酵母菌生长曲线的测定及不同生长时间麦芽汁糖度的变化
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将 ７２１ 型分光光度计波长调整到 ５６０ ｎｍ， 预热 ３０ ｍｉｎ。以未接种的麦芽汁培养液校正比色计的零
８ ＶＥＴＥＲＩＮＡＲＹ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＆ ＦＥＥＤ ＡＤＤＩＴＩＶＥＳ
兽药与饲料添加剂 ２００６ 年第 １１ 卷第 １ 期
营试养验与研饲究料
点。取盛有 ３００ ｍＬ 无菌麦芽汁培养液的 １ ０００ ｍＬ 锥形瓶 ５ 个， 各瓶中加入振荡培养 ２０ ｈ 的酵母培养 液 ３０ ｍＬ， ３０ ℃恒温培养。于培养后的第０、２、４、６、 ８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４ ｈ 分 别 用 无 菌 移 液 管 从 各 瓶 中 吸 取 培 养 液 ５ ｍＬ， 在 ５６０ ｎｍ 下测定 ＯＤ５６０ 值。 ２．４ 培养液糖度的测定
ｃｕｌｔｕｒｅ （ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ｏｎ ｐｒｅｐａｒｔｕｍ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｐｏｓｔ－ ｐａｒｔｕｍ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｍｉｌｋ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｊｅｒｓｅｙ ｃｏｗｓ ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ， ２０００， ８３： １２３－ １２７． ［ ３］ Ａｄａｍｓ Ａ Ｌ， Ｈａｒｒｉｓ Ｂ， Ｖａｎ Ｈｏｒｎ Ｊｒ Ｈ Ｈ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｖａｒｙｉｎｇ ｆｏｒ－ ａｇｅ ｔｙｐｅｓ ｏｎ ｍｉｌｋ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｗｈｏｌｅ ｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄ， ｔａｌ－ ｌｏｗ， ａｎｄ ｙｅａｓｔ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ， １９９５， ７８： ５７３－ ５８１． ［ ４］ 张继泉， 孙玉英， 王瑞明， 等． 发酵戊糖产酒精酵母菌株的选育
冻干菌种装在安瓿管内， 恢复培养首先用 ７５％ 乙醇将安瓿管的外壁消毒， 将安瓿管上部用火焰上 下烧热， 滴几滴无菌水， 使管子破裂。将无菌液体培 养基加入安瓿管中， 使样品溶解， 然后用无菌吸管 取出菌液至斜面培养基中进行培养。３０ ℃恒温培养 ４８ ｈ， 使菌种复壮。 ２．２ 扩大培养
在培养好的试管中加入无菌液体培养基， 用无 菌接种环将斜面上的菌落剥离， 摇匀， 制成菌悬液， 接种到无菌的容量为 １ Ｌ 并装有 ３００ ｍＬ 液体培养 基的锥形瓶中， 在 ３０ ℃恒温 １８０ ｒ／ｍｉｎ 振荡培养 ２０ ｈ， 此时培养液浑浊。 ２．３ 生长曲线的测定
［ Ｊ］ ．生物技术通讯， ２００２（ １３） ： ２７５－ ２７７．
［ ５］ 张 小 卫， 邵 海 枫 ， 李 珍 ， 等． 酵 母 菌 培 养 鉴 定 方 法 的 比 较 ［ Ｊ］ ．
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９９（ １７） ： ２０３．
参照食品科学糖度的测定， 采用波美比重计对 酵母菌培养液不同培养时间进行糖度测定。 ３ 试验结果
酵母菌生长曲线见图 １。培养液糖度的变化曲 线见图 ２。
４ 结论 本实验采用光电比浊法， 以热带假丝酵母和酿
酒酵母为例， 测定了酵母的一般生长曲线， 并借助 波美比重计对麦芽汁培养液糖度随酵母菌生长所 产生的变化进行了测定。从而得出酵母菌在 ３０ ℃ 恒温 １８０ ｒ／ｍｉｎ 振荡培养 ３０ ｈ 时， 生长达到最旺盛 期。并且随着酵母菌的生长， 麦芽汁培养液的营养 被消耗， 导致麦芽汁的糖度有所降低； 而后麦芽汁 培养液的糖度又有回升的趋势， 通过多重复试验测 定， 此结果是正确的。至于糖度回升的原因还有待 于进一步的研究， 初步认为是酵母菌细胞壁含有的 多糖类随着酵母菌的生长， 达到衰亡期， 酵母细胞
摘 要 采用 光 电 比 浊 法 对 酵 母 菌 ３６ ｈ 内 的 生 长 进 行 测 定 ， 以 确 定 酵 母 菌 的 最 优 生 长 时 间 。 结 果 表 明 ， 酵 母 ３０ ℃恒温振荡培养 ３０ ｈ 时， 生长达到最大值。由于实验采用麦芽汁培养液培养酵母菌， 酵母菌的生长对麦芽汁的糖 度有一定的要求， 因此又采用波美比重计对酵母菌在不同生长时间麦芽汁的糖度进行测定， 结果表明随着酵母菌的 生长， 麦芽汁培养液的糖度呈现先下降后有小幅度回升的趋势。
［ ６］ 李新， 焦连亭， 康淑荷， 等． 细菌在血培养仪上生长曲线的特点
分析［ Ｊ］ ． 江西医学检验， ２００３， ３０： ２２９－ ２３４．
［ ７］ 张颖， 沈业寿． 液体发酵蜜环菌的培养条件的优化及菌体多糖
的分离［ Ｊ］ ．食用菌， ２００１（ ２） ： ５－ ７．
［ ８］ 赵 芳 芳， 张 日 俊． 酵 母 细 胞 壁 生 理 功 能 及 其 应 用［ Ｊ］ ． 中 国 饲
关键词 酵母菌 生长曲线 培养液 糖度 中图分类号： Ｓ８１６．７９ 文献标识码： Ｂ 文章编号： １００７－ ９１５７（ ２００６） ０１－ ０００８－ ０２
酵母是一类单细胞微生物，其结构简单， 属于真 菌类［１］。目前已知的酵母菌有 ４９０ 余种。由于酵母具 有个体大、蛋白质含量高、杂食 性 强 、易 分 离 、易 培 养、代谢产物多、综合利用广等特 点 ［２］， 在 现 代 工 业 中 除 了 用 于 酿 酒 外 ， 还 用 于 甘 油 、食 用 酵 母 、有 机 酸 、酶 制 剂 以 及 饲 料 等 的 生 产 ［ ３］ 。随 着 科 技 的 发 展 和 人们对养殖业要求的不断提高及酵母菌具有的众 多生理功能， 酵母在饲料工业中得到了广泛应用。 因此， 了解酵母菌的生长周期， 掌握其最佳生长阶 段， 以更好地生产酵母类产品就显得至关重要。 １ 试验材料 １．１ 菌种
试营养验与研饲究料
ห้องสมุดไป่ตู้
兽药与饲料添加剂 ２００６ 年第 １１ 卷第 １ 期
酵母菌生长曲线的测定及不同生长时间麦芽汁糖度的变化
王秋菊 １， 许 丽 １， 崔一喆 １， 潘 军 ２
（ １． 东北农业大学动物营养研究所， 黑龙江 哈尔滨 １５００３０； ２． 哈尔滨远大牧业有限公司， 黑龙江 哈尔滨 １５００３０）
料， ２００３（ １７） ： １７－ １８．
作 者 简 介 ： 王 秋 菊 （ １９７９—） ， 女 ， 黑 龙 江 省 海 林 市 ， 在 读 硕 士 研
究生。研究方向为动物营养与饲料科学。电话： １３１９９４８０２６０， Ｅ－ ｍａｉｌ：
ｗｑｊ＿９＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ。
［ 收稿日期： ２００５－ １０－ １４］
图 １ 酵母菌生长曲线
图 ２ 培养液糖度的变化曲线
壁 破 碎 自 溶 释 放 出 来 所 致 ［ ８］ 。
参考文献 ［ １］ 白晓 婷． 酵 母 类 产 品 在 饲 料 中 的 研 究 与 应 用［ Ｊ］ ． 中 国 饲 料 ，
２００５（ ２） ： ８－ １０． ［ ２］ Ｄａｎｎ Ｈ Ｍ， Ｄｒａｃｋｌｅｙ Ｊ Ｋ， ＭｃＣｏｙ Ｇ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｙｅａｓｔ
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
基金项目： 黑龙江省哈尔滨市攻关项目（ ２００４ＡＡ６ＢＮ０２０） 。
测糖化液糖度， 将滤液用蒸馏水稀释到糖度为 ８ 波 美度， 自然 ｐＨ 值。１１５ ℃（ ０．１ Ｍｐａ） 高压灭菌 ２０ ｍｉｎ 后冷却， ４ ℃保存备用。
热带假丝酵母 ２．６１７＊ 和酿酒酵母 ２．３９９＊。购自 中国科学院微生物研究所菌种保藏中心。 １．２ 培养基制备
麦芽汁［４］： 将大麦洗净， 温水浸泡 １２ ｈ 左右， 装 入铺有纱布的托盘内， ２５ ℃恒温催芽 ２４～４８ ｈ， 麦芽 伸长到麦粒的 ２ 倍时停止。将发芽大麦烘干， 研磨 成麦芽粉。１ 份麦芽粉加入 ４ 倍水， ６５ ℃恒温水浴 ４～５ ｈ， 自行糖化， 直至糖化完全。糖化液经过 １２ 层 纱布过滤， 如果滤液浑浊， 可用鸡蛋清沉淀（ 每 １ Ｌ 滤液加 １ 个鸡蛋清： 在 ２０ ｍＬ 水中加入 １ 个鸡蛋清 用玻璃棒搅拌调匀至产生泡沫， 倒入糖化液中， 搅 拌煮沸， 将滤液静置片刻， 过滤） 。用波美比重计检
９ ＶＥＴＥＲＩＮＡＲＹ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＆ ＦＥＥＤ ＡＤＤＩＴＩＶＥＳ
斜面培养基［５］。麦芽汁， ２％琼脂， 加热融化后， 补充失水， １１５ ℃杀菌备用。
摇瓶培养基。麦芽汁， １１５ ℃高压灭菌 ２０ ｍｉｎ， 用滤纸过滤， 去除杀菌过程中形成的不溶物， 然后 用蒸馏水调糖至 ８ 波美度， 装至三角瓶中， １１５ ℃高 压灭菌 １５ ｍｉｎ。备用。 ２ 实验方法 ２．１ 恢复培养
８ ＶＥＴＥＲＩＮＡＲＹ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＆ ＦＥＥＤ ＡＤＤＩＴＩＶＥＳ
兽药与饲料添加剂 ２００６ 年第 １１ 卷第 １ 期
营试养验与研饲究料
点。取盛有 ３００ ｍＬ 无菌麦芽汁培养液的 １ ０００ ｍＬ 锥形瓶 ５ 个， 各瓶中加入振荡培养 ２０ ｈ 的酵母培养 液 ３０ ｍＬ， ３０ ℃恒温培养。于培养后的第０、２、４、６、 ８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４ ｈ 分 别 用 无 菌 移 液 管 从 各 瓶 中 吸 取 培 养 液 ５ ｍＬ， 在 ５６０ ｎｍ 下测定 ＯＤ５６０ 值。 ２．４ 培养液糖度的测定
ｃｕｌｔｕｒｅ （ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ｏｎ ｐｒｅｐａｒｔｕｍ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｐｏｓｔ－ ｐａｒｔｕｍ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｍｉｌｋ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｊｅｒｓｅｙ ｃｏｗｓ ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ， ２０００， ８３： １２３－ １２７． ［ ３］ Ａｄａｍｓ Ａ Ｌ， Ｈａｒｒｉｓ Ｂ， Ｖａｎ Ｈｏｒｎ Ｊｒ Ｈ Ｈ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｖａｒｙｉｎｇ ｆｏｒ－ ａｇｅ ｔｙｐｅｓ ｏｎ ｍｉｌｋ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｗｈｏｌｅ ｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄ， ｔａｌ－ ｌｏｗ， ａｎｄ ｙｅａｓｔ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ， １９９５， ７８： ５７３－ ５８１． ［ ４］ 张继泉， 孙玉英， 王瑞明， 等． 发酵戊糖产酒精酵母菌株的选育
冻干菌种装在安瓿管内， 恢复培养首先用 ７５％ 乙醇将安瓿管的外壁消毒， 将安瓿管上部用火焰上 下烧热， 滴几滴无菌水， 使管子破裂。将无菌液体培 养基加入安瓿管中， 使样品溶解， 然后用无菌吸管 取出菌液至斜面培养基中进行培养。３０ ℃恒温培养 ４８ ｈ， 使菌种复壮。 ２．２ 扩大培养
在培养好的试管中加入无菌液体培养基， 用无 菌接种环将斜面上的菌落剥离， 摇匀， 制成菌悬液， 接种到无菌的容量为 １ Ｌ 并装有 ３００ ｍＬ 液体培养 基的锥形瓶中， 在 ３０ ℃恒温 １８０ ｒ／ｍｉｎ 振荡培养 ２０ ｈ， 此时培养液浑浊。 ２．３ 生长曲线的测定
［ Ｊ］ ．生物技术通讯， ２００２（ １３） ： ２７５－ ２７７．
［ ５］ 张 小 卫， 邵 海 枫 ， 李 珍 ， 等． 酵 母 菌 培 养 鉴 定 方 法 的 比 较 ［ Ｊ］ ．
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９９（ １７） ： ２０３．
参照食品科学糖度的测定， 采用波美比重计对 酵母菌培养液不同培养时间进行糖度测定。 ３ 试验结果
酵母菌生长曲线见图 １。培养液糖度的变化曲 线见图 ２。
４ 结论 本实验采用光电比浊法， 以热带假丝酵母和酿
酒酵母为例， 测定了酵母的一般生长曲线， 并借助 波美比重计对麦芽汁培养液糖度随酵母菌生长所 产生的变化进行了测定。从而得出酵母菌在 ３０ ℃ 恒温 １８０ ｒ／ｍｉｎ 振荡培养 ３０ ｈ 时， 生长达到最旺盛 期。并且随着酵母菌的生长， 麦芽汁培养液的营养 被消耗， 导致麦芽汁的糖度有所降低； 而后麦芽汁 培养液的糖度又有回升的趋势， 通过多重复试验测 定， 此结果是正确的。至于糖度回升的原因还有待 于进一步的研究， 初步认为是酵母菌细胞壁含有的 多糖类随着酵母菌的生长， 达到衰亡期， 酵母细胞
摘 要 采用 光 电 比 浊 法 对 酵 母 菌 ３６ ｈ 内 的 生 长 进 行 测 定 ， 以 确 定 酵 母 菌 的 最 优 生 长 时 间 。 结 果 表 明 ， 酵 母 ３０ ℃恒温振荡培养 ３０ ｈ 时， 生长达到最大值。由于实验采用麦芽汁培养液培养酵母菌， 酵母菌的生长对麦芽汁的糖 度有一定的要求， 因此又采用波美比重计对酵母菌在不同生长时间麦芽汁的糖度进行测定， 结果表明随着酵母菌的 生长， 麦芽汁培养液的糖度呈现先下降后有小幅度回升的趋势。
［ ６］ 李新， 焦连亭， 康淑荷， 等． 细菌在血培养仪上生长曲线的特点
分析［ Ｊ］ ． 江西医学检验， ２００３， ３０： ２２９－ ２３４．
［ ７］ 张颖， 沈业寿． 液体发酵蜜环菌的培养条件的优化及菌体多糖
的分离［ Ｊ］ ．食用菌， ２００１（ ２） ： ５－ ７．
［ ８］ 赵 芳 芳， 张 日 俊． 酵 母 细 胞 壁 生 理 功 能 及 其 应 用［ Ｊ］ ． 中 国 饲
关键词 酵母菌 生长曲线 培养液 糖度 中图分类号： Ｓ８１６．７９ 文献标识码： Ｂ 文章编号： １００７－ ９１５７（ ２００６） ０１－ ０００８－ ０２
酵母是一类单细胞微生物，其结构简单， 属于真 菌类［１］。目前已知的酵母菌有 ４９０ 余种。由于酵母具 有个体大、蛋白质含量高、杂食 性 强 、易 分 离 、易 培 养、代谢产物多、综合利用广等特 点 ［２］， 在 现 代 工 业 中 除 了 用 于 酿 酒 外 ， 还 用 于 甘 油 、食 用 酵 母 、有 机 酸 、酶 制 剂 以 及 饲 料 等 的 生 产 ［ ３］ 。随 着 科 技 的 发 展 和 人们对养殖业要求的不断提高及酵母菌具有的众 多生理功能， 酵母在饲料工业中得到了广泛应用。 因此， 了解酵母菌的生长周期， 掌握其最佳生长阶 段， 以更好地生产酵母类产品就显得至关重要。 １ 试验材料 １．１ 菌种
试营养验与研饲究料
ห้องสมุดไป่ตู้
兽药与饲料添加剂 ２００６ 年第 １１ 卷第 １ 期
酵母菌生长曲线的测定及不同生长时间麦芽汁糖度的变化
王秋菊 １， 许 丽 １， 崔一喆 １， 潘 军 ２
（ １． 东北农业大学动物营养研究所， 黑龙江 哈尔滨 １５００３０； ２． 哈尔滨远大牧业有限公司， 黑龙江 哈尔滨 １５００３０）
料， ２００３（ １７） ： １７－ １８．
作 者 简 介 ： 王 秋 菊 （ １９７９—） ， 女 ， 黑 龙 江 省 海 林 市 ， 在 读 硕 士 研
究生。研究方向为动物营养与饲料科学。电话： １３１９９４８０２６０， Ｅ－ ｍａｉｌ：
ｗｑｊ＿９＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ。
［ 收稿日期： ２００５－ １０－ １４］
图 １ 酵母菌生长曲线
图 ２ 培养液糖度的变化曲线
壁 破 碎 自 溶 释 放 出 来 所 致 ［ ８］ 。
参考文献 ［ １］ 白晓 婷． 酵 母 类 产 品 在 饲 料 中 的 研 究 与 应 用［ Ｊ］ ． 中 国 饲 料 ，
２００５（ ２） ： ８－ １０． ［ ２］ Ｄａｎｎ Ｈ Ｍ， Ｄｒａｃｋｌｅｙ Ｊ Ｋ， ＭｃＣｏｙ Ｇ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｙｅａｓｔ
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
基金项目： 黑龙江省哈尔滨市攻关项目（ ２００４ＡＡ６ＢＮ０２０） 。
测糖化液糖度， 将滤液用蒸馏水稀释到糖度为 ８ 波 美度， 自然 ｐＨ 值。１１５ ℃（ ０．１ Ｍｐａ） 高压灭菌 ２０ ｍｉｎ 后冷却， ４ ℃保存备用。
热带假丝酵母 ２．６１７＊ 和酿酒酵母 ２．３９９＊。购自 中国科学院微生物研究所菌种保藏中心。 １．２ 培养基制备
麦芽汁［４］： 将大麦洗净， 温水浸泡 １２ ｈ 左右， 装 入铺有纱布的托盘内， ２５ ℃恒温催芽 ２４～４８ ｈ， 麦芽 伸长到麦粒的 ２ 倍时停止。将发芽大麦烘干， 研磨 成麦芽粉。１ 份麦芽粉加入 ４ 倍水， ６５ ℃恒温水浴 ４～５ ｈ， 自行糖化， 直至糖化完全。糖化液经过 １２ 层 纱布过滤， 如果滤液浑浊， 可用鸡蛋清沉淀（ 每 １ Ｌ 滤液加 １ 个鸡蛋清： 在 ２０ ｍＬ 水中加入 １ 个鸡蛋清 用玻璃棒搅拌调匀至产生泡沫， 倒入糖化液中， 搅 拌煮沸， 将滤液静置片刻， 过滤） 。用波美比重计检
９ ＶＥＴＥＲＩＮＡＲＹ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＆ ＦＥＥＤ ＡＤＤＩＴＩＶＥＳ
斜面培养基［５］。麦芽汁， ２％琼脂， 加热融化后， 补充失水， １１５ ℃杀菌备用。
摇瓶培养基。麦芽汁， １１５ ℃高压灭菌 ２０ ｍｉｎ， 用滤纸过滤， 去除杀菌过程中形成的不溶物， 然后 用蒸馏水调糖至 ８ 波美度， 装至三角瓶中， １１５ ℃高 压灭菌 １５ ｍｉｎ。备用。 ２ 实验方法 ２．１ 恢复培养