水中细菌总数的检测
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
水质检测菌落总数标准
水质检测菌落总数标准水质检测菌落总数标准水质检测是保障人民饮用水安全的重要手段，而菌落总数是其中一个重要的指标。
菌落总数是指在一定体积的水样中，培养基上生长出的菌落总数。
在水质检测中，菌落总数可以反映出水中微生物的数量，进而评估水质卫生状况。
因此，菌落总数标准的制定对于保障人民饮用水安全至关重要。
目前，我国对于不同用途的水质标准都有相应的规定，其中菌落总数标准也有所不同。
以下是我国常见的几种用途的水质标准中菌落总数的要求：1. 饮用水对于饮用水，我国规定菌落总数不得超过1000CFU/mL。
这是因为饮用水是人们直接饮用的水源，如果其中微生物数量过多，可能会对人体健康造成影响。
2. 洗浴用水对于洗浴用水，我国规定菌落总数不得超过5000CFU/mL。
洗浴用水是人们接触最多的一种水源，如果其中微生物数量过多，可能会对皮肤造成刺激和影响。
3. 工业用水对于工业用水，我国规定菌落总数不得超过20000CFU/mL。
工业用水通常用于生产过程中的冷却、清洗、输送等环节，如果其中微生物数量过多，可能会影响生产效率和产品质量。
4. 农业用水对于农业用水，我国规定菌落总数不得超过100000CFU/mL。
农业用水通常用于灌溉和养殖等环节，如果其中微生物数量过多，可能会影响农作物生长和动物健康。
需要注意的是，不同地区、不同场所对于菌落总数标准的要求也有所不同。
例如，在一些敏感地区或特殊场所（如医院、食品加工厂等），对于菌落总数的要求可能会更加严格。
因此，在进行水质检测时，需要根据具体情况制定相应的菌落总数标准。
除了菌落总数外，还有其他一些指标也可以反映出水质卫生状况，如大肠杆菌、氨氮、亚硝酸盐等。
因此，在进行水质检测时，需要综合考虑多种指标，以全面评估水质卫生状况。
总之，菌落总数标准是保障人民饮用水安全的重要手段之一。
在制定和执行标准时，需要根据具体情况进行调整和优化，以确保水质检测能够更好地服务于人民群众的健康和生活。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。
一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。
二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌(烘箱)。
3．水浴隔热培养箱。
4．冰箱。
5.培养皿(直径9ml)。
6．吸管(10.0ml、1.0m1)。
三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。
四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。
[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。
二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。
实验水中细菌总数的测定
实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。
但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。
本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。
实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。
实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。
痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。
测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。
常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。
实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。
在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。
断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。
实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。
通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。
通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。
这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。
2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。
通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。
3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。
这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。
4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。
这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。
5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。
这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。
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水质 细菌总数的测定
水质细菌总数的测定
水质是指水中所含有的各种物质的性质和数量，其中包括细菌总数。
细菌总数是指水中细菌的数量，是评价水质的重要指标之一。
细菌总数的测定可以反映水中细菌的污染程度，为保障人们的健康提供了重要的依据。
细菌是一类微生物，它们广泛存在于自然界中，包括水体中。
有些细菌对人体有害，如致病菌，会引起各种疾病。
因此，水中细菌总数的测定对于保障人们的健康至关重要。
测定水中细菌总数的方法有多种，其中最常用的是培养法。
培养法是将水样放入含有营养物质的培养基中，使细菌在培养基上生长繁殖，然后通过计数器或显微镜等设备进行计数。
这种方法简单易行，但需要一定的实验室设备和技术。
除了培养法外，还有一些快速检测方法，如流式细胞术、荧光定量PCR等。
这些方法可以快速准确地测定水中细菌总数，但需要更高的实验室设备和技术。
水中细菌总数的标准是由国家制定的，不同的水质标准对细菌总数的要求也不同。
例如，生活饮用水的细菌总数标准为1000个/mL 以下，而游泳池水的标准为200个/mL以下。
如果水中细菌总数超过标准，就说明水质存在问题，需要采取相应的措施进行处理。
维护水质是保障人们健康的重要措施之一。
通过测定水中细菌总数，
可以及时发现水质问题，采取相应的措施进行处理，保障人们的健康。
因此，对于水质的监测和管理，应该引起足够的重视。
实验10 水中细菌总数的测定
一、目的要求
❖ 学习水样的采取方法，检测水中细菌总数的 方法；
❖ 学习掌握平板菌落计数的原理和方法。
二、实验材料
❖ 水样 ❖ 培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水 ❖ 1ml、10ml无菌移液管，无菌培养皿等
饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总 数和大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升 水样在普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后 所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水的 总菌数不得超过100个。
三、基本原理
❖ 平板菌落计数法是根据在固体培养基上形成的一 个菌落是由一个单细胞繁殖而成的肉眼可见的子 细胞群体这一微生物的培养特征而设计的一种计 数方法。
❖ 将样品进行不同稀释，使微生物分散并以单细胞 存在。再用一定量的稀释液涂布于平板上，培养 后，每一个活细胞即能形成一个菌落。统计菌落 的数目，根据稀释的倍数及取样接种量即可换算 出样品中的含菌数。
❖ 倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入 融化后冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每皿约15ml， 置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而 又不使培养基荡出或溅到皿盖上。
❖ 培养：待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中培养 24h。
❖ 菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。
若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 一半计数×2 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小 于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 （4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 （5） 所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的 平均菌落数乘稀释倍数。
水 中 细 菌 总 数 的 检 测
水中细菌总数的检测一、试验的目标请求1.进修并控制水的细菌学检测办法2.懂得水质状态与细菌数目在饮用水检测中的重要性.二.试验道理细菌总数是指1ml水样在养分琼脂造就基中,于37℃经24h造就后,所发展的细菌菌落的总数. 细菌总数是评价水质污染程度的重要卫生指标.我国现行的生涯饮用水尺度磨练办法GB5750—85划定水样中细菌总数测定是1ml水样在通俗养分琼脂造就基中37℃经24小时造就所发展的细菌菌落的总数.所测定的细菌总数增多解释水被生涯放弃物污染,但不克不及解释污染的起源.是以必须联合总大肠菌群数来断定水污染的起源和安然程度.本试验运用平板计数技巧测定水中细菌总数.因为水中细菌种类繁多,它们对养分和其他发展前提的请求不同很大,不成能找到一种造就基在一种前提下,使水中所有的细菌均能发展滋生,是以,以必定的造就基平板上发展出来的菌落,盘算出来的水中细菌总数仅是一种近似值.今朝一般是采取通俗牛肉膏蛋白胨琼脂造就基.平板菌落计数法的长处：能测出样品中的活菌数.此法经常运用于某些成品和生物成品检定以及食物.水源的污染程度的检定等.缺陷：手续较繁,并且测定值常受各类身分的影响.生涯饮用水细菌卫生尺度我国饮用水卫生尺度：≤ 3个大肠菌群/1L饮水 , ≤ 100个细菌总数/1ml饮水三.试验仪器和材料1.高压蒸汽灭菌锅.恒温箱.冰箱.无菌接种间.2.消毒酒精.消毒水.3.试管.三角瓶.平皿.刻度吸管.涂布器等（试验前包扎灭菌处理好备用）4.造就基蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml制备办法：按照现实的须要量,按上述配方称取各成分混杂后,加热消融,调剂pH为,,分装于玻璃容器中,用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min,倒制成平板后储存于冷处备用.5.水样：自来水.中水.四.试验内容：（一）.造就基的制备：试验前事先预备好造就基平板（办法见上）,每小组2-4个平板.（二）.取水样：1.自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭,再用酒精灯火焰灭菌,打开龙头放水1-2分钟,用无菌空三角瓶接取水样200毫升.2.纯清水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后,先放走部分水,再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.3.池水.河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中掏出,最好立刻检讨,不然需放入冰箱中保管.（三）.接种造就：（请求无菌操纵）用无菌吸管汲取1毫升水样,参加平板中（每个水样平行做两个平板）,用无菌涂布器涂抹平均,在造就皿正面标注清晰后,置于37℃恒温箱内经24h-48小时造就后,统计细菌菌落的总数.（四）.菌落记数：菌落计数及陈述办法作平皿菌落计数时,可用眼睛直接不雅察,须要时用放大镜检讨以防漏掉.在记下各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步盘算时运用.在求同稀释度的平均数时,若个中一个平皿有较大片状菌落产生时,则不宜采取,而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数.若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落数散布又很平均,则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数.然后再求该稀释度的平均菌落数.五.试验留意事项六.试验陈述内容;1.记载试验办法和步调.2.列表解释检测成果.（1）自来水（2）饮用水3.思虑题：（1）从自来水的细菌总数成果来看,是否合乎饮用水的尺度？（2）你所测的水样污秽程度。
简要叙述水中细菌总数的测定步骤
水中细菌总数的测定步骤在环境监测和饮用水管理中，测定水中细菌总数是非常重要的一项工作。
它可以帮助我们了解水质的卫生情况，评估水是否符合生活饮用水标准，从而保障人们的健康。
那么，究竟应该如何测定水中细菌的总数呢？下面我将结合常用的方法，为大家详细介绍一下。
1. 收集水样我们需要准备好需要测定的水样。
这些水样可以来自自来水、地表水、井水或者其他水源。
在收集水样的过程中，需要注意使用无菌瓶或者消毒过的玻璃瓶，避免外界细菌的污染。
在收集水样的过程中，也需要避免使用含氯的消毒剂，以免对后续操作产生影响。
2. 制备稀释液收集好水样之后，接下来需要制备稀释液。
一般来说，我们会选择生理盐水或者蒸馏水作为稀释液的基质。
在制备稀释液的过程中，需要进行严格的无菌操作，以确保稀释液不会受到外界细菌的污染。
3. 进行稀释将收集到的水样加入到制备好的稀释液中，进行适当的稀释。
一般情况下，我们会选择进行多次等比稀释，以确保在测定范围内可以准确计数。
稀释完成后，需要进行摇匀，确保水样和稀释液充分混合。
4. 填充平板接下来，我们需要将稀释后的水样填充到已经准备好的平板上。
填充平板的过程中，需要采用无菌技术，避免细菌污染。
填充完成后，需要在平板上进行横向和纵向的晃动，以确保水样均匀分布在平板表面。
5. 孵育培养填充好水样的平板需要置于培养箱中进行孵育。
一般情况下，会选择在35-37摄氏度下进行孵育，孵育的时间一般为24小时。
在孵育过程中，需要注意防止平板干燥，以免影响细菌的生长。
6. 计数和分析经过孵育后，我们可以观察到在平板上形成的菌落。
这时候就需要进行计数和分析了。
一般来说，我们会选择菌落计数板或者显微镜进行观察和计数。
通过计数和分析，我们就可以得到水样中细菌的总数。
测定水中细菌总数的步骤主要包括收集水样、制备稀释液、进行稀释、填充平板、孵育培养和计数分析。
这些步骤需要严格遵守无菌操作和实验室安全规范，以确保测定结果的准确性和可靠性。
(完整版)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、认识水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2. 菌落总数 standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下 37°C 培养 48 h 后，所得 1 mL 水样所含菌落的总数。
细菌总数是议论水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增添说明水被生活废弃物污染。
由于结果不能够说明污染的本源，因此必定结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
3. 培养基与试剂2.1 营养琼脂成分蛋白胨10 g 牛肉膏 3 g氯化钠 5 g 琼脂10~20 g蒸馏水1000 mL2.2 制法：依照本质需要量，依照上述配方称取各成分混杂后，加热溶解，调整 pH 为 7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有很多杂质的琼脂，应先过滤。
），经103.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌 20 min，储蓄于冷暗处备用。
4.仪器和资料4.1仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。
4.2资料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。
4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精美pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。
5.2纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样 200 毫升。
5.3地表水的取样：应取距水面10—15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，尔后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好马上检查，否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约 15 ml 已融化并冷却到 45°C 左右的营养琼脂培养基，并马上旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
水质菌落总数检测方法
水质菌落总数检测方法一、引言水质菌落总数是评估水体卫生质量的重要指标之一，它能够反映水体中细菌的数量，进而判断水质是否合格。
因此，准确测定水质菌落总数对于保障水源安全、防止水传播疾病具有重要意义。
1. 培养法培养法是目前最常用的水质菌落总数检测方法之一。
其基本原理是将水样涂布在含有营养物质的琼脂平板上，然后在适宜的温度下培养一定时间，观察并计数菌落的数量。
这种方法简单易行，可以检测各种类型的细菌，但需要较长的时间，通常需要24-48小时才能得到结果。
2. 膜过滤法膜过滤法是一种快速测定水质菌落总数的方法。
其原理是将水样通过一块细孔膜滤膜，过滤掉水中的微生物，然后将滤膜放置在含有营养物质的琼脂平板上进行培养。
菌落在滤膜上生长并形成可见的斑点，通过计数斑点的数量来测定水质菌落总数。
相比于培养法，膜过滤法缩短了检测时间，通常只需要6-12小时即可得到结果。
3. 流式细胞仪法流式细胞仪法是一种高效准确的水质菌落总数检测方法。
它利用光散射和荧光染色技术，将水样中的微生物分为不同的群体并进行计数。
流式细胞仪能够快速检测大量样品，并提供详细的菌落分布数据，具有高灵敏度和准确性。
但是，流式细胞仪法的设备较为昂贵，需要专业操作人员进行操作。
4. PCR法PCR法是一种基于DNA扩增的水质菌落总数检测方法。
它利用特定的引物和酶，在聚合酶链反应的条件下，扩增水样中细菌的DNA片段。
通过测定扩增产物的数量，可以间接测定水质菌落总数。
PCR 法具有高灵敏度和高特异性，并且可以快速得到结果，但需要专业的实验室设备和技术支持。
三、不同方法的优缺点比较1. 培养法的优点是操作简单，可以检测不同种类的细菌。
缺点是需要较长时间，无法实时监测水质。
2. 膜过滤法的优点是快速，可以在较短时间内得到结果。
缺点是只能检测活菌，对于耐热菌等特殊菌种的检测效果较差。
3. 流式细胞仪法的优点是高效准确，可以实时监测水质。
缺点是设备昂贵，需要专业操作人员。
实验三 水中细菌总数的测定
实验三水中细菌总数的测定实验目的：1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.理解水质检测的原理和意义。
实验原理：在水体中存在着大量的微生物，其中包括细菌、藻类、真菌、原生动物等。
其中，细菌是最常见的一种。
水中细菌的检测可以对水质进行评估。
水中细菌的测定方法有多种，其中最常用的是悬浮液涂片法。
具体步骤如下：1.样品采集：准备好采集样品的器具，比如采样瓶。
在采集水样之前，要仔细洗手，并戴上手套。
2.处理样品：将样品过滤筛，去除水中的大颗粒。
然后用吸头从样品瓶中吸取适量的水样，放入卡片内。
3.制作涂片：将取出的水样涂在普通菌落计数板上。
涂片的方式要均匀，涂抹的厚度要适中。
制片完成后，可将板在37℃恒温条件下培养24小时。
4.统计菌落数目：待培养时间结束后，统计平板上的菌落数目。
实验步骤：1.准备实验药品和器具，保持清洁卫生，避免造成污染。
3.取出一片净化涂片，并用酒精灯或消毒灯消毒。
4.用吸头从采样瓶中取出适量的水样，均匀地涂在净化涂片上。
5.将制片好的涂片在恒温器中培养，待24小时后取出观察。
统计涂片上菌落的数目，计算出水样的细菌总数。
6.实验结束后，将药品和器具进行清理和消毒。
实验注意事项：1.实验过程中要注意保持清洁卫生，防止污染；2.涂片的制作要均匀，厚度不要过薄或过厚；3.涂片不要碰触手指等其他物体，否则影响菌落生长；4.待菌落计数板培养后不要翻盘，以免影响菌落的计数。
实验结果分析：通过实验，我们可以了解到水中细菌总数的检测方法，并从中得出有关水质的检测数据。
水中细菌总数越高，说明水质越差，这意味着我们在使用这种水源时需要更加谨慎和严格。
因此，水质检测对于保障人们的健康和生命安全非常重要，需要时常进行检测和监控。
水中细菌总数的测定
• 测定水中的细菌总数；（天然水、饮用水） • 学会制备琼脂营养培养基； • 熟练掌握超净工作台的操作。
实验前准备
• 仪器准备：培养皿（12个）、试管（25ml,4支） 、移液管（1ml,4支）、锥形瓶、烧杯、玻珠、胶 塞、棉花、洗耳球、电炉、牛皮纸、棉绳、天平 、高压锅、超净工作台 • 试剂准备：营养琼脂粉、酒精、饮用水、天然水 、无菌水
采样地点
• 天然水采样地点 • 饮用水采样地点
3楼，办公 室，饮水机
实验步骤
菌落的计数及图片
空白实验
ห้องสมุดไป่ตู้
饮用水
天然水
结果计算及报告
天然水体 1 10-1 10-2 饮用水 空白对照
N（个/ml）
116
205
2
5
1
根据我国天然水体卫生标准规定，在100-1000（个/mL）范围内的天 然水库为清洁，1.2×102个/mL在100-1000 （个/mL）范围内，所以我们 所测的湖水清洁标准。 根据我国生活饮用水卫生标准规定，细菌总数1mL自来水中不得超过 100个，由于5个/mL<100个/mL，所以本次实验所取的实训楼D栋3楼办公 室饮用水达标。
问题讨论
• 1、为什么水样稀释10倍后的细菌总数比原水样 的细菌总数还多? 答：因为在移取稀释10倍的水样到培养皿的时候 吸耳球中带有水，在吸取水样时，吸耳球中的水 流入移液管中，导致水样被污染，造成菌落总数 增加。
• 2、为什么空白对照的结果不是0？ 答：组内有一成员由于在超净工作台操作前双 手灭菌不完全，接触空白培养皿，导致被污染。 在移取稀释10的水样时，由于不小心把液 体溅到超净工作台上，导致超净工作台受污染。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定一、实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水的平板菌落技术的原则。
二、实验材料1、无菌培养皿、无菌吸管、无菌锥形瓶、无菌水（每管有9mL灭菌过的自来水）2、营养琼脂培养基（已灭菌的）3、酒精灯、恒温箱（培养箱）等。
三、实验步骤1、平板的制作1）将无菌培养皿编号0、1、2、3。
其中0#培养皿作为空白对照，1、2、3#培养皿作为平行实验。
2）另取一支1mL的无菌吸管从自来水中吸取1mL水样注入灭菌培养皿中。
每次吸取时，吸管都应在水样中反复吸洗几次，其中0#培养皿中不注入水样，只倾注营养琼脂培养基作空白对照。
3）在每个灭菌培养皿中倾注15mL（每一个培养皿内加入的培养基量需根据培养皿的大小决定，以能使培养皿底部铺满培养基而形成厚约2~3mm的薄层为适当）已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基（温度不可过高，否则微生物容易被烫死；温度过低，培养基容易凝固，平板不平。
如果经验不足，可以将培养基瓶置于45℃水浴锅中降温，但所需时间较长），倾入后迅速盖上皿盖，平放桌上，轻轻转动，使培养基和水样充分混合均匀，冷却后，即成平板。
4）待冷却凝固后，翻转平皿，使底面朝上，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱内培养24小时，观察有无菌落长出，并进行计数，即为1mL水样中细菌总数。
培养皿所以要倒置是为了防止培养基内水分蒸发到皿盖上而使皿盖变干。
2、菌落计数及报告方法作培养皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平皿的菌落计数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同一稀释度的平均计数时，若其中一个平皿优较大片状菌落生长，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半菌落数分布又很均匀，则可将此半平皿计数后乘以2以代表全皿菌落数。
四、实验结果（我国应用水的卫生学指标：在1mL自来水中细菌总数不得超过100个）平板菌落数1mL自来水中细菌总数1#2#3#。
倾注平板法测定水中细菌菌落总数
实验1 倾注平板法测定水中细菌菌落总数一、实验目的了解水中菌落总数测定的意义，原理；熟悉水样的采集与保存；掌握倾注平板法测定水的菌落总数的技术方法，及正确进行结果的卫生评价。
二、实验原理样品中的微生物细胞充分分散开，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，单个细胞及聚在一起的细胞可以生长繁殖，形成一个肉眼可见的菌落，统计菌落数目，即可用以评价样品中的微生物的数量。
水中细菌菌落总数是指1m l水样在营养琼脂培养基中，37℃经24h培养后所生长的菌落数。
用平板菌落计数测定水中细菌菌落总数，仅包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的和兼性厌氧的细菌菌落总数。
三、仪器与试剂营养琼脂、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、灭菌平皿、放大镜、灭菌采样瓶、灭菌刻度吸管、制备培养基用一般设备:量筒，三角烧瓶，pH计或精密p H试纸等。
四、实验方法检验程序：水样做成几个适当倍数的稀释液选择2~3个适宜稀释度，各以1ml分别加入灭菌平皿内，每个浓度同时做2个平皿。
同时做营养琼脂空白对照。
每皿加入适量营养琼脂37℃ 24h菌落计数报告操作步骤：1、检测细菌的水样采集与保存1）选择容量500ml的磨口带塞无色细口瓶，在采样前必须洗净，瓶口包扎后灭菌备用。
2）按无菌操作采集水样，采水量为瓶容量的80％左右，以便检验时充分摇动，使菌胶团分散。
3）在采集加氯消毒水样时，采样瓶应在消毒前，按每500m l水样加入1.5％硫代硫酸钠溶液2ml，以中和水中的余氯，终止氯的持续杀菌作用；然后，121℃高压灭菌20min备用。
4）水样采集后，应立即记录水样名称、时间、地点等项目，从速检验，一般不应超过2h，置冰箱保存时也不应超过4h。
2、水样的检测1) 用力振摇水样20～25次，以分散可能存在的菌胶团。
水中细菌总数的测定
琼脂培养基），使固体培养基溶化。 2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，
放置桌面待其凝固。 3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻
璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微 生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水 滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5. 倒置于37度培养箱中培养24h。
一.实验目的：
1.学习水样的采取方法和水样细菌 总数测定的方法；
2.了解水源水的平板菌落计数的原 则。
二.实验原理：
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细 菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其 他生长条件的要求差别很大，不可能找到 一种培养基在一种条件下，使水中所有的 细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养 基平板上生长出来的菌落，计算出水中细 菌总数仅是一种近似值。
2. 自来水取样： 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用
烧杯接取自来水。
3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连 续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混 匀）、自来水样不稀释。
注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入 9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河 水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。
目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。
本实验以普通肉膏蛋白胨琼脂 培养基，采用平板菌落计数技 术来分别测定自来水和河水中 的细菌总数。
三、实验操作
1.水体取样： 应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌
的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转 过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出。
水质 细菌总数的测定 菌落计数
水质细菌总数的测定菌落计数本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水中细菌总数的测定。
平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。
但是，由于细菌在水中以不同形式存在，因此可能会导致由此法所得的菌落数低于真正存在的活细菌的总数。
所需仪器包括高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、恒温培养箱、冰箱和解剖镜，以及采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿。
这些器皿需要在121℃（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。
培养基则为市售营养琼脂培养基，按说明配制后经过121℃高压蒸汽灭菌15min，并经过无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。
在进行菌落计数前，需要选择适宜的稀释度，以确保在平皿上的菌落总数介于30～300之间。
对于大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL，所得的菌落总数可适于计数。
水样的稀释方法包括将水样用力振摇20～25次，使可能存在的细菌凝团成分散状，并以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。
按同法依次稀释成1：1000、1：稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。
在操作时，需要注意吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。
操作方法包括以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2～3个适宜浓度的稀释水样1mL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每个水样应倾注两个平皿。
待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。
在进行菌落计数时，需要立即进行。
如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5～10℃冰箱内，且不得超过24h。
但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。
在进行平皿菌落计数时，需要使用解剖镜进行检查，以避免漏计。
在记录每个平皿的菌落数后，需要计算同一稀释度的平均菌落数。
如果其中一个平皿有较大的片状菌落生长，就不应该使用它，而应该使用无片状菌落生长的平皿来代表该稀释度的菌落数。
实验十一水中细菌总数的测定
根据菌落计数结果，计算每毫升水样中的细菌总数。计算公式 为：细菌总数（cfu/mL）=（平均菌落数×稀释倍数）/接种体 积。同时，计算标准差和变异系数，评估结果的可靠性。
04 实验结果与数据分析
菌落形态描述及数量统计
菌落形态
在培养皿中观察到不同形态的菌落， 包括圆形、不规则形状等。菌落表面 光滑或粗糙，颜色也有所不同，从白 色到黄色不等。
结果分析与讨论
结果分析
根据实验结果，可以对水样中的细菌总数进行评估。如果细菌总数超过了相应的卫生标准，则说明水 样受到了污染，需要采取相应的措施进行处理。
结果讨论
在实验过程中，可能会受到一些因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。这些因素可能会导致实验 结果的偏差。因此，在讨论实验结果时，需要考虑这些因素的影响，并对实验结果进行合理的解释和 讨论。同时，也可以提出改进实验方法的建议，以提高实验的准确性和可靠性。
时一般采用平板计数法，选择菌落数在30-300之间的平板进行计数，
以确保结果的准确性。
03 实验步骤与操作
样品稀释与接种
样品稀释
取1mL水样，加入9mL无菌水中，充分混匀，得到10^-1稀释液。以此类推， 制备10^-2、10^-3等稀释液。
接种
分别取不同稀释度的水样1mL，倾注于无菌平皿中，每个稀释度做两个平行样。 同时，以无菌水作空白对照。
计数误差
在细菌计数过程中，可能因计数不准确或视野选择不当导 致误差。为减小误差，应采用合适的计数方法，如平板计 数法，并选择具有代表性的视野进行计数。
提高实验准确性的建议
严格控制实验条件
在实验过程中，应严格控制温度、湿 度、光照等实验条件，确保实验结果 的准确性和可重复性。
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建筑
水中细菌总数的检测
1.实验目的
1、学习并掌握水的细菌学检测方法
2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2.菌落总数 standard plate-count bacteria
水样在营养琼脂上、有氧条件下 37°C培养 48 h后，所得 1 mL水样所含菌落的总数。
细菌
总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污
因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
染。
由于结果不能说明污染的来源，
3.培养基与试剂
2.1营养琼脂成分
2.2制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。
），经 10
3.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌 20 min，储存于冷暗处备用。
4.仪器和材料
仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。
材料：灭菌平皿（直径 9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、
试管架等。
放大镜或菌落计数器、 pH计或精密 pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集
自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水 3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。
纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水
样 200毫升。
地表水的取样：应取距水面10— 15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸
入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，
最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤
生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约 15 ml已融化并冷却到 45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋
摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每次检验时应做一平行接种，
同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。
待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36°C±1° C条件下连续培养 48 h，进行菌
落计数，即为 1 ml水样中的菌落总数。
水源水：以无菌操作方法吸取 1 ml充分混匀的水样，注入盛有 9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈 1:10稀释液。
吸取 1:10稀释液 1 ml，注入盛有 9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:100稀释液。
按同
法依次稀释成 1:1000、1:10000稀释液备用。
如此递增稀释一次，必须更换一支刻度吸管。
用灭菌吸管吸取 1 ml未稀释的水样和 2~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌培养皿内，
建筑
其余操作同 6.1生活饮用水的 检验步骤。
7.菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。
在记下各平皿的
菌落数后，应求出同稀释度的 平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的 平均数时， 若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，
则不宜采用，而应以无片状菌落产生的 平皿作为该 稀释度的 平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的 一半， 而其余一半中菌落数分布又很均匀， 则 可将此半皿计数后乘
的 选择及报告方法
2以代表全皿菌落数。
然后再求该稀释度的 平均菌落数。
不同稀释度 首先选择平均菌落数在 30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的 平均菌落数符合此范
1中实例 1）。
围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表
若有两个稀释度，其生长的 菌落数均在
30~300之间，则视二者之比值来决定：若其比值小
于 2，应报告两者的 平均数（如表 1实例 2）；若比值大于 2，则报告其中稀释度较小的 菌 落数（如表 1实例 3）。
若等于 2亦报告其中稀释度较小的 菌落数（见表
1实例 4）。
若所有稀释度的 平均菌落数均大于
300，则应按稀释度最高的 平均菌落数乘以稀释倍数报告 30，则应按稀释度最低的 平均菌落数乘以稀释倍数报告 之（见表 1中实例 5）。
若所有稀释度的 平均菌落数均小于
之（见表 1中实例 6）。
3
若所有稀释度的 平均菌落数不在
30~300之间，则应以最接近 30或 300的 平均菌落数乘以 稀释倍数报告之（见表 1中实例 7）。
若所有稀释度的 平板上均无菌落生长，则以“未检出”报告之。
如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的 平板上，任 意数其中 2个平板 1 cm2中的 菌落数，除 2求出每平方厘米内平均菌落总数， 63.6 cm2，再乘以其稀释倍数报告之。
100以内时，按实有数 报告；大于 100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的 数值，以四舍五入法计算； 10的 指数来表达（见表 1“报告方式”列。
）
8.生活饮用水卫生标准规定：菌落总数不超过 100 CFU/ml 。
乘以皿底面积 菌落计数的 报告：菌落数在 为了缩短后面的 零数，也可以用
建筑
列表说明检测结果。
（ 1）自来水
（2）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？。