布鲁菌外膜蛋白的糖基化及免疫效果检测

ｎｏ ｏ ｃ ｌｍｅ ｒ ． Ｔｈｉ ｔ ｄｙ ａ ｅ ｔ ｙ ｏｒ ｅ ｅ ｏ ｌ ｇｉａ ｍｏ ｙ ｓ ｓ ｕ ｐ ｖ ｓ ｈｅ ｗａ ｆ ｄ ｖ ｌ ｐｍｅ ｔ ｎ ｐ ｏ ｏ ｉ ｆ ｅ Ｂｒ ｅ ｌ ｔ ｒ ｅ ｅ ｎ ａ ｄ ｒ ｍ ｔｏｎ ｏ ｎ ｗ ｕｃ ｌａ ａ ｇ ｔ ｄ
Ｂｕｒ ｅ ｌ ｕ ｅ ｅ ｂ ａ ｏ ｅ ｎ ｃ ｌａ ｏ ｔ ｒ ｍ ｍ ｒ ｎｅ ｐｒ ｔ ｉ ｓ
ＦＵ ｉ ｇ ｌ，ＤＯＮＧ ｉ ｇｍ ｅ ，Ｗ ＡＮＧ ｏ Ｊｎ —ｉ Ｂｎ — ｉ Ｒｕ ，Ｗ ＡＮＧ ｉ— ｉ Ｊａ ｘｎ
（ ｌ ｇ ｆＩ ｆ ｒ ｔ ｎ Ａｎｍａ ｃｅ ｃ ＆ Ｔｅ ｈ ｏｏ ｙ，Ｉ Ｃｏｌ ｅｏ ｎｏ ｍａｉ ｉ ｌＳ ｉｎ ｅ ｅ ｏ ｃ ｎ ｌｇ ｍｍｕ ｏｏ ｙ Ｌ ｂ ｒ ｔｒ ， ｎ ｌｇ ａ ｏ ａｏ ｙ
１ 材 料 与 方 法
主产 生 的免疫 应答 以细 胞免 疫 为主 ， 体液 免疫 为辅 。
收稿 日期 ： ０ ０ ０ — ２ ２ １－５１
基金项 目： 国家 “ 十一 五” 技 支 撑 计 划 项 目 （０ ６ ＡＤ０ Ａ１ ） 科 ２０Ｂ ４ ０； 河 北 省“ 一 五 ” 技 支 撑 项 目（ ５ ４ ４ １ ； 北 省 “ 万 吨 奶 工 十 科 ０ ２ ０ ２ Ｄ） 河 千
ｇ ｙ ｏ ｙ ａ ｉｎ ｍｏ ｉｉｄ ｌｃ ｓ ｌｔ ｄｆｅ ｗｉ — ｍａ ｎ ｐ ｒ ｎ ｓ ｌ ｈ ｎ ｌ ｏ ｈｏ ｙ ｎ ｔ ， ｔ ｅ ｅ ｌｉ ｅ ｗｉｈ ａ ｊ ｖ ｎ ． ｏ ｔ ｈ Ｄ－ ｎ ｏ ｙ ａ ｏ ｙ— ｅ ｙ ｉ ｔ ｉｃ ａ ａｅ ｈ ｎ ｍｕ ｓｆ ｄ ｐ ｓ ｉ ｔ ｄｕ ａ ｔ Ｂａ ｅ ｎ ｃ ｍｐｅ ｅｙｒ ｎ ｏ ｚ ｄｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ，Ｂ ｓ ｄ ｏ ｏ ｌｔ ｌ ａ ｄ ｍｉｅ ｘ ｅ ｉ ｎ ｓ ＡＬＢ／ ｃ ｒ ｎｅ ｔｄ， ｎ ｈ ｎｓ ｍｐｅ ｆｓ ｒ ｍ ｒ ｃｍｉｅｗｅｅｉｊｃｅ ａ ｄｔ ｅ ａ ｌｓｏ ｅ ｕ ｗｅ ｅ
Ｃ ｉｅｅＪ ｕｎ ｌ ｆＶｅｅｉａｙＭｅ ｉｎ ｈｎ ｓ ｏ ｒａ ｏ ｔｒ ｒ ｄｃ ｅ ｎ ｉ
中 国兽 医 杂 志 ２ １ 年 （ ４ ０ １ 第 ７卷 ） ４期 第
布 鲁 菌 外 膜 蛋 白 的糖 基 化 及 免 疫 效 果 检 测
付 景 丽 ，董 炳梅 ，王 若 ，王 家鑫
ａ ｔｂ ｄ Ｓｎ ｔｓｇ ｉｉａ ｔ（ ｎ ｉ ｏ ｙ ｉ ｏ ｉ ｎ ｆ ｎ Ｐ＞ ０ ０ ） ｃ ． ５ ．Ｅｘ ｅ ｉ ｎ ａ ａ ｃｎ ｎ ｕ ｅ ｅ ｌ ｌ ｒｉ ｍ ｕ ｅｒ ｓ ｏ ｓ ｔ ｍｍ ｕ ｐ ｒｍｅ ｔ ｌ ｃ ｉ ｅ ｉ ｄ ｃ ｄ ｃ ｌ ａ ｖ ｕ ｍ ｎ ｅ ｐ ｎ ｅ ｗｉｈ ｉ －
（ 北农业大学动物科技学 院 免疫学 实验室 ， 北 保定 ０１０） 河 河 ７０ ０ 摘 要 ： 研 制 安全 、 效 、 型 靶 向化 布 鲁 菌 外 膜 蛋 白疫 苗 ， 用 去 污 剂 连 续 抽 提 与 电 洗 脱 法 分 离 纯 化 出 布 鲁 菌 外 膜 蛋 为 有 新 采
白 ， 进 行 ａＩ 甘 露 吡 喃异 硫 氰 酸苯 酯糖 基 修 饰 、 剂 乳 化 。依 据 统计 学 中 完 全 随 机 实 验 设 计 试 验 ， 疫 Ｂ Ｌ ／ 小 鼠 ， 集 并 —） ＿ 佐 免 Ａ． ｃ Ｂ 收
ｃ ｌｅ ｔ ｄ ａ ｄｉｆ ｒ ｎｔ ｉ ｅ ｆ ｒ ｈ ｄｅ ｅ ｍｉ ｔｏｎ ｏ ｌ ｃ ｅ ｔ ｆｅ ｅ ｔｍ ｓ ｏ ｔ ｅ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｏｆ ｏｔ Ｉ ｂ ｈ ｇＧ ａ Ｉ ｎｄ ＦＮ一 ｌｖ ｌ ｗｉｈ ｅ ｅｓ ｔ ＥＬＩ ＳＡ． Ｒｅ ｕ ｔ ｓ ｌｓ ｓ ｏｗｅ ｈａ ｈｅ ｔ ｒ ｅ ｏｔ ｉ ｆ３７ ５ ｋＤ ｎ ． ｈ ｄ ｔ ｔｔ ａ ｇ ｔｐｒ ｅ ｎｓ ｏ ． ａ ｄ ４７ ２ ｋＤ ｒ ｓ ａ ｅ ｎｄ ｇ ｙｃ ｓ ｌ ｔ ｄ ｓ ｃ ｅ ｓ ｕｌｙ．Ａｆ ｅ ａ ｅ ｉｏｌ ｔ ｄ ａ ｌ ｏ ｙ ａ ｅ ｕ ｃ ｓ ｆ ｌ ｔｒ
Ｐ ｏ Ｐ ｒ ｒ ｔｏ ｃ ａ ｅ１ ． ｒ． ｕ ｅｐｏ ｅｍｉ Ｇｒｄ ２ ５／ 自 Ａｍｒｓｏ ｓ ９ ６购 ｅｃ ， ｏＤ一 露 吡喃异 硫氰 酸 苯酯 、 ｉ ｎ 一０ 、 ＭＳ ｃ 甘 — Ｔｒ ｏ Ｘ １ ０ Ｄ ｔ Ｏ、 ４ 甲基 吗啉 购 自 Ｓｇ 一 ｉｍａ公 司 ， ， ， ０ １ 一 甲基 十 ２ ６ １ ，４四 五烷购 自 Ａｃｏ ， ｙ ｏｙ ｈｃ ｅ ｇ ｈｔ 、 ｒ ｓ Ｌ ｓ ｚｍｅＣ ｉ ｎＥ ｇＷ ｉ 两 ｋ ｅ 性 洗 涤 剂 ３１ —４购 自 Ｃ ｌｉｃ ｅ Ｒ ＭＩ１ ４ ａｂｏ ｈ ｍ， Ｐ 一 ６ ０购 自
势 ， 差异不显著 （ ＞Ｏ０） 但 Ｐ ． ５ 。表 明 试 验 用 疫 苗 能 激 发 机 体 的 细 胞 免 疫 应 答 ， 产 生 了免 疫 记 忆 。本 研 究 为 研 制 布 鲁 菌 新 型 且
靶 向 化 疫 苗 的 研 发 和 推 广 提 供 了研 究 依 据 。 关键词 ： 布鲁 菌 Ｉ 蛋 白 ； 基 化 ； 剂 ； 苗 夕膜 糖 佐 疫
ｉ ｍｍｕ ｉｉｇ ｍｉｅｗｉｈｎ ｎ ｐ ｒｉｌｓａ ｊ ｖ ｎ ｍｕ ｓｆ ｄｖ ｃ ｉ ｅ ｈ ｅ ｅ ｆＩ Ｎ一 ｓｉ ｃｅ ｓ ｄｇ ａ ｕ ｌ ｎ ｚｎ ｃ ｔ ａ ｏ ａ ｔｃｅ ｄ ｕ ａ ｔｅ ｌｉ ｅ ａ ｃｎ ，ｔ ｅｌｖ ｌ Ｆ ７ｗａ ｒ ａ ｅ ｒ ｄ ａｌ ｉ ｏ ｎ ｙ
ｖ ｃｉ ． ａ ｃｎｅ
Ｋｅ ｒ ｓ Ｂｒ ｃ ｌａ； ｕ ｅ ｅ ｂ ａ ｅ ｐ ｏ ｅ ｎ ｌ ｃ ｓ ｌｔｏ ｙ ｗｏ ｄ ： ｕ ｅ ｌ ｏ ｔ ｒｍ ｍ ｒ ｎ ｒ ｔ ｉ ；ｇ ｙ ｏ ｙ ａ ｉ ｎ
Ｃｏ ｒｓ ｏ ｄｎ ｕ ｈ ｒ Ｗ ＡＮ ｉ— ｉ ｒ ｅｐ ｎ ｉ ｇａ ｔｏ ： Ｊａｘ ｎ
Ａｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌＵｎ ｖ ｒ ｉ ｆＨ ｅ ｅ ，Ｂ ｏ ｉ ｇ ０ １ ０ ｒｃ ｌ ａ ｉｅ ｓｔ ｏ ｂ ｉ ａ ｄｎ ７ ０ ０，Ｃｈ ｎ ） ｕ ｙ ｉａ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｉ ｒ ｅ ｏ ｄ ｓｇ ａ ｅ ｅ ｆ ｃ ｉ ｅ ａ ｄ ｎ ｖ １ｔ ｒ ｅ ｅ ｕ ｅ ｌ ｕ ｅ ｅ ｂ ａ ｅ ｐ ｏ ｅｎ ｖ ｃ ｓｒ ｃ ：ｎ ｏ ｄ ｒ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ｆ ， ｆ ｅ ｔｖ ｎ ｏ ｅ ａ ｇ ｔ ｄ Ｂｒ ｃ ｌ ａ ｏ ｔ ｒ ｍ ｍ ｒ ｎ ｒ ｔ ｉ ａ — ｃ ｎ ，ｃ ｎ ｅ ｕ ｉ ｅ ｅ ｔａ ｔ ｎ ｗｉｈ ｅ ａ ｉａ ｏ ｎ ｌｃ ｒｃ ｅ ｕ ｉ ｎ ｗａ ｍｐ ｏ ｅ ｏ ｉ ｏ ａ ｅ ｔ ｅ ｅ ｐ ｏ ｅｎ ， ｉ ｅ ｏ ｓ ｃ ｔ ｘ ｒ ｃ ｉ ｔ ｒ ｄ ｃ ｔ ｒ ａ ｄ ｅ ｅ ｔ ｉ ｌ ｔｏ ｓ ｅ ｌ ｙ ｄ ｔ ｓ ｌ ｔ ｈ ｓ ｒ ｔ ｉ ｓ ｖ ｏ
中 图分 类 号 ：８ ２ ６ ４ ￥ ５．１
文献标识码 ： Ａ
文 章 编 号 ：５ ９６ ０ （ ０ １ ０—０ ５０ ０ ２ —０５ ２ １ ）４０ １—３
Ｉ ｍｍｕ ｏ ｓａ ｏ ａｇ ｔ ｇｖ ｃｉｅｃ ｎ ａｅ ｔ ｌｃ ｓｌｔ ｎｏ ｎ ａｓｙｆｒｔｒ ｅｉ ａｃｎ ｏ ｊ ｇ ｔｄｗｉ ｇｙｏｙａｉ ｆ ｎ ｕ ｈ ｏ
不 同 时 间 点 血 液 样 品 ， ＬＳ 法 检 测 血 清 中 ＩＧ 和 Ｉ Ｎ ７含 量 。结 果 显 示 分 离 纯 化 出 ３ ． Ｄ与 ４ ． Ｄ 的 目的 蛋 白 并 成 Ｅ ＩＡ ｇ Ｆ 一 ７ ５ｋ ７ ２ｋ 功 糖基 化 修 饰 ； 米 颗 粒佐 剂 乳 化 后 的 试 验 用 疫 苗 免 疫 小 鼠 ， 清 ＩＮ 水 平 呈 显 著 升 高 趋 势 （ 纳 血 Ｆ一 Ｐ＜ Ｏ ０ ） 抗 体 水 平 略 显 优 ．５；
１ １ 材料 ．
Ｂ Ｂ ｃ 鼠（ ＡＬ ／ 小 体重 ２ ￣２ ， 性 ， ０ ５ｇ 雄 合
１ ６
中 国 兽 医 杂 志 ２ １ 年 （ ４ 卷 ） ４期 ０１ 第 ７ 第
Ｃ ｉｅｅＪｕｎ ｌ ｆ ｔｒ ａｙＭ ｅｉｎ ｈｎ ｓ ｏ ｒａ ｏ ｅｉ ｒ ｄｃ ｅ Ｖｅ ｎ ｉ
格证 编 号 ９ ４ ７ ） 自河北 省 实 验 动物 中心 ， 剂 ： ０ １３ 购 佐 Ｍｏ ｔｎｄ ＭＳ２ １ ｎ ａ ｉｅＩ ５ Ｃ ＶＧ 由法 国赛 比克公 司惠 赠 ，
ｉ ｅ ｕ （ ｎ ｓ ｒ ｍ Ｐ￣ ０ ０ ） Ｅｘ ｅ ｉ ｅ ｔ ｌｖ ｃ ｉｅ ｈ ｓａ ｌ ｔｅ ａ ｖ ｎ ａ ｅ ｉ ｎ ｉｏ ｙ ｌｖ ｌ ｕ ｈ ｉｆｒ ｎ ｅ ｏ ． ５． ｐ ｒ ｎ ａ ａ ｃｎ ａ ｉ ｌ ｄ ａ ｔ ｇ ｎ ａ ｔｂ ｄ ｅ ｅ ，ｂ ｔｔ ｅ ｄｆｅｅ ｃ ｆ ｍ ｔ
程 ” 撑 技 术 研 究 （７ ２ １６ ） 支 ０ ２ ７ ４ ２ 作 者 简 介 ： 景 丽 （９ ０） 女 ， 士 生 ， 要 从 事 抗 感 染 免 疫 研 付 １ ８一 ， 硕 主
究 ， — ｉ ｊ ｇｉ ＠ ｙｈ ｏ ｃ Ｅ ｍａｌ ｉ ｌｕ ａ ｏ． ｎ ：ｎ ｆ 通讯作者 ： 家鑫 ，— ｉ 王 Ｅ ｍａｌ ：ｗａｇｉ ｉ６ ＠ ｙ ｈ ｏ ｃｒ ｎ ｊ ｘｎ ８ ａ ａ ｏ ．ｏ ｎ
只， 其他 组 均 为 １ ｇ 只 ；免 疫 次 数 ： 次 ； 疫 间 ５ ／ 两 免 隔 为两 周 。 １ ５ １ 试 验取 材 （ ） 免 后 ４ ７ １ 、 ４ ｄ 二 免 ．． １一 、 、 Ｏ １ ，
Ｉ ｖｔｏ ｅ Ｃ ｒ ｏ ａｉ ｎ， ｏ ｓ Ｆ ７ Ｑｕ ｎ ｉ ｉｅ ｎ ｉｒ ｇ ｎ ｏ ｐ ｒ ｔ ｏ Ｍ ｕ ｅ Ｉ Ｎ一 ａ ｔｋ ｎ
１ ４ 蛋 白抗 原 与佐 剂乳化 成 试验 用疫 苗 。 ．
１ ５ 免 疫接 种试 验 采 取 完全 随机 资料 的方差 分 ． 析 比 较 如 下 种 类 的 免 疫 效 果 ： Ｏ 只 ６ ８周 龄 ６ ～
布鲁 菌最 主 要毒力 特 征是 在吞 噬细胞 内生存 和
复 制 ，这 是 布 鲁 菌 逃 避 宿 主 免 疫 监 视 的 主 要 原 因Ｅ 。 目前 ， 布鲁 菌病 的防控 主要是 接种 疫 苗 ， ｌ ？ 对 宿
然而， 目前使 用 的疫苗 大都 为布 鲁菌减 毒 活疫 苗＿ ， ２ ］ 在 实 际应用 中活 疫 苗存 在 残 余 毒力 强 、 尔 回复 毒 偶 力 等危 险 。为避 免传 统 减 毒 疫 苗 的缺 陷 ， 据 布 鲁 根 菌特 殊 的致 病 机 制 与 机 体 对 布 鲁 菌 的免 疫 应 答 机 制， 我们 寻找 了布 鲁杆 菌特异 性外 膜蛋 白， 对其 免 并 疫效 果做 了相 关研 究 。为研 制安 全 、 效 、 型靶 化 有 新 布鲁 菌外 膜蛋 白（ ＭＰ ） 苗提供 研究 基础 。 Ｏ ｓ疫
Ｂ Ｂ ｃ 鼠 随 机 分 成 ５组 ： 组 、 ＡＬ ／ 小 Ａ Ｂ组 、 组 、 Ｃ Ｄ
组、 Ｅ组 ， 组 １ 每 ２只 ， 分别 接 种 ： 化蛋 白质 、 基 化 纯 糖
蛋 白质 、 验用疫 苗 、 鲁菌 病 活 疫 苗 （ 、 Ｂ ； 试 布 Ｓ ） Ｐ Ｓ 接

种 途径 ： 下 注射 ； 种 剂 量 ：。 苗 组 ３亿 Ｃ Ｕ／ 皮 接 Ｓ疫 Ｆ