43菌种培养及菌种悬浮液制备操作规程

目的：建立菌种斜面培养及菌种悬浮液制备操作规程。

适用范围：适用于菌种斜面培养及菌种悬浮液的制备。

职责：生产用菌培养人员负责实施本规程。

内容：

一、试管斜面的制备。

1、将15mm×180mm 玻璃试管洗净，配上棉塞，同250mL三角瓶、接种针、纱布，5mL、10mL吸管放入高压灭菌锅，经0.14-0.16mPa压力灭菌1小时，待冷却后，放干燥箱烘干待用。

2、以工艺要求，称取培养基，一人称取，一人监称。

3、碳酸钠应单独称量置入250mL三角瓶中，配成10%的溶液。玉米浆用煮沸的蒸馏水溶解后，同其它培养基加水，配成欲定体积的溶液，用40%的氢氧化钠溶液调好PH值为6.5-7.0。

4、分装，用100mL量筒将配好的溶液装入250mL三角瓶内，每瓶装量50mL。

5、给每个三角瓶塞上棉塞，包上牛皮纸，用纸绳扎紧放入铁丝框中，在121℃，0.10-0.12mPa高压锅中灭菌30分钟。

6、冷却后，放入36-37℃恒温培养箱内培养2天，检查是否有杂菌生长，若无方可倒斜面使用。

7、将上述三角瓶里的培养基在沸水浴中熔化成液体，立即按程序带入无菌室倒斜面。

8、倒斜面：在无菌室内灭菌条件下进行，在净化工作台上，去掉包装和线绳，二人配合，用10mL吸管，给每个盛培养基的三角瓶里加总体积10%的碳酸钠溶液，塞上棉塞，摇匀。

9、用5mL吸管将三角瓶里培养基溶液分别装入15mm×180mm的试管里，装量为试管的1/4，并且试管配上棉塞。

10、在桌平面上，放上0.6mm粗的玻璃棒，将试管放在上面，摆成斜面，待冷却后使用。

11、在净化工作台面上，用接种针将原种挑少许，接入被接种玻璃试管里，塞上棉塞，放28-30℃恒温培养箱培养2天-3天。

12、眼观试管斜面无杂菌，且菌落丰满，放4-6℃冰箱内保存或接入茄子瓶斜面内。

二、茄子瓶斜面的制备

1、茄子瓶空斜面的制备同试管斜面的制备（注茄子瓶斜面先分装，后消毒）。

2、茄子瓶空斜面用新传代的试管菌种斜面当原种，在灭菌室净化工作台上接种于四瓶茄子瓶空斜面，塞上棉塞，放28-30℃恒温培养箱内培养2天。

3、眼观茄子瓶斜面无杂菌，且菌落丰满，用于制作种子悬浮液。

三、菌种悬浮液的制作：

1、在净化工作台上，去掉培养基的茄子瓶斜面种瓶和灭菌水瓶的包装。

2、快速分别倒入茄子瓶斜面内30-40mL灭菌水，盖好棉塞，放下灭菌水瓶。

3、打开茄子瓶棉塞，用接种铲轻轻刮下全部菌落，随即盖好棉塞，四瓶同法逐个操作。

4、把刮好的各瓶菌种悬浮液合并倒入接种瓶里，安上接种针头，上好卡子，准备接种。

四、接种：

生产种子罐碱补好后，带上制作好的菌种悬浮液（注意密封好针头），酒精棉球、胶布、火柴、镊子等，到发酵岗位配合发酵人员接种。

五、接种完毕，做好种罐接种监控记录，并整理、清除灭菌室，按要求消毒清洁工作。