYSYSYSIIIMCMMCCEMEMEMDDDEEEIIDIDDCCCIIAIAACCCLLLAAAULLULUNSNNSSCICCIVIIVIVIEEEEEENRNNRRSCSCISCETIEIESTTYSSYY
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双向电泳研究流程图 CTCTCTOHOHOHLLIILRLIRLRLDEDEDEGGMMGMEEEIIILOLOLOIIIFFTTFTABABABRARARAYSYSYSIIIMCMMCCEMEMEMDDDEEEIIDIDDCCCIIAIAACCCLLLAAAULLULUNSNNSSCICCIVIIVIVIEEEEEENRNNRRSCSCISCETIEIESTTYSSYY
蛋白质组研究策略
组织、细胞等
蛋白质分离
双向凝胶电泳分离 色谱分离
切取蛋白条带或蛋白点 蛋白混合物
酶解
多肽混合物 MS/MS 数据库比对
质谱鉴定
蛋白质1 蛋白质2 蛋白质3 。。。
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Extraction of protein
Isoelectric focusing (1D gel)
Ettan™ IPGphor™
SDS-PAGE
MALDI-TOF
staining
Spot excision; Trypsin digestion
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双向凝胶电泳技术
目前唯一能分离上千种蛋白的技术
人肾脏细胞
细胞系K562
小鼠肝细胞
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主要内容
1. 双向凝胶电泳的原理 2. 双向凝胶电泳的流程 3. 双向凝胶电泳的局限性和进展 4. 双向凝胶电泳的应用 5. 质谱的定义 6. 离子源（ESI和MADLI） 7. 质量分析器（四级杆，离子阱，TOF,FT-ICR) 8. 质谱图的意义和解析
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双向凝胶电泳和质谱技术
刘东 TEL: 68771960 E-mail: liudong@163.com 全军免疫学研究所
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导课
Human Proteome Organization,HUPO
蛋白质组：阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式， 其内容包括鉴定蛋白质的存在方式（修饰形式），研究其结 构、功能、定量和相互作用等
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1.1.1电泳的基本知识
• 电泳的定义：带电粒子在直流电场中向着所带电 性相反的电极移动的现象。
• 影响电泳的因素： 1． 带电粒子的带电状态（电量和电性）。 2． 带电粒子的分子量大小和分子形状。 3． 电场强度。 4． 缓冲液的PH 值，组成成分及离子强度。 5． 支持介质的吸附和电渗作用。
1.1.2 蛋白质电泳的基本知识 CTCTCTOHOHOHLLIILRLIRLRLDEDEDEGGMMGMEEEIIILOLOLOIIIFFTTFTABABABRARARAYSYSYSIIIMCMMCCEMEMEMDDDEEEIIDIDDCCCIIAIAACCCLLLAAAULLULUNSNNSSCICCIVIIVIVIEEEEEENRNNRRSCSCISCETIEIESTTYSSYY
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蛋白质组研究策略
组织、细胞等
蛋白质分离
双向凝胶电泳分离 色谱分离
切取蛋白条带或蛋白点 蛋白混合物
酶解
多肽混合物 MS/MS 数据库比对
质谱鉴定
蛋白质1 蛋白质2 蛋白质3 。。。
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Extraction of protein
Isoelectric focusing (1D gel)
Ettan™ IPGphor™
SDS-PAGE
MALDI-TOF
staining
Spot excision; Trypsin digestion
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