流式细胞术的应用课件

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6 在器官移植中的作用
FCM通过检测受者血清中抗供者的抗HLA的抗体，根 据抗体的种型、效价、靶抗原和器官移植的类型不同， 抗体介导的排斥反应也有所不同，FCM比传统方法更 灵敏、操作时间更短并可同时检测细胞亚型、分辨出 IgG和IgM抗体。巨细胞病毒（CMV）能在白细胞内繁 殖并合成CMV特异性蛋白，通过FCM检测CMV特异性 抗原及其抗原分泌量，这种技术用于CMV感染检测时 感染后4h便可检出T淋巴母细胞中CMV-DNA，从而可 快速、准确地反映CMV在移植受者中的早期感染状况， 对预防和减少感染具有重要意义 ［8］ 。以FCM监 测肾移植受体CD8 + 、CD38 + 、T细胞亚群的变化也可 监测CMV感染 ［9］ 。
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5 病毒抗体检测
利用吸附有病毒抗原的聚苯乙烯微球作为 载体的病毒抗体FCM分析技术已广泛应用。 结合流式细胞仪与微球杂交法可同步检测 同一反应管中HIV、HCV、HBV的数目和种类， 其基本原理为将检测不同病原体的探针分 别包被微球，流式细胞仪分辨特异性结合 后发出的不同强度的荧光。当用FCM技术检 测HCV核心抗原、NS 3 抗原抗体时，其灵 敏度比酶标免疫技术高5倍左右 ［7］
T淋巴细胞检测 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
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CD8+Ts淋巴细胞检测
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B淋巴细胞检测
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NK细胞检测
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3 白细胞分类分析
利用FCM的体积测定和细胞结构测定来检测 每个白细胞的光散色强度，它与细胞体积、 细胞膜结构、细胞核形状、细胞质性状等 多种因素有关，经过分析可得到中性粒细 胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞 的检测结果。这种方法应用于血细胞计数 速度快、结果准确，大大提高了临床实验 室的工作效率 ［5］ 。
BD LSR
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FACSAria
文档仅供参考，不能作为科学依据，请胞仪的工作原理
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流式细胞仪特点
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开滦医院引进的BD公司FACSCalibur流式细 胞仪
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信号检测--散色光
它反应细胞FSC（小角散 射)光它反应细胞的相对 大小和截面积的大小 SSC (90度角散射光)代表 细胞的颗粒度和精细结 构的变化 的物理特性,根据前侧向 散射光，可以把不同类 型的细胞群加以区分
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信号检测--荧光信号
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4 病毒抗原的检测
FCM既可用于检测受染细胞内的病毒抗原，也可检测 受染细胞表面的病毒抗原。由于FCM检测的是单个细 胞，因此FCM检测受染细胞适用于血液、支气管灌洗 液、尿标本以及经酶消化过的组织细胞。同时由于 FCM为多参数分析，因此可在单个细胞中同时获得多 个分析参数并能定量检出受染细胞。当用不同荧光染 料标记不同的病毒抗原特异性抗体或将特异性病毒抗 体与不同大小的乳胶颗粒相联时，FCM可同时检测到 同一样本中的多种病毒或病毒抗原 ［6］ 。
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流式细胞术的操作流程
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流式细胞仪检测范围
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1 对细胞抗原的检测
各种血细胞都有相应的抗原表达方式，并且不同成熟阶 段表达的抗原种类也不完全相同。通过免疫荧光标记技 术将细胞表面抗原同标记有特异染料的一种以上单克隆 抗体结合后，在流式细胞仪同一激光光源激发下产生几 种特异荧光色，由荧光检测器对每个细胞的体积、结构、 荧光种类及性质等多种参数同时测定，分析得到细胞群 体的多种表面抗原的表达情况。FCM也可用于特异性细 胞质内或细胞核上抗原的检测，并协同其他实验指标预 示疾病的预后［2］ 。FCM也为网织红细胞计数提供了 快速、准确的测试手段，可通过某些染料与网红中RNA 结合，在FCM测量时发出特定颜色的荧光，进行单参数 定量RNA。
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2 对淋巴细胞及其亚群的分析
FCM进行淋巴细胞及其亚群的分析，分类更 客观、准确。使用流式细胞仪的绝对计数 系统，即加入已知数量的荧光微球，通过 仪器测定时收获的细胞数量和微球数量及 血液标本用量，直接得到每微升全血中T淋 巴细胞亚群的绝对计数（个/μl）［3］ 。 用FCM检测PBMC中p24、p24nef、p18等HIV 抗原阳性的CD4 + 细胞数可监测体内HIV复 制情况，结果表明HIV抗原阳性细胞与CD4 + 细胞数量负相关 ［4］ 。