结核分枝杆菌属
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＜5mm为阴性≥ ＞ 5mm为阳性 ＞ 15mm为强阳性 应用：选择卡介苗接种对象；判断卡介苗接种效果；辅助诊断婴幼儿结核病；测定肿瘤患者 细胞免疫状态
结核分枝杆菌－－检验程序 标本
涂片抗酸 染色镜检
标本前处理
核酸 检测
抗体 检测
接种液体 培养基
接种固体培养基 可疑菌落
慢性生长菌
快速生长菌
抗酸染色
麻风杆菌
犰狳
抗酸染色
染液组成： 石炭酸复红、3％盐酸酒精、美兰
染色步骤 ※石炭酸加温染5分钟，水洗 ※ 3％盐酸酒精脱色致无红色脱下为止，水洗 ※美蓝染1分钟，水洗，干后镜检
染色结果 ※抗酸菌：红色 ※非抗酸菌：蓝色
染色意义：区别抗酸菌与非抗酸菌
结核分枝杆菌菌落
结核分枝杆菌（抗酸染色）
麻风病人
结核分枝杆菌属
1
分枝杆菌属主要特点
是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。 细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。 具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用抗酸染色。 专性需氧营养要求特殊，大多数生长缓慢。 不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，所致疾病呈慢性。
Hale Waihona Puke Baidu
分枝杆菌属种类 结核分枝杆菌复合群
分
枝
杆
菌
属
非典型分枝杆菌
报告方式
培养结果
＋
斜面20个菌落以上，占斜面1/4以下
2＋
斜面上菌落生长面积占1/4以上，1/2以下
3＋
斜面上菌落面积占斜面1/2以上，3/4以下
4＋
斜面上菌落生长密集，成菌苔
非典型分枝杆菌
是指结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。 大多为环境中的腐生菌 对酸碱比较敏感 对常用抗结核药耐受 为条件致病菌，艾滋病患者易感染鸟复合分枝杆菌
麻风分枝杆菌
结核分枝杆菌 牛分枝杆菌、 非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌
光产色分枝杆菌 暗产色分枝杆菌 不产色分枝杆菌 迅速生长分枝杆菌
结核分枝杆菌－－形态染色
细长略弯，分枝生长趋势 无芽孢，无鞭毛，部分菌株有荚膜 革兰染色阳性，不易着色 抗酸染色阳性
结核分枝杆菌－－培养特性
生长条件： 专性需氧、细胞内寄生菌、最适pH6.5～6.8、营养要求高、培养基含鸡蛋、马铃薯粉、甘油、
2＋
10个视野内发现1~9条抗酸菌
3＋
每个视野内发现1~9条抗酸菌
4＋
每个视野内发现9条以上抗酸菌
结核分枝杆菌－－分离培养
标本前处理： ※目的：杀死杂菌；液化标本 ※方法：
4％NaOH法； 4％H2SO2法； 胰酶-新洁尔灭法等 培养基选择：罗氏培养基、米氏培养基、小川培养基等 接种 培养
培养结果记录与报告方法
鉴定试验
接种小白鼠 豚鼠
脏器涂片 镜检
菌种鉴定
结核分枝杆菌－－涂片检查
直接涂片 薄涂片 厚涂片
集菌涂片 沉淀集菌法 漂浮集菌法
荧光显微镜检查法： 金刚胺O染色→荧光显微镜下检查
抗酸染色－－报告方式 报告方式
镜检结果
-
仔细检查300个视野未发现抗酸杆菌
±
300个视野内发现1~2条抗酸菌
＋
100个视野内发现1~9条抗酸菌
蛋白质 糖类 结核杆菌不产生内、外毒素，不产生侵袭性酶
结核分枝杆菌－－所致疾病与免疫性
经多途径感染，引起结核病，以肺结核多见 类型：原发感染和继发感染 免疫性 ※抗结核免疫以细胞免疫为主 ※抗结核免疫属带菌免疫 ※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现
结核分枝杆菌－－结核菌素试验
原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反 应的试验。 结果：根据注射部位是否出现红肿判断结果
麻风分枝杆菌－－生物学性状
为抗酸杆菌 细胞内寄生 有麻风杆菌寄生的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞 体外人工培养尚未成功 犰狳是动物感染模型
麻风分枝杆菌－－临床意义与微检
经呼吸道、接触感染 引起麻风病 瘤型麻风（开放型）：传染性强 结核样型（闭锁性）：传染性弱 微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的主要依据
谢谢！
25
孔雀绿等 生长现象： ※生长缓慢 ※改良罗氏培养基菌落特征：干燥、淡黄色、 质地较硬的R型菌落 ※液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长
结核分枝杆菌－－生化反应
生化反应不活泼，不发酵糖类 与非结核分枝杆菌鉴别： 耐热触酶试验－；（非结核分枝杆菌＋） 与牛分枝杆菌鉴别 烟酸试验＋；（牛分枝杆菌－）
结核分枝杆菌－－抵抗力与变异性
抵抗力特点：“三耐四敏” ※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1：13000） ※对湿热、70％乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长期使用易产生耐药性）
变异性 ※典型形态－→多形性 ※ R型菌落－→S型菌落 ※有毒－→无毒（用于制备疫苗） ※抗结核药敏感－→耐药
结核分枝杆菌－－致病物质
脂质 索状因子:与该菌毒力有密切关系 磷脂: 分枝菌酸：与抗酸性有关 蜡质D:具有佐剂作用 硫酸脑苷脂
结核分枝杆菌－－检验程序 标本
涂片抗酸 染色镜检
标本前处理
核酸 检测
抗体 检测
接种液体 培养基
接种固体培养基 可疑菌落
慢性生长菌
快速生长菌
抗酸染色
麻风杆菌
犰狳
抗酸染色
染液组成： 石炭酸复红、3％盐酸酒精、美兰
染色步骤 ※石炭酸加温染5分钟，水洗 ※ 3％盐酸酒精脱色致无红色脱下为止，水洗 ※美蓝染1分钟，水洗，干后镜检
染色结果 ※抗酸菌：红色 ※非抗酸菌：蓝色
染色意义：区别抗酸菌与非抗酸菌
结核分枝杆菌菌落
结核分枝杆菌（抗酸染色）
麻风病人
结核分枝杆菌属
1
分枝杆菌属主要特点
是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。 细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。 具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用抗酸染色。 专性需氧营养要求特殊，大多数生长缓慢。 不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，所致疾病呈慢性。
Hale Waihona Puke Baidu
分枝杆菌属种类 结核分枝杆菌复合群
分
枝
杆
菌
属
非典型分枝杆菌
报告方式
培养结果
＋
斜面20个菌落以上，占斜面1/4以下
2＋
斜面上菌落生长面积占1/4以上，1/2以下
3＋
斜面上菌落面积占斜面1/2以上，3/4以下
4＋
斜面上菌落生长密集，成菌苔
非典型分枝杆菌
是指结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。 大多为环境中的腐生菌 对酸碱比较敏感 对常用抗结核药耐受 为条件致病菌，艾滋病患者易感染鸟复合分枝杆菌
麻风分枝杆菌
结核分枝杆菌 牛分枝杆菌、 非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌
光产色分枝杆菌 暗产色分枝杆菌 不产色分枝杆菌 迅速生长分枝杆菌
结核分枝杆菌－－形态染色
细长略弯，分枝生长趋势 无芽孢，无鞭毛，部分菌株有荚膜 革兰染色阳性，不易着色 抗酸染色阳性
结核分枝杆菌－－培养特性
生长条件： 专性需氧、细胞内寄生菌、最适pH6.5～6.8、营养要求高、培养基含鸡蛋、马铃薯粉、甘油、
2＋
10个视野内发现1~9条抗酸菌
3＋
每个视野内发现1~9条抗酸菌
4＋
每个视野内发现9条以上抗酸菌
结核分枝杆菌－－分离培养
标本前处理： ※目的：杀死杂菌；液化标本 ※方法：
4％NaOH法； 4％H2SO2法； 胰酶-新洁尔灭法等 培养基选择：罗氏培养基、米氏培养基、小川培养基等 接种 培养
培养结果记录与报告方法
鉴定试验
接种小白鼠 豚鼠
脏器涂片 镜检
菌种鉴定
结核分枝杆菌－－涂片检查
直接涂片 薄涂片 厚涂片
集菌涂片 沉淀集菌法 漂浮集菌法
荧光显微镜检查法： 金刚胺O染色→荧光显微镜下检查
抗酸染色－－报告方式 报告方式
镜检结果
-
仔细检查300个视野未发现抗酸杆菌
±
300个视野内发现1~2条抗酸菌
＋
100个视野内发现1~9条抗酸菌
蛋白质 糖类 结核杆菌不产生内、外毒素，不产生侵袭性酶
结核分枝杆菌－－所致疾病与免疫性
经多途径感染，引起结核病，以肺结核多见 类型：原发感染和继发感染 免疫性 ※抗结核免疫以细胞免疫为主 ※抗结核免疫属带菌免疫 ※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现
结核分枝杆菌－－结核菌素试验
原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反 应的试验。 结果：根据注射部位是否出现红肿判断结果
麻风分枝杆菌－－生物学性状
为抗酸杆菌 细胞内寄生 有麻风杆菌寄生的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞 体外人工培养尚未成功 犰狳是动物感染模型
麻风分枝杆菌－－临床意义与微检
经呼吸道、接触感染 引起麻风病 瘤型麻风（开放型）：传染性强 结核样型（闭锁性）：传染性弱 微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的主要依据
谢谢！
25
孔雀绿等 生长现象： ※生长缓慢 ※改良罗氏培养基菌落特征：干燥、淡黄色、 质地较硬的R型菌落 ※液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长
结核分枝杆菌－－生化反应
生化反应不活泼，不发酵糖类 与非结核分枝杆菌鉴别： 耐热触酶试验－；（非结核分枝杆菌＋） 与牛分枝杆菌鉴别 烟酸试验＋；（牛分枝杆菌－）
结核分枝杆菌－－抵抗力与变异性
抵抗力特点：“三耐四敏” ※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1：13000） ※对湿热、70％乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长期使用易产生耐药性）
变异性 ※典型形态－→多形性 ※ R型菌落－→S型菌落 ※有毒－→无毒（用于制备疫苗） ※抗结核药敏感－→耐药
结核分枝杆菌－－致病物质
脂质 索状因子:与该菌毒力有密切关系 磷脂: 分枝菌酸：与抗酸性有关 蜡质D:具有佐剂作用 硫酸脑苷脂