鸡卵黄免疫球蛋白IgY酶联免疫分析
IGY鸡卵黄免疫球蛋白
1概述卵黄抗体（yolk antibody, IgY）：通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。
2IgY的形成、作用机理与制备卵黄抗体的形成禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。
当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体；当卵细胞分泌进入输卵管时，流经输卵管的血液中含有的特异性抗体(主要是IgA和IgM)进入卵清中，形成卵清抗体。
IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的IgG。
与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中移行的时间较短，因而卵清抗体含量极微。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用，但同时也会干扰鸡疫苗的免疫效果。
IgY的性质IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。
正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。
其等电点约为5.2。
IgY与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。
在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。
IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY；高于80℃，大部分IgY失去活性。
IgY在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时活性亦有所下降。
IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。
将胃蛋白酶和IgY在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。
鸡卵黄抗体在防治家畜疾病中的应用-中国饲料行业信息网
鸡卵黄抗体在防治家畜疾病中的应用-中国饲料行业信息网鸡卵黄抗体在防治家畜疾病中的应用随着中国加入WTO，我国畜牧养殖业迎来了一个巨大的发展机遇。
我们应该看到，尽管我国的肉、蛋、奶产品在国际市场上具有较大的价格优势，但因存在药物残留等问题，其市场前景并不乐观。
为了增强我国畜牧产品的国际竞争力，必须提高产品品质，减少药物残留，逐渐降低甚至停止使用抗生素等药物。
卵黄抗体是一种颇具潜力的抗生素替代品，它具有无毒、天残留、不产生抗药性等优点，发展前景备受瞩目。
产蛋母鸡经免疫后，血清中将产生相应的抗体，随后这些抗体会被选择性地转移到卵黄中。
由于卵黄只含有一种免疫球蛋白Igh，故称其为卵黄免疫球蛋白IgG（Yolk Immlunoglobulin G，简称为IgY）。
卵黄中IgY的浓度较高，能长期维持甚至超过血清中抗体浓度的水平（Larsson等，1993；Hatta等，1993）。
鸡是生产多克隆抗体的理想动物，从鸡蛋中获取特异性抗体具有产量高、成本低、操作简单等优点。
l只产蛋鸡每年大约可产280个蛋，每只蛋约含100－150mgIgY，因此1只鸡每年可提供约40mglY(Min e等，2002）。
研究证实，鸡生产抗体的效率是哺乳动物的10倍以上。
IgY口服免疫疗法可提供有效的被动免疫保护，防止由细菌或病毒引起的胃肠道或非肠道感染。
近年来，使用特异性IgY代替抗生素来防治家畜疾病的研究发展迅速，应用前景十分广阔。
1 口服IgY对奶牛乳房炎的治疗乳房炎是奶牛的一种常见多发病，是造成奶牛业损失最大的疾病之一。
1992年，乳房炎感染使美国奶牛协会成员的损失逾两亿美元。
奶牛因患乳房炎会导致产奶量下降，且牛奶中还有可能带有致病微生物。
目前防治乳房炎主要采用抗生素法，但由于长期使用致使牛奶中残留了大量抗生素，严重影响牛奶品质。
Coleman在1996年采用口服IgY法成功治疗了泌乳期如牛的乳房炎，并获得美国专利。
泌乳期奶牛的SCC（Somatic Cell Count，体细胞数）一般都会上升，服用特异性 IgY会使 SCC显著降低，乳头上的致病菌减少甚至完全消失（Coleman，2000）。
提纯鸡卵黄免疫球蛋白IgY方法的研究
１ ２ ．．
取消毒完毕 的鸡蛋
疾病 的报 道 。鸡 卵黄 抗 体 （ｍ ｕｏｌ ｕ ｎ ｏ Ｊ Ｉｍ ｎｇ ｂｌ ｆ ｏ ｉ ｅｇｙｌ， Ｙ 是 由母鸡血 液 中 Ｉ ｇ ｏ Ｉ ） ｋｇ ｇ Ｇ转移 至其 卵黄 中对子代产生保护性 作用的免疫球蛋 白 。免疫 Ｊ 鸡蛋黄 中含 有 大 量来 源 于血 清 的 Ｉ ｇ Ｇ抗 体 （ 即
第３ ７卷 第 ２期 ２１ ０ ２年 ４月
贵 阳 医 学 院 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＵＩ ＹＡＮＧ ＥＤＩ Ｍ ＣＡＬ ＣＯＬ ＬＥＧＥ
Ｖｏ ． ７ Ｎｏ ２ １３ ． ２ ２． ０１ ４
・
技术 与 方法 ・
提 纯 鸡 卵 黄 免疫 球 蛋 白 ＩＹ方 法 的研 究 水 ｇ
４℃ 离 心 １ ｉ， 其 白 色 沉 淀 ， 于 ００ ｏ Ｌ ５ｍｎ 取 溶 ．１ｍ ｌ ／
纯度与得率均较高的提取鸡 卵黄免疫球蛋 白 Ｉ ｇ Ｙ 方法 ， 为大规模制备 口服抗幽门螺旋杆菌 Ｉ ｇ Ｙ抗体 治疗 胃肠道疾病实验提供资料 。
ｐ ７４的 Ｐ Ｓ２ｍ 中。置于双蒸水中搅拌透析 ， Ｈ． Ｂ ｌ １
ｈ后更 换 透 析 液一 次 ， ４～ 共 ５次 ， 析 过 夜 后 ， 透 析
１ 材 料 与 方 法
１ １ 动物 与试 剂 ．
出透析 后 的样 品 ， 以 ０２ ｍ 滤器 过滤灭 菌。 再 ．２ 获得 ＩＹ后用无菌 Ｅ 管盛装 ， 一 ０℃保存 。 ｇ Ｐ 置 ２ Ｊ
１２ ２ 透 析袋 处理 ．． 在 ３０ｍ 透 析 处 理 液 （ ％ ０ ｌ ２
［ 中图分类号 ］Ｒ４． ３１１
［ 文献标识码 ］Ｂ ［ 文章编号］１ ０ ７ （ １） － １－ ０ ． ０ ２ ２０ ０ １ ２ ０２ ７ ０ ２２ ０
基因专一性鸡卵黄抗体(IgY)的研究及应用
基因专一性鸡卵黄抗体(IgY)的研究及应用
唐金宝;吉爱国
【期刊名称】《生命的化学》
【年(卷),期】2004(24)1
【摘要】用抗原免疫鸡 ,从鸡卵黄中获取特异多克隆IgY抗体 ,是一条高产量、低成本的简便快速途径。
IgY与哺乳动物抗体IgG相比具有许多突出的优点 ,使IgY 在现代免疫学中已得到广泛应用。
采用基因免疫方法制备的基因专一性IgY抗体 ,在免疫分析、寻找药靶和生物标记物、制备新抗体等方面 ,必有进一步的应用。
【总页数】2页(P79-80)
【关键词】鸡卵黄免疫球蛋白;IgY;基因专一性IgY抗体
【作者】唐金宝;吉爱国
【作者单位】山东大学药学院;山东大学威海分校海洋生物工程系,咸海264209【正文语种】中文
【中图分类】Q819
【相关文献】
1.鸡卵黄抗体IgY在临床医学中的应用 [J], 杜洪桥
2.应用斑点ELISA快速研究鸡卵黄抗体IgY的理化性质 [J], 阮光萍;马骊;姚新生;温茜;邹红云;罗微;王小宁
3.鸡卵黄抗体(IgY)的性质、提纯及应用于寄生虫学的研究 [J], 周彦
4.鸡卵黄抗体(IgY)的提纯及其在医学上的应用 [J], 杨婷婷
5.鸡ND-IBD卵黄抗体(IgY)的精制与应用 [J], 杨勇
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免疫球蛋白测定方法
常用的免疫球蛋白测定方法，主要有免疫电泳、酶联免疫吸附试验、荧光免疫分析、免疫组织化学、放射免疫分析等。
1、免疫电泳：免疫电泳是一种用于分离和定量测定血液中各种免疫球蛋白的方法，它利用电场将血液中的免疫球蛋白按照电荷大小分离成多个带，然后用特异性抗体进行染色和检测，可以定量测定免疫球蛋白类型，如IgM、IgG、IgA等。
2、酶联免疫吸附试验：是一种常用的免疫球蛋白测定方法，通过将待测血清中的免疫球蛋白与特定抗体结合，再使用酶标记进行检测，从而能判断出检测结果。
3、荧光免疫分析：是利用荧光染料标记抗体和待测血清中的免疫球蛋白结合，然后通过荧光测定来检测和定量特定免疫球蛋白。
荧光免疫分析灵敏度高，可以检测极低浓度的免疫球蛋白。
4、免疫组织化学：一种用于检测细胞内抗原的生物学技术，通过将抗体与显色剂结合，在显微镜下观察免疫球蛋白的存在和分布。
5、放射免疫分析：放射免疫分析利用放射原理，将放射性同位素和抗原抗体反应相结合进行测量。
若进行免疫球蛋白测定后有异常情况出现，需要及时就医进行综合诊断治疗。
鸡卵黄免疫球蛋白_IgY_分离_纯化方法研究进展
胞反应性。
抗肿瘤免疫的存在与肿瘤负荷减小的临床表现相关。
这一试验和其他近期试验都得益于人们对抗肿瘤免疫的加深了解。
大多数新的免疫治疗方法的目的在于促进CD8+CTL的活化,该细胞被认为是众多鼠肿瘤排斥模型中的主要效应细胞。
而且已知肿瘤采用多种机制诱导宿主耐受并阻止T AA特异性CTL 活化。
树突状细胞(DC)可表达高水平主要组织相容性复合体分子、共刺激分子和活化T 细胞的细胞因子,也许对克服这些障碍及活化TAA特异性CT L应答有用。
因此,许多新疫苗也加有已在体外荷载了TAA的自体DC。
而该研究用DC刺激物GM-CSF代之。
GM-CSF的作用是通过募集外周DC前体并诱导DC成熟来促进抗原提呈细胞(APC)提呈TAA和CT L的活化。
最近的研究也证实了CD40介导的DC活化在激发TA A特异性CT L应答中的作用。
最近报道用竞争性抗CD40抗体处理后的小鼠体内出现了CTL依赖性B淋巴瘤排斥反应。
因此,GM-CSF和CD40配体可能是未来淋巴瘤和其他肿瘤疫苗的良好佐剂配方。
Bendandi等报道的疫苗策略并不代表特别新颖的方法,但是其治疗效果的验证、计划周密的研究设计、以及细致的实施,使这一研究成为癌症疫苗开发领域中的一个标志。
在确定疫苗是否可以达到理想的治疗效果时,对患者病期的考虑不容忽略。
这些发现提示在癌症治疗中,须用疫苗方法进行早期干预。
而且,将特异性T AA作为疫苗的研究,应当仔细监测接种后的免疫应答。
今后鉴定其他肿瘤TA A的研究以及仔细监测的肿瘤疫苗试验,应导致更新、更有效的疫苗策略的建立。
(杨陵江编译 陈受霓校)参考文献1De Gru iji T D et al.Nat M ed,1999;5(10):1124-1125 2Ver morken J B et ncet,1999;353:345-3503Bend andi M et al.Nat M ed,1999;5(10):1171-1177(2000-01-18收稿)鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)分离、纯化方法研究进展湖北医科大学口腔医学院(430079) 江千舟综述 樊明文 边 专审校 摘要 鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)作为一种高产量高效的抗体,已被广泛应用于医学各个领域。
鸡卵黄免疫球蛋白IgY酶联免疫分析
鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T30 ng/L - 900ng/L使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中卵黄免疫球蛋白（IgY）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）水平。
用纯化的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入卵黄免疫球蛋白（IgY），再与HRP标记的卵黄免疫球蛋白（IgY）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的卵黄免疫球蛋白（IgY）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
免疫球蛋白的检测方法
免疫球蛋白的检测方法免疫球蛋白（Immunoglobulin，简称Ig）是一类在机体免疫应答中起关键作用的蛋白质，它能够识别和结合抗原，参与免疫反应的调节和执行。
因此，对免疫球蛋白的检测具有重要的临床意义。
本文将介绍免疫球蛋白的检测方法，以及各种方法的优缺点和适用范围。
一、免疫球蛋白的定量检测方法。
1. 酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
ELISA法是一种常用的免疫球蛋白定量检测方法，其原理是利用酶标记抗体与待测血清中的免疫球蛋白结合，再通过底物的反应产生显色反应来定量测定免疫球蛋白的含量。
ELISA法操作简便，灵敏度高，且能够同时检测多个样本，因此被广泛应用于临床诊断和科研领域。
2. 免疫荧光法。
免疫荧光法是利用荧光标记的抗体与待测血清中的免疫球蛋白结合，再通过荧光显微镜观察荧光信号来定量测定免疫球蛋白的含量。
该方法操作简单，对样本的要求较低，且具有较高的特异性和灵敏度，适用于多种免疫球蛋白的检测。
二、免疫球蛋白的定性检测方法。
1. 免疫固定电泳法。
免疫固定电泳法是一种通过电泳分离待测血清中的免疫球蛋白亚型的方法。
该方法操作简便，能够快速、准确地对免疫球蛋白的亚型进行鉴定，对于某些免疫球蛋白病的诊断具有重要意义。
2. 免疫印迹法（Western Blot）。
免疫印迹法是一种通过将待测血清中的免疫球蛋白分离并转移至膜上，再通过特异性抗体的结合来检测免疫球蛋白的方法。
该方法具有高度的特异性和灵敏度，能够对免疫球蛋白进行准确的定性鉴定。
三、各种方法的优缺点和适用范围。
1. ELISA法的优点是操作简便，灵敏度高，适用于大规模样本的检测，但其缺点是对待测物质的亲和性要求较高。
2. 免疫荧光法的优点是具有较高的特异性和灵敏度，适用于多种免疫球蛋白的检测，但其缺点是需要荧光显微镜等专门设备。
3. 免疫固定电泳法的优点是操作简便，能够快速、准确地对免疫球蛋白的亚型进行鉴定，但其缺点是不能进行定量测定。
4. 免疫印迹法的优点是具有高度的特异性和灵敏度，能够对免疫球蛋白进行准确的定性鉴定，但其缺点是操作较为繁琐，且耗时较长。
鸡IgY抗体(IgY Ab)说明书活性
4000U/L
5 号标准品
150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
2000U/L 1000U/L
4 号标准品 3 号标准品
150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
500U/L
2 号标准品
150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
6ml×1/瓶
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。
注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
10 分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结：
(IgY)的性质、提纯及应用于寄生虫学的研究
任平国等ｌｌ叩采用的有机物沉淀法。其原理为： 一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多 的蛋白质和酶，不溶于水、稀盐溶液或碱中，可用乙 醇、丙酮和丁醇等有机溶剂，它们具有一定的亲水性 和较强的亲脂性，是理想的提脂蛋白的提取液。其 工艺流程为：卵黄一８倍水稀释并搅１０ｍｉｎ－－－用 ＨＣｌ调ｐＨ至５．２后在４＂Ｃ静置２ｈ去沉淀一在上 清液中加入９５％冰乙醇（一２０℃）使终浓度为６０％ （ｖ／ｖ）一４℃搅拌２０ｍｉｎ后离心（２２ ０００ｒ／ｒａｉｎ，４＂Ｃ， ２５ｒａｉｎ）一收集沉淀并加入０．０２８ｍｏｌ／Ｉ。ＮａＣｌ溶液 在４＂Ｃ下过滤除去脂蛋白沉淀一收集的滤液用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法进行纯化得纯度为９８％的ＩｇＹ。用 大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）对其活性进行测定，效果良好， 此方法能保持免疫球蛋白的活性。
虫病防治中越来越受到重视。 １卵黄抗体（ＩｇＹ）的性质
源的试剂要好而且经济。 １．３获取抗体简单ＩｇＹ无需采血，只需收集免疫 母鸡产下的鸡蛋即可获得抗体。传统的哺乳动物来 源的抗体搜集需通过繁杂的注射及免疫表达过程， 且需要在常规间隔时间内收集血清。ＩｇＹ大大简化
了这一流程Ｈｊ。
１．４假阴性或假阳性率低
Ｉｓｍａｅｌ
Ｍａｒｃｅｔ［７３等提出了聚乙二醇法（ＰＥＧ），
其卵黄用２倍体积缓冲液稀释后，采用８．５％、１２％ ＰＥＧ两次沉淀，重新溶解后用Ｔｒｉｓ—ＨＣｌ沉淀，得
４．８±０．８ｍｇＩｇＹ／ｍＬ卵黄。
Ｃｌｄｕｄｉａ Ｍａｒｉａ Ｃｏｓｔａ ｄｅ Ａｌｍｅｉｄａ等【８０报道的水
Ｄｏｎｇ［１副等，为寻找最适配体，用按照最
中国人兽共患病学报
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｅｓ
４４ｌ
文章编号：１００２—２６９４（２０１１）０５—０４４１一０３
鸡卵黄免疫球蛋白在畜禽生产中的应用前景
鸡卵黄免疫球蛋白在畜禽生产中的应用前景Williams等（1962）发现用某种抗原免疫产蛋母鸡，鸡血清中可产生相应抗体，产蛋母鸡又能以产蛋方式将血清免疫球蛋白有效地转移到卵黄中（ROse和Orlans，1981）。
鸡血液中能转移到卵黄中的免疫球蛋白只有免疫球蛋白G （IgG），至今尚未发现卵黄中存在免疫球蛋白A和M（IgA和IgM）（胡清林等，1997）。
因此卵黄中的IgG又称为卵黄抗体或卵黄免疫球蛋白（简称1GG）(Leslie和Clem，1969）。
与哺乳动物的Igh相比，鸡蛋的lgY具有取材方便、提取方法比较简单、产量高等优点。
IgY的稳定性较好，可作为口服剂或饲料添加剂用于预防和治疗动物早期的消化道疾病。
用禽卵大量制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。
本文简介一下IgY的分子结构、功能。
特点及分离提纯方法，着重介绍IgY在畜禽生产中的应用前景。
1 IgY的分子结构与功能正常鸡的IgY分子量约为180KD，由两条重链和两条轻链组成，分子量分别为67000和2200。
IgY的等电点接近5．2.尽管IgY同免疫球蛋白E（IgE）和LgY 有相似的结构特征，但从抗体产生特性及数量来看，IgY与哺乳动物IgG更相似。
IgY的基本功能是与特异性抗原结合而发生免疫反应，增强机体的免疫力。
IgY通过口服方式，可用于预防和治疗哺乳动物早期的消化道疾病。
2 IgY的特点2．l免疫的产蛋母鸡是高效率、高质量的IgY"生产厂"经用特定抗原免疫的产蛋母鸡，对抗原可产生持久性应答。
抗体在卵黄中出现的时间比在血清中约晚一周，一般在母鸡被免疫后15d左右出现，效价可维持数月至一年以上。
Hatta 等（1993）报道，经轮状病毒（HRV）免疫成功的母鸡，其所产蛋中的抗HRVIgY 效价可维持一年以上。
卵黄中IgY的含量超过哺乳动物血清抗体含量。
每个卵黄中lgY含量可达100～250mg（teslie和CIem，1969）。
抗白色念珠菌鸡卵黄抗体_IgY_的研制
论著 文章编号:100025404(2002)0921026203抗白色念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)的研制常 山,张雅萍,查晓霞,肖光夏 (第三军医大学附属西南医院全军烧伤研究所,重庆400038) 提 要:目的 观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度、来源及稳定性。
方法 应用白色念珠菌作为抗原免疫25周龄Leghorn鸡,通过改良水溶法(W D)提取蛋黄中抗体IgY,双紫外光测定抗体含量,S DS2PAGE电泳检测抗体纯度,Western blot免疫印迹法测定该抗体来源,E LIS A检测热处理后的抗体活性。
结果 抗体含量13mg/ml蛋黄液,抗体纯度达到95%,Western blot免疫印迹证明该抗体与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。
E LIS A检测热处理后的抗体活性,其具有良好的热稳定性。
结论 鸡蛋黄内含有丰富的抗体,通过W D水溶提取法可得到高产量,高纯度的特异性抗体IgY,证明其来源于鸡血清中的IgG,对热具有高度稳定性。
关键词:鸡卵黄抗体;IgY;白色念珠菌 中图法分类号:R379.4;R392.11 文献标识码:APreparation of chicken egg yolk antibody(IgY)against C andida albicansCH ANG Shan,ZH ANG Y a2ping,ZH A X iao2xia,XI AO G uang2xia(Research Institute of Burns,S outhwest H ospital,Third M ilitary M edical University, Chongqing400038,China) Abstract:Objective T o observe the yield,purity and stability of IgYfrom chicken eggs y olk.Methods Laying hens(White Leghorn),25 weeks old,were immunized with Candida albicans.IgY was purified with the m odified simple water dilution method(W D)and its purity and yield were measured respectively with S DS2PAGE and ultraviolet spectrophotometry.The antigenicity of IgYwas assayed with Western2blotting method and its stability to heat was measured with E LIS A.Re sults Purity of IgYwas about95%and13mg IgYfrom per millilitre egg y olk was routinely ob2 tained.M oreover IgY had the same m olecular weight and antigenicity in comparis on with IgGof chicken serum.Conclusion IgYfrom eggs y olk of laying hens immunized with Candida albicans is g otten success fully.The W D purification methods possess high yield and purity and have no adverse effect on the immunoactivity of IgY.The IgY is proved to be the IgGfrom chicken serum and has fav orable stability to heat. K ey w ords:egg y olk antibody;IgY;Candida albicans 鸡蛋黄中含有大量来源于血清的IgG抗体(又名IgY),蛋黄中抗体浓度远高于血清,鸡对绝大多数抗原刺激1周后均能产生抗体,1只鸡可获得高特异性抗体长达28周,目前IgY抗体提取方法日益成熟,简单高效,对抗体活性影响小,因而可获得大量均一性良好的多克隆抗体。
抗变链球菌鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备及活性检测
抗变链球菌鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备及活性检测
黄靖;罗健
【期刊名称】《江西食品工业》
【年(卷),期】2002(000)002
【摘要】以远缘链球菌(S.sorbrinus 6715血清型g)免疫产卵母鸡,应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定鸡卵黄中免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk,IgY)的活性,研究鸡免疫应答并制备出高免抗-S.sorbrinus IgY.结果显示以109 cfu/只剂量免疫的母鸡,第一次免疫后的第七天卵黄中出现特异性IgY,加强免设后抗体效价上升更快,经ELISA法检测,卵黄中的抗体效价到1:384.而冷冻干燥后的IgY,其效价要超过1:2000.
【总页数】4页(P11-14)
【作者】黄靖;罗健
【作者单位】南昌大学中德联合研究院,330047;南昌天惠肉食品有限责任公司,330001
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体(IgY)的制备 [J], 尤昕;朴松旭;张静春;姜春善;崔鲜花;金春花
2.抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究
[J], 黄清松;罗深秋;林元藻;曾位森
3.抗胱抑素C鸡卵黄IgY抗体的制备及鉴定 [J], 傅龙章;杨平;李敏惠;潘克俭;邹珂珂;杨菌;李艳超;黄杰;叶启迪;马玲玲
4.特异性鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)抗SARS-CoV作用的研究 [J], 胡国柱;聂荣庆;张进;吴东风;杨华英;文珠;段淑敏;张智清
5.鸭卵黄免疫球蛋白的提纯及兔抗鸭IgY(H+L)HRP标记抗体的制备 [J], 孙凌霜;齐岩;王彬;史楠;王君伟
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卵黄免疫球蛋白IgY的提纯及应用研究进展
２ ） ， 中轻 链 （ ） 子 量 约２ ０ ０ ， 链 分 子 Ｌ 其 Ｌ分 ２ ０ Ｄａ 重 量 约６ ０ ０ ， 电 点 接 近 ５２ ７ ０ Ｄａ 等 ．。含 氮 量 为 １ ．％。 ４８ ＩＹ的 氨 基 酸 组 成 与 鸡 血 清 ＩＧ和 牛 ＩＧ不 同 （ ｇ ｇ ｇ 如
选 健康 产 蛋母 鸡 隔离 饲养 后进 行 免疫 ， 免
疫方法 可选 皮下 、 内 、 肉 、 脉 、 股 沟 、 皮 肌 静 腹 法
６ ９ ． ８ ３ ．
氏囊 注 射 或 口服 等 。 最 常 用 的方 法 是 翅 下 肌 肉
ｌ ． ２ ３
９ ３ ． ７ ５ ．
注 射 。免 疫 抗 原 有 多 种 ， 年 来 国外 已制 备 多 种 近 不 同抗 原 的ＩＹ， 括 人 和 动 物 的 疾 病 的 病 原 体 ｇ 包 以及 细 胞 、 素 、 种 蛋 白等 。一 般 免 疫３ ４ ， 激 各 ￣次 免 疫 后 ７ ０ ， 蛋 中就 产 生 了抗 体 ， 后 ＩＹ ￣１ 天 鸡 随 ｇ
ＩＹ结 构虽 然 和ＩＧ不 同 ， 它 仍 具 有 免 疫 活 ｇ ｇ 但 １ ＩＹ的 性质 ｇ 鸡 卵 黄 免 疫 球 蛋 白 （ Ｙ） 鸡 卵 黄 中存 在 的 Ｉ 是 ｇ
性 ， 抗 体 活性 很 高 。ＩＹ的性 质 较 稳 定 ， 性 保 且 ｇ 活
持 良好 。根 据Ｍａ ｏｏ Ｓ ｉ ｚ 研究 在低 于７ ℃ 条 ｋ ｔ ｈｍｉ ｕ ５
９ ８ ． ８ ０ ． ２ ３ ． ７ ５ ．
１ ０ ． ３ １ ．
逐渐增高 ， 后 达到高峰 ， 最 以后 又 缓 慢 下 降 。 如
禽类抗HBV抗体IGY检测方法的建立
蛋鸡抗HBV-IgY的制备与酶标检测方法的建立摘要: 目的：制备出特异性的抗HBV-IGY抗体, 探索ELISA检测条件。
方法：用人乙肝疫苗免疫蛋鸡, 分别收集鸡蛋, 4 ℃下保存备用; 用鸡蛋抗体IgY提取系统（EGGstract IgY Purification System，EIPS）提取鸡蛋黄中IgY 抗体; 用改进的酶联免疫吸附法检测IgY 抗体含量，探索最佳检测条件。
结果在免疫后第一至三周, IgY 抗体含量开始上升，第六周达到高峰，并可持续两个月，结论采用乙肝疫苗免疫母鸡,，可持续性获得特异性抗HBV-IgY抗体。
关键词：乙肝病毒;卵黄抗体；ELISA鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)具有与血清IgG一样的抗体活性。
鸡的IgY类似于哺乳动物IgG，其分子量约为180 kb，等电点接近5．2。
其重链有4个稳定区，无交链区，而哺乳动物的IgG 只有3个稳定区。
IgY的含氮量为14．8％，氨基酸组成及含糖量与人和兔的免疫球蛋白有显著的差异。
特异性鸡卵黄抗体IgY对病原体感染的防御无动物种属的差异，这为IgY防治人类疾病的应用奠定了基础。
乙型肝炎病毒((Hepatitis B virus,HBV)的感染，不仅引起急、慢性病毒性肝炎，而还与肝硬化和肝细胞癌的发生、发展有密切的关系。
接种重组乙肝疫苗或合成肽疫苗能够增强乙肝患者的抗HBV免疫应答，通过接种疫苗对机体施加HBV抗原刺激有助于乙肝的治疗，为探讨禽类抗乙肝病毒卵黄抗体（抗HBV-IgY）的特性，我们利用重组酵母乙型肝炎疫苗，对蛋鸡进行免疫后，用EIPS提取蛋黄中的IgY，利用改进的人乙肝表面抗体检测试剂盒检测所得IgY中HBV-IgY含量变化,为进一步开发应用HBV-IgY做准备。
1 材料与方法1.1试剂材料重组酵母乙型肝炎疫苗购自北京天坛生物制品股份有限公司，批号；EGGstract IgY：Purification System购自普洛麦格（北京）生物技术有限公司，批号；乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）购自上海科华生物技术有限公司，批号20081006，羊抗鸡-HRP购自；一般化学试剂采用国产分析纯试剂。
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鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
30 ng/L - 900ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中卵黄免疫球蛋白（IgY）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）水平。
用纯化的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入卵黄免疫球蛋白（IgY），再与HRP标记的卵黄免疫球蛋白（IgY）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的卵黄免疫球蛋白（IgY）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）浓度。
试剂盒组成
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。