鸡卵黄免疫球蛋白的mPEG修饰及其稳定性研究
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经 过 几 十 年 的发 展 ， Ｅ Ｐ Ｇ化 技 术 不 仅 在 蛋 白质 类 药 物 的 开 发
ＤＹＹ １ ＿２电泳仪 （ 北京六一仪器厂 ） Ｄ ０ ； Ｕ７ ０紫外一 可见 光分光
中得到普遍 的应用 ，而且 已扩 展到新型 药物载体 、控 释制剂 等各个领域＿ 。 ５ 研究表 明 ， Ｐ Ｇ修饰 后 ，大多数 蛋 白质 ］ 经 Ｅ 发生免疫原性与抗原 性降低 ，热稳 定性及 机械 稳定 性增加 ，
Байду номын сангаас
光谱 、圆二色光谱 和荧光光谱分析 比较 了修饰前后 ＩＹ的稳定性 。首先 用 Ｎ 羟基琥 珀酰亚胺活化 的单 甲氧 ｇ ＿
基聚乙二醇（ ＮＨＳｍＰ Ｇ 对 ＩＹ进行化学修饰 ，确定 了 ｍＰ Ｇ的最佳修饰条件 ，即 ＩＹ与 ｒＰ Ｇ摩尔 比为 － Ｅ ） ｇ Ｅ ｇ ｎＥ １： ０ Ｈ 值为 ７ 反应时间为 １ｈ 所得产物 ｍＰ Ｇ－ Ｙ修饰率为 ２ ． ６ ，活性保持 率为 ８ ． ２ 。其次 １ 、ｐ 、 ， Ｅ Ｉ ｇ Ｏ ５ ７ ６
光度计 （ 美国贝克曼库尔特有限公司 ） Ｆ ２ Ｈ计 （ ； Ｅ ０ｐ 梅特勒一 托利 多中国有 限公 司） ；酶 标仪 （ＭＡ Ｉ ＲＫ） ＥＲ Ｅ ０型 ；Ｖ Ｔ Ｘ ７
傅里 叶变换红外 光 谱仪 （ 国 Ｂ ｕ ｅ 公 司） Ｊ８ 德 ｒｋ ｒ ； 一０圆二 色光
溶 解性增加 ，循 环半 衰期 延 长 ，耐 蛋 白酶 水解 等 性 质 的改
利用鸡 卵黄提取免疫 活性成分并使得稳定性得 到保护具有重
大经济及现 实意义 。
１ 实验部分
１ １ 材 料 与 试 剂 ．
鸡产生免疫反应 ， 在输 卵管内卵黄成熟期 ， 血液 中 ＩＧ被选 ｇ 择性地转移到卵黄 中唯一 的免疫球蛋 白类 Ｌ 。经 大量的研究 １ ］
发现 ，ＩＹ具有不与人类补体 以及类 风湿 因子结合［ 等免疫 ｇ ２ ］
变［。 ７ 本工作主要研究 了单 甲氧基 聚乙二醇 （ Ｅ 修饰 过 ］ ｍＰ Ｇ）
谱仪 （ 日本 Ｊ Ｓ Ｏ公 司） Ｆ ５０ ｐ 荧 光分光 光度计 （ ＡＣ ；Ｒ －３ １ ｃ 日本
通过光谱分析法对 ＩＹ 以及 ｍＰ Ｇ ＩＹ 的热稳定性和酸碱稳定性进行 了研究 。 ｇ Ｅ －ｇ 结果表 明， ｏ℃温育 １０ｍｉ ７ ２ ｎ 后 ，ｇ ＩＹ的 ａＨｅｉ，］ｓｅｔ － ｌ ３ ｈ ｅ，￣Ｔ ｒ ，Ｒ ｎ ｏ 各 二 级 结 构 含 量 由 １ ． ，４ ． ，６ ２ ，３ ． 变 为 ｘ － ｕｎ ａ ｄｍ ４５ ２１ ． ７２ １ ６ ，５． ５ ，５ ８ ，３ ． ；ｍＰ ＩＹ 的 各二 级 结 构 含 量 由 ｌ ． ，４ ． ，６ ３ ，３ ． 变 为 ． ５ ２ ． ７５／ ／ ０ Ｅ ｇ ２９ ２７ ． ８１ ３１ ． ％，５． ％，７ ２ ，３ ． 。同样酸碱 处理后 ， Ｅ － Ｙ 比修饰 前 ＩＹ所 引起 的二 级结构 变化更小 。 ０５ ． ９２ ｍＰ Ｇ Ｉ ｇ ｇ
鸡 卵黄 免疫球 蛋 白的 ｍＰ Ｇ修 饰 及 其 稳定 性研 究 Ｅ
王 丽英 ， 马美 湖 ， 黄 群 ， 史晓霞
华 中农业大学 ， 国家蛋 品加工技术研发分 中心 ， 湖北 武汉 ４ ０ ７ ３００
摘
要
研究了单甲氧基聚乙二醇（ Ｅ 对鸡卵 黄免疫球 蛋白（ｇ 的化学 修饰 ， 通过傅里 叶变换红外 ｍＰ Ｇ） ＩＹ） 并
１ ２ 仪 器 与 设 备 ． ＡＬ ＨＡ － Ｄ ｌｓ冷 冻 干 燥 机 （ 国 Ｃ ｒ ｔ 司 ） Ｐ １４Ｌ ｐｕ 德 ｈｉ 公 ｓ ；
其用于机体 时 ，会引 发抗 体 产 生而 降低 疗 效 ，并 且 易受 温
度、 酸碱 的影响 ，在所有种类免疫球蛋 白中稳定性最低 ｌ ， ３ ］ 从而限制 了 ＩＹ的应用 领域 。聚乙二醇 修饰 （ Ｅ ｍｏ ｉｃ— ｇ Ｐ Ｇ ｄｆ ａ ｉ ｔ ｎ） ２ ｉ 是 ０世纪 ７ ｏ Ｏ年代后期逐渐发展起来 的一 项热 门技 术 ，
第３卷 ， ９ ２ 第 期
２０ １２年 ９月
光
谱
学
与
光
谱
分
析
Ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃ ｒ ｌＡｎ ｌ ｓｓ ｐ ｃ ｒ ｓ ｏ ｙ ａ ｄ Ｓ ｅ ｔａ ａ ｙ ｉ
Ｖｏ． ２ Ｎｏ ９ ｐ ２ ０ — ５ ７ １ ３ ， ． ， ｐ ５ １２ ０ Ｓ ｐ ｅ ｅ ，２ １ ｅ ｔ ｍｂ ｒ ０ ２
学特性 ， 现在 已被 广泛 应用 于免 疫 学诊 断 和 医药等 许 多方 面 。由于 ＩＹ是蛋 白质类大分 子 ，具有一定 的免 疫原性 ，当 ｇ
新 鲜鸡 蛋 （ 汉 九 峰 山养 鸡 场 ） 武 ；鸡 卵 黄 免 疫 球 蛋 白 （ｇ ＩＹ，实验室制 备 ，纯度 ９ ．２ ） ５ Ｏ ；鸡 ＩＹ Ｌ Ｓ ｇ Ｅ ＩＡ试剂 盒 、 ２ ４ ６三硝 基苯磺 酸 、 甲氧基聚 乙二醇 （ Ｅ Ｍｒ ５０ ０ ， ，－ 单 ｍＰ Ｇ， ： ０ ＫＤ 、Ｎ＿ 。 甲基 甲酰胺 、丁二 酸酐 、Ｎ 羟基 琥珀酰 亚胺 、 ） Ｎ’ 二 ＿ 二环 己基碳二亚胺等 购 自 Ｓｇ 公 司。 ｉ ｍａ
中 图 分 类 号 ： ５ ． ０６ ７ ３
及修饰物 ｍＰ Ｇ ＩＹ温度 、酸碱稳定性进行 了比较 。对充分 Ｅ － ｇ
引 言
鸡 卵 黄 免 疫 球 蛋 白 ， 称 ＩＹ（ｈｃｅ ｇ ｏｋｉ ｎ — 简 ｇ ｃｉ ｎｅｇｙ ｌ ｍｍｕ ｏ ｋ ｇｏ ｕｉ） ｌｂ ｌ ，又称鸡卵黄抗 体 ，是产 蛋母鸡 受免疫 刺激 后 ， ｎ 母
因此可 以推断出 ＩＹ经过 ｍＰ Ｇ修饰后对温 度 、 ｇ Ｅ 酸碱处理所引起 的变性有着更强 的稳定性 。
关键词
单 甲氧基聚 乙二醇 ；卵黄免疫球 蛋 白； 化学修饰 ；光谱分析 ； 稳定性
文 献 标 识 码 ：Ａ Ｄ ：１． ９ ４ ｊｉ ｎ １ ０ —５３ ２ １ ）９２ ０ —７ ＯＩ ０ ３ ６／．ｓ ．０ ００ ９ （ ０ ２０ —５ １０ ｓ
ＤＹＹ １ ＿２电泳仪 （ 北京六一仪器厂 ） Ｄ ０ ； Ｕ７ ０紫外一 可见 光分光
中得到普遍 的应用 ，而且 已扩 展到新型 药物载体 、控 释制剂 等各个领域＿ 。 ５ 研究表 明 ， Ｐ Ｇ修饰 后 ，大多数 蛋 白质 ］ 经 Ｅ 发生免疫原性与抗原 性降低 ，热稳 定性及 机械 稳定 性增加 ，
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光谱 、圆二色光谱 和荧光光谱分析 比较 了修饰前后 ＩＹ的稳定性 。首先 用 Ｎ 羟基琥 珀酰亚胺活化 的单 甲氧 ｇ ＿
基聚乙二醇（ ＮＨＳｍＰ Ｇ 对 ＩＹ进行化学修饰 ，确定 了 ｍＰ Ｇ的最佳修饰条件 ，即 ＩＹ与 ｒＰ Ｇ摩尔 比为 － Ｅ ） ｇ Ｅ ｇ ｎＥ １： ０ Ｈ 值为 ７ 反应时间为 １ｈ 所得产物 ｍＰ Ｇ－ Ｙ修饰率为 ２ ． ６ ，活性保持 率为 ８ ． ２ 。其次 １ 、ｐ 、 ， Ｅ Ｉ ｇ Ｏ ５ ７ ６
光度计 （ 美国贝克曼库尔特有限公司 ） Ｆ ２ Ｈ计 （ ； Ｅ ０ｐ 梅特勒一 托利 多中国有 限公 司） ；酶 标仪 （ＭＡ Ｉ ＲＫ） ＥＲ Ｅ ０型 ；Ｖ Ｔ Ｘ ７
傅里 叶变换红外 光 谱仪 （ 国 Ｂ ｕ ｅ 公 司） Ｊ８ 德 ｒｋ ｒ ； 一０圆二 色光
溶 解性增加 ，循 环半 衰期 延 长 ，耐 蛋 白酶 水解 等 性 质 的改
利用鸡 卵黄提取免疫 活性成分并使得稳定性得 到保护具有重
大经济及现 实意义 。
１ 实验部分
１ １ 材 料 与 试 剂 ．
鸡产生免疫反应 ， 在输 卵管内卵黄成熟期 ， 血液 中 ＩＧ被选 ｇ 择性地转移到卵黄 中唯一 的免疫球蛋 白类 Ｌ 。经 大量的研究 １ ］
发现 ，ＩＹ具有不与人类补体 以及类 风湿 因子结合［ 等免疫 ｇ ２ ］
变［。 ７ 本工作主要研究 了单 甲氧基 聚乙二醇 （ Ｅ 修饰 过 ］ ｍＰ Ｇ）
谱仪 （ 日本 Ｊ Ｓ Ｏ公 司） Ｆ ５０ ｐ 荧 光分光 光度计 （ ＡＣ ；Ｒ －３ １ ｃ 日本
通过光谱分析法对 ＩＹ 以及 ｍＰ Ｇ ＩＹ 的热稳定性和酸碱稳定性进行 了研究 。 ｇ Ｅ －ｇ 结果表 明， ｏ℃温育 １０ｍｉ ７ ２ ｎ 后 ，ｇ ＩＹ的 ａＨｅｉ，］ｓｅｔ － ｌ ３ ｈ ｅ，￣Ｔ ｒ ，Ｒ ｎ ｏ 各 二 级 结 构 含 量 由 １ ． ，４ ． ，６ ２ ，３ ． 变 为 ｘ － ｕｎ ａ ｄｍ ４５ ２１ ． ７２ １ ６ ，５． ５ ，５ ８ ，３ ． ；ｍＰ ＩＹ 的 各二 级 结 构 含 量 由 ｌ ． ，４ ． ，６ ３ ，３ ． 变 为 ． ５ ２ ． ７５／ ／ ０ Ｅ ｇ ２９ ２７ ． ８１ ３１ ． ％，５． ％，７ ２ ，３ ． 。同样酸碱 处理后 ， Ｅ － Ｙ 比修饰 前 ＩＹ所 引起 的二 级结构 变化更小 。 ０５ ． ９２ ｍＰ Ｇ Ｉ ｇ ｇ
鸡 卵黄 免疫球 蛋 白的 ｍＰ Ｇ修 饰 及 其 稳定 性研 究 Ｅ
王 丽英 ， 马美 湖 ， 黄 群 ， 史晓霞
华 中农业大学 ， 国家蛋 品加工技术研发分 中心 ， 湖北 武汉 ４ ０ ７ ３００
摘
要
研究了单甲氧基聚乙二醇（ Ｅ 对鸡卵 黄免疫球 蛋白（ｇ 的化学 修饰 ， 通过傅里 叶变换红外 ｍＰ Ｇ） ＩＹ） 并
１ ２ 仪 器 与 设 备 ． ＡＬ ＨＡ － Ｄ ｌｓ冷 冻 干 燥 机 （ 国 Ｃ ｒ ｔ 司 ） Ｐ １４Ｌ ｐｕ 德 ｈｉ 公 ｓ ；
其用于机体 时 ，会引 发抗 体 产 生而 降低 疗 效 ，并 且 易受 温
度、 酸碱 的影响 ，在所有种类免疫球蛋 白中稳定性最低 ｌ ， ３ ］ 从而限制 了 ＩＹ的应用 领域 。聚乙二醇 修饰 （ Ｅ ｍｏ ｉｃ— ｇ Ｐ Ｇ ｄｆ ａ ｉ ｔ ｎ） ２ ｉ 是 ０世纪 ７ ｏ Ｏ年代后期逐渐发展起来 的一 项热 门技 术 ，
第３卷 ， ９ ２ 第 期
２０ １２年 ９月
光
谱
学
与
光
谱
分
析
Ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃ ｒ ｌＡｎ ｌ ｓｓ ｐ ｃ ｒ ｓ ｏ ｙ ａ ｄ Ｓ ｅ ｔａ ａ ｙ ｉ
Ｖｏ． ２ Ｎｏ ９ ｐ ２ ０ — ５ ７ １ ３ ， ． ， ｐ ５ １２ ０ Ｓ ｐ ｅ ｅ ，２ １ ｅ ｔ ｍｂ ｒ ０ ２
学特性 ， 现在 已被 广泛 应用 于免 疫 学诊 断 和 医药等 许 多方 面 。由于 ＩＹ是蛋 白质类大分 子 ，具有一定 的免 疫原性 ，当 ｇ
新 鲜鸡 蛋 （ 汉 九 峰 山养 鸡 场 ） 武 ；鸡 卵 黄 免 疫 球 蛋 白 （ｇ ＩＹ，实验室制 备 ，纯度 ９ ．２ ） ５ Ｏ ；鸡 ＩＹ Ｌ Ｓ ｇ Ｅ ＩＡ试剂 盒 、 ２ ４ ６三硝 基苯磺 酸 、 甲氧基聚 乙二醇 （ Ｅ Ｍｒ ５０ ０ ， ，－ 单 ｍＰ Ｇ， ： ０ ＫＤ 、Ｎ＿ 。 甲基 甲酰胺 、丁二 酸酐 、Ｎ 羟基 琥珀酰 亚胺 、 ） Ｎ’ 二 ＿ 二环 己基碳二亚胺等 购 自 Ｓｇ 公 司。 ｉ ｍａ
中 图 分 类 号 ： ５ ． ０６ ７ ３
及修饰物 ｍＰ Ｇ ＩＹ温度 、酸碱稳定性进行 了比较 。对充分 Ｅ － ｇ
引 言
鸡 卵 黄 免 疫 球 蛋 白 ， 称 ＩＹ（ｈｃｅ ｇ ｏｋｉ ｎ — 简 ｇ ｃｉ ｎｅｇｙ ｌ ｍｍｕ ｏ ｋ ｇｏ ｕｉ） ｌｂ ｌ ，又称鸡卵黄抗 体 ，是产 蛋母鸡 受免疫 刺激 后 ， ｎ 母
因此可 以推断出 ＩＹ经过 ｍＰ Ｇ修饰后对温 度 、 ｇ Ｅ 酸碱处理所引起 的变性有着更强 的稳定性 。
关键词
单 甲氧基聚 乙二醇 ；卵黄免疫球 蛋 白； 化学修饰 ；光谱分析 ； 稳定性
文 献 标 识 码 ：Ａ Ｄ ：１． ９ ４ ｊｉ ｎ １ ０ —５３ ２ １ ）９２ ０ —７ ＯＩ ０ ３ ６／．ｓ ．０ ００ ９ （ ０ ２０ —５ １０ ｓ