1.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 4学时
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。
（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。
2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
微生物实验思考题参考标准答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二.细菌的简单染色和革兰氏染色1.革兰氏染色中那一步是关键？为什么？你是如何操作的?革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间）。
如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s)。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同?自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
３. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4．涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题?a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1．镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状,比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。
实验七 酵母菌的形态观察和死活细胞鉴别
第3组：3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基100ml： 蛋白胨3g，氯化钠1.5g，水100ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.5ml，每管加5ml，共15管,内装倒置 小管，121℃灭菌20min。
第4-5组：普通浓度乳糖蛋白胨发酵培养基700ml：P244 蛋白胨7g，氯化钠3.5g，水700ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1.2ml， 每管加7ml，共45管，内装倒置小管 每管加10ml，共35管，内装倒置小管，121℃灭菌20min。
实验七 酵母菌的形态观察 与死活细胞鉴别
目的要求
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式 2、学习区分酵母菌死活细胞的方法
实验原理
酵母菌是单细胞真核微生物， 其大小为常见细菌的几倍至几 十倍。大多数酵母采用出芽方 式进行繁殖。 美蓝是一种弱氧化剂，其氧化 态呈蓝色，还原态呈无色。用 美蓝对酵母细胞进行染色时， 由于新陈代谢，活细胞具有较 强的还原能力，可使美蓝由蓝 色的氧化型转变为无色的还原 型，染色后细胞呈无色。死细 胞或代谢能力弱的衰老细胞其 还原能力弱，染色后细胞呈蓝 色。
• 第8组：蛋白胨水培养基：250ml，p244 蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，水250ml，每管7ml， 121℃ 灭菌20min
实验材料
• 1. 培养2d的面包酵母斜面培养物 • 2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液
实验方法
美蓝染液水浸片法
1. 滴一滴吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作取酵母培 养物置于染液中，混合均匀。 2. 取盖玻片，将盖玻片一端与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并 盖在菌液上。 3. 3min后，镜检。观察酵母菌形态及出芽情况，并根据细胞 颜色区别死活细胞。 4. 30min后，再次观察。
• 第6组：固体淀粉培养基：600ml，P243 蛋白胨6g，氯化钠3g，牛肉膏3g，可溶性淀粉1.2g，水 600ml，琼脂10g， 121℃灭菌20min。 • 第7组：明胶培养基，500ml，P243 蛋白胨5g，氯化钠2.5g，牛肉膏1.5g，明胶80g，水500ml ，每管7ml， 121℃灭菌20min。
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的：1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。
2.学习区分细胞的死活状态。
二、实验原理：1.放线菌的形态特征：放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。
放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。
放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。
2.酵母菌的形态特征：酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。
酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。
酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。
3.死活细胞鉴别：通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。
三、实验材料与方法：1.材料：-放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片-无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器-酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-亚甲基蓝染液：浓度为1%2.方法：a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。
b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。
d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。
e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。
g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。
四、实验结果与分析：通过观察放线菌的细胞形态和菌落特征，可以发现放线菌的形态特征是不规则的菌落结构，内部有菌丝状结构。
放线菌的细胞形态多样，有圆形或椭圆形细胞。
实验四 酵母菌的形态观察, 死活
实验四酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术,显微镜直接计数法日期11月10号星期三90节一、实验目的1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法.3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。
二、实验原理染色：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。
测量：微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。
用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
计数：每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。
在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。
下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数因1ml=1cm3=1000mm3，三、实验仪器1 菌种: 培养48h的酵母菌．２染色液和试剂：0.05%、0.1%吕氏碱性美蓝．3 器材：显微镜、血球计数板、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、吸水纸、计数器、移液器、擦镜纸。
酵母的形态观察及死活细胞鉴别
一、目的要求 二、基本原理 三、器材： ——菌种：酿酒酵母 ——试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液、
碘液 ——其他器皿及用具：显微镜等
基本原理
★美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝行染色时，由于细 胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使 美蓝由蓝色的氧化型变为 无色的还原型。因此，具 有还原能力的酵母活细胞 是无色的，而死细胞或代 谢作用微弱的衰老细胞则 呈蓝色，借此即可对酵母 菌的死活细胞进行鉴别。
思考题
P55（10）
下一个实验
霉菌的形态观察
基本原理
★细胞中的颗粒是啤酒酵母的贮藏营养物质和 细胞的代谢产物，包括异染颗粒、肝糖和脂肪 粒等。主要存在于细胞质中。肝糖颗粒是酵母 的贮藏营养物质，在繁殖旺盛时的幼小细胞中 含量明显。一般啤酒酵母经24h培养后，其达 到高峰，它可被碘化钾染成棕色。
操作步骤
一、美蓝浸片 1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液， 然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染 液中，混合均匀。 2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然 后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高 倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区 别死活细胞。
操作步骤
4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量 是否增加。 5）用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。
2、水一碘液浸片的观察 在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液，然后在 其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水一碘液中混 匀，盖上盖玻片后镜检。
结果与分析
★结果 ——绘图表示所观察到的酵母菌的形态特征 ——制表列出不同浓度吕氏碱性美蓝染色后 细菌死活细胞比例及变化
实验三、霉菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
二、基本原理 基本原理
1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖 少数以裂殖 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖、少数以裂殖进 芽殖、 裂殖进 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子。 子囊孢子。 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 氧化型呈蓝色， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代 谢作用，细胞内具有较强的还原能力， 谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无 活细胞是 色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和淡 死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和 或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色 蓝色。 蓝色。
四、操作步骤
在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液 子挑取少许菌丝， 子挑取少许菌丝，浸于染液中 散开 盖上盖玻片 用镊 用解剖针将菌丝分 用高倍
低倍镜观察
镜观察菌丝局部
操作要点： 操作要点： • 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 • 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 • 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。
实验三 酵母菌的形态观察及死、 酵母菌的形态观察及死、活细胞 的鉴别和霉菌的形态观察 的鉴别和霉菌的形态观察
微生物实验思考题参考答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。
如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
酵母菌形态观察及死活鉴别
酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。
2、盖片时斜着放不易产生气泡。
1。
实验十六酵母菌细胞形态观察及死活细胞的染色鉴别
实验十六酵母菌细胞形态观察及死活细胞的染色鉴别目的要求1. 通过观察了解酵母细胞的形态结构。
2. 掌握鉴别酵母细胞死活的染色方法。
材料1. 菌种：酵母菌菌悬液。
2. 染料：0.1％美兰染色液。
3. 其他：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、试管、蒸馏水等。
原理酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态。
用美兰染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。
美兰是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。
活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美兰还原，而细胞不被染色。
因此，用美兰对酵母细胞染色一定时间后，无色的为活细胞，呈蓝色的则为死亡细胞。
需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是一定的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。
方法1．酵母菌细胞形态的观察取洁净的载玻片一块，用滴管取酵母菌悬滴于载玻片中央，取盖玻片一块，小心地将盖玻片一端与菌液接触，然后缓慢地将盖玻片放下，以避免产生气泡。
至此，一片酵母菌水浸标本片就制成了。
先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，观察时注意酵母细胞的形状及出芽情况。
2．死活酵母细胞的染色鉴别取0.1％美兰液一滴，滴在一块洁净的载玻片中央，加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3～5分钟后加盖玻片制成水浸标本片，镜检。
内容1. 制片观察所给各种酵母菌的细胞形态。
2. 用美兰液对酵母菌死活细胞进行染色鉴别。
结果与思考题1. 绘图表示所观察的各种酵母菌，注明菌名及放大倍数。
2. 用美兰对酵母细胞进行染色鉴别时，为什么要控制染料的浓度和染色时间?。
实验五 酵母菌的形态观察、死活细胞的鉴别及显微镜直接计数法
五、实验报告
1、绘图说明你所观察的酵母菌的形态特征 填表： 2、填表：
各中格中菌数 1 2 3 4 5 二次平均值 菌数/mlAຫໍສະໝຸດ B 5二、实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。
菌种： 1、菌种：酿酒酵母 仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜， 2、仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜，盖玻 片，载玻片等 0.1%美蓝染色液等 3、0.1%美蓝染色液等
四、实验内容： 实验内容：
1、美蓝浸片观察 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液， 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液，然后用 0.1%的美蓝染色液 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。将玻片放置 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 并判断细胞的死活。 并判断细胞的死活。
利用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片， 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半， 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1，计数室的 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格， 25个中方格 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16 16个小方格 16个 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16个 中方格，而每个中方格又分成25个小方格， 25个小方格 中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规 格的计数板，每一个大方格中的小方格400 400个 格的计数板，每一个大方格中的小方格400个，每一个大方格 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm 盖上盖玻片后， 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后， 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米， 0.1毫米 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米，所以计数室的容积为 万分之一毫升）。 0.1mm3（万分之一毫升）。
酵母菌的形态观察与死活鉴定
实验三酵母菌的形态观察与死活鉴定
一、实验目的与内容
1、实验目的：
2、实验内容：
二、实验原理
三、实验器材
1.供试菌种
2.试剂
3.器皿
四、实验步骤
(一)美蓝浸片观察
(二)水-碘浸片观察
(三)酵母菌死亡率计算
酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞的百分数。
在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数5~6个视野，记录并计算。
死亡率=死细胞总数/(死、活细胞总数)×100%
五、注意事项
六、实验结果分析
七、实验报告
1.绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，注明菌名与放大倍数。
2.三线表记录吕氏碱性美蓝、碘染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响。
八、思考与探究
1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。
2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
实验⼆酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验⼆酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别⼀、实验⽬的与要求观察酵母菌的形态及出芽⽣殖⽅式；学习区分酵母菌死活细胞的实验⽅法。
⼆、基本原理1.单个的酵母菌合同是常见细菌的⼏倍甚⾄⼏⼗倍。
为单细胞，呈圆形，卵形或椭圆形，内有细胞核，液泡和颗粒体物质。
有的种类能产⽣⼦囊孢⼦或掷孢⼦、冬孢⼦、担孢⼦等。
有的种类⼀定条件下形成假菌丝或真菌丝。
⼤多数采取出芽⽅式进⾏⽆性繁殖，也可通过结合产⽣⼦囊孢⼦进⾏有性⽣殖。
2.酵母菌在液体培养基中⽣长时，能利⽤其中的可发酵型糖，并产⽣⽓体，有些产⽣挥发性的酯⾹味，菌体可沉于管的底部或悬浮在培养液中，或漂浮在培养液省形成菌膜或菌醭（分析⼀下为什么）。
当其⽣长在固体培养基上时，菌落形态与细菌相似，但较⼤较厚，呈乳⽩⾊或红⾊，表⾯湿润、粘稠，易被挑起。
随时间延长，菌落颜⾊往往变暗，有些菌落边缘呈皱褶状。
3. 由于细胞个体⼤，采取涂⽚的⽅法制⽚有可能损伤细胞，⼀般通过美蓝染液⽔浸法或⽔-碘液浸⽚法来观察酵母菌形态及出芽⽣殖⽅式。
美兰对细胞⽆毒，其氧化型呈蓝⾊，还原型呈⽆⾊。
由于细胞的新陈代谢，，活细胞内有较强还原能⼒，使美兰由氧化型转变为⽆⾊的还原型，染⾊后活细胞呈⽆⾊。
死细胞或代谢能⼒微弱的衰⽼细胞内还原⼒弱，染⾊后细胞呈蓝⾊或淡蓝⾊。
三、实验材料1.酵母液体培养物和斜⾯培养物。
2.吕⽒碱性美兰染液，⾰兰⽒染⾊⽤碘液。
3.仪器和其他⽤品四、⽅法步骤1.制⽚先在载玻⽚中央滴加⼀滴0.1％吕⽒碱性美蓝染液，再滴加少量⽔稀释。
⽆菌操作取试管中培养的酵母菌少许，放在吕⽒碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
⽤镊⼦夹盖玻⽚⼀块，⼩⼼地盖在液滴上。
2.镜检将制好的⽔浸⽚放置3分钟后镜检。
先⽤低倍镜，再⽤⾼倍镜，观察酵母菌的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜⾊来区别死、活细胞。
染⾊30分钟后再次观察，注意死活细胞⽐例是否发⽣变化。
⽤0.05%染液作对照同时进⾏上述实验。
1酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别4学时.
1酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别4学时.实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别预习内容：1. 光学显微镜的使用（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，23-27页）2. 酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，91-95页）预习思考题：1. 随着物镜放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？视野范围是如何变化的？2. 制作水浸片时如何避免产生气泡？3. 影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH等因素对死活细胞数目比例有什么影响？4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。
5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?一、实验目的与要求1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。
但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。
实验四 酵母菌的形态观察
实验四酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术,显微镜直接计数法生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节一实验目的1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
2.了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 .3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。
二实验原理美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。
微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。
用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把 10 mm长度刻成 100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。
酵母菌的形态观察实验报告
一、实验目的1. 观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。
2. 学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，其细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。
酵母菌主要通过出芽生殖进行繁殖，即在母细胞的一端形成芽体，芽体逐渐长大并与母细胞分离，形成新的个体。
美蓝是一种无毒性的染料，其氧化型呈蓝色，还原型无色。
活细胞具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，活细胞无色，而死细胞或代谢缓慢的老细胞则呈蓝色或淡蓝色。
三、实验器材1. 酿酒酵母或卡尔酵母（Saccharomyces calsbergensis）2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液3. 革兰氏染色用的碘液4. 显微镜5. 载玻片6. 盖玻片7. 接种针8. 烧杯9. 火柴四、实验步骤1. 准备酵母菌培养物：取少量酿酒酵母，接种于土豆平板培养基上，28-30℃培养3-5天。
2. 制备美蓝浸片：a. 在载玻片中央滴一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液。
b. 用接种针挑取少量酵母菌，均匀涂布在染液上。
c. 盖上盖玻片，轻压使酵母菌与染液充分接触。
3. 制备水浸片：a. 在载玻片中央滴一滴无菌水。
b. 用接种针挑取少量酵母菌，均匀涂布在水中。
c. 盖上盖玻片，轻压使酵母菌与水充分接触。
4. 显微镜观察：a. 将美蓝浸片和水浸片置于显微镜下观察。
b. 观察酵母菌的细胞形态、大小、细胞核、芽体等特征。
c. 比较美蓝浸片和水浸片中酵母菌的形态差异。
5. 死活细胞鉴别：a. 观察美蓝浸片中酵母菌的染色情况。
b. 活细胞呈无色，死细胞或代谢缓慢的老细胞呈蓝色或淡蓝色。
五、实验结果1. 酵母菌细胞形态：a. 酵母菌细胞呈椭圆形、圆形或卵圆形，大小不一。
b. 细胞核位于细胞中央，呈圆形或椭圆形，核膜清晰。
c. 细胞质均匀，无色或淡蓝色。
2. 出芽生殖方式：a. 观察到酵母菌细胞一端形成芽体，芽体逐渐长大。
b. 芽体与母细胞分离，形成新的个体。
酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察
酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：班级：生科二班学号：组别：二同组者：【目的要求】1.了解酵母菌的形态及出芽方式2.学习区分酵母菌的死细胞和活细胞3.掌握酵母菌子囊孢子的观察方法【基本原理】酵母菌繁殖方式：单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式（在PDF酵母合成培养基中）进行无性繁殖，也可以通过结合产生子囊孢子（麦氏培养基中）进行有性繁殖。
美蓝染色原理：由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。
同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。
美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。
由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。
死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。
子囊孢子：是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。
在酵母菌种，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要指标之一。
酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。
麦氏（Meclary）培养基（葡萄糖-醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。
孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。
因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。
在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。
【实验器材】1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。
2.溶液与试剂：0.1%吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，番红染液，95%乙醇。
3.培养基：麦氏（Meclary）琼脂斜面培养基。
4.仪器或其他用品：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环等。
【操作步骤】1.两种培养基的配置分别配置100ml麦氏培养基和200ml酵母合成培养基，其成分配比详见附录一。
微生物实验报告——真菌的观察
⑴.在载玻片中央滴加一滴 0.1%吕氏碱性美兰染液，无菌操作用接种环从酿酒酵母斜面培养物挑去少量 菌体于染液中，混合均匀。 ⑵.在液滴上轻轻加盖一张盖玻片。 ⑶．将载玻片放置 3min 后，用显微镜观察酵母菌的形态、出芽生殖和假菌丝，根据酵母菌的颜色区分 细胞死活。 ⑷.染色 30min 后再次观察，注意死活细胞的比例是否变化。 ⑸.用 0.05%吕氏美兰染液做对照重复上述实验。 2. 酵母菌大小测定。 ⑴.将镜台微尺和目微尺分别正确装到显微镜的镜台和目镜上。 ⑵.在低倍镜下转动目镜将两个微尺的刻度调整平行，移动镜台微尺使两尺在某一区域内刻度线重合， 然后分别数出两重合线之间镜台微尺和目微尺所占的格数。用同样的方法分别测出高倍镜和油镜下重合 线之间两尺分别所占的格数。
微生物学实验报告
酵母菌形态观察、大小测定和计数，放线菌和霉菌形态观察
2012/4/26 实验目的： 1. 观察酵母菌的形态和出芽生殖，学习显微镜镜台测微尺和目镜测微尺的使用，并掌握用测微尺测定微生
实验三酵母菌形态观察及死活细胞鉴别-副本
实验三酵母菌形态观察及死活细胞鉴别-副本
实验三酵母菌形态观察及死活细胞鉴别
一、实验目的
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖。
2、学习制作水浸片，掌握区分酵母菌死活细胞的实验方法。
3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
二、实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有性繁殖通过接合产生子囊孢子。
美蓝是一种无毒性的染料。
它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。
因此酵母活细胞是无色的，而死细胞或衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，以此进行鉴别。
三、实验器材
1、菌种：酵母菌。
2、染液及溶液：美蓝染液。
3、其他物品：目镜测微尺、镜台测微尺；载片及盖片等。
四、实验步骤
1、在载玻片中央加一滴美蓝染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液于染液中，混合均匀。
2、加盖玻片。
注：不要产生气泡。
3、将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色区别死、活细胞。
4、染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。
5、绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。
五、实验结果
描述酵母菌的个体特征。
根据观察结果绘图。
六、思考题
随时间的迁移，视场中被染成篮色的酵母菌细胞数有何变化?试分析其原因?。
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实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别预习内容：1. 光学显微镜的使用（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，23-27页）2. 酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，91-95页）预习思考题：1. 随着物镜放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？视野范围是如何变化的？2. 制作水浸片时如何避免产生气泡？3. 影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH等因素对死活细胞数目比例有什么影响？4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。
5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?一、实验目的与要求1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。
但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。
2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。
3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。
四、实验步骤与内容1．美蓝浸片的观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，用吸水纸吸取多余的液体。
注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。
（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞，绘图。
（4）染色约0.5h后再次观察并绘图，注意死细胞数量是否增加。
（5）用0.05%吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。
（6）清洗载玻片，整理实验台。
2．水-碘液浸片的观察(选做)在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用碘液(卢戈氏碘液)，然后在其上加3 小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
五、实验结果绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征、出芽情况及死活细胞数量变化。
图1：酵母菌0.1%美蓝浸片观察3min（10×10）图2：酵母菌0.1%美蓝浸片观察3min（10×40）图3：酵母菌0.1%美蓝浸片观察30min（10×40）图4：酵母菌0.05%美蓝浸片观察3min（10×10）图5：酵母菌0.05%美蓝浸片观察3min（10×10）图6：酵母菌0.05%美蓝浸片观察30min（10×40）注意：显微镜的放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数。
物镜倍数（低倍镜10倍，高倍镜40倍，油镜100倍）六、思考题1. 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。
美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。
原因：要点一：渗透压增大→细胞失水；要点二：还原力有限，浓度高或时间较长都会对细胞结构造成破坏。
2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？要点：(1)细胞大小及形态；(2)液泡；(3)出芽生殖；(4)鞭毛；(5)细胞核及细胞器实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别练习题一、名词解释1. 假菌丝：酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，容易形成成串的细胞。
如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。
二、填空题1. 高倍镜头的数值孔径通常为，放大倍数为。
2. 油镜头的数值孔径通常为，放大倍数为。
3. 低倍镜头的数值孔径通常是，放大倍数为。
4. 使用显微镜低倍镜观察时，聚光器应该，使用显微镜高倍镜观察时，聚光器应该适当。
5. 显微镜的微动螺旋每转一圈升降距离为。
6. 显微镜的光学系统由、、和组成。
7. 显微镜的机械部分包括等九部分组成。
8. 简单染色的操作程序是9．酵母菌通过0.1%美兰染色1~2分钟后，活细胞呈色，死细胞呈色；10. 在其它条件相同的情况下，物镜放大倍数越大，焦距，其工作距离，所需光量。
11. 用日光灯作光源时，通常用反光镜，用自然光作光源时，通常用反光镜。
12. 显微镜的倍数越大，焦深越，调焦应该越。
三、选择题1. 对光学显微镜观察效果影响最大的是：（）A 目镜B 物镜C 聚光器D总放大倍数2. 目镜头上的"K"字母表示：（C ）A.广视野目镜B.惠更斯目镜C.补偿目镜；3. 目镜头上的"P"字母表示：（A ）A.平场目镜B.广视野目镜C.平场补偿目镜4. 物镜头上的"PL"字母表示：（A ）A.正低相差物镜B.正高相差物镜C.负高相差物镜。
5. 物镜头上的"UVL"字母表示：（C ）A.无荧光物镜B.照相物镜C.相差物镜。
6. 镜头上标有"对C"字母的镜头是：（A ）A.相差调整望远镜B.摄影目镜C.相差目镜7. 物镜头上的"APO"字母代表（B ）A.消色差物镜B.复消色差物镜C.半消色差物镜8．物镜头上的"Ach"字母表示（A ）A.平场物镜B.超平场物镜C.消色差物镜9．物镜头上的“NH”字母表示：（C ）A.正相差物镜B.负相差物镜C.负高相差物镜10．物镜头上的“0.17”表示：（A ）A.要求的盖玻片厚度B.要求的载玻片厚度C.镜头浸油的深度11．镜头上标有“NK"字母的镜头是（A ）A.照相目镜B.荧光目镜C.相差目镜12．目镜头上的“PK”字母表示（C ）A.平场目镜B.补偿目镜C.平场补偿目镜13．物镜头上的"Splan"字母表示（A ）A.超平场物镜B.平场物镜C.消色差物镜14．物镜头上的"SplanApo"表示（A ）A.超平场复消色差物镜B.超平场半消色差物镜C.超平场物镜15.物镜头上的"Planapo"表示（C）A.超平场物镜B.平场物镜C.平场复消色差物镜16．物镜头上的"Plan"字母表示（A ）A.平场物镜B.消色差物镜C.超平场物镜17．目镜头上的"W"字母表示（C ）A.广视野高眼点补偿目镜B.高眼点目镜C.广视野目镜18．目镜头上的"SWK"字母表示（A ）A.超广视野目镜B.高眼点补偿目镜C.平场补偿目镜19.目镜头上的"WHK"字母表示（B ）A.超广视野目镜B.广视野高眼点目镜C.平场补偿目镜20.物镜头上的"错.L"字母表示（B ）A.消色差物镜B.半消色差物镜C.复消色差物镜四、判断是非题1. 显微镜的放大倍数越高，其视野越大。
（）2. 浸油的油镜头可用软的卫生纸擦净。
( )3. 为了节省时间，可直接在染色涂片上滴加香柏油后，直接用油镜观察。
( )4. 使用油镜的正确操作步骤是：低倍镜观察→高倍镜观察→转出高倍镜头，滴加香柏油后用油镜观察。
（）5. 在擦拭显微镜镜头时，应向一个方向擦拭。
（）6. 显微镜镜头的放大倍数越大,它的数值孔径值越大,其镜口角也越大。
（）7. 用油镜镜检时应将聚光器升至最高。
（）8. 使用高倍镜时，可将聚光器升至最高。
（）9. 显微镜的放大倍数愈高，其视野面积愈大。
（）10. 光学显微镜的分辨率与介质折射率有关，由于香柏油的介质折射率（约1.5）高于空气（1.0）。
因此使用油镜的观察效果好于高倍镜，目前科学家正在寻找折射率比香柏油更高的介质以改进光学显微镜的观察效果。
（）五．问答题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响? 试分析其原因。
美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。
原因：要点一：渗透压增大→细胞失水；要点二：还原力有限，浓度高或时间较长都会对细胞结构造成破坏。
2. 显微镜下观察酵母菌的个体形态特征与细菌个体形态特征有何不同?要点：(1)细胞大小及形态；(2)液泡；(3)出芽生殖；(4)鞭毛；(5)细胞核及细胞器3. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?4. 简述酵母菌死亡率测定的原理。
答：死亡率测定的原理：活的微生物，由于不停的新陈代谢，使细胞内氧化还原值低，且还原能力强。
当某种无毒的染料进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进入死细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色。
在中性和弱酸性条件下，活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区分活菌和死菌。
方法：取0.05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美蓝液中混匀，染色2~3分钟，加盖片，于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞（可计5~6个视野的细胞总数）。
计算公式：。