总菌数测定1(完整版)
饲料总菌数的测定
饲料中细菌总数的测定方法标准类别:农业饲料标准实施日期:点击:236本标准参照采用国际标准 ISO4833—1978《食品和动物饲料中微生物学检验方法》。
1 主题内容与适用范围本标准规定了饲料中细菌总数的测定方法。
本标准适用于饲料中细菌总数的测定。
2 原理将试样稀释至适当浓度，用特定的培养基，在30±1℃下培养72±3h，计数平板中长出的菌落数，计算每克试样中的细菌数量。
3 仪器、设备3.1 天平：感量为0.1g。
3.2 振荡器：往复式。
3.3 干热灭菌箱：50-200±1℃。
3.4 高压灭菌锅。
3.5 冰箱：普通冰箱。
3.6 恒温箱30±51℃。
3.7 电炉：可调式。
3.8 平皿：直径为9cm。
3.9 吸管：容量为1、10mL。
3.10 三角烧瓶：容量为 250、500mL。
3.11 玻璃珠。
3.12 试管：18×180mm。
3.13 水浴锅46±1℃。
3.14 酒精灯。
3.15 试管架。
3.16 橡皮乳头。
4 检验程序细菌总数的检验程序如下：检样↓做成几个适当倍数的稀释液↓选择2-3个适宜稀释度，各以1ml量加入灭菌皿内↓每平皿内加入适量琼脂30±1℃↓ 72±3h菌落计数↓报告5 操作步骤5.1 采样采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。
首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀，在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。
根据饲料仓库、饲料垛的大小和类型，分层定点采样，一般可分三层五点或分层随机采样，不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检，小量存贮的饲料可使用金属小勺采取上、中、下各部位的样品混合。
海运进口饲料采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛饲料超过10000t，则应加采一个样品。
细菌总数测定方法
细菌总数测定方法细菌总数测定是一种用来确定给定样品中存在的细菌总数量的方法。
在微生物学和生化学领域中，细菌总数的准确测量对于研究微生物活动、食品安全、健康和环境健康等方面非常重要。
下面将详细介绍细菌总数测定方法的原理、步骤和常用技术。
1. 细菌总数测定的原理：细菌总数测定的原理基于细菌的生长和繁殖特性。
在适宜的培养条件下，细菌会通过二分裂等方式进行繁殖。
通过培养基的可见菌落计数或显微镜下的细胞计数，可以得出给定样品中的细菌总数。
2. 细菌总数测定的步骤：（1）制备培养基：根据需要培养的细菌类型选择适宜的培养基，如普通营养琼脂培养基（Nutrient Agar）、肉汤葡萄糖琼脂培养基（Tryptone Glucose Yeast Extract Agar）等。
制备过程中要注意无菌操作，以避免外源性细菌的污染。
（2）样品制备：将待测样品适当稀释，以使细菌总数在可计数范围内。
稀释液可以选择生理盐水、磷酸盐缓冲液等。
（3）接种培养：将稀释好的样品分别接种在含有适宜培养基的琼脂平板上。
通过平板接种法或涂布法使细菌均匀分布于琼脂表面。
（4）培养条件控制：将接种好的琼脂平板放入恒温培养箱中，在适宜的温度和湿度下培养。
常见的培养温度为37，培养时间根据细菌类型和繁殖速度确定，通常为18-24小时。
（5）细菌计数：培养一段时间后，通过可见菌落计数或显微镜下的细胞计数确定细菌总数。
对于可见菌落计数，需要计算样品中每个可区分的菌落单元数。
对于显微镜下的细胞计数，可以使用像计数室或显微镜装置来准确计数细菌。
3. 常用细菌总数测定技术：（1）可见菌落计数法（plate count method）: 将稀释好的样品通过平板接种法均匀播种在琼脂平板上，通过培养后可见菌落数来确定细菌总数。
这是一种简单、常用的方法，适用于可培养的细菌。
（2）显微镜计数法(microscopic count method)：通过显微镜下观察直接计数细菌细胞数来确定细菌浓度。
菌落总数测定原理完整版PPT
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细菌总数的测定完美版PPT
2.包装 （1）移液管包装
将干燥的移液管的吸端用细铁丝塞入少许棉花构成1～ 1.5cm长的棉塞，以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹 入管内。棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉 花滑入管内。将塞好棉花的移液管的尖端，放在4～5cm宽的 长纸条的一端，移液管与纸条约成30°夹角，折叠包装纸包 住移液管的尖端（实验图2-1），用左手将移液管压紧，在 桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头 折叠打结。包好的多个移液管可再用一张大的报纸包好。
皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗
花将、塞牛 好皮棉纸花（的培或移养报液纸管皿）的、尖由电端一烤，箱放底。在4一～5盖cm宽组的成一套，用牛皮纸或报纸将每套培养皿 如（果3）将（培培养皿养皿皿底的放包金朝装属里筒内，皿盖朝外，）包好。如果将培养皿放金属筒内 （3）进培养行皿干的包热装 灭菌，则不必用纸包。
（2）棉塞的制作
（2）试管和三角瓶等的包装
用棉塞或泡沫塑料塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住
然后在棉塞与管口和瓶口的外面用两层报纸与细线（或用铝
箔）包扎好，放在铁丝或铜丝篓内待灭菌。
晾干或放入烘箱中烘干、备用。 培养皿、移液管、试管及其他玻璃器皿可用干热
（3）培养皿的包装 度调至160 oC后维持2小时，把恒温箱的调节旋扭调
实验四 细菌总数的测定 ————器皿的包扎
一、目的
1．熟悉玻璃器皿的包扎方法。 2．掌握干热灭菌法灭菌技术。
二、仪器和材料
试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量简纱布、棉 花、牛皮纸（或报纸）、电烤箱。
三、方法与步骤
1.洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。培养
皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗 刷并用自来水冲净。移液管先用洗液浸泡， 再用水冲洗干净。洗刷干净的玻璃器皿自然 晾干或放入烘箱中烘干、备用。
(完整版)饲料中霉菌总数测定方法
霉菌总数检测操作规程1 原理根据霉菌生理特性，选择适宜霉菌生长而不适宜细菌生长的培养基，采用平板计数法测定霉菌总数。
2 试剂与仪器2.1 所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针、移液器2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基高盐察氏培养基取高盐察氏培养基109g，加入蒸馏水1L，搅拌加热至完全溶解，分装三角瓶，115℃高压灭菌30 min，备用。
3、操作步骤3.1配制0.85%生理盐水称取氯化钠8.5g溶于1000mL蒸馏水中。
3.2 锥形瓶加入生理盐水90mL，试管中加入生理盐水9mL，121℃灭菌30min。
（三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关）。
3.3 将1000μL枪头、培养皿、5mL枪头、称量勺、带6颗玻璃珠具塞试管，121℃灭菌30min。
（注意计算数量）3.4 枪头、培养皿置于烘箱103℃烘干。
（1-3步需提前一天完成）3.5 对称量房间进行紫外灭菌30分钟，关灯静置60 min。
以无菌操作取样品10g于含90mL 生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡30min，制成1:10的均匀稀释液。
3.6 吸取1:10稀释液10mL注入带玻璃珠的试管，置微型混合器上混合3min。
3.7 用1000μL枪头吸取1:10稀释液1mL，沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水9mL的试管中，于振荡器上混合均匀，制成1:100的均匀稀释液。
3.8 另取一只1mL灭菌吸管，按照上述操作方法，作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，更换一支灭菌吸头。
3.9 选择3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，吸取该稀释的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。
3.10 稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃的高盐察氏培养基（可放置46℃±1℃水浴锅内保温）注入培养皿约15mL，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀。
细菌总数测定
菌落总数测定（一）实验材料1. 仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2. 培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、平板计数琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0 ±.23. 待检样：利乐包装鲜牛奶250mL（二）实验方法与步骤1. 检验程序菌落总数检验程序：检样一做成几个适当倍数的稀释液一选择3个适宜稀释度各以1mL之量分别入灭菌平皿内—每皿内加入46°C 15-20mL营养琼脂—置36± °C恒温箱内培养（48i2）h取出—菌落数—报告2. 检样稀释及培养（1 ）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25mL 鲜牛奶，放于含有225mL 灭菌生理盐水的500mL 灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1:10 的均匀稀释液。
（2）用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1:100的稀释液。
（3）另取1mL 的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用 1 支1mL 灭菌吸管。
（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL 稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46C营养琼脂培养基注入平皿15mL~20mL, 并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将平板计数琼脂培养基倾入加有1mL 稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±C恒温箱内培养（48±0 h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。
实验报告细菌总数检查(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细菌总数检查的基本原理和方法。
2. 了解细菌总数在食品、水质等领域的应用。
3. 培养实验操作技能，提高对微生物检测工作的认识。
二、实验原理细菌总数是指在一定条件下，每克（或每毫升）样品中所含有的细菌总数。
细菌总数是衡量样品微生物污染程度的重要指标。
本实验采用平板计数法测定细菌总数。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛奶、自来水、土壤等样品。
2. 仪器：恒温培养箱、天平、无菌试管、无菌棉签、无菌操作台、无菌水、营养琼脂平板、计数器等。
四、实验方法1. 样品处理：将样品按照一定比例加入无菌水中，充分振荡，制成均匀的样品悬液。
2. 制备菌悬液：取适量样品悬液，用无菌吸管加入无菌试管中，依次稀释10倍、100倍、1000倍，备用。
3. 制备平板：将营养琼脂平板在恒温培养箱中培养至凝固。
4. 接种：用无菌棉签蘸取适量菌悬液，均匀涂布于平板表面。
5. 培养与计数：将接种好的平板放入恒温培养箱中，培养24小时后，观察菌落生长情况。
按照菌落数在30～300之间的平板进行计数。
6. 计算细菌总数：根据菌悬液稀释倍数，计算每克（或每毫升）样品中的细菌总数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：样品A（牛奶）细菌总数：3.2×10^7 CFU/g样品B（自来水）细菌总数：2.1×10^5 CFU/mL样品C（土壤）细菌总数：5.8×10^7 CFU/g2. 结果分析：样品A（牛奶）的细菌总数较高，可能是因为牛奶在储存、运输过程中受到污染。
样品B（自来水）的细菌总数较低，符合我国饮用水标准。
样品C（土壤）的细菌总数较高，可能与土壤环境有关。
六、实验结论1. 本实验成功掌握了细菌总数检查的基本原理和方法。
2. 通过对样品的细菌总数检测，可以了解样品的微生物污染程度，为食品、水质等领域的质量控制提供依据。
3. 在实验过程中，需要注意无菌操作，避免污染样品。
七、实验反思1. 实验过程中，操作要规范，避免人为因素对实验结果的影响。
细菌总数和大肠杆菌的测定
高温之所以能杀死微生物，主要是因为微生物细胞的基本组成是蛋白质，蛋白质遇热会凝固变性。
而启动一切生命活动的生物催化剂-酶，其主要成分也是蛋白质，也具有不耐热性。
湿热比干热容易杀死微生物，原因是蛋白质的含水量越多，加热时愈容易凝固，而且湿热所用的水蒸气的传导力与穿透力都比较强，更容易破坏蛋白质。
微生物在其最低生长温度下代谢活动减弱，处于休眠状态，维持生命而不发育。
实验室常用冰箱保存菌种，反复冻融会使细胞收到破坏，微生物死亡。
实验 细菌总数的测定一、测定方法平皿计数法二、方法依据《生活饮用水卫生规范》三、测定范围生活饮用水及其水源水中的细菌总数的测定四、测定原理细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。
按本作业指导书所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
五、试剂营养琼脂1、成分A蛋白胨 10gB牛肉膏 3gC氯化钠 5gD琼脂 10～20gE蒸馏水 1000mL2、制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
六、仪器设备1、高压蒸汽灭菌器2、干热灭菌箱3、培养箱36±1℃4、电炉5、天平6、冰箱7、放大镜或菌落计数器8、 pH计或精密pH试纸9、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等七、分析步骤1、生活饮用水1.1以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36±1℃培养箱内培养24h，进行菌落计数，即为水样1mL中的细菌总数。
细菌总数的测定法
细菌总数的测定法一、细菌数测定的基本概念药品细菌数测定是微生物的定量检查，是用来判断药品被细菌污染程度和卫生质量评价的重要指标，也是检测药品质量的重要指标之一。
细菌计数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH 位、培养温度和时间等）每1g、lml、l0cm2供试品液经培养后所生长的菌落数。
所谓一定条件是按我国药典规定，在需氧条件下，30～35℃，一般培养48h,在营养琼脂培养基平板上生长的细菌菌落数。
细菌数的测定方法有多种：平板法、薄膜过滤法、涂抹法。
药品细菌数测定是活菌计数，最常用的平板法是以平板菌落计数为依据，即每个菌落代表个菌细胞，但有的菌落也可能是多个菌细胞形成，如双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等，很可能是多个菌细胞在一起。
故准确地说，细菌数测定值实际上是菌落形成单位数( CFU)。
平板法菌落计数法，是受一定条件的限制：如供试液是否均质，供试液中的细菌是否充分分散；培养基的质量、培养温度及培养时间的影响；有繁殖能力的菌细胞才能形成菌落，死菌及某此受损伤的细菌或营养要求苛刻的细菌在规定的培养基上不能生长，因而不被计数。
在试验操作中应考虑到这此问题。
二、设施、设备、仪器及器皿1、设施细菌数测定全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净净度l0000级和局部洁净度100 级单向流空气区域内进行，以防止再污染。
2、设备、仪器恒温培养箱（30～35℃）、微波炉、匀浆仪（4000～10000r / min ）、康氏振荡器、恒温水浴、电热干燥箱（250～300℃）、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果验证并应定期请有关部门检定）菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平（感量0.1g）、pH 值系列比色计、全封闭可拆卸或开放式的薄膜过滤器。
3、器皿锥形瓶（250～300ml ）、培养皿（∮9cm）、量筒（100ml）、试管（18×18mm）、刻度吸管（l ml , 10ml）、载玻片、玻璃或搪瓷、不锈钢消毒缸（带盖）。
细菌总数的测定
细菌总数的测定（平皿计数法）1.概述本法适用于生活用水、循环冷却水及其它水中细菌总数的测定。
也适用于反渗透脱盐水中细菌总数的测定。
敞开式循环冷却水系统细菌总数的要求：≤1×105个/mL。
2.方法介绍本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的黏泥，所得的黏泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在（29±1）℃培养72h来测定黏泥中的细菌总数。
3.试剂和材料3.1 牛肉膏，生化试剂。
3.2 蛋白胨，生化试剂。
3.3 NaCl.3.4琼脂，生物试剂。
3.5 NaOH溶液，40g/L。
3.6 HCl，1＋11溶液。
3.7 乙醇溶液，75％。
3.8 牛皮纸。
3.9 医用脱脂棉。
3.10 医用脱脂纱布。
3.11 石英砂，210～150μm 。
4.仪器和设备4.1 25号浮游生物网。
4.2 量筒，25mL和500mL。
4.3 转子流量计。
4.4 瓷研钵。
4.5 无菌箱（室）或超净工作台。
4.6 蒸汽压力灭菌器。
4.7 生化培养箱。
4.8 电热干燥箱，温度可控制在[（60～280）±2]℃.4.9 刻度吸管，1mL和5mL。
4.10 磨口三角瓶，100mL。
4.11容量瓶，1000mL。
4.12 培养皿，d90mm 。
4.13 三角瓶，500mL。
4.14 搪瓷量杯，1000mL。
5.试验前的准备5.1 培养基的制备称取下列试剂：牛肉膏 3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂15.0g。
将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1000mL。
用NaOH 溶液或HCl溶液调节pH值至7.2±2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。
塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器在（121±1）℃下灭菌15min,此为灭过菌的培养基。
5.2 无菌稀释水的制备5.2.1 生理盐水的配制。
(完整)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定一、目的要求l．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2．了解水源水的平板菌落计数的原则。
二、基本原理本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
三、器材l．培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。
2.仪器或其他用具灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶,灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等.四、操作步骤l．水样的采取（1）自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后,以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
（2）池水、河水或湖水应取距水面l0～15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
2．细菌总数测定（1）自来水①用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。
共做两个平皿.②分别倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
③另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空自对照。
④培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h，进行菌落计数。
⑤两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数.(2)池水、河水或湖水等①稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。
取lml水样注入第一管9ml 灭菌水内、摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1、10—2与10-3。
稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30～300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。
细菌总数测定
一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：GB4789.2-94《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
实验1.细菌总菌落数的测定
六、说明
为了保证实验结果能准确反映被检样品的真实情 况，检验时必须注意以下一些要求和规定： （1）检验中所用的所有器具都必须洗净、烘干、灭 菌，即不能存在活菌，也不能残留有抑菌物质。 （2） 应注意采样的代表性，如系固体样品，取样 时不应集中在一点，宜多采几个部位。固体检样 在加入稀释液后，最好置于均质器中，以800～ 在加入稀释液后，最好置于均质器中，以800～ 1000r/min的速度处理1min，以获得均匀的稀释 1000r/min的速度处理1min，以获得均匀的稀释 液。
（3）为减少样品在稀释时造成的误差，在连续递次稀释时， 每个稀释液应充分振荡，使其均匀（最好采用漩涡混合 器），同时每变化1个稀释倍数应更换1 器），同时每变化1个稀释倍数应更换1支吸管。在进行 连续稀释时，应使吸管内的液体沿壁流入生理盐水中， 勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部附着的检液 溶于其内，造成误差。 （4）样品稀释液大多采用生理盐水，有时也用磷酸缓冲液 或0.1﹪的蛋白胨水。如果检样的含盐较高（如酱制品）， 0.1﹪ 稀释液也可采用无菌蒸馏水。用做样品稀释的液体，每 批都要做空白催找，以判断培养基、培养皿、吸管及空 气可能存在的污染。
（5）为了控制培养基的硬度适合细菌的生长，琼脂 含量选为1.5﹪ 含量选为1.5﹪。为了便于操作，有时在灭菌前， 就把培养基分装到不同的试管内，一般1 就把培养基分装到不同的试管内，一般1支试管 内的分装量是15ml营养琼脂底部带有沉淀的部 内的分装量是15ml营养琼脂底部带有沉淀的部 分应弃去，以免与菌落混淆而影响观察计数。 （6）为使菌落能在平板上均匀分布，将检液加入平 皿后，应在20min内倾入培养基并旋转混匀。可 皿后，应在20min内倾入培养基并旋转混匀。可 将平皿放在平面上，先前后左右地摆动，然后 按顺、逆时针的方向转动。混合时应多加小心， 不要使其溅到皿边和皿盖上。
微生物菌落总数的测定—菌落总数的计数方法
混合均匀。
•
6、 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温
箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。
•
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生
长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼
脂培养基（约4毫升），凝固后培养。
• （二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要
菌落总数的测定
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培养箱等。
四、 流程
• 1、检样 • 2、做几个适当倍数的稀释液 • 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 • 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 • 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小时 • 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 • 7、 计算菌落总数 → 报告
10-4
3.1x106
• 2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜
计数范围内时，应以两者比值决定。若其比值小 于2，应报告两者的平均数；若大于等于2，则报 告稀释度较小的菌落数。
试样 稀释度
例次 10-2
10-3
1
380
52
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
18
10-3
5.2x104
32
10-3，10-4
2.6x105
12
细菌总数的测定实验报告
细菌总数的测定实验报告一、实验目的1、学习并掌握细菌总数测定的基本原理和方法。
2、熟练使用无菌操作技术和微生物培养技术。
3、了解环境中细菌污染的情况，评估卫生质量。
二、实验原理细菌总数是指在一定条件下培养后所得的 1ml 或 1g 检样中所含细菌的菌落总数。
本实验采用平板计数法，将样品经过适当稀释后，在营养琼脂培养基上培养，经过一定时间和适宜的温度，每个活菌会形成一个可见的菌落，通过计算平板上的菌落数，乘以稀释倍数，即可得出样品中的细菌总数。
三、实验材料与设备1、样品：取自_____（具体地点）的水样/土壤样/食品样等。
2、培养基：营养琼脂培养基。
3、试剂：无菌生理盐水。
4、仪器设备：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、移液器、无菌培养皿、无菌吸管等。
四、实验步骤1、样品采集与处理水样：用无菌采样瓶采集一定量的水样，若水样中细菌含量较高，可进行适当稀释。
土壤样：称取一定量的土壤，加入无菌生理盐水，振荡摇匀，制成土壤悬液，然后进行稀释。
食品样：根据食品的性质，采取合适的方法进行处理和稀释。
2、制备稀释液取一支无菌吸管吸取 1ml 原始样品，加入 9ml 无菌生理盐水中，充分混匀，制成 10 倍稀释液。
依次类推，制备出不同稀释度的样品稀释液。
3、接种分别吸取 1ml 不同稀释度的样品稀释液，注入无菌培养皿中。
每个稀释度做 2-3 个平行。
4、倾注培养基立即向培养皿中倾注约 15-20ml 冷却至 45℃左右的营养琼脂培养基，轻轻转动培养皿，使样品与培养基充分混匀。
5、培养待培养基凝固后，将培养皿倒置，放入 37℃恒温培养箱中培养 24-48 小时。
6、菌落计数培养结束后，取出培养皿，计数每个培养皿中的菌落数。
选择菌落数在 30-300 之间的平板进行计数。
7、计算结果细菌总数（CFU/ml 或 CFU/g）＝平均菌落数×稀释倍数五、实验结果与分析1、实验结果记录记录不同稀释度培养皿中的菌落数，如下表所示：｜稀释度|10^－1|10^－2|10^－3|10^－4|10^－5|｜｜｜｜｜｜｜｜菌落数|＿____|＿____|＿____|＿____|＿____|2、结果计算根据上述记录的数据，选择合适的稀释度进行计算。
总大肠菌群数量测定
总大肠菌群在饮用水的微生物安全监测中，普遍采用正常的肠道细菌作为粪便污染指标，而不是直接测定肠道致病菌。
总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37C生长时能使乳糖发酵，在24h 内产酸产气的革氏阴性无芽胞杆菌。
总大肠菌群系指每升水样中所含有的总大肠菌群的数目。
总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
一多管发酵法1 应用范围1.1 本法适用于饮用水、水源水，特别是浑浊度含量高的水质中总大肠菌群的测定。
1.2 水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在。
2 原理根据总大肠菌群应具有的生物特性，产气，能在选择性培养基上产生典型菌落。
3 仪器3.1xx3.2 革兰氏染色用有关器材。
3.3 高压蒸汽灭菌器。
3.4 干热灭菌箱。
3.5 恒温箱。
3.6 冰箱。
3.7 放大镜。
3.8 试管、平皿（直径4 培养基4.1 乳糖蛋白胨培养液4.1."1 成分蛋白胨10g 牛肉膏3g 乳糖5g 氯化钠5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液蒸馏水1000ml4.1."2 制法将蛋白胨、牛肉膏、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
4.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。
4.3 品红亚硫酸钠培养基（供多管发酵法用）4.3. "1 成分蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾3. "5gxx15~30g蒸馏水1000ml无水亚硫酸钠5g 左右5%碱性品红乙醇溶液4.3. "2 储备培养基的制备如革兰氏阴性无芽胞杆菌，9cm）、刻度吸管等，置于干热灭菌箱中1ml1000ml 蒸馏水中加热溶解，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，在37C24h内能发酵乳糖并产酸160C灭菌2h调整pH 为7."2~7."4，再加入1ml置高压蒸汽灭菌器中，以115C乳糖及氯化钠置于20ml先将琼脂加至900 蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH值为7."2~7."4 ，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌中以115C灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
细菌总数测定
三、实验材料
无菌吸管1ml、10ml， 三角烧瓶（500ml），玻璃珠，无菌培养皿，
试管，无菌净化台、营养琼脂培养基、生理 盐水或其他释释液：定量分装于玻璃瓶和试 管内灭菌 等
四、实验操作
检验程序： 检样 做成几个稀释倍数的稀释液 选择2-3个适宜的稀释度 各取1ml分别 加入灭菌平皿中 每皿内加入适量的营 养琼脂（36℃,48h） 菌落计数 报告
四、实验操作
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其 中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时， 采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍 五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指 数来表示。
四、实验操作
②稀释度的选择 应选择平均菌落数在 30 ～ 300 之间的稀释度，乘以稀 释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在 30 ～ 300 之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于 或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数 字。 若所有稀释度平均菌落数均大于 300 ，则应按稀释度 最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于 30，则应按稀释度 最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀 释倍数报告之。
四、实验操作
3.稀释 用1ml无菌吸管精确地吸取1:10稀释液1ml放入10-2的试管 中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，管内液体外溢。 然后仍用此吸管将管内悬液来回吸收三次，吸时伸入管底，吹 时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自10-2试管吸1ml 放入10-3试管中，吸吹三次，……、其余依次类推。整个稀释 过程如图
总菌数测定1(完整版)
细菌总数的测定（1）培养计数法一、目的1.掌握从微生物群体中土壤和饲料等）获得纯种微生物的分离和培养技术。
2.掌握无菌操作技术。
二、材料和器皿1. 天平、取样工具、涂布棒(接种棒)。
2. 无菌三角瓶、试管、培养皿、移液管、玻璃珠。
3. 无菌水。
4. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
三、实验操作步骤1、取样将待测样品充分混匀，取少量，备用。
2、倒平板熔化已灭菌的上述4种培养基并冷却至45oC左右倒平板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。
3、编号取5支无菌空试管（15×150mm）依次编号为10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。
4、分装无菌水按无菌操作用5mL移液管分别吸取4.5mL无菌水于编号的各无菌空试管中。
5. 制备土壤稀释液称土样1g于盛有99mL无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的三角瓶中，振荡10～20min，使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散，此即为10-2浓度的菌悬液。
用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次、摇匀，此即为10-3浓度。
同样方法，依次稀释到10-7。
稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。
环境要求：琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
代表性：取固体样品时需多采几个部位，且经过均质或研磨；液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
减少误差：每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管，将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，并且稀释液应充分振摇。
6、培养及计数计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。
如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。
计平皿中菌落数：肉眼观察，必要时用放大镜检查。
记下各平板的菌落总数，求出同稀释度的各平板平均菌落数。
规律：不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。
如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。
【课外阅读】细菌总数的测定1
细菌总数的测定一、测定方法：平皿计数法二、方法依据：《地表水环境质量标准》（GB3838—2002）三、测定范围：江河、湖泊、运河、渠道、水库等具有使用功能的地表水水域中的细菌总数的测定四、测定原理：细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。
按本方案所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
五、试剂营养琼脂1．成分：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂10～20g、蒸馏水1000mL2．制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
六、仪器设备高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、培养箱36±1℃、电炉、天平、冰箱、放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等七、分析步骤1．以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液。
2．吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。
按同法依次稀释成1:1000，1:10000稀释液等备用。
如此递增稀释一次，必须更换一支1 mL灭菌吸管。
3．用灭菌吸管取2~3个适宜稀释度的水样1mL，分别注入灭菌平皿内。
倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
4．待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36±1℃培养箱内培养24h，进行菌落计数，即为水样1mL中的细菌总数。
八、计算1．菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
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细菌总数的测定
（1）培养计数法
一、目的
1.掌握从微生物群体中土壤和饲料等）获得纯种微生物的分离和培养技术。
2.掌握无菌操作技术。
二、材料和器皿
1. 天平、取样工具、涂布棒(接种棒)。
2. 无菌三角瓶、试管、培养皿、移液管、玻璃珠。
3. 无菌水。
4. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
三、实验操作步骤
1、取样
将待测样品充分混匀，取少量，备用。
2、倒平板
熔化已灭菌的上述4种培养基并冷却至45oC左右倒平
板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。
3、编号
取5支无菌空试管（15×150mm）依次编号为10-3、10-4、
10-5、10-6、10-7。
4、分装无菌水
按无菌操作用5mL移液管分别吸取4.5mL无菌水于编号的
各无菌空试管中。
5. 制备土壤稀释液
称土样1g于盛有99mL无菌水或无菌生理盐水并装有玻
璃珠的三角瓶中，振荡10～20min，使土样中的菌体、芽孢
或孢子均匀分散，此即为10-2浓度的菌悬液。
用无菌移液
管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三
次、摇匀，此即为10-3浓度。
同样方法，依次稀释到10-
7。
稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。
环境要求：琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
代表性：取固体样品时需多采几个部位，且经过均质或研磨；液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
减少误差：每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管，将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，并且稀释液应充分振摇。
6、培养及计数
计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。
如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。
计平皿中菌落数：肉眼观察，必要时用放大镜检查。
记下各平板的菌落总数，求出同稀释度的各平板平均菌落数。
规律：不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接
近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。
如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。
当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。
如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数；当计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。
再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。
计数原则：选平均菌落数在30~300之间者进行计算
1.仅1个稀释度的平均菌落数在此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数报
告之。
2.若有2个稀释度的平均菌落数在30~300之间时，则按两者的菌落总数之比来决
定，若比值小于2应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小的菌落总数。
3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，以稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍
数报告之。
4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀
释倍数报告之。
5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最接近300或30的平均菌
落数乘以稀释倍数报告之。
6.若所有的菌落数匀为“无法计数”时，应注明水样的最大稀释倍数。
7在求同稀释度的平均数时，若其中1个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜
采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落约
为平板的一半，而另一半平板上菌落分布很均匀，则可按半平板上的菌落计数，
然后乘以2作为整个平板的菌落数。
7、菌落总数报告方式
菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。
为了缩短数字后面的零位，可用10的指数来表示。
固体检样以克（g)为单位报告，液体检样以毫升（mL）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。
8. 计数
选菌落分散、菌落数适量且各平行皿菌落数接近的稀释度的平皿计数，通常细菌和放线菌选取菌落数在30～300之间的平皿，霉菌选菌落数在10～100之间的平皿，最后换算成每克待测干样品所含菌数。
同一稀释度的平均菌落数×稀释倍数
每克样品含菌数=——————————————————
1－样品含水量％
(2) 直接镜检法
一、目的要求
1、明确血球计数板计数的原理
2、掌握测定细胞总数、活菌数百分率的技术
二、实验原理
镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。
菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网。
每个方格网共分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。
计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，每个小方格的面积为1／400mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为
l／4000mm3。
使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
血
球
计
数
扳
的
构
造
血球计数板计数网的分区和分格
三、实验器材
待测菌悬液，显微镜，血球计数板，载玻片，电吹风，盖玻片，接种环，
0.1%吕氏美蓝染色液。
四、方法步骤
1、菌悬液的制备
为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5-10个为宜，可采用10倍系列稀释法。
对于固体待测物，取10g放入盛有90ml无菌水的三角瓶中，充分震荡20分钟，使待测物与水充分混合，此为待测物10-1悬液，吸取1ml此悬液，置于9ml无菌水中，另用无菌吸管吹吸3次混匀，此为10-2悬液，以此类推。
2、镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
如有污物，则需清洗，用点吹风吹干后才能进行计数。
3、加样品
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌
悬液由盖玻片边缘让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸
吸去多余菌液。
样品要均匀充满计数室，不可有气泡。
4、显微镜计数
加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍
物镜寻找计数室的位置，然后换成高倍物镜（40倍）进行计数。
显微镜视
野中的光线要暗一些，否则，不容易看清计数室的方格线。
计数时，对位于
线上的细菌，可采取只计数两条边的办法，即遵循查上不查下，查左不查右
的原则。
当芽体达到母细胞大小1/2时，即可计作两个细胞。
细胞数（mL）=80小格内酵母菌细胞数/80×400×10000×稀释倍数=4na×106式中n——稀释倍数
A——平均每个中格细胞数
5、活菌数的测定
滴一滴0.1%吕氏美蓝液于载玻片中央，再用接种环取菌液少许，与染
液混匀，染色2–3min，加盖玻片，立即镜检，计数在一个视野中，以变
蓝（死）和未变蓝（活）的细胞数。
依法再计数2-3个视野中的细胞数。
活细胞数×100%
活菌数百分率= 细胞总数
死亡率是单位体积内死亡的细胞数占总细胞数的百分率。
6、计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或电吹风吹干。