脐带间充质干细胞(9月季度培训课件)

• 2.八天换液
间充质干细胞的冻存
• 细胞收集前须给检测送样做细菌检测 和流式（CD90+、CD105+、CD166+） • 冷冻保护剂（胎牛血清+DMSO） 配制：DMSO 10% • 冷冻方式 深低温冰箱梯度降温
细胞治疗程序
1、治疗前咨询： 明确诊断，明确疾病处于哪一期； 2、治疗风险： 分析利弊；可能的副作用；获益 3、知情同意：
前景
• 干细胞治疗是继药物治疗、手术治疗 之后的又一场医疗革命。目前，发达 国家已经开始将干细胞治疗技术用于 临床治疗自身免疫性疾病、心肌梗死、 脊髓损伤、心力衰竭等疾病。
间充质干细胞前景
干细胞的魅力在于：一旦身体需要，这
些细胞可按照发育途径通过分裂而产 生分化成熟的体细胞。也许在某一天， 人们突然发现，人体器官可以在实验 室按需要、按流程生产，血细胞、脑 细胞、骨骼、心肌细胞、肝脏、神经 等的更换都不成问题，即使患上白血 病、帕金森氏症和癌症这些不治之症 也能绝处逢生。
阴性
细胞发放
• 1.细胞的保存(基质：生理盐水或者保
存液）
• 2.运输要求：时间、温度
• 3.病人信息填写完整
• 4.样本检测合格
MSC治疗禁忌证：
• 1. 怀孕。 • 2. 精神病。 • 3. 严重的心、肝、肾、肺功能不全。 3. 不能控制的严重感染。 4. 合并其他有致命危险的疾病。 • 5. 一般受者年龄不超过65岁 （个别患者 >65岁）。 • 6. 自体免疫性疾病晚期。 • 7. 恶性肿瘤。 • 8. HIV 阳性
二、脊髓损伤
临床资料
本组男11例，女4例。年龄11-48岁， 平均37岁。病程4个月-5年，平 均1.2年。治疗前均有损伤平面以 下肌力、肌张力减退，其中尿失 禁9例，大便失禁7例。
临床资料
脐带间充质干细胞108，第一次、第
三次制成混悬液20ml，其中5ml通 过腰穿作椎管内注射，另外15ml 经静脉输注。第二次、第四次制成 混悬液40ml，作静脉输注。每次 间隔一周，共4次为一疗程。
脐带组织中得到了一种多能干细胞，称 作脐带间充质干细胞(UC-MSC)。UCMSC具有胚胎干细胞类似的增殖能力和 多向分化潜能，且来源丰富、取材方便、 低病毒感染率、无伦理障碍，又没有胚 胎干细胞产生畸胎瘤的问题，并且抗原 性很低。不产生免疫排斥反应，异体使 用无需HLA配型。
间充质干细胞治疗疾病的原理 • 替代和修复死亡和受损伤的细胞； • 激活休眠和处于抑制状态的细胞； • 旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗 凋亡因子等）
间充质干细胞的制备方式
华通氏胶的提取与培养 • 华通氏胶提取： • 1.消毒 • 2.清洗 • 3.分离出两条动脉和一条静脉 • 4.剥取华通氏胶 • 5.剪碎华通氏胶（大小1mm3 ） • 6.接种至培养皿培养（密度2-3g/10cm 皿）
间充质干细胞原代培养
• 细胞补液和换液（原代培养）
• 1. 制备五天补液（观察是否有细胞爬 出）
供者筛选
• 供者需要提供供者的既往病史、 现病史、家族史等资料。
样本采集运输要求
• 脐带采集标准： 1.脐带长度不得低于20cm 2.脐带两端均在2-3cm处结扎 3.脐带保存液在有效期内，并且无明显颜色变 化 4.脐带保存瓶无漏液现象，密封严实、无裂横 5.采集套装内容完整，无缺失 6.采集信息登记完整、字迹清楚易辨认 7.脐带运输时间在规定范围内 8.温度控制在适度范围内（0度-25度）
间充质干细胞
间充质干细胞（ mesenchymal stem cells，
MSC）是干细胞家族的重要成员，来 源于发育早期的中胚层和外胚层。 MSC最初在骨髓中发现，因其具有多 向分化潜能、造血支持和促进干细胞 植入、免疫调控和自我复制等特点而 日益受到人们的关注。Βιβλιοθήκη 脐带——获取干细胞的另一来源
我国科学家2006年首次从新生婴儿废弃的
样本接收标准
• 脐带的接收标准： 1.样本信息一致、无误，并能追溯至脐带所 有人。 2.母血采集量≥5ml 脐血检测样本采集量≥5ml 3. 采集套装内容完整，无缺失；采集信息 登记完整、字迹清楚易辨认。 4.无可能造成供者基因型异常的家族史。 5.供者健康调查表登记信息无异常。
间充质干细胞的制备方式
治疗前准备
• • 1). 安全检测:菌检； 2). 个体化治疗方案设计：每一位病 人的治疗方案，都根据其评价结果具 体制定; • 3). 需要的细胞数量； • 4). 细胞的使用方法； • 5). 可能出现的不良反应及应对措施。
间充质干细胞质量要求
• • • • • 细菌检测 内毒素检测 革兰氏检测 支原体检测 活性检测≥90%
评价标准
感觉平面恢复2个椎体节段以上，
肌力恢复2级及以上，肌张力 恢复2级及以上，大小便能控 制，达到上述之一者，为显效。 有改善但达不到上述标准，为 有效。
结果
15例患者，显效5例，有效 9例，无效1例。
三、肌萎缩侧索硬化症 肌萎缩侧索硬化症(amyotrphic
lateral sclerosis，ALS)是一种 累及锥体束上、下运动神经元 (脊髓、大脑、脑干)的进行性 变性疾病，发病后2～5年内死 亡，主要死因为呼吸衰竭，目 前临床无有效治疗方法。
涉及病症
神经系 统疾病 心血管 疾病 肝脏疾 病
多向分化
是关键
鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、
间充质 干细胞
骨关 节疾 病 血液系 统疾病 烧伤
能支持造血和促进造血干细胞植入、调 节免疫以及分离培养操作简便等特点
作为种子细胞，临床上主要用于 治疗机体无法自然修复的组织细 胞和器官损伤的多种难治性疾病 作为免疫调节细胞，治疗免疫排 斥和自身免疫性疾病
移 植 前 30.69±4.32 122.78±89.32
MSC治疗肝硬化的机制
主要有以下几个方面： • 1)MSC分化形成正常肝细胞，补充肝细胞数量， 改善肝功能； • 2)MSC分泌细胞因子/生长因子、抑制炎症反应； • 3)MSC抑制肝星形细胞，活化、阻止细胞外基质 的生成； • 4)MSC激活卵原细胞，促进肝细胞再生； • 5)MSC降解肝内过量的细胞外基质。
12例肝硬化患者脐带间充质干细
胞移植前后实验室指标变化
ALB(g/L)
移植后 4周 36.28±5.81 P 值 <0.01
ALT(U/L) 65.67±20.63 <0.05
TBIL(μmol/L) 35.32±21.61 33.75±19.71 >0.05
PT(s) 17.89±4.49 15.68±4.14 <0.05
儿脐带提取间充质干细胞经实验室传 代、扩增，取108制成40ml混悬液， 第一次经肝动脉注入，第二次以后为 静脉输注，每周一次，共4次。4周后 复查生化指标。
结果
食欲改善、体力好转11例（91.66%）；
腹胀减轻11例（91.66%）；腹水减少、 下肢浮肿减轻10例（83.33%）。12例 患者术中均未发生严重并发症，术后 无不良反应。
糖尿 病
脐带间充质干细胞具有临床应用价值
• • • • •
• 泌尿系统：肾实质的修复； • 消化系统：肝组织的修复； • 内分泌系统：胰岛细胞的修复； • 神经系统：脑、脊髓损伤的修复； • 血液系统：化疗、放疗后造血系统 的修复； • • 循环系统：心肌修复、血管修复； • • 免疫系统：调节免疫，移植治疗时可 降低免疫排斥反应； • • 衰竭器官的结构和功能的修复和再生： 最终替代组织和器官移植。
脐带间充质干细胞概述
市场部 2015-09-13
目录
定义 临床应用 优势 前景 样本接收标准及冻存工艺 案例分析
什么是脐带间充质干细胞？
• 脐带间充质干细胞 （Mesnchymal Stem Cells， MSCs）是指存在于新生儿脐带 组织中的一种多功能干细胞，它 能分化成许多种组织细胞。
间充质干细胞治疗途径 • • • • 腰穿途径 静脉途径 局部种植 介入途径
优势
• 1、取材方便：采集过程简单、无痛苦， 不影响母子健康； • 2、细胞数量丰富：增值能力强，可为组 织器官的修复和再生提供所需的大量细胞； • 3、免疫原性低：具有独特的免疫调 节功 能，自体使用不引起免疫排斥反应，异体 移植还可降低免疫反应； • 4、不涉及社会、伦理及法律方面的更多 争议。
案例分析
干细胞临床应用
一、肝硬化
细胞移植有可能成为肝硬化治疗的最
佳备选方案。越来越多的体内外实 验表明MSC可以横向分化为功能性 肝细胞，动物研究表明脐带MSC可 以抑制诱导型的肝硬化发生，并促 进肝硬化的消退。
临床资料
本组男10例，女2例，年龄38-63岁。均 为慢性乙型肝炎，肝硬化, ChildPugh分级B级9例，C级3例。健康婴
结果
4名患者经MSC治疗后用力肺活
量和ALS功能评分的线性衰减 趋势明显变缓。有效率达 44.4%。研究结论为MSC治疗 ALS安全、耐受性好、无明显 急性或长期毒性，且疗效颇具 前景。
• 间充质干细胞的制备原理： 脐带华通氏胶内富含间充 质干细胞，通过分离获得华通 氏胶后，并进行体外培养，利 用间充质干细胞贴壁生长和可 体外扩增特性，可获得更多的 间充质干细胞。
组织块分 离法
免疫五项检测均为阴性
工艺流程简介
供者筛选 发放 运输 采集 复苏 接收 冻存 制备 培养
临床应用
信息反馈