细菌感染的检测方法与防治原则

凝集试验
用已知抗体检测待检标本中未知的颗粒性抗原。
协同凝集试验
IgG的Fc段与金葡菌的SPA结合，Fab段与细菌抗原 结合后，可使金葡菌发生肉眼可见的凝集现象。
免疫荧光技术 对流免疫电泳
用已知的荧光抗体检测待检标本中的未知抗原，借 助荧光显微镜观察。
利用双向琼脂扩散与电泳技术相结合的方法。由于电泳 和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动，在比 例合适处形成肉眼可见的沉淀线。
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• 生物芯片的分类
– 基因芯片（gene chips），又称DNA芯片 – 蛋白质芯片 – 细胞芯片 – 组织芯片 – 糖芯片
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• 生物芯片的用途
– 微生物感染的快速诊断：对某些病原体，如 细菌、真菌和病毒进行多重快速检查与鉴别；
– 微生物变异机制和耐药机制的研究； – 微生物基因分型及分子流行病学的调查； – 微生物基因组及后基因组的研究：可研究病
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(二) 细菌分离培养与鉴定
细菌检查的一般程序
脓/痰/尿
涂片、染色、镜检
标本
分离培养
纯培养
血、脑 脊液等
增菌
生化反应 血清学鉴定 药敏试验 动物实验
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细菌的分离培养
• 培养基的成分 • pH • 培养时间 • 温度 • 气体环境
在血平板上的肺炎链球菌菌落
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生化试验
肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应
细菌分离培 养与鉴定
细菌成 分检测
抗原 检测
核酸 检测
特异性抗 体检测
细菌培养、形态学检查 生物试验、血清学鉴定 动物试验、药物敏感试验
凝集试验、免疫荧光技术 酶免疫技术、免疫印迹试验
等
核酸杂交、PCR 16S rRNA基因序列分析
基因芯片等
直接凝集试验 乳胶凝集试验 补体结合试验
4 ELISA等
一.临床标本的采集与运送原则
酶免疫技术
用酶标记的抗体检测特异性可溶性抗原的实验技术。 20
（四）细菌核酸的检测
PCR（含RTPCR、real time PCR等）
16S rRNA 基因序列
分析
核酸杂交 技术
基因芯片 技术
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（五）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、 细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片、尼 龙膜等固相支持物上，在一定的条件下进行生 化反应。用化学荧光法、酶标法或同位素法显 示反应结果，通过特定的仪器读取与收集数据， 并用软件进行数据分析，从而判断样品中靶分 子的种类和数量。
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自动微生物鉴定及药敏分析系统
将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自动微 生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、读数、 分析、最后报告鉴定及药敏结果。
摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社
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自动微生物鉴定及药敏分析系统
微生物数码鉴定原理
计算并比较数据库内每 个细菌条目对系统中每 个生化反应出现的频率 总和
细菌感染的检测方法与 防治原则
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本章重点与难点
• 细菌感染性标本的采集原则 • 细菌感染的实验室检验程序 • 常用的血清学诊断方法 • 适应性免疫的获得方式 • 人工免疫的概念和常用的免疫制剂 • 细菌感染的治疗原则
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细菌感染的实验室检验方法
含菌 标本
可疑细菌 感染
血清（双 份）标本
形态学检查
原体基因的序列、转录表达、抗原的表达及 细菌糖键的特异性研究； – 抗微生物感染药物的研制等。
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三、细菌感染的血清学诊断
用已知的细菌或其特异性抗原检测病人血清 或其他体液中的抗体及其效价的变化，可以 作为感染性疾病的辅助诊断。
由于本实验多采取病人血清检测抗体，故常 称为血清学诊断（serological diagnosis）。
药敏检测原理
微型化的肉汤稀释试验 根据CLSI标准得到相 应敏感度：敏感、中度 敏感和耐药
系统组成
自动微生物鉴 定及药敏分析
系统
测试卡（板）、菌液 接种器、培养和监测 系统、数据管理系统
性能特点
自动化程度较高、检测速度 快、可鉴定细菌种类及药敏 试验种类多、数据处理软件 功能强大、结果准确可靠
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（三）细菌抗原的检测
标本采集
早期采集 无菌操作 选感染部位 最佳时间采集 双份血清
标本运送
做好标记 置于密闭容器内
尽快送检
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（一）细菌的形态学检查
暗视野 显微镜
相差 显微镜
不染色 标本
主要用于检查在生活状态下 细菌的动力及其运动情况
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革兰 染色
抗酸 染色
荧光金胺 O染色
其他 特殊染色
细菌的染色
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革兰染色
葡萄球菌（革兰染色阳性） 大肠埃希菌（革兰染色阴性）
一般适用于抗原性较强的细菌，以及病程较 长的感染性疾病。也可用于调查人群对某病 原菌的免疫应答水平以及检测疫苗接种后的 预防效果。
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细菌性感染的血清学诊断
血清学试验 直接凝集反应 乳胶凝集试验 沉淀试验 间接免疫荧光技术 补体结合试验 中和试验 酶联免疫吸附试验
疾病举例 肥达试验、外斐试验 脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌 梅毒 各类微生物感染 Q热 风湿热（抗O试验） 各类微生物感染
– 能够完全抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度
• 最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC）
– 能够杀死培养基中细菌的最低药物浓度
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纸片扩散法
含有定量抗生素的纸片贴在已接种待检病原菌 的琼脂平板上，纸片上的抗生素向周围琼脂中扩散， 形成了逐渐减小的药物浓度梯度。由于致病菌对各 种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现 抑制病原菌生长而形成的大小不同的抑菌环。根据 抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐 药或敏感。
15Байду номын сангаас
稀释法
• 以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的 培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为 双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓 度。
• 稀释法
– 琼脂稀释法——使用琼脂培养基 – 肉汤稀释法——使用肉汤培养基
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抗生素连续梯度法（E-test法）
将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设 定的稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培 养基培养以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌 浓度（MIC）。
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血清学鉴定
• 利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌 • 对细菌进行种、群、型的鉴定
沙门菌血清学鉴定
摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社 13
药物敏感试验
• 纸片扩散法、稀释法、E-test法…… • 最低抑菌浓度（minimum inhibitory
concentration, MIC）