骨髓细胞学检查

骨髓细胞学检查

骨髓细胞学检查应抽取骨髓少量制成薄片。采用骨髓小粒丰富、制片厚薄均匀的涂片，经瑞氏—姬姆萨混合染色后，于显微镜下检查细胞质和量的变化。[试剂]

1)瑞氏染色液：瑞氏染粉18，置洁净干操的研钵内，加甘油3.5ml，研磨片刻，

使瑞氏染粉充分溶解，加甲醇约50ml，继续研磨片刻后，收集上层染液；残余部分再加甲醇50ml研磨：再收集上层染液，重复几次后，用甲醇冲洗研钵，倒入同一瓶内，最后加甲醇至500mi。开始几周应经常振摇染色液。染色液存放的时间越长，染色效果也越佳。此外，研磨时染粉内应先加甘油，、以免染粉在研磨过程中结成块，更易溶解。染粉未经研磨配成的染液不宜用作骨髓片染色。

2)姬姆萨浓缩染液：将姬姆萨染粉3．8g放入纯甘油250ml中，置60℃水浴2

小时，溶解后力口60℃预热的甲醇250m1混匀，于室温、棕色瓶内保存，配后数天即可使用，可长期保存。

3)pH6．5磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾1．5g，磷酸氢二钠1．0g、加蒸馏水到

5000ml。最后纠正pH6．5。

4)姬姆萨稀释液：取姬姆萨溶液50m1，加pH6．5磷酸盐缓冲液到500ml，混

匀。此液为姬姆萨应用液，可直接作涂片复染用。作瑞氏稀释液时，取此液10一20mL加蒸馏水至100ml，混匀即可。

[操作]

1．骨髓取材：

取材部位有胸骨、棘突、髂骨前嵴或后嵴等。两岁以内小孩最好用胫骨，成人常取髂后上棘，此部位穿刺方便，病人也易接受．穿刺前要求严格

消毒，杜绝细菌感染，除穿刺室紫外线消毒和皮肤消毒外，还应注意穿

刺包和手套消毒时间有否过期。戴手套要熟练，避免手套接触来消毒物

品。穿刺针进入髓腔时常有脱空感，吸取前针筒内应留有1m1左右的空

隙，否则髓液很快进入针筒空隙而无法取出。针筒内若有水份也要用消

毒纱布擦干，以免溶解细胞。吸液量一般控制在0．2m1左右。因吸量过

多，易被外周血稀释。部分病人干抽或吸出量太少时，不要将针头立即

拔出，可边抽边调节针头深浅，或边抽边缓慢外移针头，最后将针头内

可能残留的髓液尽量推出、制片，以减少病人痛苦。

2．涂片：

选两块小粒较多、厚薄均匀的骨髓片，自然干燥后在较厚的头端髓膜上

写上病人姓名、日期及“BM”标记。加瑞氏染色液8—12滴，用吸球吹

吸并使其布满整张涂片，约半分钟后，加姬姆萨稀释液5-10滴，再用吸

球吹吸气，使两液充分混匀，若有金黄色油膜出现，染色效果更佳。染

色时间一般为10一20分钟，夏天可缩短些、冬天则可延长些。冲洗时

应乎放玻片让流水缓慢冲洗。另外，因手拿玻片处可能会有染料残留，

应更换手拿位置再予冲洗。染色太淡的涂片，可用姬姆萨稀释液复染3 分

钟；着色太深时，可用瑞氏染液滴加于涂片上。立即冲洗即可。各实验

室最好能摸索出自己的染色经验，尽量做到一次性染色成功。没有姬姆

萨染液的单位，可用蒸馏水加少量天青(或美蓝)代替，但染色效果没有

前者好。染好的涂片要自然干燥，切忌加热烘干，否则细胞退色而影响

观察。

3．染色

选两块小粒较多、厚薄均匀的骨髓片，自然干燥后在较厚的头端髓膜上

写上病人姓名、日期及“BM”标记。加瑞氏染色液8—12滴，用吸球吹

吸并使其布满整张涂片，约半分钟后，加姬姆萨稀释液5-10滴，再用吸

球吹吸气，使两液充分混匀，若有金黄色油膜出现，染色效果更佳。染

色时间一般为10一20分钟，夏天可缩短些、冬天则可延长些。冲洗时

应乎放玻片让流水缓慢冲洗。另外，因手拿玻片处可能会有染料残留，

应更换手拿位置再予冲洗。染色太淡的涂片，可用姬姆萨稀释液复染3

分钟；着色太深时，可用瑞氏

染液滴加于涂片上。立即冲洗即可。各实验室最好能摸索出自己的染色

经验，尽量做到一次性染色成功。没有姬姆萨染液的单位，可用蒸馏水

加少量天青(或美蓝)代替，但染色效果没有前者好。染好的涂片要自然

干燥，切忌加热烘干，否则细胞退色而影响观察。

[分析要点]

(1)骨髓片观察的内容:

1)肉眼观察涂片有无骨髓小粒、脂肪滴制片、染色是否良好。

2)低倍镜下观察骨髓增生情况(主要分为5级)，标本有否稀释，并计

数全片的巨核细胞，了解有无特殊异常细胞。

3)高倍镜下观察巨核细胞形态及巨核细胞分类计数(一般被分类的巨

核细胞应不少于25个)，并进一步观察低倍镜下看到的可疑细胞。

4)油镜下明确在低、高倍镜发现的异常或可疑细胞的性质，并作骨髓

细胞分类和全面的细胞形态分析。

骨髓细胞分类计数的正常范围较难制定。因为分析骨髓像是以骨髓细胞变化为基础，并结合临床表现和血像的综合性分析，不能只以单一的比例作为是否正常的标准。另外，个体差异、穿刺是否成功和分类部位等，都会影响细胞分类的结果。

（2）正常骨髓主要指标及其分类原则：

1．正常骨髓像主要指标：

(1) 骨髓增生程度呈增生活跃。

(2) 有核细胞量中等，小粒内细胞较丰富。

(3) 涂片无脂肪滴，或在中老年者见少量脂肪滴。

(4) 粒、红细胞比例约2—4：1，粒细胞可占50％，淋巴细胞约占20％(小儿可高达40％)，单核细胞、浆细胞、网状细胞一般＜3％。

(5) 巨核细胞在1．5×3cm2涂片上可找到20—100只。若小于20只，排除因标本稀释原因外，可结合临床考虑巨核细胞减少。产血小板巨核细胞应不

少于总巨核细胞的1／3，成按血小板易见到。

(6)

嗜酸性粒细胞小于5％。嗜碱性粒细胞＜1％。 (7) 原始细胞中，原故细胞和原红细胞均小于2％。

(8) 偶尔可见内皮细胞、组织嗜碱细胞、组织嗜酸细胞、成骨细胞、破骨细胞和脂肪细胞等。

2．观察骨照片应注意的事项：

(1) 对介于上、下两阶段的同一系细胞，应按划下不划上的原则分类。对分类曲线出现不明原因的畸形分布时，介于上、下阶段的细胞可适当调整其阶

段性；

(2) 一般病人的骨髓片中，偶见或为疑似的原始单核细胞、原始淋巴细胞(小儿除外)及原始浆细胞，可不作报告或归于原始粒细胞中，以减少分类出现的

混乱。

(3) 骨髓细胞分类计数不应少于200个，否则分类误差太大，较难反映细胞的其实分布情况。

(4) 书写报告时要对粒、红、巨三系细胞比例、形态变化分别描写，有特殊变

化的情况，尤其对临床诊治有价值的细胞应另加说明。骨髓报告的结论应结合临床和其他实验室检验加以考虑，对尚不明确的结果只须描写看到的内容，不要任意下结论。

(5) 骨髓片若出现下列情况，则提示标本全部或部分稀释。

① 无骨髓小粒或有少量骨髓小粒，小粒内细胞丰富，但涂片有核细胞量减少。

② 外周血中血小板量正常或增多，但涂片巨核细胞量减少。

③ 成熟阶段粒细胞比例明显增高，而有核细胞量却减少。

(6) 当怀疑骨髓有转移性肿瘤时，不管涂片是否稀释，应看完所有涂片，尤其要注意涂片的头尾及两侧部位，是否有成堆排列的肿擅细胞。

常见血液病骨髓像诊断要点：

1)缺铁性贫血(IDA)：

成熟红细胞体积偏小，幼红细胞呈现核固缩和胞浆量少及着色偏蓝等核老、浆幼的核浆发育不平衡现象。外铁明性，含内铁细胞减少。此类贫血最常见，临床上常有胃病、痔疮和月经多等病史。

2)巨幼细胞性贫血(MA)：