布鲁菌外膜蛋白的糖基化及免疫效果检测
一种人与家畜体内布鲁氏菌的检测方法[发明专利]
![一种人与家畜体内布鲁氏菌的检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1cc09ae1eff9aef8951e06db.png)
专利名称：一种人与家畜体内布鲁氏菌的检测方法专利类型：发明专利
发明人：杜志强,王建英,张雪峰
申请号：CN201310403116.5
申请日：20130906
公开号：CN103675289A
公开日：
20140326
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种人与家畜体内布鲁氏菌的检测方法，属于免疫学的技术领域。
本发明利用重组布鲁氏菌Omp19外膜蛋白作为抗原蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过免疫印迹试验进行人或者家畜动物血清的免疫识别，根据免疫印迹的结果可以直接判断人与家畜体内是否存在布鲁氏菌。
本发明可以作为检测人或者家畜体内是否存在布鲁氏菌的重要方法，在我国广大农牧业养殖区的布鲁氏菌病的快速、准确检测方面有较大的应用空间。
申请人：内蒙古科技大学
地址：014010 内蒙古自治区包头市昆区阿尔丁大街7号
国籍：CN
代理机构：包头市专利事务所
代理人：庄英菊
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布鲁氏菌主要外膜蛋白特征及其应用研究进展
布鲁氏菌主要外膜蛋白特征及其应用研究进展
王锐;王占黎;丁海涛;邹昊
【期刊名称】《包头医学院学报》
【年(卷),期】2022(38)1
【摘要】布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病。
外膜蛋白是布鲁氏菌重要的毒力因子,同时具有较好的免疫原性,能够刺激机体产生较强的免疫力,可以作为布鲁氏菌病诊断的抗原和布鲁氏菌病亚单位疫苗的候选物。
本文对目前几种重要的布鲁氏菌外膜蛋白相关研究进展进行综述,以期进一步了解布鲁氏菌外膜蛋白的特性,为研制布鲁氏菌病的诊断试剂及相关疫苗提供参考价值。
【总页数】5页(P92-96)
【作者】王锐;王占黎;丁海涛;邹昊
【作者单位】内蒙古医科大学;内蒙古自治区疾病相关生物标志物重点实验室;内蒙古自治区人民医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】S85
【相关文献】
1.布鲁氏菌外膜蛋白的研究进展
2.犬种布鲁氏菌外膜蛋白的特性及宿主牦牛及其外膜蛋白的影响
3.基于布鲁氏菌外膜蛋白OMP28的ELISA检测试剂盒的研制与应用
4.布鲁氏菌外膜蛋白的研究——Ⅲ.牛种、羊种布鲁氏菌非典型株外膜蛋白SDS—PAGE图谱的特点
5.布鲁氏菌外膜蛋白的研究——Ⅱ.牛、羊、猪三种布鲁氏菌光滑型菌株外膜蛋白SDS-PAGE图谱的比较
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布鲁氏菌病PCR检测的临床意义
布鲁氏菌病PCR检测的临床意义姚馨月;郑文艳【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2016(048)002【总页数】4页(P189-192)【关键词】布鲁氏菌;PCR;诊断【作者】姚馨月;郑文艳【作者单位】内蒙古医科大学,内蒙古呼和浩特010059;中国人民解放军第253医院感染科,内蒙古呼和浩特010010【正文语种】中文【中图分类】R378.5布鲁氏菌病(brucellosis,简称布病)是由布鲁氏菌感染引起的人畜共患传染-变态反应性疾病[1]。
世界动物卫生组织(OIE)将其列为重要传染病，属于《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并列为《家畜家禽防疫条例实施细则》中二类传染病中之首[2～4]。
布病在我国的整体流行趋势呈现出老疫区死灰复燃，新疫区范围扩大[5]。
布鲁氏菌病潜伏期为1～3周，初期症状类似重感冒，如发热、关节疼痛、疲劳、乏力、多汗、肝脾肿大等症状。
临床症状极不典型，在诊疗过程中易造成误诊，急性期布病如不及时诊断极易发展为慢性期。
慢性布病患者往往都会伴有不同程度的骨关节系统病变[6]。
本病的致命性并发症为中枢神经系统病变及心肌病变[7]。
所以布病的早期诊断，就变的尤为重要。
我国CDC布病诊断标准为：(1)流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物、布鲁菌培养物等，或生活在疫区的居民；(2)临床症状和体征排除其他疑似疾病；(3)实验室检查：病原分离、试管凝集实验、补体结合实验、抗人球蛋白阳性。
凡具备第(1)、(2)项和第(3)项中的任何一项检查阳性即可确诊为布病。
布病的实验室检查方式是确诊布病的关键证据。
诊断布病的“金标准”是病原分离，但病原分离要求在P3级生物实验室进行，对实验室操作人员有较高的专业技术要求，耗时长，最终的菌落形态不易辨认，且有明显的操作暴露危险，增大医源性感染的可能。
在基层不易推广。
培养的阳性率极低。
1.1 凝集实验SAT一直是各国用作诊断布病的常规血清学诊断方法，我国更是将其列为了诊断布病的法定检测方法[8]。
布鲁菌Irr蛋白的生物信息学分析、表达纯化以及ELISA方法的初步建立
·研究论文·摘 要：为建立一种检测布鲁菌抗体的间接ELISA 检测方法，本研究对Irr 蛋白进行生物信息学分析、原核表达，用纯化的重组蛋白Irr 作为包被抗原，建立了一种检测布鲁菌抗体的间接 ELISA 方法。
结果显示，重组蛋白Irr 包被量为0.25 μg ，5％脱脂奶粉封闭2 h ，一抗稀释浓度1∶500孵育2 h ，二抗稀释浓度1∶5000孵育2 h ，显色15 min 时建立的间接ELISA 方法条件最优，该方法的OD 450临界值为0.55，与凝集实验的符合率达到96.7%，同时具有较好的特异性和重复性。
以上结果表明，本研究基于Irr 蛋白建立了操作简单、特异性高、重复性好的血清学间接ELISA 检测方法，为布鲁菌病的诊断和流行病学调查提供了技术支持。
关键词：布鲁菌；Irr 蛋白；原核表达；生物信息学；间接ELISA 方法中图分类号：S852.61 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2023）04-0057-10Bioinformatics Analysis, Expression and Purifi cation of Brucella Irr Protein andPreliminary Establishment of ELISA MethodSUN Tianhao 1, ZHANG Qian 2,3, CAO Xudong 2, LI Nan 1, CHENG Kejian 1, ZHANG Jiangwei 1,WANG Zhen 1,2, CHEN Chuangfu 1,2(1. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Xinjiang 832000, China; 2. Co-Innovation Center for Zoonotic Infectious Diseases in the western region, Shihezi University, Xinjiang 832000, China; 3. Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science,Xinjiang 832000, China)布鲁菌Irr 蛋白的生物信息学分析、表达纯化以及ELISA 方法的初步建立孙天浩1，张 倩2,3，曹旭东2，李 楠1，程科建1，张江伟1，王 震1,2，陈创夫1,2（1.石河子大学动物科技学院，石河子832000；2.西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心，石河子832000；3.新疆农垦科学院，石河子832000）Abstract: In order to establish an indirect ELISA method for detecting Brucella antibodies, this study performed bioinformatics analysis and prokaryotic expression of Irr protein, and used purified recombinant protein Irr as the coating antigen to establish a method for detecting Brucella Indirect ELISA method for antibodies. The results showed that the coating quantity of recombinant protein Irr was 0.25 μg, 5% skimmed milk powder was blocked for 2 h, the primary antibody dilution concentration was 1:500 and incubated for 2 h, the secondary antibody dilution concentration was 1:5000 and incubated for 2 h, and the color development was 15 min. Optimally, the critical value of this method is OD 450 0.55, and the coincidence rate with the agglutination experiment reaches 96.7%, which also has good specifi city and repeatability. In summary, this study established a serological indirect ELISA detection method based on Irr protein with simple operation, high specifi city and good reproducibility, which provided technical support for the diagnosis and epidemiological investigation of brucellosis.Key words: Brucella ; Irr protein; prokaryotic expression; bioinformatics; ELISA收稿日期：2021-06-15基金项目：国家自然科学基金项目（31760020，U1803236）作者简介：孙天浩，男，硕士研究生，主要从事动物传染病诊断与防治研究；张倩，女，助理研究员，硕士，主要从事动物传染病诊断与防治研究通信作者：王震，E-mail：******************.cn；陈创夫，E-mail：**************Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2023,31(4):57-66· 58 ·中国动物传染病学报2023年8月布鲁菌病（Brucellosis），是由胞内生存的布鲁菌引起的一种严重危害人和家畜健康的人兽共患传染病，其可以引起人的波浪热，母畜流产以及公畜睾丸炎等症状，严重阻碍畜牧业的发展和公共卫生安全[1]。
布鲁氏菌的血清学检测方法
布鲁氏菌的血清学检测方法布鲁氏菌病（简称布病）是一种人兽共患的传染病，世界范围内流行。
布病给人造成了大量损失和痛苦。
近年由于布病的散发病例的增多，患者多无明确接触史，临床症状又不典型，因此其实验室检测至关重要。
目前布氏菌的实验室检测主要分三类：布氏菌细菌学检测、血清学检测和分子生物学检测。
细菌学检测周期长、阳性率低、感染风险高等特点，分子生物学对仪器、人员、技术的要求较高使得这两类技术在临床诊断应用上不是很普遍，应用最多的还是布氏菌的血清学检测。
本文现就布氏菌的血清学的检测进行如下综述。
布氏菌血清学方法可以分为：凝集法、补体结合法、酶联免疫吸附试验法、荧光偏振法、胶体金层析法等。
其中凝集法是通过特异性抗体与颗粒性抗原结合产生凝集的血清学实验，现应用最多的为虎红平板凝集实验、试管凝集实验、二巯基乙醇试管凝集实验、抗人球蛋白抗体实验等。
虎红平板凝集实验（RBPA）其抗原系用抗原性良好的牛种布氏菌株在适宜培养基上培养收获菌体, 经加热灭活, 离心后用虎红染料染色, 悬浮于乳酸缓冲液（PH3.6-3.7）制成。
它能抑制非特异性反应的IgM和增强特异性IgG 的活性, 其反应敏感稳定, 特异性优于试管凝集实验。
因此PBPA在很多国家推广使用, 是我国常规的诊断方法之一。
RBPA操作简单，不需要大型精密的仪器，适合基层医疗机构和检测点应用。
因有很高的灵敏性且能在短时间内完成，RBPA常用于初筛实验。
其有很高的准确性，特别是当检测1:4稀释血清标本阳性时其诊断的特异性更高【1】。
但RBPA也有局限性，纤维蛋白原可与虎红染料发生非特异性结合形成假阳性【2】，急性病人早期，体内产生的抗体以IgM为主，RBPA可能检测为阴性。
试管凝集实验(SAT)又称莱特试验是1897年由Wright发明，其方法简便，特异性强，可半定量检布鲁氏菌抗体滴度，因此有很高的诊断价值，至今在临床上广泛使用。
我国布病诊断标准中当SAT滴度≥1：100可确诊是活动性布病。
布鲁氏菌外膜蛋白OMP15.6表达及免疫反应原性测定
摘 要 ： 达羊布鲁 氏菌 １Ｍ 预测外膜蛋 白 Ｏ １ ．， 索其作 为诊 断抗原 的可 能性 。采用 降落 Ｐ Ｒ方法 ， 表 ６ ＭＰ ５ 探 ６ Ｃ 从 羊布鲁 氏菌 １Ｍ 基 因组 Ｄ Ａ 中扩 增 出 ４ ３ ｐ的基 因片段 ， ６ Ｎ ２ｂ 将该 片段克 隆于原核表 达载体 Ｐ Ｅ ４ ． ， 建重组 Ｇ Ｘ一Ｔ ２ 构 表 达载体 。经 ＩＴ Ｐ Ｇ诱 导 ，ＤＳＰ Ｅ 检 测 ，结果 表 明 ，在 大肠杆 菌 中成 功表 达 了外 膜蛋 白 Ｏ １ ．。经 Ｗｅｔ Ｓ —ＡＧ ＭＰ ５ ６ ｓ ． ｅ ｂｏｔ ｇ 测 ， ｍ．ｌｔｎ 检 ｉ 该蛋 白能与豚 鼠抗布鲁 氏菌 阳性血 清发 生特异性免 疫反应 ， 为其之 后 的抗 原性 以及 免疫原 性研 究
Ｉｔ ｔ ｒｔ ｏ ０ ｎ ￣ ｌ ｍ￣ ａ ｄ ｏＩ Ｍａ ｂ ａ Ｐቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ０ ｄｍ ｉ ， ｉ ｆＢ ｕ ｌ ｉ ｉ ｆ ．ｏ ｎ ＝ ｌ ｔ 船 ｍ ｒ￣ 】惋 ｒ
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１ ． ５６
（ Ｏ ｅ ａｏａｏｙ ｆｒＺ ｏ ｏｅ． ｈｎ ｇｉｕｔ ａ Ｕ ｉ ｒ ｔ，Ｂ ｉ ｇ １０ ） Ｍ Ａ Ｋ ｙ Ｌ ｂ ｒｔｒ ｏ ｏ ｎ ｓｓ Ｃ ｉ Ａ ｒ ｌ ｒｌ ｎｖ ｓ ｙ ｅ ｉ １３ ａ ｃ ｕ ｅｉ ｊ ｎ ０ ９
布 鲁 氏菌 病 是世 界 范 围 内引 起 １２ 血清与 抗体 豚 鼠抗布 鲁 氏菌 每 降 一 度 ２个 循 环 ，５℃ 时 １ ． ５ ０个 循 的人畜共 患病重要病 原体之 － ［ ” 。世 阳性 血清 由本实验 室置备 ； 羊抗豚 鼠 环 ， ２℃延伸 ９ ， ３ ７ ０Ｓ共 ６个循 环 ； 最 界 部分 地 区在 ２ ０世 纪 ８ ０年 代 中期 ＩＧ购 自北京百奥康生物技术 有限公 后 ７ ｇ ２℃延 伸 １ ｎ ０ｍｉ。 后 ，我 国 自 ２ ０世 纪 ９ ０年代 后期 ， 布 司 。 １３ ４ 重组表 达 载体 的构 建 Ｐ Ｒ ．． Ｃ 鲁 氏菌病 疫情 一直呈现 回升态 势 ， 是 １３ 目的 片段 的 Ｐ Ｒ扩 增 和 重 组 产 物 Ｂ ｍＨ 和 Ｅ ｏ Ｉ双 酶 切 后 ， ． Ｃ ａ Ｉ ｃＲ 和 在持 续稳定下 降 ２ Ｏ年 后 的 大 幅 度 反 表 达 载 体 的构 建 同 样 用 Ｂ ｍ 和 Ｅ ｏ Ｉ 酶 切 的 表 ａ ＨＩ ｃＲ 双 弹 。目前 国内外 尚缺乏 高效的布鲁 氏 １３ １ 引 物 的 设 计 与 合 成 根 据 达 载体 Ｐ Ｅ 一Ｔ ２连 接 ，将 连接 产 ．． Ｇ Ｘ４ ． 菌疫苗 。 布鲁 氏菌细 菌学检测在方法 ＧｅＢ ｎ 中 Ｏ ｎ ａＫ ＭＰ ５ １． ６对应 的基 因设 物 转化入 感受态 细胞 Ｂ ２ ，在 带有 Ｌ１ 上存在 安全性 差、 时耗 力和诊 断通 计 引物 ，并 引入 Ｂ ｍ 和 Ｅ ｏ Ｉ 耗 ａ ＨＩ ｃ Ｒ 酶 氨苄抗 性的 Ｌ Ｂ平板上 ，筛选 阳性菌 量低 等缺点 ； 利用细菌 多糖抗 原的血 切位点 。 引物 由上海 生工生物技术有 落 。 将该平板 上的单个菌落导入含有 清 学检 查存 在 交叉 反应 及 不 能鉴 别 限 公 司 合 成 。 氨 苄的 Ｌ Ｂ液 体 中 ，７℃ 过 夜 摇 动 ３ 临床感 染动 物 和疫 苗 免 疫动 物 等缺 上 游 引 物 ５ Ｇ ’ ＧＧ Ｔ Ｃ 后 ， 质 粒酶 切鉴 定 ， 接 以菌 液为 Ｃ Ａ Ｃ 提 直 ＧＣ Ｔ ＡＣ Ｔ Ｃ ＡＴ ＧＣ ＧＡＣ Ｔ ３； ＣＴ Ｔ ’下 模 板进 行 Ｐ Ｒ鉴 定， 陷， 使动物布 病防控技 术 临床 应用 致 Ｃ 并送 公司测 序 。 受Ｎ ￣Ｎ［ 布 鲁氏菌抗原成分复杂 ， 游 引物 ５ Ｇ Ｇ Ａ Ｔ Ｃ Ｃ ＧＴ ＡＴ １４ 重组表达 载体 的诱导表 达 将 ２ １ 。 ’ Ａ Ｔ Ｇ Ｃ ． Ｃ ’ 有 脂多糖 、 多糖 、 Ｏ 外膜 蛋 白等 ， 研究 ＴＣＴＴＣＡ ＴＣＡ ＧＧ ３ 。 测序 正确 的 阳性 菌 液导 入含 有氨 苄 发 现布 鲁 氏菌 外膜 蛋 白具有 很好 的 １ ． 基 因组模 板 Ｄ Ａ 的提 取 取 的 ２ ．２ ３ Ｎ ＹＴ液 体培 养 基 ，７℃培 养 至菌 ３ 免 疫原性［１ ２。为此 ， － ３ 本研 究试 图通过 灭 活 的羊 种 布 鲁 氏菌 １ 菌 液 １ 液 的 ０ 值 在 ０ ．． 时 加 入 ６ Ｍ ５ Ｄ ．１ ５ ０ 大肠 杆菌表达 、 鉴定 蛋 白的免疫反应 ｕＬ，用 １５ｕ Ｌ ＮＥ重悬 之 后加 入 ＩＴ ＩＴ 终 浓 度 分 别 为 ０ ３ Ｔ Ｐ Ｇ， Ｇ Ｐ ． ｍＭ、 ５ 原性 ， 以便 为进～步 寻找诊 断性抗原 １ ５ ｕ Ｌ 含 ２ Ｔ ｉ ｎ Ｘ一０ Ｔ ３ ％ ｒ ｏ １ ０ ＮＥ 洗 １ ｔ ． ｍＭ、 ． ｍＭ，分 ２ｈ ４ｈ ６ｈ取 ０ ２０ 、 、 提 供理论依据 。 涤。 然后加入新鲜配置 的 ５ ／ ｍＬ的 样 ， ｍｇ 检测 蛋 白是 否表 达 ， 并确 定 最佳 １ 材 料 与 方 法 溶菌酶 ３ Ｌ ０ ，轻弹 混匀， ７℃水浴 表 达 条 件 。 ３ １ １ 菌 株 、载体 羊布鲁 氏菌 １Ｍ ３ ｎ 再 加 入 ５ｍｇ ． ６ ０ｍｉ。 ／ 蛋 白 酶 Ｋ １ ５ Ｗ ｅｔ －ｂｏｔ ｇ检 测 表 达 蛋 ｍＬ ． ｓｒ ｅ ｎ ｌｔｎ ｉ １ ，５℃水浴孵 育过夜 ，最后加 白 的 免 疫 原 性 重 组 的 Ｏ １ ． ５ｕ Ｌ ６ ＭＰ ５ ６蛋 灭 活菌 株及 Ｐ Ｅ ．Ｔ ２表 达载 体均 Ｇ Ｘ４ 一 由本实验室保存 。 入 １ ｍＬ的 Ｒ Ａｓ，２ ０ｕ ｅ Ｃ Ｎ ｅ－ ０℃保 存 白经 １％Ｓ —Ｐ Ｅ凝 胶 电泳 后 ， ２ ＤＳ ＡＧ 半干转 印 至硝酸 纤维 素膜 ，０ １％马血 基金项 目： 现代农 业（ 肉牛 ） 业技术体 系建设 备用 。 产 Ｃ ７℃封 闭 １ ，Ｂ Ｔ洗 涤 ３次 ， ＰＳ ｈ 与 专 项 资金 ； 国 家科技 部科 技 支撑 计 划项 目 １３ ３ 目的 基 因 的 Ｐ Ｒ 扩 增 反 清 ３ ．． 应 条件 为 ９ ４℃预 变性 ３ ｎ ９ ℃变 １ ０ ；４ ｍｉ ： ０稀释 的豚 鼠抗布鲁 氏菌 阳性血 ５ （ ０ ６ Ａ ０ Ａ ５ ０ ） ２ ０Ｂ Ｄ ４ ０－ ３ ； 性 ４ ， 火 温 度 从 ６ ５ 退 Ｓ ５℃ 降 到 ５ ５℃ ， 清 作 用 ７ ｍｉ，Ｂ Ｔ洗 涤 ３次 ， １ ０ ｎＰ Ｓ 与 ： 通讯作者 ： 吴清民
羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d的原核表达、鉴定及纯化
’ 讯 作 者 简介 ， 通 白文 涛 。Ｅ ｍ ｉ ｂｉｔ ＠ ｆｍｕ ｅｕ ｃ 。 ． ａｌ ａ ａ ｍ ．ｄ ．ｎ ： ｗｏ
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国家 自然科 学基 金 （３９ １８ ） 助 ００２１资
第一作 者 简介 ：张 蕾 ， 士 研究 生 ， － ａ ：ｘ１７０ 博 Ｅ ｍ ｉ ｚ ３９＠ ｆｍｕ ｌ ０ ｉ ． ｎ
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根据 Ｇ ｎ ａ ｋ中序 列 ， 计 羊 布 鲁 菌 Ｏ ｐ ５ ｅＢ ｎ 设 ｍ ２ｄ 基 因编 码 区上 下 游 引物 （ 分别 含 有 Ｂ ｍＨ Ｉ和 Ｘ ｏ ａ ｈ Ｉ 酶切 位点 ） 由上海博 亚生物 工程公 司合 成 ： ，
性抗体 ， 且可用 于布 鲁菌 病 的检 测 ］ 。布鲁 菌外 膜 蛋 白特别 是 Ｏ ２ ／ ｍ ３ ｍｐ５ Ｏ ｐ １家 族蛋 白 ， 常用 于 作 为 潜在 的保 护 抗 原 或 者 诊 断 抗 原 。近 期 研 究 发 现 ，
２１ ０ ０年 ６月 １ 日收到 ０ 军 队科 技 攻 关 项 目（６ Ｏ １ 、 ０ Ｇ ９ ）
第ｌ ０卷 第 ２ ５期 ２ １ ０ ０年 ９月 １７ —８５ ２ １ ）５６４ —５ ６ １１ １（ ００ ２ —１６０
科
学
技
术
与
工
程
Ｖｏ ． ０ Ｎｏ ２ Ｓ ｐ． ０１ １１ ．５ ｅ ２ ０
Ｓ ｉｎｃ ｃ ｎ ｌｇ ｎ ｇｎｅ ｒｎ ｃｅ ｅ Ｔｅ ｈ ｏｏ ｙ ａ ｄ Ｅｎ ｉ ｅｉ ｇ
布鲁杆菌基因工程疫苗免疫保护效率的初步观察
布鲁杆菌基因工程疫苗免疫保护效率的初步观察高永辉;张松乐;曾政;罗德炎;张良艳;董梅;王希良【期刊名称】《中华地方病学杂志》【年(卷),期】2006(025)001【摘要】目的比较布鲁杆菌6种抗原表位所获得的基因工程疫苗的免疫保护效率.方法布鲁杆菌核糖体蛋白L7/L12、胞质蛋白P39、细胞表面蛋白BCSP31、二氧四氢喋啶合成酶BLS、16.5×103的外膜蛋白PAL和翻译起始因子IF3的基因片段与真核表达载体pcDNA3.1(+)构建的核酸疫苗及上述6条片段转入pET32a(+)后诱导表达的的重组蛋白免疫小鼠,3次免疫后进行攻毒实验,对其免疫保护效率进行初步观察.结果L7/L12和BLS的重组蛋白疫苗和核酸疫苗都产生了非常显著的保护作用,P39的核酸疫苗、IF3和BCSP31的重组蛋白疫苗也产生了非常显著的保护作用,其中L7/L12核酸疫苗的保护效率最高.结论初步认为布鲁杆菌的优势抗原表位所获得的基因工程疫苗可产生一定的抗布鲁杆菌作用,可作为未来布鲁杆菌新型疫苗的候选者,有进一步研究的价值.【总页数】4页(P46-49)【作者】高永辉;张松乐;曾政;罗德炎;张良艳;董梅;王希良【作者单位】100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.鸡传染性支气管重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LHB株病毒攻击的免疫保护[J], 石星明;王云峰;王玫;刘胜旺;童光志;徐灵龙;贺笋2.猪口蹄疫O型基因工程疫苗免疫保护试验 [J], 赵利平;刘玉梅;刘国英;郑兆鑫3.鸡传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LTJ95I株病毒攻击的免疫保护 [J], 王云峰;石星明;王玫;刘胜旺;童光志;何来;贺笋;崔红玉;李一经4.鸡传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LT95Ⅰ株病毒攻击的免疫保护 [J], 石星明;王玫;王云峰;杨桂花;孙鹏;李继松;曾伟伟;刘胜旺5.PEDV基因工程亚单位疫苗对仔猪的免疫保护试验 [J], 洪树彬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同方法检测布鲁氏菌抗体的对比评价
不同方法检测布鲁氏菌抗体的对比评价布鲁氏菌是一种引起动物和人类布鲁氏病的细菌，可以通过感染动物、食用感染物或与感染动物接触等多种途径被人体感染。
因此，对布鲁氏菌的检测非常重要，而检测布鲁氏菌抗体是检测布鲁氏病的常用方法之一。
目前，常用的检测布鲁氏菌抗体的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、血凝试验（CFT）和微量补体结合试验（MCT）。
本文将对这三种方法进行对比评价。
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种高灵敏度、高特异性、快速、简便且能同时处理多个样品的检测方法。
它通过将具有抗原性质的蛋白质与试验液中的抗体结合，在试验中加入特定酶标记的二抗以形成抗原-抗体-酶复合物，通过检测酶标记的颜色变化量，可以确定样品中抗体的含量。
该方法具有操作简便、适用范围广、检测结果可靠等优点。
目前，ELISA已成为检测布鲁氏菌抗体的首选方法。
二、血凝试验（CFT）CFT是一种检测抗体的传统方法，其原理是将受检血清与布鲁氏菌抗原混合，通过抗原-抗体结合导致血清发生凝集反应，并测定凝集的程度来判断血清中抗体的含量。
该方法具有适用于样品种类广泛、操作简单、成本低等优点。
但是，该方法存在许多缺点，如需要长时间的反应和读取时间、试剂稀释的影响等，同时凝集反应的灵敏度较差，不适用于抗体浓度低的检测。
因此，CFT主要应用于筛查试验和流行病学调查。
三、微量补体结合试验（MCT）MCT是一种通过测定受检物中微量补体结合反应来检测抗体的方法。
这种方法与CFT相比，具有操作简单、结果快速、准确度高等优点，特别是对于婴儿和孕妇等抗体含量较低的样品具有较好的检测效果。
但是，该方法的灵敏度较高，需要特别的设备和试剂，成本比较昂贵。
此外，MCT不适用于大规模筛查，对于复杂的临床情况分析也不够直观。
总之，针对不同的检测需求和实际应用场景，选择不同的检测方法是非常必要和重要的。
当需要进行大规模、快速、高效、准确的检测时，ELISA将是最好的选择；CFT则可用于筛查和流行病学调查；而对于抗体含量较低的样品，MCT则更适用。
牛型布鲁氏菌A19株外膜蛋白OMP2b的表达及鉴定
２．１ 牛型 布 鲁 氏 菌 Ａ１９ 菌 株 基 因 组 ＤＮＡ 的 提 取 及兔抗血清的效价检测
关 键 词 ：牛 型 布 鲁 氏 菌 ；外 膜 蛋 白 ２ｂ；蛋 白 表 达 ；免 疫 印 迹
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ２ｂ（ＯＭＰ２ｂ） ｏｆ Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｓｔｒａｉｎ Ａ１９
ＨＥ Ｌｉａｎｇ１，２，ＨＡＮ Ｘｉａｎ－ｇａｎ１，ＨＵ Ｑｉｎｇ－ｈａｉ １，ＤＩＮＧ Ｃｈａｎ１，ＹＵ Ｓｈｅｎｇ－ｑｉｎｇ１
中 国 兽 医 科 学 ２０１０，４０（０９）：９２５－９２８ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ
中 图 分 类 号 ：Ｓ ８５２．６１４ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１６７３－４６９６（２０１０）０９－０９２５－０４
牛型布鲁氏菌 Ａ１９株外膜蛋白 ＯＭＰ２ｂ的表达及鉴定
收 稿 日 期 ：２０１０－０５－２７；修 回 日 期 ：２０１０－０８－０２ 基 金 项 目 ：国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 计 划 （９７３）项 目 （２０１０ＣＢ５３０２０２）；中 央 级 科 研 院 所 公 益 性 研 究 专 项 （２０１０ＪＢ１６） 作 者 简 介 ：何 亮 （１９８６－ ），男 ，江 西 赣 州 人 ，硕 士 生 。＊ 通 讯 作 者 ，Ｔｅｌ：０２１－３４２９３４６１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕｓ＠ｓｈｖｒｉ．ａｃ．ｃｎ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ；ＯＭＰ２ｂ；ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ
布鲁氏菌病 （ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ）是 由 细 胞 内 寄 生 的 革 兰 氏 阴 性 小 杆 菌 ——— 布 鲁 氏 菌 引 起 的 一 种 人 畜 共 患 病，它以发热、流产 为 主 要 症 状，严 重 威 胁 着 人 畜 健 康 。 近 年 来 ，布 鲁 氏 菌 病 疫 情 呈 持 续 增 长 态 势 ，统 计 资料 表 明，全 世 界 每 年 约 有 ５００ ０００ 例 人 布 鲁 氏 菌 病 发 生，每 年 因 该 病 造 成 的 经 济 损 失 近 ３０ 亿 美 元［１－２］。在我国，布鲁氏菌病是国家规定的二 类 法 定 传 染 病 ，感 染 人 的 主 要 是 牛 、羊 、猪 ３ 种 共 １６ 个 型 的 布鲁氏菌。我国３１ 个 省 （市、区）中 有 ２５ 个 省 （市、
布鲁氏菌BP26蛋白的原核表达及鉴定
布鲁氏菌BP26蛋白的原核表达及鉴定鲁友铭; 李俊萱; 吴胜昔; 曾政; 黄恒; 李令臣; 侯力嘉【期刊名称】《《重庆理工大学学报（自然科学版）》》【年(卷),期】2019(033)010【总页数】6页(P185-190)【关键词】布鲁氏菌; BP26重组蛋白; 原核表达; 镍柱纯化; 蛋白免疫印迹【作者】鲁友铭; 李俊萱; 吴胜昔; 曾政; 黄恒; 李令臣; 侯力嘉【作者单位】重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054; 重庆市动物疫病预防控制中心重庆401120【正文语种】中文【中图分类】R516布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患病，也是世界上流行性最广、危害最大的一种人畜共患病。
布鲁氏菌是一种胞内寄生的革兰氏阴性菌，因其可以感染人类与其他60余种哺乳动物，导致宿主出现流产、发热、关节性损伤等患病特征，对发展中国家畜牧业带来巨大的经济损失。
近期我国颁布多项政策与法律以达到对布鲁氏菌病的及时防控[1-2]。
早期、快速、准确地诊断该病是防控与净化该病的关键。
现有的布鲁氏菌病的实验室诊断技术标准主要包括虎红平板凝集试验(RBT)、全乳环状试验(MRT，仅限于乳牛)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、抗人球蛋白试验(AGT,仅限于人)、间接酶联免疫吸附测定(IELISA)、竞争酶联免疫吸附测定(CELISA)、补体结合酶联免疫吸附测定(CF-ELISA)、胶体金技术(GICT)、荧光偏振试验(FPA)以及各类核酸诊断技术等[3]。
其中RBT、MRT仅限于布鲁氏菌的初步筛选。
而以SAT为典型的传统血清学试验存在假阳性与假阴性的现象，无法区分人工免疫以及自然感染。
ELISA为主的新型免疫学与分子生物学诊断技术各具特色，但都存在一定的局限性[4]。
外膜蛋白是布鲁氏菌的主要毒力因子，其通过干扰巨噬细胞抗原呈递活性，促使布鲁氏菌逃离宿主的免疫反应，从而在宿主中大量增殖[5]。
BP26(Omp26)蛋白是布鲁氏菌的优势蛋白，是一种具有强免疫原性的外膜蛋白，也是目前普遍采用的基因敲除候选蛋白。
布氏杆菌外膜蛋白OMP39的高效表达及反应原性检测
布氏杆菌外膜蛋白OMP39的高效表达及反应原性检测李娜;吴清民;王少华;黄会岭【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2009(045)002【摘要】布氏杆菌病是一种人畜共患性传染病，广泛流行于世界各地的绝大多数国家和地区，尤其是亚洲、非洲、南欧和拉丁美洲。
近年来，该病流行呈直线上升趋势，动物群中该病流行对人类健康造成了严重威胁，每年因该病造成的经济损失高达数亿美元。
由于带菌动物是其他动物和人类布氏杆菌病的主要传染源，因此控制动物群布氏杆菌病是该病防制或根除的关键。
目前，布氏杆菌病的诊断方法主要是凝集试验技术，【总页数】3页(P30-32)【作者】李娜;吴清民;王少华;黄会岭【作者单位】河北农业大学动物科技学院,河北,保定,071001;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100193;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100193;河北北方学院动物科技学院,河北,张家口,075131;河北农业大学动物科技学院,河北,保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S852.61+4【相关文献】1.嗜水气单胞菌外膜蛋白omp TS基因的高效表达及其免疫原性 [J], 谢俊锋;朱静仪2.嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的高效表达及其免疫原性 [J], 谢俊锋;叶巧真;何建国;戴伟君;黄晓;何鸣筱;陈诚3.志贺氏福氏5型菌外膜蛋白ipa BC基因的高效表达及其免疫保护作用… [J], 芮贤良;徐永强4.布鲁氏菌外膜蛋白OMP 15.6表达及免疫反应原性测定 [J], 王少华;李娜;吴清民5.布氏杆菌外膜蛋白OMP15的原核表达及免疫原性测定 [J], 王少华;李娜;吴清民;王家鑫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于布鲁氏菌外膜蛋白OMP28的ELISA检测试剂盒的研制与应用
doi ：10.3969/j.issn.2095-3887.2020.05.010!疾病！基于布鲁氏菌外膜蛋白OMP28的ELISA 检测控试剂盒的研制与应用吕素芳*1,董炳梅2，郭广君$,胡莉萍3,任洪林4,李峰！The sensitivity of the kit was high , with sheep serum was up to1 ：3 200 and bovine serum was up to 1 ：6 400.The repeatabilitywas good , the coefficient of variation within and between batches were 1.01%-4.83% and 1.48%-7.11% in sheep ,0.75%-4.56% and 2.08%-7.41% in bovine. No cross-reaction with other bac-(1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东省畜禽用蜂胶疫苗研究开发推广中心,滨州256600；2.山东绿都生物科技有限公司，滨州256600；3.山东省动物疫病预防与控制中心，济南250022；4.吉林大学人兽共患病研究所，长春130062)摘要：为了评估牛羊场布鲁氏菌病抗体流行情况，建立牛羊通用的抗体检测方法，选择外膜蛋白 OMP28为包被抗原，建立并优化ELISA 方法,标准化ELISA 操作规程，组装ELISA 检测试剂盒,进行敏感性、重复性、血清交叉反应、保存期等评价，并与商品化试剂盒进行比对分析。
对采集自临床的牛羊血清样品进行应用检测。
结果表明：OMP28-ELISA 检测方法最佳抗原包被浓度13.6 !g/mL ，试剂盒 敏感性较高,羊血清达1：3 200、牛血清达1：6 400倍稀释；重复性好，羊分别为1.01%~4.83%和1.48%~7.11%，牛分别为0.75%~4.56%和2.08%~7.41%；与其他细菌无血清交叉反应，在4 °C 条件下保存期1年，与商品化ELISA 试剂盒符合率达96%以上。
布鲁菌外膜蛋白及毒力因子研究进展
鲁 菌与上 述 ６种 陆地 哺乳 动 物源 布鲁 菌 的 同源性 高
达 ９ 以 上 Ｏ 引。随着 分 子 生 物 学 的 发展 ， 布 鲁 菌 对 分子 结构 的研 究正 深 入进 行 ， 断 获得新 发 现［ ， 不 ４ 这 ］
维普资讯
动物 医学进 展 。０ ６ ２ （ Ｏ ：３２ ２ ０ ，７ １ ） ２ —７
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｃｎｅ ｏｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄｉｉ
布 鲁 茵 外 膜 蛋 白及 毒 力 因子研 究 进 展
杨 春 华 ， 昌庆 ¨ 邱
对进 一 步认识 和控 制 布鲁 菌病 具 有 现实 意义 。对 马
耳 他布 鲁菌基 因组测 序 表 明含有 ３２ ４ｂ 和 ９ ５ｂ ９ ｐ ３ ｐ
蛋 白 ， Ｏｍｐ ａ和 Ｏｍｐ ｂ基 因 编 码 ， 中 由 ２ ２ 其 核 苷酸 ， 以两个 环 形染 色体 的形 式存 在 ， 中一 它们 其 ３ ｕ 白基 因 可 能 是 一 个 与 毒 力 相 关 的 基 个 环 有 ２ １ ７ ｂ ８ｋ 蛋 １ ｐ和 １ ４ ｂ ４ ｐ核 苷 酸 ，另 一 个 环 有 因； 第三 组 外 膜 蛋 白 包括 ３ ｕ和 ２ ｕ两个 １ ７ ｐ和 ７ ７ｂ 苷酸 ， 编码 ３１ ７个 开 放 阅 １ｋ ５ｋ １ ７ｂ ８ ｐ核 共 ９ 相 关 的蛋 白， 有 重 要 的免 疫 功 能 。３ ｕ蛋 读框 。应 用生 物 信 息 学 软 件 进 行 分 析 表 明 ， 中的 具 １ｋ 其
１ 布 鲁 菌外 膜 蛋 白
布鲁菌 蛋
白［ 引。革 兰 氏 阴性 细 菌 的外 膜 蛋 白被 证 明能 够调 节
布鲁菌外膜蛋白OMP25的原核表达
收稿日期:2010-07-06;修回日期:2011-02-23基金项目: 十一五 国家重大科技攻关项目(2006BAD 4A 16-4)作者简介:刘艳琴(1985-),女,硕士研究生,i m au li uyanqin @163.co m.通信作者:吴树清(1957-),男(蒙古族),教授,本科.布鲁菌外膜蛋白O M P25的原核表达刘艳琴,吴树清,吴 杰(内蒙古农业大学兽医学院,内蒙古呼和浩特010018)中图分类号:S813.1文献标识码:A文章编号:1004-7034(2011)04-0020-03关键词:布鲁菌;分离株;外膜蛋白OMP25;重组质粒;蛋白纯化摘 要:为了克隆布鲁菌外膜蛋白OMP25基因并构建基因的原核表达系统,试验采用聚合酶链反应(PCR)扩增得到布鲁菌基因组OM P25基因片段,T-A 克隆后测定核苷酸序列,将目的基因定向插入原核表达载体pET -32a ,经双酶切和DNA 测序,再将构建的重组质粒转化到E.coil DH 5 、Rosetta ,经I PTG 诱导后用SDS-PAGE 检测重组蛋白pET32a-OM P25的表达情况。
结果表明:经DNA 测序显示OMP25基因序列和插入位点正确,成功构建了重组质粒pET 32a-OMP25,经IPTG 诱导表达出以包涵体形式存在的长为43ku 的OMP25融合蛋白;经W estern-b l o t 检测,OM P25融合蛋白与布鲁菌阳性血清发生特异性反应,说明重组蛋白具有良好的反应原性。
Prokaryocyotic Expression of Outer M embrane P rotein 25of BrucellaLI U Yan-qi n ,WU Shu-q i n g ,WU Jie(C oll ege of veteri n ary M ed i ci n e ,InnerM ongo li a Agricultura lU n i vers it y ,H ohhot 010018)K ey words :B rucell a ;is olates ;outerm e m brane protei n25(O M P25);reco m b i nan t p l as m i d ;protei n purificationAbstract :To cl on e and con struct t he reco mb i n ant exp ressi on p l as m i d f or 25ku Outer me m b rane protei n (O M P25)of B rucell a i n E.col,i The gene segm ents of Bru cell a OM P25w ere a m p lified and ob t a i ned by pol ym erase chai n reaction (PCR ),then s equ enced after TA cl on i ng .Subse quen tly t he t arget gene w as cl on ed i n t o p rokaryoti c expression vector PET -32a and i den tified by restri ction enzy m e d i gesti on and DNA sequen ci ng .The reco m binant plas m i d w as tran sf or m ed i n to E.coli Rosett a .A fter i ndu ced by I TPG,t h e reco mb i n ant protei n express ed byOM P25gene in E.co liDH5 and Rosett a w as i d enti fi ed by SDS -P AGE an al ysis .The res u lts of DNA sequen ci ng s ho w ed t h at t he sequence and cl on i ng site of the insert forOM P25gen ew ere exact .The reco m binant express i on p las m i d PET-32a -O M P25w as cons truct ed ,and t h e protei n i ncl u d i ng bod i es of O M P2543ku f u si on w as s u ccessf u lly exp ressed i ndu ced by I PTG.The O M P25gene ofB rucell a w as cl oned i nto PET-32a,and then recomb i nan t p las m i d pET32a-O M P25was constructed and the reco m binantOM P25protei n w as successfu ll y exp ress ed i n E.coliRosetta .The w estern-b l otti ng analysis sho w ed that t he reco mb i nant O M P25react ed s pecificall y w it h bru cell a pos i ti ve serum.It i nd i cated the reco m b i nant protei n process ed favorab le i m m unogen i cit y .布鲁菌是革兰阴性、兼性细胞内寄生菌,主要通过黏膜上皮侵入机体,在脾脏、肝脏、乳腺、生殖器官等部位增殖和扩散[1]。
布鲁氏菌新型疫苗表达及免疫原性检测
布鲁氏菌新型疫苗表达及免疫原性检测目的：总结布鲁氏菌新型疫苗表达及免疫原性检测情况。
方法：选取7/L12核蛋白，其保守性非常高，通过予以试验，查看17.3 kDa蛋白在保护作用方面的基本情况，并给予真核细胞翻译起始因子3各项抗原预测方案。
结果：以酶联免疫吸附测定法为主要方案，可以对滴度相对偏高的特异性抗体进行检测，同时WB也可以证明有特异性抗体形成。
结论：国内布鲁氏菌新型疫苗表达实验还处于探索研究阶段，通过对酶联免疫斑点实验法以及流式细胞仪相关分析技术对布鲁氏菌新型疫苗各个细胞的免疫指标进行评价，有助于提升其利用效率以及安全性。
标签：布鲁氏菌；新型疫苗；表达；免疫原性；检测情况布鲁氏菌本身为革兰阴性杆菌当中的一种特殊构成元素，可以直接寄生于人类和牲畜的细胞中，已经成为布氏菌病发生的主要病原体，会对人类健康以及畜牧业的健康发展造成直接威胁。
布氏菌病本身发病率非常高，不仅有许多人会感染上布氏菌病，同时畜牧业也会受布氏菌病直接影响，给国家经济以及发展带来不良影响，因此对细菌传播进行有效控制十分关键，而且已经发展成为当前急需处理的难题之一。
就布氏菌病来说，当前通常以19号疫苗对其进行预防，多在牛接种免疫中应用，而羊则主要接种Rev-1疫苗[1]。
但是，这些疫苗在牛和羊当中的使用效率十分有限，研发、应用各种布鲁氏菌新型疫苗尤为重要。
1.资料与方法1.1一般资料本次研究活动的资料选取7/L12核蛋白，克隆载体是PGEM-T载体以及pET32a原核表达载体。
实验细胞选择COS7细胞，培养基则选择RPMll640培养基，包含了胎牛血清10%，在百分之五的培养箱中对其进行培养，并将培养箱温度控制为37摄氏度。
实验对象选择BALBC小鼠，其年纪在五周至八周之间，等级是二级。
1.2方法1.2.1从猪布鲁氏菌、布氏杆菌中提取出基因组脱氧核糖核酸，并在50毫升YT液体的培养基中进行培养，温度设定为37摄氏度，转速是每分钟210r，培养时长是72小时。
羊布鲁菌外膜蛋白Omp22的原核表达及鉴定
羊布鲁菌外膜蛋白Omp22的原核表达及鉴定张亮;张蕾;张芳琳;李璞媛;李凯;吴兴安;徐志凯;白文涛【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2009(009)014【摘要】布鲁菌外膜蛋白 Omp22与布鲁菌致病性相关,又可诱导机体免疫反应.为进一步研究Omp22的特性,对其进行原核表达,并初步鉴定.根据Genbank序列,设计并合成羊布鲁菌外膜蛋白 Omp22引物.以羊布鲁菌M5株基因组DAN为模板,PCR扩增并克隆入原核表达载体 pGEX-4T-1中.酶切鉴定正确后,测定序列;将重组质粒 pGEX-4T-1-Omp22电转化大肠杆菌DH5α中,诱导表达,并采用羊布鲁菌兔免疫血清,Western-blot初步检测融合蛋白GST-Omp22表达情况和免疫学特性.结果PCR扩增出约660 bp目的条带,与预期相符;酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了 pGEX-4T-1-Omp22 原核表达载体;优化诱导温度,结果表明,在25℃诱导表达时,该融合蛋白大部分出现在上清中;Western-blot结果证实,GST-Omp22可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合.说明成功构建了 Omp22 蛋白原核表达载体并进行了可溶性表达;该融合蛋白可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合.Omp22蛋白的表达,为进一步研究布鲁菌的致病机制以及疫苗研制奠定基础.【总页数】5页(P3969-3973)【作者】张亮;张蕾;张芳琳;李璞媛;李凯;吴兴安;徐志凯;白文涛【作者单位】第四军医大学微生物学教研室,西安,710032;第四军医大学微生物学教研室,西安,710032;第四军医大学微生物学教研室,西安,710032;第四军医大学微生物学教研室,西安,710032;第四军医大学微生物学教研室,西安,710032;第四军医大学微生物学教研室,西安,710032;第四军医大学微生物学教研室,西安,710032;第四军医大学微生物学教研室,西安,710032【正文语种】中文【中图分类】Q516【相关文献】1.幽门螺杆菌外膜蛋白omp22和黏附素hpaA融合基因原核表达系统的构建与鉴定 [J], 黄学勇;段广才;范清堂;郗园林;黄志刚;宋春花2.羊布鲁菌外膜蛋白omp2b的克隆原核表达及纯化 [J], 张蕾;徐志凯;张芳琳;张亮;于澜;白文涛;应旗康;李凯;程林峰;叶伟;吴兴安3.羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d的原核表达、鉴定及纯化 [J], 张蕾;张芳琳;张亮;王海涛;胡刚;吴兴安;徐志凯;白文涛4.布鲁菌外膜蛋白Omp22基因的原核表达与生物信息学分析 [J], 朱华培;成鹰;焦寒伟;杜丽;王凤阳;赵天靖;徐开莲;贾晓晓;郭莳雨;史巧芸;庞峰;荣辉;张珈宁5.羊布鲁菌外膜蛋白Bp-26基因的克隆及其原核表达 [J], 史巧芸;荣辉;郭莳雨;贾晓晓;张珈宁;朱华培;杜丽;成鹰;焦寒伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于糖化酶的布鲁氏菌抗体快速检测方法的建立与评估
基于糖化酶的布鲁氏菌抗体快速检测方法的建立与评估
蒋小丽
【期刊名称】《现代科学仪器》
【年(卷),期】2024(41)2
【摘要】目的:建立一种布鲁氏菌抗体相对定量检测的新方法,并对其性能进行评价。
方法:验证液化条件;建立糖化酶与血糖仪反应值的标准曲线;制备酶标抗体及ELISA 平板进行样本检测及反应体系干扰验证的试验。
结果:糖化酶浓度与糖浓度成正比,
糖化酶-布鲁氏菌脂多糖抗原耦联-1对阴阳性区分度更好,干扰验证试验发现临床样本中葡萄糖、HBsAg、HBsAb、HCV和BSA的水平,均对检测结果无影响。
结论:通过构建基于葡萄糖检测的ELISA法,通过便捷式血糖仪,可以实现快速检测布鲁氏菌抗体,为临床诊断提供了新的手段。
【总页数】6页(P25-30)
【作者】蒋小丽
【作者单位】简阳市人民医院实验医学科
【正文语种】中文
【中图分类】S85
【相关文献】
1.研制新型布鲁氏菌抗体胶体金快速检测卡方法的建立与应用
2.运用ELISA快速
检测CPV抗体方法的建立与均衡性的研究 I.间接ELISA快速检测CPV抗体方法的建立3.快速检测布鲁氏菌抗体的滴金免疫测定法的建立及应用4.基于流产布鲁氏
菌重组BvrS蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立5.基于纳米抗体的猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法的建立和性能评估
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１ 材 料 与 方 法
主产 生 的免疫 应答 以细 胞免 疫 为主 ， 体液 免疫 为辅 。
收稿 日期 ： ０ ０ ０ — ２ ２ １－５１
基金项 目： 国家 “ 十一 五” 技 支 撑 计 划 项 目 （０ ６ ＡＤ０ Ａ１ ） 科 ２０Ｂ ４ ０； 河 北 省“ 一 五 ” 技 支 撑 项 目（ ５ ４ ４ １ ； 北 省 “ 万 吨 奶 工 十 科 ０ ２ ０ ２ Ｄ） 河 千
ｇ ｙ ｏ ｙ ａ ｉｎ ｍｏ ｉｉｄ ｌｃ ｓ ｌｔ ｄｆｅ ｗｉ — ｍａ ｎ ｐ ｒ ｎ ｓ ｌ ｈ ｎ ｌ ｏ ｈｏ ｙ ｎ ｔ ， ｔ ｅ ｅ ｌｉ ｅ ｗｉｈ ａ ｊ ｖ ｎ ． ｏ ｔ ｈ Ｄ－ ｎ ｏ ｙ ａ ｏ ｙ— ｅ ｙ ｉ ｔ ｉｃ ａ ａｅ ｈ ｎ ｍｕ ｓｆ ｄ ｐ ｓ ｉ ｔ ｄｕ ａ ｔ Ｂａ ｅ ｎ ｃ ｍｐｅ ｅｙｒ ｎ ｏ ｚ ｄｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ，Ｂ ｓ ｄ ｏ ｏ ｌｔ ｌ ａ ｄ ｍｉｅ ｘ ｅ ｉ ｎ ｓ ＡＬＢ／ ｃ ｒ ｎｅ ｔｄ， ｎ ｈ ｎｓ ｍｐｅ ｆｓ ｒ ｍ ｒ ｃｍｉｅｗｅｅｉｊｃｅ ａ ｄｔ ｅ ａ ｌｓｏ ｅ ｕ ｗｅ ｅ
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中 国兽 医 杂 志 ２ １ 年 （ ４ ０ １ 第 ７卷 ） ４期 第
布 鲁 菌 外 膜 蛋 白 的糖 基 化 及 免 疫 效 果 检 测
付 景 丽 ，董 炳梅 ，王 若 ，王 家鑫
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（ 北农业大学动物科技学 院 免疫学 实验室 ， 北 保定 ０１０） 河 河 ７０ ０ 摘 要 ： 研 制 安全 、 效 、 型 靶 向化 布 鲁 菌 外 膜 蛋 白疫 苗 ， 用 去 污 剂 连 续 抽 提 与 电 洗 脱 法 分 离 纯 化 出 布 鲁 菌 外 膜 蛋 为 有 新 采
白 ， 进 行 ａＩ 甘 露 吡 喃异 硫 氰 酸苯 酯糖 基 修 饰 、 剂 乳 化 。依 据 统计 学 中 完 全 随 机 实 验 设 计 试 验 ， 疫 Ｂ Ｌ ／ 小 鼠 ， 集 并 —） ＿ 佐 免 Ａ． ｃ Ｂ 收
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势 ， 差异不显著 （ ＞Ｏ０） 但 Ｐ ． ５ 。表 明 试 验 用 疫 苗 能 激 发 机 体 的 细 胞 免 疫 应 答 ， 产 生 了免 疫 记 忆 。本 研 究 为 研 制 布 鲁 菌 新 型 且
靶 向 化 疫 苗 的 研 发 和 推 广 提 供 了研 究 依 据 。 关键词 ： 布鲁 菌 Ｉ 蛋 白 ； 基 化 ； 剂 ； 苗 夕膜 糖 佐 疫
ｉ ｍｍｕ ｉｉｇ ｍｉｅｗｉｈｎ ｎ ｐ ｒｉｌｓａ ｊ ｖ ｎ ｍｕ ｓｆ ｄｖ ｃ ｉ ｅ ｈ ｅ ｅ ｆＩ Ｎ一 ｓｉ ｃｅ ｓ ｄｇ ａ ｕ ｌ ｎ ｚｎ ｃ ｔ ａ ｏ ａ ｔｃｅ ｄ ｕ ａ ｔｅ ｌｉ ｅ ａ ｃｎ ，ｔ ｅｌｖ ｌ Ｆ ７ｗａ ｒ ａ ｅ ｒ ｄ ａｌ ｉ ｏ ｎ ｙ
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中 图分 类 号 ：８ ２ ６ ４ ￥ ５．１
文献标识码 ： Ａ
文 章 编 号 ：５ ９６ ０ （ ０ １ ０—０ ５０ ０ ２ —０５ ２ １ ）４０ １—３
Ｉ ｍｍｕ ｏ ｓａ ｏ ａｇ ｔ ｇｖ ｃｉｅｃ ｎ ａｅ ｔ ｌｃ ｓｌｔ ｎｏ ｎ ａｓｙｆｒｔｒ ｅｉ ａｃｎ ｏ ｊ ｇ ｔｄｗｉ ｇｙｏｙａｉ ｆ ｎ ｕ ｈ ｏ
不 同 时 间 点 血 液 样 品 ， ＬＳ 法 检 测 血 清 中 ＩＧ 和 Ｉ Ｎ ７含 量 。结 果 显 示 分 离 纯 化 出 ３ ． Ｄ与 ４ ． Ｄ 的 目的 蛋 白 并 成 Ｅ ＩＡ ｇ Ｆ 一 ７ ５ｋ ７ ２ｋ 功 糖基 化 修 饰 ； 米 颗 粒佐 剂 乳 化 后 的 试 验 用 疫 苗 免 疫 小 鼠 ， 清 ＩＮ 水 平 呈 显 著 升 高 趋 势 （ 纳 血 Ｆ一 Ｐ＜ Ｏ ０ ） 抗 体 水 平 略 显 优 ．５；
１ １ 材料 ．
Ｂ Ｂ ｃ 鼠（ ＡＬ ／ 小 体重 ２ ￣２ ， 性 ， ０ ５ｇ 雄 合
１ ６
中 国 兽 医 杂 志 ２ １ 年 （ ４ 卷 ） ４期 ０１ 第 ７ 第
Ｃ ｉｅｅＪｕｎ ｌ ｆ ｔｒ ａｙＭ ｅｉｎ ｈｎ ｓ ｏ ｒａ ｏ ｅｉ ｒ ｄｃ ｅ Ｖｅ ｎ ｉ
格证 编 号 ９ ４ ７ ） 自河北 省 实 验 动物 中心 ， 剂 ： ０ １３ 购 佐 Ｍｏ ｔｎｄ ＭＳ２ １ ｎ ａ ｉｅＩ ５ Ｃ ＶＧ 由法 国赛 比克公 司惠 赠 ，
ｉ ｅ ｕ （ ｎ ｓ ｒ ｍ Ｐ￣ ０ ０ ） Ｅｘ ｅ ｉ ｅ ｔ ｌｖ ｃ ｉｅ ｈ ｓａ ｌ ｔｅ ａ ｖ ｎ ａ ｅ ｉ ｎ ｉｏ ｙ ｌｖ ｌ ｕ ｈ ｉｆｒ ｎ ｅ ｏ ． ５． ｐ ｒ ｎ ａ ａ ｃｎ ａ ｉ ｌ ｄ ａ ｔ ｇ ｎ ａ ｔｂ ｄ ｅ ｅ ，ｂ ｔｔ ｅ ｄｆｅｅ ｃ ｆ ｍ ｔ
程 ” 撑 技 术 研 究 （７ ２ １６ ） 支 ０ ２ ７ ４ ２ 作 者 简 介 ： 景 丽 （９ ０） 女 ， 士 生 ， 要 从 事 抗 感 染 免 疫 研 付 １ ８一 ， 硕 主
究 ， — ｉ ｊ ｇｉ ＠ ｙｈ ｏ ｃ Ｅ ｍａｌ ｉ ｌｕ ａ ｏ． ｎ ：ｎ ｆ 通讯作者 ： 家鑫 ，— ｉ 王 Ｅ ｍａｌ ：ｗａｇｉ ｉ６ ＠ ｙ ｈ ｏ ｃｒ ｎ ｊ ｘｎ ８ ａ ａ ｏ ．ｏ ｎ
只， 其他 组 均 为 １ ｇ 只 ；免 疫 次 数 ： 次 ； 疫 间 ５ ／ 两 免 隔 为两 周 。 １ ５ １ 试 验取 材 （ ） 免 后 ４ ７ １ 、 ４ ｄ 二 免 ．． １一 、 、 Ｏ １ ，
Ｉ ｖｔｏ ｅ Ｃ ｒ ｏ ａｉ ｎ， ｏ ｓ Ｆ ７ Ｑｕ ｎ ｉ ｉｅ ｎ ｉｒ ｇ ｎ ｏ ｐ ｒ ｔ ｏ Ｍ ｕ ｅ Ｉ Ｎ一 ａ ｔｋ ｎ
１ ４ 蛋 白抗 原 与佐 剂乳化 成 试验 用疫 苗 。 ．
１ ５ 免 疫接 种试 验 采 取 完全 随机 资料 的方差 分 ． 析 比 较 如 下 种 类 的 免 疫 效 果 ： Ｏ 只 ６ ８周 龄 ６ ～
布鲁 菌最 主 要毒力 特 征是 在吞 噬细胞 内生存 和