提纯鸡卵黄免疫球蛋白 IgY - 贵州医科大学学报编辑部
口服微囊化卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备及性能研究的开题报告
口服微囊化卵黄免疫球蛋白（IgY）的制备及性能研究的开题报告一、研究背景和意义免疫球蛋白（Ig）是一种免疫系统生成的免疫分子，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
其中，IgG广泛存在于人体血液中，是一种免疫防御中最主要的抗体类型，具有极高的亲和力和特异性，因此在临床医学诊断、治疗和预防领域得到广泛应用。
目前，常规的IgG制备方法主要是从兔、鸡等动物中提取，但存在动物福利和传染病等风险问题。
微囊化卵黄免疫球蛋白（IgY）是一种以鸡蛋为原料制备的抗体，具有天然、安全、高特异性等优点。
近年来，IgY在人类疾病的预防和治疗、食品安全和植物保护等方面得到了广泛应用。
但目前IgY制备方法仍存在IgY纯度低、成本高、稳定性差等问题，因此需要进一步研究改进制备方法，提高其性能和应用效果。
二、研究目的本研究旨在制备口服微囊化卵黄免疫球蛋白（IgY），并研究其物理化学性质和生物活性，探究其在医药和食品安全领域的应用前景。
三、研究内容和方法1.卵黄IgY的制备方法优化：选取不同的抗原、免疫方案和提取方法，优化鸡蛋中IgY 的产量和纯度。
2.口服微囊化IgY的制备：采用超声波法制备微囊化IgY颗粒，优化微囊化过程中的超声波参数、微囊化剂浓度等条件，获得具有较高稳定性的IgY微囊颗粒。
3.IgY微囊的物理化学性质分析：测定其粒径、Zeta电位、表面形貌和形状、微粒分布等性质。
4.生物学活性测试：采用免疫学方法检测IgY微囊的抗原特异性和亲和力，并检测IgY 微囊的口服吸收效率及生物体内分布情况。
四、研究意义和预期结果通过优化IgY制备和微囊化过程进行改进，并通过各项测试和评价评估其性能和应用效果，从而为IgY在医药和食品安全等领域的应用提供参考和技术支持。
预期结果是获得具有较高稳定性、生物活性和吸收效率的口服微囊化IgY颗粒，为其临床应用及产品研发提供坚实的技术基础。
IGY鸡卵黄免疫球蛋白
1概述卵黄抗体（yolk antibody, IgY）：通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。
2IgY的形成、作用机理与制备卵黄抗体的形成禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。
当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体；当卵细胞分泌进入输卵管时，流经输卵管的血液中含有的特异性抗体(主要是IgA和IgM)进入卵清中，形成卵清抗体。
IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的IgG。
与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中移行的时间较短，因而卵清抗体含量极微。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用，但同时也会干扰鸡疫苗的免疫效果。
IgY的性质IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。
正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。
其等电点约为5.2。
IgY与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。
在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。
IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY；高于80℃，大部分IgY失去活性。
IgY在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时活性亦有所下降。
IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。
将胃蛋白酶和IgY在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。
基因专一性鸡卵黄抗体(IgY)的研究及应用
基因专一性鸡卵黄抗体(IgY)的研究及应用
唐金宝;吉爱国
【期刊名称】《生命的化学》
【年(卷),期】2004(24)1
【摘要】用抗原免疫鸡 ,从鸡卵黄中获取特异多克隆IgY抗体 ,是一条高产量、低成本的简便快速途径。
IgY与哺乳动物抗体IgG相比具有许多突出的优点 ,使IgY 在现代免疫学中已得到广泛应用。
采用基因免疫方法制备的基因专一性IgY抗体 ,在免疫分析、寻找药靶和生物标记物、制备新抗体等方面 ,必有进一步的应用。
【总页数】2页(P79-80)
【关键词】鸡卵黄免疫球蛋白;IgY;基因专一性IgY抗体
【作者】唐金宝;吉爱国
【作者单位】山东大学药学院;山东大学威海分校海洋生物工程系,咸海264209【正文语种】中文
【中图分类】Q819
【相关文献】
1.鸡卵黄抗体IgY在临床医学中的应用 [J], 杜洪桥
2.应用斑点ELISA快速研究鸡卵黄抗体IgY的理化性质 [J], 阮光萍;马骊;姚新生;温茜;邹红云;罗微;王小宁
3.鸡卵黄抗体(IgY)的性质、提纯及应用于寄生虫学的研究 [J], 周彦
4.鸡卵黄抗体(IgY)的提纯及其在医学上的应用 [J], 杨婷婷
5.鸡ND-IBD卵黄抗体(IgY)的精制与应用 [J], 杨勇
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卵黄免疫球蛋白的提取及其体外抑菌作用的研究
卵黄免疫球蛋白的提取及其体外抑菌作用的研究
张志强;李志涛
【期刊名称】《河南农业科学》
【年(卷),期】2012(041)009
【摘要】对卵黄免疫球蛋白(IgY)的提取工艺及其抑菌作用进行研究.采用水稀释法脱除卵黄中的脂类,确定最佳除脂条件为:水稀释倍数6倍；采用硫酸钠盐析法与凝胶层析法对卵黄进一步纯化,得到纯度为97％的IgY.用不同质量浓度的IgY对大肠杆菌进行抑菌试验,发现高质量浓度IgY的抑菌效果要优于低质量浓度的抑菌效果,以10 g/L的抑菌率最高,为74.3％.
【总页数】3页(P152-154)
【作者】张志强;李志涛
【作者单位】衡水学院生命科学学院,河北衡水053000;衡水学院生命科学学院,河北衡水053000
【正文语种】中文
【中图分类】S852.4
【相关文献】
1.盐析法提取卵黄免疫球蛋白的研究 [J], 冷春玲
2.鸡卵黄免疫球蛋白的提取及体外抑菌活性研究 [J], 陈希文;郭晓萍;房春林;何念;王雄清;赵利红;钟兴莲
3.鸡卵黄免疫球蛋白Y的提取及防治感染性疾病的研究进展 [J], 张文元;杨亚冬;何浙生
4.鸭、鹅卵黄免疫球蛋白提取的比较研究 [J], 孙凌霜;齐岩;史楠;王君伟
5.鸡卵黄抗IBD免疫球蛋白的提取与应用研究 [J], 刘旭光;蒋长苗;丁建平
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冰乙醇分级离心法分离纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究
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鸡抗内毒素卵黄抗体IgY的制备
鸡抗内毒素卵黄抗体IgY的制备常山;张雅萍;赵永亮;肖光夏【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2002(24)10【摘要】目的研究分别应用内毒素 (LPS)、类脂A(LipidA)和大肠杆菌突变株J5免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量、纯度、效价并筛选最佳免疫抗原。
方法分别应用内毒素 (LPS)、类脂A(LipidA)和大肠杆菌J5突变株作为抗原免疫2 5周龄Leghorn鸡 ,水溶法 (WD)提取蛋黄中抗体IgY ,双紫外光测定抗体含量 ,SDS PSGE电泳检测抗体纯度 ,细菌酶联染色和ELISA检测抗体特异性、效价及筛选最佳免疫抗原。
结果 3种抗内毒素IgY含量和效价分别为 14 4mg ml和1∶12 80 0 (J5 )、10 61mg ml和1∶12 80 0(LPS)、9 2 6mg ml和1∶3 2 0 0 (LipidA) ,抗体纯度均为 95 %左右。
结论大肠杆菌突变株J5和内毒素 (LPS)为最佳免疫抗原 ,免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量和效价最高。
【总页数】3页(P1199-1201)【关键词】鸡卵黄抗体;IgY;内毒素;脂多糖;类脂A;J5;抗内毒素抗体【作者】常山;张雅萍;赵永亮;肖光夏【作者单位】第三军医大学附属西南医院全军烧伤研究所【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体(IgY)的制备 [J], 尤昕;朴松旭;张静春;姜春善;崔鲜花;金春花2.抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体IgY的动物保护作用研究 [J], 潘泓;陈程;詹迪深;陈学文;孔天翰3.鸡卵黄抗眼镜王蛇毒抗体IgY的理化特性 [J], 王薇;余清声;王桂平4.抗胱抑素C鸡卵黄IgY抗体的制备及鉴定 [J], 傅龙章;杨平;李敏惠;潘克俭;邹珂珂;杨菌;李艳超;黄杰;叶启迪;马玲玲5.鸡抗人精子卵黄抗体IgY的制备 [J], 吕年青;黄宇烽;赵金然;徐建平;吕年贵;张建伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较
对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较皮晋魁;张焕容【摘要】本文比较了水稀释-饱和硫酸铵沉淀法（法一）和水稀释-冰乙醇分级沉淀法（法二）分离提纯鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）的产率、纯度及抗体效价。
结果表明：两种方法提取的IgY纯度均较高,法一纯化的IgY的产率及蛋白活性相对更好。
%Two methods for extracting IgY：water diluted-saturated ammonium sulfate precipitation method（method 1）and water diluted-iced ethanol centrifugation precipitation（method 2）,which were compared about IgY extraction rate,purity and antibody titer.The result showed that IgY extracted by both methods had high purity and method 1 was relatively better than method 2 in extraction rate and protein activity of IgY.【期刊名称】《四川畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)010【总页数】3页(P26-28)【关键词】卵黄免疫球蛋白;纯化;产率;纯度;活性【作者】皮晋魁;张焕容【作者单位】西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】S852.46本试验采用水稀释法初提IgY，然后分别用硫酸铵沉淀法和冰乙醇分级沉淀法进一步提取IgY，检测IgY提取量、纯度以及活性效价，为选择较好的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）提取方法提供依据。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 新鲜鸡蛋购自成都农业科技职业学院实训中心。
一种新型饲料添加剂——卵黄免疫球蛋白IgY
一种新型饲料添加剂——卵黄免疫球蛋白IgY
宋迎春
【期刊名称】《饲料研究》
【年(卷),期】2005()1
【摘要】对卵黄色疫球蛋白IgY分子结构功能性质、提纯方法、作为饲料添加剂的应用及作用机制 4个方面进行了讨论 ,旨在说明卵黄免疫球蛋白作为一种新型饲料添加剂的可行性、优越性。
【总页数】5页(P19-23)
【关键词】卵黄免疫球蛋白;饲料添加剂;鸡
【作者】宋迎春
【作者单位】新疆巴州畜牧科学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S816.7
【相关文献】
1.一种新型的食品添加剂——鸡卵黄免疫球蛋白 [J], 钟青萍;陈红兵;等
2.卵黄免疫球蛋白(IgY)特性、制备及应用 [J], 田刚;汪咏新;廖洪利
3.提纯鸡卵黄免疫球蛋白IgY方法的研究 [J], 谢国文;张永宏;许春杏;杨杰;张维森;张健
4.卵黄免疫球蛋白IgY治疗过敏性鼻炎80例 [J], 施建绒
5.新型饲料添加剂--鸡卵黄免疫球蛋白 [J], 徐有良;林勇;廖玲
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鸡卵黄免疫球蛋白_IgY_分离_纯化方法研究进展
胞反应性。
抗肿瘤免疫的存在与肿瘤负荷减小的临床表现相关。
这一试验和其他近期试验都得益于人们对抗肿瘤免疫的加深了解。
大多数新的免疫治疗方法的目的在于促进CD8+CTL的活化,该细胞被认为是众多鼠肿瘤排斥模型中的主要效应细胞。
而且已知肿瘤采用多种机制诱导宿主耐受并阻止T AA特异性CTL 活化。
树突状细胞(DC)可表达高水平主要组织相容性复合体分子、共刺激分子和活化T 细胞的细胞因子,也许对克服这些障碍及活化TAA特异性CT L应答有用。
因此,许多新疫苗也加有已在体外荷载了TAA的自体DC。
而该研究用DC刺激物GM-CSF代之。
GM-CSF的作用是通过募集外周DC前体并诱导DC成熟来促进抗原提呈细胞(APC)提呈TAA和CT L的活化。
最近的研究也证实了CD40介导的DC活化在激发TA A特异性CT L应答中的作用。
最近报道用竞争性抗CD40抗体处理后的小鼠体内出现了CTL依赖性B淋巴瘤排斥反应。
因此,GM-CSF和CD40配体可能是未来淋巴瘤和其他肿瘤疫苗的良好佐剂配方。
Bendandi等报道的疫苗策略并不代表特别新颖的方法,但是其治疗效果的验证、计划周密的研究设计、以及细致的实施,使这一研究成为癌症疫苗开发领域中的一个标志。
在确定疫苗是否可以达到理想的治疗效果时,对患者病期的考虑不容忽略。
这些发现提示在癌症治疗中,须用疫苗方法进行早期干预。
而且,将特异性T AA作为疫苗的研究,应当仔细监测接种后的免疫应答。
今后鉴定其他肿瘤TA A的研究以及仔细监测的肿瘤疫苗试验,应导致更新、更有效的疫苗策略的建立。
(杨陵江编译 陈受霓校)参考文献1De Gru iji T D et al.Nat M ed,1999;5(10):1124-1125 2Ver morken J B et ncet,1999;353:345-3503Bend andi M et al.Nat M ed,1999;5(10):1171-1177(2000-01-18收稿)鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)分离、纯化方法研究进展湖北医科大学口腔医学院(430079) 江千舟综述 樊明文 边 专审校 摘要 鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)作为一种高产量高效的抗体,已被广泛应用于医学各个领域。
抗铜绿假单胞菌IgY的制备优化及抑菌效果
抗铜绿假单胞菌IgY的制备优化及抑菌效果姚羽菲;龙敏;文荟淋;姚刚【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2018(015)002【摘要】目的探讨高效价、高纯度且生物活性好的抗铜绿假单胞菌(PA)的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备工艺.方法采用超声破碎、共振裂解、研磨破碎等方法裂解PA,筛选出最佳裂解抗原,然后将裂解抗原或经甲醛灭活的全菌抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡;采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的Ig Y抗体效价变化;通过硫酸铵盐析,超滤法纯化抗体,并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法(SDS-PAGE)和二喹啉甲酸(BCA)法测定抗体纯度和浓度,平板法评价IgY对PA的抑菌效果,并以蒸馏水作为对照;扫描电镜法检测细菌形态变化.结果超声破碎法裂解的PA 抗原浓度最高且蛋白条带最为完整;0.5 mL的1×109 CFU/m L灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高,可高达1:25600;硫酸铵沉淀,超滤纯化后的抗体纯度可达94％,浓度为27.02 mg/mL;IgY体外抑菌试验表明,2.7 mg的抗体能明显抑制PA生长,与蒸馏水对照组相比,IgY试验组菌落数减少了9/10,并且明显抑制了细菌绿色色素的产生;扫描电镜观察Ig Y试验组菌体较长、较大且皱缩.结论采用灭活全菌免疫母鸡,经水稀释、硫酸铵沉淀、超滤纯化的制备方法可得到高纯度和高效价的抗PA IgY,所制抗体具有特异性和显著抑菌活性.%Objective To prepare the pure and effective immunoglobulin yolk (IgY ) against pseudomonas aeruginosa ,and optimize the preparation process .Methods Using these methods ,such as ultrasonication ,res-onancecracking ,grinding ,we lysed p .aeruginosa and gained the optimized lysisantigen .The laying hens were immunized with lysis antigen or inactivated bacteria .Indirect Enzyme-linked immunosorbent was used to eval-uate the titer and stability of IgY .Then IgY was isolated and purified from egg yolks with high-titer using wa-ter dilution-salting out method or ultrafiltration .The purity and concentration of IgY were analysed by SDS-PAGE and BCA ,respectively .The antibacterial effect was evaluated by plate method ,and the cell morphology was detected by scanning electron microscopy .Results Ultrasonication was the most effective way to crack the antigen of p .aeruginosa .Immunization scheme that 0 .5 mL inactivate bacteria (1 × 109 CFU/mL) were in-jected hens and secondly injected after 4 weeks was proved the best for the titer of 1:25600 .The purity of IgY was 94％ after ammonium sulfate precipitation and ultrafiltration purification and the concentration 27 .02 mg/mL ,2 .7 mg IgY could restrain the grow th of bacteria obviously and the colony number decreased 9/10 compared to the control group .Meanwhile ,the green pigment produced byp .aeruginosa was inhibited obviously .Scanning electron microscope showed p .aeruginosa were bigger and shrinking after treated withIgY .Conclusion T he preparation and purification IgY against P .aeruginosa has been successfully optimized . And the IgY antibody has specific and marked antibacterial activity .【总页数】5页(P202-205,208)【作者】姚羽菲;龙敏;文荟淋;姚刚【作者单位】四川大学华西临床医学院 ,成都610041;四川大学生命科学学院 ,成都610065;四川大学生命科学学院 ,成都610065;成都安蒂康生物科技有限公司610041【正文语种】中文【中图分类】Q816【相关文献】1.抗嗜水气单胞菌IgY的提纯及体外抑菌效果研究 [J], 李肖梁;尹兆正;钱娅;朱志刚;方维焕2.黄芩、黄柏提取液与抗-MRSA IgY体外抑菌活性的比较研究 [J], 陈桂红;吴铁;黄清松;常改风;钟锐生;于琼3.抗牙龈卟啉单胞菌IgY的制备及抑菌效果 [J], 胡国柱;聂荣庆;张进;文珠;唐宁4.抗伴放线放线杆菌IgY的制备及抑菌试验研究 [J], 吴东风;聂荣庆;唐宁;张进;文珠;胡国柱5.抗伴放线放线杆菌IgY的制备及其抑菌研究 [J], 张孝华;张帅玉;张进;唐宁;聂荣庆;胡国柱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
(IgY)的性质、提纯及应用于寄生虫学的研究
任平国等ｌｌ叩采用的有机物沉淀法。其原理为： 一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多 的蛋白质和酶，不溶于水、稀盐溶液或碱中，可用乙 醇、丙酮和丁醇等有机溶剂，它们具有一定的亲水性 和较强的亲脂性，是理想的提脂蛋白的提取液。其 工艺流程为：卵黄一８倍水稀释并搅１０ｍｉｎ－－－用 ＨＣｌ调ｐＨ至５．２后在４＂Ｃ静置２ｈ去沉淀一在上 清液中加入９５％冰乙醇（一２０℃）使终浓度为６０％ （ｖ／ｖ）一４℃搅拌２０ｍｉｎ后离心（２２ ０００ｒ／ｒａｉｎ，４＂Ｃ， ２５ｒａｉｎ）一收集沉淀并加入０．０２８ｍｏｌ／Ｉ。ＮａＣｌ溶液 在４＂Ｃ下过滤除去脂蛋白沉淀一收集的滤液用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法进行纯化得纯度为９８％的ＩｇＹ。用 大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）对其活性进行测定，效果良好， 此方法能保持免疫球蛋白的活性。
虫病防治中越来越受到重视。 １卵黄抗体（ＩｇＹ）的性质
源的试剂要好而且经济。 １．３获取抗体简单ＩｇＹ无需采血，只需收集免疫 母鸡产下的鸡蛋即可获得抗体。传统的哺乳动物来 源的抗体搜集需通过繁杂的注射及免疫表达过程， 且需要在常规间隔时间内收集血清。ＩｇＹ大大简化
了这一流程Ｈｊ。
１．４假阴性或假阳性率低
Ｉｓｍａｅｌ
Ｍａｒｃｅｔ［７３等提出了聚乙二醇法（ＰＥＧ），
其卵黄用２倍体积缓冲液稀释后，采用８．５％、１２％ ＰＥＧ两次沉淀，重新溶解后用Ｔｒｉｓ—ＨＣｌ沉淀，得
４．８±０．８ｍｇＩｇＹ／ｍＬ卵黄。
Ｃｌｄｕｄｉａ Ｍａｒｉａ Ｃｏｓｔａ ｄｅ Ａｌｍｅｉｄａ等【８０报道的水
Ｄｏｎｇ［１副等，为寻找最适配体，用按照最
中国人兽共患病学报
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｅｓ
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文章编号：１００２—２６９４（２０１１）０５—０４４１一０３
对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较
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本试验采用水稀释法初提 Ｉ ｇ Ｙ，然后分别用硫酸
铵 沉 淀 法和 冰 乙醇 分 级 沉 淀 法进 一 步 提 取 Ｉ ｇ Ｙ，检 测 Ｉ 提取 量 、 度 以及 活 性 效价 ， ｇ Ｙ 纯 择 较 好 的鸡 卵黄 为选 免 疫 球 蛋 白（ｇ 提 取 方法 提供 依 据 。 Ｉ Ｙ）
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摘 要 ： 文 比较 了水 稀释 一 和硫 酸铵 沉 淀 法 （ 本 饱 法一 ） 水 稀释 一冰 乙醇分 级 沉 淀 法 （ 和 法二 ） 离提 纯 分
鸡 卵黄 免疫 球 蛋 白（ Ｙ 的 产 率 、 Ｉ ） ｇ 纯度 及 抗 体 效 价 。 结 果表 明 ： 种 方 法提 取 的 ＩＹ 纯度 均 较 高 ， 一 纯 两 ｇ 法
抗白色念珠菌鸡卵黄抗体_IgY_的研制
论著 文章编号:100025404(2002)0921026203抗白色念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)的研制常 山,张雅萍,查晓霞,肖光夏 (第三军医大学附属西南医院全军烧伤研究所,重庆400038) 提 要:目的 观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度、来源及稳定性。
方法 应用白色念珠菌作为抗原免疫25周龄Leghorn鸡,通过改良水溶法(W D)提取蛋黄中抗体IgY,双紫外光测定抗体含量,S DS2PAGE电泳检测抗体纯度,Western blot免疫印迹法测定该抗体来源,E LIS A检测热处理后的抗体活性。
结果 抗体含量13mg/ml蛋黄液,抗体纯度达到95%,Western blot免疫印迹证明该抗体与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。
E LIS A检测热处理后的抗体活性,其具有良好的热稳定性。
结论 鸡蛋黄内含有丰富的抗体,通过W D水溶提取法可得到高产量,高纯度的特异性抗体IgY,证明其来源于鸡血清中的IgG,对热具有高度稳定性。
关键词:鸡卵黄抗体;IgY;白色念珠菌 中图法分类号:R379.4;R392.11 文献标识码:APreparation of chicken egg yolk antibody(IgY)against C andida albicansCH ANG Shan,ZH ANG Y a2ping,ZH A X iao2xia,XI AO G uang2xia(Research Institute of Burns,S outhwest H ospital,Third M ilitary M edical University, Chongqing400038,China) Abstract:Objective T o observe the yield,purity and stability of IgYfrom chicken eggs y olk.Methods Laying hens(White Leghorn),25 weeks old,were immunized with Candida albicans.IgY was purified with the m odified simple water dilution method(W D)and its purity and yield were measured respectively with S DS2PAGE and ultraviolet spectrophotometry.The antigenicity of IgYwas assayed with Western2blotting method and its stability to heat was measured with E LIS A.Re sults Purity of IgYwas about95%and13mg IgYfrom per millilitre egg y olk was routinely ob2 tained.M oreover IgY had the same m olecular weight and antigenicity in comparis on with IgGof chicken serum.Conclusion IgYfrom eggs y olk of laying hens immunized with Candida albicans is g otten success fully.The W D purification methods possess high yield and purity and have no adverse effect on the immunoactivity of IgY.The IgY is proved to be the IgGfrom chicken serum and has fav orable stability to heat. K ey w ords:egg y olk antibody;IgY;Candida albicans 鸡蛋黄中含有大量来源于血清的IgG抗体(又名IgY),蛋黄中抗体浓度远高于血清,鸡对绝大多数抗原刺激1周后均能产生抗体,1只鸡可获得高特异性抗体长达28周,目前IgY抗体提取方法日益成熟,简单高效,对抗体活性影响小,因而可获得大量均一性良好的多克隆抗体。
四种鸡卵黄免疫球蛋白纯化方法的研究
四种鸡卵黄免疫球蛋白纯化方法的研究
白晓丽;梁候明
【期刊名称】《现代食品科技》
【年(卷),期】2003(019)004
【摘要】本文比较了分离纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的四种方法(即水稀释法,聚乙二醇法,葡聚糖硫酸盐法和黄原胶法).包括IgY产量,纯度,活性,简便性及扩大生产规模的潜力.试验表明:水稀释法(DS)产量最高,然后依次为葡聚糖硫酸盐法(DS),黄原胶法(Xan),聚乙二醇法(PEG);同时发现水稀释法简便、快速、高效,适用于工业化生产.
【总页数】3页(P72-73,31)
【作者】白晓丽;梁候明
【作者单位】天津科技大学食品科学与生物工程学院天津 300222;天津科技大学食品科学与生物工程学院天津 300222
【正文语种】中文
【中图分类】R446.62
【相关文献】
1.鸡卵黄免疫球蛋白分离纯化方法的研究进展 [J], 薛海燕;宋宏新
2.三种鸡形目雉科禽类卵黄抗体的纯化及二抗的制备 [J], 杨帆;刘先菊;林树柱;秦川;张连峰
3.鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）分离,纯化方法研究… [J], 江千舟
4.鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)分离纯化的研究 [J], 任平国;徐启红
5.经卵黄注射抗IBDV半纯化卵黄免疫球蛋白 [J], 李秉鸿
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卵黄免疫球蛋白IgY的提纯及应用研究进展
２ ） ， 中轻 链 （ ） 子 量 约２ ０ ０ ， 链 分 子 Ｌ 其 Ｌ分 ２ ０ Ｄａ 重 量 约６ ０ ０ ， 电 点 接 近 ５２ ７ ０ Ｄａ 等 ．。含 氮 量 为 １ ．％。 ４８ ＩＹ的 氨 基 酸 组 成 与 鸡 血 清 ＩＧ和 牛 ＩＧ不 同 （ ｇ ｇ ｇ 如
选 健康 产 蛋母 鸡 隔离 饲养 后进 行 免疫 ， 免
疫方法 可选 皮下 、 内 、 肉 、 脉 、 股 沟 、 皮 肌 静 腹 法
６ ９ ． ８ ３ ．
氏囊 注 射 或 口服 等 。 最 常 用 的方 法 是 翅 下 肌 肉
ｌ ． ２ ３
９ ３ ． ７ ５ ．
注 射 。免 疫 抗 原 有 多 种 ， 年 来 国外 已制 备 多 种 近 不 同抗 原 的ＩＹ， 括 人 和 动 物 的 疾 病 的 病 原 体 ｇ 包 以及 细 胞 、 素 、 种 蛋 白等 。一 般 免 疫３ ４ ， 激 各 ￣次 免 疫 后 ７ ０ ， 蛋 中就 产 生 了抗 体 ， 后 ＩＹ ￣１ 天 鸡 随 ｇ
ＩＹ结 构虽 然 和ＩＧ不 同 ， 它 仍 具 有 免 疫 活 ｇ ｇ 但 １ ＩＹ的 性质 ｇ 鸡 卵 黄 免 疫 球 蛋 白 （ Ｙ） 鸡 卵 黄 中存 在 的 Ｉ 是 ｇ
性 ， 抗 体 活性 很 高 。ＩＹ的性 质 较 稳 定 ， 性 保 且 ｇ 活
持 良好 。根 据Ｍａ ｏｏ Ｓ ｉ ｚ 研究 在低 于７ ℃ 条 ｋ ｔ ｈｍｉ ｕ ５
９ ８ ． ８ ０ ． ２ ３ ． ７ ５ ．
１ ０ ． ３ １ ．
逐渐增高 ， 后 达到高峰 ， 最 以后 又 缓 慢 下 降 。 如
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２期
谢国文等 提纯鸡卵黄免疫球蛋白 Ｉ ｇ Ｙ方法的研究 Ｉ ｇ Ｙ技术） 正在成 提取免疫球蛋白卵黄抗体技术（ 为生物技术领域和医药研究中的新热点， 并且越来 越得到国内外同仁的重视， 有可能替代用免疫动物
１ ］ 它肠道感染性疾病并取得满意效果 ［ ， 亦有口服
提供。 １ ２ Ｉ ｇ Ｙ提取与纯化 １ ２ １ 两步硫酸铵提取方法 取消毒完毕的鸡蛋 １个， 用剪刀打开一个小洞， 让蛋清缓缓流出至不 能再流出后， 再以无菌生理盐水洗净卵清， 将整个 卵黄小心移至滤纸上， 来回滚动， 除尽蛋清。再用 针头刺破蛋黄， 使之移到量筒。量取约 ８ｍ ｌ 蛋黄 液， 加１ ０倍双蒸水稀释卵黄， 混匀后 调 ｐ Ｈ值为 ５ １， － ２ ０℃过夜， 室温解冻， １ ２０ ０ ０ｒ ／ ｍ ｉ ｎ４℃ 离 心３ ０ｍ ｉ ｎ ， 再将上清液用滤纸过滤除脂， 获得较清 上清 液。上 清 液 加 入 硫 酸 铵 晶 体， 使其浓度为 １ ９ ％， 静置 １ｈ后， 再次以 １ ２０ ０ ０ｒ ／ ｍ ｉ ｎ４℃ 离心 １ ５ｍ ｉ ｎ ， 取其 白 色 沉 淀。将 白 色 沉 淀 溶 于 １ ５ｍ ｌ ０ ０ １ｍ ｏ ｌ ／ Ｌｐ Ｈ７ ４Ｐ Ｂ Ｓ 中， 再加入硫酸铵晶体， 使 其浓度为 １ ４ ％， 再次静置 １ｈ 后， 再次以 １ ２０ ０ ０ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ４℃ 离心 １ ５ｍ ｉ ｎ ， 取其白色沉 淀， 溶于 ０ ０ １ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ｐ Ｈ ７ ４的 Ｐ Ｂ Ｓ２ｍ ｌ 中。置于双蒸水中搅拌透析， １ ｈ 后更换透析液一次， 共 ４～ ５次， 透析过夜后， 析 出透析后的样品， 再以 ０ ２ ２μ ｍ 滤 器 过 滤 灭 菌。
趋成熟， 使得大规模生产鸡卵黄免疫球蛋白 Ｉ ｇ Ｙ并 在预防和治疗细菌和病毒引起的消化道和非消化
８ ］ 道疾病中发挥重要作用成为可能 ［ 。
２ 结果
两步硫酸铵法提纯的 Ｉ ｇ Ｙ纯度与得率均高于 饱和硫酸铵法， 用Ｂ ａ ｎ ｄ Ｓ ｃ ａ ｎ 软件分析蛋白纯度， 前 ｇ Ｙ纯度可达 ９ ０ ％ 以上， 而后者所得的 者所得的 Ｉ Ｉ ｇ Ｙ纯度约为 ７ ２ ％。用 Ｂ ｒ ａ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄ方法测定 Ｉ ｇ Ｙ蛋 白浓度， 前者蛋白得率为 ６ ２ ５ｇ ／ Ｌ蛋黄， 后者蛋白 得率仅为 ４ ２ ５ｇ ／ Ｌ蛋黄。显然两步硫酸铵法提取 ｇ Ｙ纯度与得率均高于后者。 的Ｉ
本实验比较了两步硫酸铵法与饱和硫酸铵法 提取卵黄抗体 Ｉ ｇ Ｙ技术。实验结果显示， 两步硫酸 铵法所得的 Ｉ ｇ Ｙ纯度与得率均高于饱和硫酸铵法， 前者与后者相比， 具有优越性。 从免疫鸡蛋中用两步硫酸铵法获取抗体的方 ｇ Ｙ纯度 法简单而又实用， 提取鸡卵黄免疫球蛋白 Ｉ
８ ］ 与得率均相对较高 ［ 。期待卵黄抗体 Ｉ ｇ Ｙ技术日
［ 关键词］免疫球蛋白类；蛋黄蛋白质类；鸡 ［ 中图分类号］Ｒ 文献标识码］Ｂ 文章编号］１ ３ ４ １ ． １ ［ ［ ０ ０ ０ ２ ７ ０ ７ （ ２ ０ １ ２ ） ０ ２ ０ ２ １ １ ０ ２ 近年来， 将含有特异性 Ｉ ｇ Ｙ的免疫鸡蛋口服用 于防治轮状病毒腹泻、 脊髓灰质炎、 甲型肝炎和其
第３ ７卷 第 ２期 贵 阳 医 学 院 学 报 Ｖ ｏ ｌ ． ３ ７ Ｎ ｏ ． ２ ２ ０ １ ２年 ４月 Ｊ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ ＬＯ ＦＧ Ｕ Ｉ Ｙ Ａ Ｎ Ｇ ＭＥ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ ＬＣ Ｏ Ｌ Ｌ Ｅ Ｇ Ｅ ２ ０ １ ２ ４ ·技术与方法·
提纯鸡卵黄免疫球蛋白 Ｉ ｇ Ｙ方法的研究
［ 基金项目］ 贵州省科基金 通讯作者
１ ２ ２ 透析袋处理 在 ３ ０ ０ｍ ｌ 透析处理液（ ２ ％ Ｎ ａ Ｈ Ｃ Ｏ 、 １ｍ ｍ ｏ ｌ ／ ＬＥ Ｄ Ｔ Ａ ，ｐ Ｈ８ ０ ） 中将透析袋煮 ３ 沸１ ０ｍ ｉ ｎ 后， 以蒸馏水彻底漂洗后再在 ３ ０ ０ｍ ｌ （ ｐ Ｈ ８ ）１ｍ ｍ ｏ ｌ ／ ＬＥ Ｄ Ｔ Ａ液中煮沸 １ ０ｍ ｉ ｎ ， 再以灭菌水 里外彻底冲洗。 １ ２ ３ 饱和硫酸铵提取方法 以相同浓度卵黄粗 提液进行饱和硫酸铵提取。用水稀释法粗提卵黄
４ 参考文献
［ １ ］郑平， 孙先军， 郭字红， 等． 抗轮状病毒免疫球蛋白治疗 婴幼儿轮状病毒肠炎 疗 效 观 察 ［ Ｊ ］ ． 中 国 妇 幼 保 健， ２ ０ ０ ７（ ２ ９ ） ： ４ １ ０ ８－ ４ １ ０ ９ ． ［ ２ ］黄清松， 罗深秋 抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ Ｍ Ｒ Ｓ Ａ ） 卵黄免疫球蛋白（ Ｉ ｇ Ｙ ） 的制备与性质研究［ Ｊ ］ ． 广 东药学院学报， ２ ０ ０ ８ （ ２ ） ： １ １－ １ ４ ［ ３ ］陈斌， 杨志华． 鸡卵黄免疫球蛋白（ Ｉ ｇ Ｙ ） 的作用机理及 应用前景［ Ｊ ］ ． 浙江畜牧兽医， ２ ０ ０ ５ （ １ ） ： ９－ １ ０ ． ［ ４ ］扬帆， 张连峰 卵黄抗体的分离提取和纯化方法 ［ Ｊ ］ ． 中国比较医学杂志， ２ ０ ０ ７ （ １ １ ） ： ７－ １ １ ． ［ ５ ］Ｄ ｏ ｎ ｇＤ ， Ｌ ｉ ｕＨ ， Ｘ ｉ ａ ｏＱ ， ｅ ｔ ａ ｌ ． Ａ ｆ ｆ ｉ ｎ ｉ ｔ ｙｐ ｕ ｒ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｅ ｇ ｇ ｙ ｏ ｌ ｋｉ ｍ ｍ ｕ ｎｏ ｇ ｌ ｏ ｂ ｕ ｌ ｉ ｎ ｓ （ Ｉ ｇ Ｙ ）ｗ ｉ ｔ ｈａ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｉ ｃ ｌ ｉ ｇ ａ ｎ ｄ ［ Ｊ ］ ． ＪＣ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ａ ｒＢＡ ｎ ａ ｌ ｙ ｔ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ Ｂ ｉ ｏ ｍ ｅ ｄＬ ｉ ｆ ｅＳ ｃ ｉ ， ２ ０ ０ ８ （ ８ ７ ０ ） ： ５ １－ ５ ４ ． ［ ６ ］Ｎ ｉ ｌ ｓ ｓ ｏ ｎＥ ， Ｌ ａ ｒ ｓ ｓ ｏ ｎＡ ， Ｏ ｌ ｅ ｓ ｅ ｎＨＶ ， ｅ ｔ ａ ｌ ． Ｇ ｏ ｏ ｄｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｉ ｇ Ｙ ａ ｇ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ Ｐ ｓ ｅ ｕ ｄ ｏ ｍ ｏ ｎ ａ ｓ ａ ｅ ｒ ｕ ｇ ｉ ｎ ｏ ｓ ａｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｎｃ ｙ ｓ ｔ ｉ ｃｆ ｉ ｂ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ［ Ｊ ］ ． Ｐ ｃ ｄ ｉ ａ ｔ ｒ Ｐ ｕ ｌ ｍ ｏ ｎ ｏ Ｉ ， ２ ０ ０ ８（ ９ ） ： ８ ９ ２－ ８ ９ ９ ． ［ ７ ］Ｇ ｒ ｅ ｕ ｎ ｋ ｅ Ｋ ， Ｓ ｐ ｉ ｌ ｌ ｎ ｅ ｒ Ｅ ， Ｂ ｒ ａ ｒ ｅ ｎＩ ， ｅ ｔ ａ ｌ ． Ｂ ｉ ｖ ａ ｌ ｅ ｎ ｔ ｍ ｏ ｎ ｅ ｅ ｌ ｏ ｎ ａ ｌ Ｉ ｇ Ｙａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｓｂ ｙｃ ｏ ｎ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍ ｂ ｉ ｎ ａ ｆ ｌ ｔ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙｆ ｒ ａ ｇ ｍ ｅ ｎ ｔ ｓ ［ Ｊ ］ Ｊ ． Ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｅ ｈ ｎ ｏ ｌ ， ２ ０ ０ ６（ ２ ） ： ４ ４ ６－ ４ ５ ６ ． ［ ８ ］郑平， 孙先军， 郭字红， 等． 抗轮状病毒免疫球蛋白治疗 婴幼儿轮状病毒肠炎 疗 效 观 察 ［ Ｊ ］ ． 中 国 妇 幼 保 健， ２ ０ ０ ７（ ２ ９ ） ： ４ １ ０ ８－ ４ １ ０ ９ ． （ ２ ０ １ １－ １ ２－ ２ ７收稿， ２ ０ １ ２－ ０ ２－ ２ ７修回） 编辑： 余
６ ］ 获得 Ｉ ｇ Ｙ后用无菌 Ｅ Ｐ管盛装， 置－ ２ ０℃保存 ［ 。
ｇ Ｙ鸡蛋产品替代抗生素成功治疗胃肠道 特异性 Ｉ 疾病 的 报 道
［ ２ ］
。鸡 卵 黄 抗 体 （ Ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｇ ｌ ｏ ｂ ｕ ｌ ｉ ｎｏ ｆ
［ ３ ］
， Ｉ ｇ Ｙ ） 是由母鸡血液中 Ｉ ｇ Ｇ转移至其卵黄 ｅ ｇ ｇｙ ｏ ｌ ｋ 中对子代产生保护性作用的免疫球蛋白 。免疫 鸡蛋黄 中 含 有 大 量 来 源 于 血 清 的 Ｉ ｇ Ｇ抗 体 （ 即 Ｉ ｇ Ｙ ） ， 浓度远高于血清， 维持时间长达 ２ Байду номын сангаас周， 具有 高度稳定性和生物学活性， 这使鸡卵黄抗体 Ｉ ｇ Ｙ口 服防病治病成为可能， 目前国内外已有较多关于怎 样从鸡蛋黄中提取 Ｉ ｇ Ｙ的报道
注： １－ ４泳道为两步硫酸铵法提取的 Ｉ ｇ Ｙ ， ５ 、 ８泳道为超声 超碎的 Ｈ Ｐ抗原， ６泳道为 Ｍ ａ ｒ ｋ ｅ ｒ ， ７ 、 ９泳道为 饱和硫酸铵法提取的 Ｉ ｇ Ｙ 。
图１ 两步硫酸铵法与饱和硫酸铵 提纯的 Ｉ ｇ Ｙ电泳图 Ｆ ｉ ｇ ． １ Ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｉ ｓ ｏ ｎｏ ｆ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｇ ｒ ａ ｍ ｓ ｏ ｆ Ｉ ｇ Ｙｐ ｕ ｒ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈｔ ｗ ｏｓ ｔ ｅ ｐａ ｍ ｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄａ ｎ ｄ ｓ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ｄａ ｍ ｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ
谢国文，张永宏 ，许春杏，杨 杰，张维森，张 健 （ 贵阳医学院附院 消化科，贵州 贵阳 ５ ５ ０ ０ ０ ４ ）
［ 摘 要］目的：优化抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白 Ｉ ｇ Ｙ提取方法。方法：比较硫酸铵盐和饱和硫酸铵 ２种方
Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ对提取产物进行鉴定。结果： ｐ Ｈ ５ １水稀释法加盐析法（ 两步硫酸 法对卵黄除脂效果的影响， 并采用 Ｓ 铵法） 除脂效果相对较好， 获得 Ｉ ｇ Ｙ纯度及得率均较高。 结论：水溶稀释法加盐析法（ 两步硫酸铵法） 制备 ｌ ｇ Ｙ 具有纯度高、 得率高、 特异性强及利用小体积样品获得大量纯化蛋白的优点。