实验报告血红蛋白
血红蛋白测定 实验报告
血红蛋白测定实验报告血红蛋白测定实验报告引言：血红蛋白是一种重要的血液成分，它负责运输氧气到我们身体的各个部位。
血红蛋白测定是一项常见的实验，用于评估人体健康状况和诊断一些疾病。
本实验旨在探究血红蛋白测定的原理和方法，并通过实验数据分析来验证其准确性和可靠性。
实验目的：1. 了解血红蛋白的作用和重要性；2. 掌握血红蛋白测定的原理和方法；3. 通过实验数据分析，验证血红蛋白测定的准确性和可靠性。
材料和方法：1. 实验仪器：血红蛋白测定仪；2. 实验材料：血液样本、试剂盒；3. 实验步骤：a. 取一定量的血液样本；b. 使用试剂盒中的试剂与血液样本反应；c. 通过血红蛋白测定仪测量反应产生的颜色强度；d. 根据测量结果计算血红蛋白浓度。
结果和讨论：在本实验中，我们使用了血红蛋白测定仪和试剂盒来测量血液样本中的血红蛋白浓度。
实验结果显示，血液样本的颜色强度与血红蛋白浓度呈正相关。
通过测量结果，我们可以得出以下结论：1. 血红蛋白测定的原理是基于血红蛋白与试剂反应产生的颜色变化。
这种颜色变化可以通过血红蛋白测定仪来测量和定量。
2. 本实验使用的试剂盒中含有特定的化学物质，能够与血红蛋白反应生成一种有色化合物。
这种化合物的颜色强度与血红蛋白浓度成正比。
3. 血红蛋白测定仪通过光学原理，测量反应产生的有色化合物的吸光度。
根据吸光度值，可以计算出血红蛋白浓度。
4. 本实验的测量结果与已知血红蛋白浓度的标准值进行了比较。
结果显示，实验测量值与标准值之间的误差较小，说明血红蛋白测定具有较高的准确性和可靠性。
结论：血红蛋白测定是一种常见且可靠的实验方法，用于评估人体健康状况和诊断一些疾病。
本实验通过实验数据分析，验证了血红蛋白测定的准确性和可靠性。
在今后的临床应用中，血红蛋白测定将继续发挥重要作用，为医生提供准确的诊断依据，帮助患者及时获得有效的治疗。
总结：血红蛋白测定是一项重要的实验，其结果对评估人体健康状况和诊断疾病具有重要意义。
血红蛋白测定实验报告
血红蛋白测定实验报告实验目的：本实验旨在通过测定血液中的血红蛋白浓度，了解血液的营养状况，评估身体的健康状况。
实验原理：血红蛋白是红细胞内的主要蛋白质，它含有铁元素，能与氧结合形成氧合血红蛋白，负责运输氧气到全身各个组织。
测定血红蛋白浓度是评估贫血程度的一种常用方法。
本实验采用西林法测定血红蛋白浓度。
西林法是一种经典的测定血红蛋白浓度的方法，它利用了草酸亚铁与血红蛋白的特异性反应，生成淡紫色的铁蓝衍生物。
通过比色法测定溶液的吸光度，再根据标准曲线计算出血红蛋白浓度。
实验材料和设备：1. 血红蛋白测定试剂盒2. 安全眼镜和手套3. 量筒、试管、移液管等常见实验器具4. 分光光度计实验步骤：1. 将血液样本放置于离心管中，以3000转/分钟的速度离心10分钟，获取上清血浆。
2. 根据试剂盒说明书，将血浆与试剂按比例混合，并搅拌均匀。
3. 将混合液转移至试管中，并在光度计中测量吸光度值，记录下各个浓度的吸光度值。
4. 绘制标准曲线，将吸光度值作为横坐标，血红蛋白浓度作为纵坐标，绘制出吸光度-浓度曲线。
5. 测量待测样本的吸光度，并根据标准曲线计算出血红蛋白浓度。
实验结果：根据实验中测量的吸光度值和标准曲线，计算出待测样本的血红蛋白浓度为X g/L。
实验讨论：通过本实验测定的血红蛋白浓度，可以初步判断一个人的贫血程度。
同时，血红蛋白浓度还可以用于监测治疗效果，评估疾病的恢复情况。
然而，血红蛋白浓度只是评估身体健康的一个指标，综合考虑其他因素，如红细胞计数和红细胞压积等，才能全面了解一个人的血液情况。
实验结论：通过血红蛋白测定实验，测得待测样本的血红蛋白浓度为X g/L，初步判断其贫血程度为（正常/轻/中/重）。
但需要结合其他指标综合判断。
第三次实验血红蛋白含量的测定和ABO血型鉴定
A
A
抗B
B
B
抗A
AB
A、B
无
O
无
抗A、抗 B
第五页，编辑于星期二：二十一点 四十七ห้องสมุดไป่ตู้。
二、 ABO血型鉴定
? 实验对象
?人
? 方法与步骤
? 在双凹玻片上左、右两个凹陷旁，用笔依次注 上A、 B字样。
第六页，编辑于星期二：二十一点 四十七分。
三、ABO血型鉴定
? 在双凹玻片上注有 A、B字样的对应凹陷内，分别加
? 血液的酸化处理
?稀释和比色
? 读出测定结果： g/100ml
? 结果的换算：将读出的结果换算为 g/L
第四页，编辑于星期二：二十一点 四十七分。
二、ABO血型鉴定
? 目的要求
? 学习鉴别血型的基本方法 ? 观察红细胞凝集现象，掌握 ABO 血型鉴定的原理。
血型 红细胞膜（抗原、凝集原） 血清（抗体、凝集素）
A型、 B型标准血清各一滴。
? 在双凹玻片的A、 B 凹陷内分别加入红细胞悬液 1滴，
用牙签搅拌，使抗血清和红细胞悬液充分混合。在室
温下静置 10～15 min 后，观察凝集结果，如果肉眼
观察不明显，可用显微镜作进一步观察，并注意区分
凝集、凝固和沉淀。
? 根据凝集结果判别血型 。
第七页，编辑于星期二：二十一点 四十七分。
第三次实验 血液生理
Southwest University
第一页，编辑于星期二：二十一点 四十七分。
本次实验主要内容
一一 血红蛋白含量的测定 二 ABO血型鉴定
第二页，编辑于星期二：二十一点 四十七分。
一、血红蛋白含量的测定
? 目的要求
分析化学实验报告范文9血红蛋白脱辅基和重组-2022-1210
分析化学实验报告范文9血红蛋白脱辅基和重组-2022-1210血红蛋白(Hemoglobin)脱辅基和和重组一、实验目的1.通过实验，了解结合蛋白的变性与变性条件下的行为，从而对结合蛋白中辅基的作用有更深的认识。
2.学习一种生物无机生化科研中常用的为金属酶和蛋白质脱辅基和重组的方法。
3.掌握柱层析法。
二、实验原理血红蛋白是由二价铁Fe(Ⅱ)血红素作为辅基与多肽链结合组成的一种结合蛋白，它是由四个亚基组成的四聚体，分子量大约为65000Da。
四个亚基中的两个亚基的氨基酸序列相同，称为α–亚基，每条链含141个氨基酸。
另外两个氨基酸序列相同的亚基，称为β–亚基，各含146个氨基酸。
α与β亚基有各自的二级、三级空间结构，亚基间以非共价键结合在一起。
每个亚基中均含有一个血红素辅基，它处于一个疏水环境，此疏水环境对血红蛋白的可逆载氧功能起着非常重要的作用。
Fe(Ⅱ)在血红蛋白中始终是以+2价还原态存在的，若被氧化成Fe(Ⅲ)，则称为高铁血红蛋白（MHb），其失去可逆载氧的功能。
血红素与血红蛋白均以非共价键相连，其中包括:①Fe(Ⅱ)与近端组氨酸(F8Hi)上的Nε上的配位键；②卟啉环侧链丙酸阴离子与蛋白质氨基酸侧链之间的盐桥；③卟啉环中乙烯基与蛋白质的疏水相的相互作用。
在酸性条件下，由于蛋白的变性而使这些作用变得很弱，以至于高铁血红素可以从血红蛋白的疏水区中游离出来。
利用高铁血红素在丁酮中的溶解度大大高于它在水溶液中的溶解度的性质，用多次丁酮萃取的方法将血红素与蛋白分离。
分离得到的脱辅基血红蛋白(ApoHb)可以再用金属卟啉化合物(例如高铁血红素、钴卟啉、铜卟啉等)进行重组，生成各种不同金属卟啉的血红蛋白。
由于高铁血红蛋白（MHb）的紫外可见吸收光谱中，在405nm处有很强的特征吸收峰，而脱辅基血红蛋白(ApoHb)只在280nm处有蛋白的特征吸收峰，当将高铁血红素加入ApoHb溶液中后，重组成功的高铁血红蛋白（MHb）又会在405nm处出现它的特征吸收峰，因而血红蛋白的脱辅基与重组试验均可用紫外可见分光光度计进行检测。
实验报告 血红蛋白
实验报告血红蛋白实验报告：血红蛋白引言：血红蛋白是人体中非常重要的一种蛋白质，它负责携带氧气到身体各个组织和器官，维持正常的生理功能。
本实验旨在探究血红蛋白的结构、功能以及与健康的关系。
一、血红蛋白的结构血红蛋白是由四个亚单位组成的复合蛋白，每个亚单位都含有一个铁离子。
这个结构使得血红蛋白具有高度的亲和力，能够与氧气结合形成氧合血红蛋白。
血红蛋白的结构决定了它的功能，也是它能够在人体内发挥作用的基础。
二、血红蛋白的功能血红蛋白的主要功能是携带氧气。
当我们呼吸时，肺部的氧气会与血液中的血红蛋白结合，形成氧合血红蛋白。
然后，这个氧合血红蛋白会通过血液循环输送到身体的各个部位，释放氧气供组织和器官使用。
同时，血红蛋白还能够携带二氧化碳，将其从组织中带回到肺部，完成呼吸过程。
三、血红蛋白与健康的关系血红蛋白的正常水平对人体健康至关重要。
过低的血红蛋白水平可能导致贫血，使身体无法获得足够的氧气，从而引发疲劳、头晕和心慌等症状。
而过高的血红蛋白水平则可能导致血液黏稠度增加，增加心脏负担，增加心血管疾病的风险。
因此，保持适当的血红蛋白水平对维持健康至关重要。
四、血红蛋白的检测方法为了了解血红蛋白的水平，医生通常会通过血液检测来进行评估。
常见的检测方法包括完全血细胞计数（CBC）和血红蛋白电泳。
完全血细胞计数可以提供血红蛋白的数量和其他相关参数，而血红蛋白电泳则可以检测血红蛋白的类型和异常。
五、影响血红蛋白水平的因素血红蛋白水平受多种因素的影响。
饮食中的铁、维生素B12和叶酸等营养物质是血红蛋白合成的重要组成部分，缺乏这些物质会导致血红蛋白水平下降。
同时，慢性疾病、肾脏问题和骨髓疾病等也可能影响血红蛋白的生成和功能。
结论：血红蛋白在人体中起着至关重要的作用，它负责携带氧气到身体各个组织和器官，维持正常的生理功能。
保持适当的血红蛋白水平对维持健康至关重要。
通过血液检测可以了解血红蛋白的水平，进而评估身体的健康状况。
《血红蛋白含量测定》实验综述报告
血红蛋白含量测定实验综述报告前言血红蛋白（Hb）是人体内比较常见的一种蛋白质，它负责携带氧气和二氧化碳，在维持人的生命活动和健康方面起着重要的作用。
因此，对于血红蛋白含量的测定，具有重要的临床意义。
本文主要介绍了血红蛋白含量测定的一些相关实验方法和步骤。
实验材料1.血糖试剂盒2.血红蛋白含量测定仪器3.暗室4.血液样本（采集自参加实验的志愿者）实验方法步骤1：血液样本处理采集完血液样本后，需要先进行一些必要的处理。
首先，需要将采集到的血液样本与血糖试剂盒中的试剂混合均匀，并置于暗室内培养15分钟。
步骤2：测定吸光度在血液样本和试剂混合物培养完毕后，需要使用血红蛋白含量测定仪器测定样品的吸光度。
这里介绍一下使用光度计进行吸光度测定的具体步骤：1.取出测定仪，并将其插到电源插座上，接通电源后打开电源开关。
2.选择合适的波长。
这里以540 nm为例。
3.利用去离子水调零，将样品装入比色皿并置于光度计中，读取吸光度值。
步骤3：计算血红蛋白含量通过上述步骤，我们可以得到样品的吸光度值，接下来需要根据吸光度值来进行血红蛋白含量的计算。
具体来说，可以使用以下公式进行计算：血红蛋白浓度（g/L）=吸光度值（nm）/系数A总血红蛋白（g/L）=血红蛋白浓度（g/L）×Dilution Ratio×Correction Factor（其中系数A、Dilution Ratio和Correction Factor具体数值因测量仪器不同而异）实验注意事项1.在进行操作时，需要按照正常的实验操作流程进行，比如避免测量过程中的干扰因素。
2.对于各项材料的使用和实验过程中的注意事项等，需要仔细阅读使用说明书。
实验结果我们在实验中使用的是三大健康人群的血液样本。
通过计算，得出他们的血红蛋白浓度如下：志愿者编号血红蛋白浓度（g/L）001 128.4002 146.7003 135.9实验结论通过实验，我们可以得出三名志愿者的血红蛋白含量，对三名志愿者的血红蛋白含量进行比较，发现存在一定差异。
血红蛋白电泳实验报告
实验汇报实验名称：血红蛋白电泳项目名称：两种碱性血红蛋白样品处理方法的电泳结果实验时间：2018年9月17日实验室：龙泉驿区妇幼保健院检验科实验人员：杨松报告单位：成都温伦科技有限公司一、实验目的：1、掌握生理盐水处理血红蛋白样品的方法2、掌握四氯化碳处理血红蛋白样品的方法3、掌握电泳仪实验的操作4、分析两种碱性血红蛋白样品处理方法电泳结果的不同二、实验原理：血红蛋白电泳就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术，在临床检验中, 主要用于分离各类蛋白分子。
三、实验方法：琼脂糖电泳法四、实验器械：样品：10个EDTA抗凝管抽取的病人全血样品试剂：0.9%生理盐水500ml，四氯化碳500ml，界面液250ml，美国Helena Spife3000血红蛋白电泳检测试剂盒器材：移液枪，一次性移液枪头若干，EDTA抗凝管10个，玻璃试管10个设备：美国Helena Spife3000 全自动电泳仪五、实验步骤：1、取得医院检验科EDTA抗凝管抽取的病人全血样品10个，编号为1，2,3......10。
2、将1-10号十个个样品分别用移液枪取200ul到玻璃试管中，编号为1-1,2-1,3-1,.....10-1。
3、将1-10号10个样品进行生理盐水前处理，处理方法如下：-用0.9%生理盐水混匀，3500 rpm离心10分钟.-吸走弃去清液。
-以上步骤连续进行三次。
-完全吸走弃去上清液。
-20ul制作后的样本+80ul溶血素，混匀。
-取溶血后的样本17ul加入样品孔。
4、将1-1到10-1号10个样品进行四氯化碳前处理，处理方法如下：-用0.9%生理盐水溶液5000μL与样品混合。
-3000rpm离心5分钟。
-弃去上清液，只留下红细胞。
-加入200ul 蒸馏水溶解红细胞。
-加入300ul 的四氯化碳，混合均匀，3000rpm离心5分钟。
血红蛋白测定实验报告
血红蛋白测定实验报告血红蛋白是人体内一种重要的血液蛋白，它能够携带氧气到达身体各个器官和组织。
血红蛋白测定是临床常用的一种检验方法，能够提供有关患者体内氧合情况的重要信息。
本次实验旨在通过测定参与实验的人员的血液样本中的血红蛋白含量，来了解其体内氧合情况及贫血情况。
实验步骤：1. 收集血液样本：准备工作台和所需器材，包括带有一次性安全针头的注射器、耗材等。
选择一个适当的部位，通常是患者的指尖。
在清洁皮肤后，用注射器抽取一定量的血液样本。
2. 采用血红蛋白计测定仪测定血红蛋白含量：将血液样本倒入已经预装了染剂的检测管中，混合均匀。
将检测管放入血红蛋白计测定仪中。
根据血红蛋白计测定仪的说明书，操作仪器进行测定。
实验结果：本次实验中测得参与者A的血红蛋白含量为X克/升，参与者B的血红蛋白含量为Y克/升，参与者C的血红蛋白含量为Z克/升。
讨论与分析：通过本次实验，我们发现不同参与者的血红蛋白含量存在一定的差异。
血红蛋白含量的正常范围可能因个人的年龄、性别、健康状况和生活习惯等因素而有所不同。
血红蛋白在人体中起着至关重要的作用，它能够与氧气结合形成氧合血红蛋白，并将氧输送到身体各个组织和器官中。
因此，血红蛋白含量的变化往往与身体的氧合情况有关。
根据世界卫生组织的建议，成年男性的正常血红蛋白范围为130-170克/升，成年女性的正常血红蛋白范围为120-150克/升。
如果血红蛋白低于这个范围，就可能存在贫血的情况。
贫血是一种常见的疾病，其主要特征是机体内的红细胞数量或质量的减少，导致无法满足身体对氧气的需求。
贫血可以由多种原因引起，例如缺铁、缺维生素B12或叶酸、慢性疾病等。
血红蛋白测定不仅在临床中广泛应用，而且在科研领域也扮演着重要角色。
通过测定血红蛋白的含量，可以了解机体的氧合情况，为临床诊断和治疗提供重要依据。
总结：通过本次血红蛋白测定实验，我们了解到血红蛋白是人体中不可或缺的重要物质。
血红蛋白含量的测定可以为医生提供诊断和治疗贫血等疾病的依据，也为科研人员提供了重要的实验数据。
血红蛋白测定实验报告
一、实验目的1. 掌握血红蛋白测定的原理和方法。
2. 了解血红蛋白在人体中的生理作用和临床意义。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据分析能力。
二、实验原理血红蛋白是一种含铁的蛋白质，主要存在于红细胞中，具有携带氧气和二氧化碳的功能。
血红蛋白测定主要通过比色法进行，利用血红蛋白在特定波长下的光吸收特性，通过比较待测样本与标准品的吸光度，计算出血红蛋白的浓度。
三、实验材料1. 仪器：分光光度计、离心机、恒温水浴箱、吸管、试管等。
2. 试剂：血红蛋白标准品、邻甲联苯胺溶液、过氧化氢溶液、醋酸溶液、生理盐水、抗凝剂等。
四、实验方法1. 标准曲线绘制（1）取6个试管，分别加入0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml血红蛋白标准品，加入生理盐水定容至1ml。
（2）向每个试管中加入2ml邻甲联苯胺溶液，混匀。
（3）将试管放入恒温水浴箱中，37℃水浴10分钟。
（4）取出试管，加入2ml过氧化氢溶液，混匀。
（5）用分光光度计在530nm波长下测定吸光度。
（6）以血红蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样本测定（1）取静脉血2ml，加入抗凝剂，混匀。
（2）离心分离血浆，取血浆1ml。
（3）按照标准曲线绘制步骤，测定吸光度。
（4）根据标准曲线，计算血红蛋白浓度。
五、实验结果1. 标准曲线绘制根据实验数据，绘制标准曲线，得到线性方程：y = 0.017x + 0.001。
2. 样本测定根据实验数据，计算血红蛋白浓度为120g/L。
六、实验讨论1. 本实验通过比色法测定血红蛋白浓度，操作简单，结果准确。
2. 血红蛋白浓度是反映人体贫血程度的重要指标，对临床诊断和治疗具有重要意义。
3. 在实验过程中，应注意以下事项：（1）试剂应避光保存，避免受潮、污染。
（2）操作过程中应保持恒温水浴箱温度稳定。
（3）分光光度计应校正，确保测量准确。
（4）实验数据应准确记录，便于后续分析。
七、实验结论通过本实验，我们掌握了血红蛋白测定的原理和方法，了解了血红蛋白在人体中的生理作用和临床意义。
实验报告_血红蛋白
一、实验目的1. 掌握血红蛋白的提取和分离方法。
2. 学习使用分光光度计测定血红蛋白的浓度。
3. 了解血红蛋白在生理和病理过程中的作用。
二、实验原理血红蛋白是一种含铁的蛋白质，是红细胞中携带氧气的主要成分。
血红蛋白的浓度是衡量红细胞携氧能力的重要指标。
本实验采用分光光度法测定血红蛋白含量，其原理是基于血红蛋白在特定波长下具有特定的光吸收特性。
三、实验材料1. 人血清2. 氯化钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 乙酸缓冲液5. 酚酞指示剂6. 高铁氰化钾溶液7. 分光光度计8. 50ml容量瓶9. 1ml移液管10. 10ml量筒四、实验方法1. 血红蛋白提取：取一定量人血清，加入氢氧化钠溶液，充分振荡，使血红蛋白释放出来。
2. 血红蛋白分离：将提取的血红蛋白溶液加入乙酸缓冲液，调节pH至4.6，离心分离血红蛋白。
3. 血红蛋白测定：取一定量的血红蛋白溶液，加入高铁氰化钾溶液，充分振荡，使血红蛋白氧化为高铁血红蛋白。
用分光光度计在540nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算血红蛋白浓度。
五、实验步骤1. 准备标准曲线：取一系列已知浓度的血红蛋白标准溶液，按照实验方法测定吸光度，以吸光度为纵坐标，血红蛋白浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 提取血红蛋白：取2ml人血清，加入10ml氢氧化钠溶液，充分振荡，使血红蛋白释放出来。
3. 分离血红蛋白：将提取的血红蛋白溶液加入10ml乙酸缓冲液，调节pH至4.6，离心分离血红蛋白。
4. 测定血红蛋白：取1ml血红蛋白溶液，加入1ml高铁氰化钾溶液，充分振荡，使血红蛋白氧化为高铁血红蛋白。
用分光光度计在540nm波长下测定吸光度。
5. 计算血红蛋白浓度：根据标准曲线，计算血红蛋白浓度。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，得到线性方程为y=0.021x+0.004，其中y为吸光度，x为血红蛋白浓度。
2. 血红蛋白浓度测定：根据实验步骤，测定血红蛋白溶液的吸光度为0.60。
分析化学实验报告9. 血红蛋白脱辅基和重组-2013-1210
血红蛋白(Hemoglobin)脱辅基和和重组一、实验目的1.通过实验，了解结合蛋白的变性与变性条件下的行为，从而对结合蛋白中辅基的作用有更深的认识。
2.学习一种生物无机生化科研中常用的为金属酶和蛋白质脱辅基和重组的方法。
3.掌握柱层析法。
二、实验原理血红蛋白是由二价铁Fe(Ⅱ)血红素作为辅基与多肽链结合组成的一种结合蛋白，它是由四个亚基组成的四聚体，分子量大约为65000Da。
四个亚基中的两个亚基的氨基酸序列相同，称为α–亚基，每条链含141个氨基酸。
另外两个氨基酸序列相同的亚基，称为β–亚基，各含146个氨基酸。
α与β亚基有各自的二级、三级空间结构，亚基间以非共价键结合在一起。
每个亚基中均含有一个血红素辅基，它处于一个疏水环境，此疏水环境对血红蛋白的可逆载氧功能起着非常重要的作用。
Fe(Ⅱ)在血红蛋白中始终是以+2价还原态存在的，若被氧化成Fe (Ⅲ)，则称为高铁血红蛋白（MHb），其失去可逆载氧的功能。
血红素与血红蛋白均以非共价键相连，其中包括:①Fe(Ⅱ)与近端组氨酸(F8His)上的Nε上的配位键；②卟啉环侧链丙酸阴离子与蛋白质氨基酸侧链之间的盐桥；③卟啉环中乙烯基与蛋白质的疏水相的相互作用。
在酸性条件下，由于蛋白的变性而使这些作用变得很弱，以至于高铁血红素可以从血红蛋白的疏水区中游离出来。
利用高铁血红素在丁酮中的溶解度大大高于它在水溶液中的溶解度的性质，用多次丁酮萃取的方法将血红素与蛋白分离。
分离得到的脱辅基血红蛋白(ApoHb)可以再用金属卟啉化合物(例如高铁血红素、钴卟啉、铜卟啉等)进行重组，生成各种不同金属卟啉的血红蛋白。
由于高铁血红蛋白（MHb）的紫外可见吸收光谱中，在405nm 处有很强的特征吸收峰，而脱辅基血红蛋白(ApoHb)只在280nm处有蛋白的特征吸收峰，当将高铁血红素加入ApoHb溶液中后，重组成功的高铁血红蛋白（MHb）又会在405nm处出现它的特征吸收峰，因而血红蛋白的脱辅基与重组试验均可用紫外可见分光光度计进行检测。
血红蛋白电泳实验报告
血红蛋白电泳实验报告实验报告：血红蛋白电泳实验一、引言血红蛋白（hemoglobin）是一种具有输送氧气功能的蛋白质，存在于人类和许多动物的红细胞中。
它由四个亚基构成，包括两个α亚基和两个β亚基。
血红蛋白的功能和结构与其所含的亚基类型密切相关，而异常的血红蛋白亚基组合可能导致一些血液疾病的发生。
血红蛋白电泳实验是一种常用的实验方法，用于检测血液中血红蛋白的类型和数量，以帮助诊断和监测相关疾病。
二、实验目的通过血红蛋白电泳实验，了解不同类型血红蛋白的迁移速度，并根据实验结果对血液样本进行分类和鉴定。
三、实验材料与方法实验材料：1. 血液样本2. 血红蛋白电泳试剂盒3. 相关实验设备：电泳仪、垂直电泳槽、电源等实验方法：1. 血液样本处理：将血液样本离心，取上清液得到红细胞。
2. 血红蛋白裂解：将红细胞加入裂解液，用振荡器进行充分混合。
3. 准备样品槽：将电泳槽填充足够量样品缓冲液，并插入电泳纸。
4. 样品加载：取相应量的裂解液，滴于电泳纸上。
5. 电泳：将电泳槽连接至电源，设定电压和时间。
6. 停止电泳：电泳结束后，断开电源，取出电泳纸。
7. 进行染色：用染色试剂将血红蛋白带染色。
8. 结果分析：观察电泳纸上的血红蛋白带，根据迁移速度和染色程度对其进行鉴定和分类。
四、实验结果与讨论实验结果显示，通过血红蛋白电泳实验，可以清晰地观察到不同类型血红蛋白的迁移带。
血红蛋白A带出现在电泳纸上最远的位置，表明它的迁移速度最快，而其他类型的血红蛋白则随着亚基结构的不同而迁移速度差异明显。
根据实验结果，我们可以将血红蛋白带分为以下几类：1. 血红蛋白A：正常血红蛋白，包括两个α亚基和两个β亚基。
2. 血红蛋白S：镰状细胞贫血患者中常见的异常血红蛋白，由两个α亚基和两个替代的βS亚基组成。
3. 血红蛋白C：血红蛋白C病患者中可见的异常血红蛋白，由两个α亚基和两个替代的βC亚基组成。
4. 血红蛋白F：胎儿血红蛋白，包括两个α亚基和两个γ亚基。
实验报告血红蛋白doc
实验报告血红蛋白doc实验报告血红蛋白篇一：生化实验报告实验5 血红蛋白凝胶过滤实验报告课程名称：生化实验B实验日期：班级：姓名学号：血红蛋白凝胶过滤一、背景及目的血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质。
存在于脊椎动物、某些无脊椎动物血液和豆科植物根瘤中。
人体内的血红蛋白由两个α亚基和两个β亚基组成。
每个亚基均成球状，内部有一个血红素。
血红素上的亚铁离子可以可逆的与氧分子结合，起到运输氧气的作用。
当携带氧气时，血红蛋白呈鲜红色，无氧时为暗红色。
凝胶过滤法又称凝胶排阻层析或分子筛层析，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。
层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。
一般是大分子先流出来，小分子后流出来。
凝胶过滤的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。
对于高分子物质有很好的分离效果。
影响分离效果的因素主要有以下几点：1.基质的(本文来自：小草范文网:实验报告血红蛋白)颗粒大小、均匀度2.筛孔直径和床体积的大小3.洗脱液的流速4.样品的种类等，5.缓冲液的pH6.而最直接的影响是 Kav 值的差异性， Kav 值差异性大，分离效果好； Kav 值差异性小，则分离效果很差，或根本不能分开。
影响凝胶过滤的因素主要有：1、层析柱的选择：长的层析柱分辨率要比短的高，但层析柱长度不能过长。
2、加样量：加样过多，会造成洗脱峰的重叠；加样过少，提纯后各组分量少、浓度较低。
3、凝胶柱的鉴定：凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡。
4、洗脱速度：洗脱速度应保持适中。
目前凝胶过滤技术的应用主要是以下几点：1、脱盐2、用于分离提纯3、测定高分子物质的分子量4、高分子溶液的浓缩5、蛋白质的复性二、实验原理层析法是基于不同物质在流动相和固定相之间的分配系数不同而将混合组分分离的技术。
血红蛋白的测定实验报告
血红蛋白的测定实验报告血红蛋白的测定实验报告引言：血红蛋白是一种重要的血液成分，它负责将氧气输送到身体各个组织和器官中。
因此，准确测定血红蛋白水平对于评估人体健康状况至关重要。
本实验旨在通过一系列实验步骤，测定血液中血红蛋白的含量。
材料与方法：1. 血液样本：从志愿者的指尖采集足够的血液样本。
2. 高氯酸铁法：将血液样本与高氯酸铁溶液混合，并在酸性条件下进行反应。
3. 分光光度计：使用分光光度计测量反应后的溶液的吸光度。
4. 标准曲线：制备一系列已知浓度的血红蛋白溶液，以建立标准曲线。
实验步骤：1. 采集血液样本：使用消毒棉球清洁指尖，然后用无菌针头将足够的血液采集到试管中。
2. 加入高氯酸铁溶液：将已采集的血液样本与高氯酸铁溶液按比例混合，确保完全混合。
3. 反应：将混合溶液置于酸性条件下反应一段时间，通常为15分钟。
4. 测量吸光度：使用分光光度计，将反应后的溶液吸入比色皿中，并将其放入光度计中，记录吸光度值。
5. 制备标准曲线：分别测量不同浓度的血红蛋白溶液的吸光度，并绘制标准曲线。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们得到了一系列已知浓度的血红蛋白溶液的吸光度值，并绘制了标准曲线。
根据待测血液样本的吸光度值，我们可以通过标准曲线找到相应的血红蛋白浓度。
然而，在实际操作中，我们可能会遇到一些问题。
首先，血液样本的采集过程需要小心，以避免污染或损坏样本。
其次，高氯酸铁溶液的配制和使用需要准确控制比例和反应时间，以确保反应的准确性和可重复性。
最后，分光光度计的使用也需要注意，确保正确操作和准确读数。
此外，本实验中使用的高氯酸铁法是一种常用的测定血红蛋白的方法之一。
然而，还有其他方法可以测定血红蛋白，如比色法、电泳法等。
不同的方法有各自的优缺点，选择适合的方法取决于实验目的和条件。
结论：通过本次实验，我们成功地测定了血液样本中的血红蛋白含量。
血红蛋白作为血液中的重要成分，对于评估人体健康状况具有重要意义。
实验一血红蛋白的测定（氰化法）
实验一血红蛋白的测定（氰化法）1．实验特点实验类型：验证实验类别：专业基础计划学时：3 每组人数：22．实验目的要求：了解氰化法测定血红蛋白的原理，掌握人体血液样本的采集方法，分光光度法测定原理和技术。
3．实验原理：血红蛋白在铁氰化钾和氰化钾的作用下，生成极为稳定的氰化高铁血红蛋白（红色），其颜色深浅与血红蛋白的含量成正比。
氰化高铁血红蛋白在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。
其化学反应式如下：- 1 -- 2 -氰化高铁血红蛋白高铁血红蛋白血红蛋白氰化钾铁氰化钾⎯⎯→⎯⎯⎯⎯→⎯4．实验仪器设备：10μL 血色素吸管（或定量毛细管）5mL 或10mL 带盖试管721分光光度计称取碳酸氢钠140mg 、铁氰化钾200mg 、氰化钾50mg ，用蒸馏水溶解并稀释到1000mL 。
贮存于棕色试剂瓶内，在4°C 冰箱保存，至少可稳定数月到一年。
5．材料消耗费：10元6．实验内容步骤：吸取2.5mL试剂于5mL带盖试管中，加入10μL血液，混匀后放置15min。
选用0.5cm光径比色杯，与540nm波长下，以试剂调节仪器零点，测定各样品管的光密度。
7．注意事项：本法为国际血液学标准化委员会（ICSH）所推荐，具有操作简便、不需要标准、结果准确可靠等优点。
应用本法进行血红蛋白的测定，所用分光光度计的波长必需事先经过校正。
实验条件改变，如更换了光电池或灯泡、电压不稳、试剂换了批号等等均会引起光密度的改变。
为了获得正确结果，可用标准液校正或采用色泽近似的无机盐人工永久标准液来核对，这也是一种行之有效的方法。
如以上两点难以实现，宜采用标准曲线法或直接比较法进行。
血样放入试剂后形成的氰化高铁血红蛋白极为稳定，经试验，在4°C冰箱存放70天之久前后结果仍能保持一致。
为此，可将各地采集的样品在加入试剂后，在2-10°C环境中，集中到中心实验室进行比色测定。
血红蛋白的测定实验报告
血红蛋白的测定实验报告
实验目的：了解血红蛋白的生物学意义及其测定方法，掌握血红蛋白的测定实验技术。
实验原理：血红蛋白是一种四聚体蛋白质，在其全部载氧的状态下，氧气与每个血红蛋白四聚体中的四个铁原子结合。
血红蛋白含有的铁离子可以通过一种称为法因林反应的化学方法来测定。
在这个反应中，铁离子和一种叫做二异丙基联苯胺（DIP）的试剂可以形成一种可见的蓝色化合物。
由于每个血红蛋白分子中含有四个铁原子，因此法因林反应是一种比色的方法，用以估算血中的血红蛋白浓度。
实验步骤：
1. 收集标本：收集血液标本并放入一根带有抗凝剂的试管中。
2. 离心：把试管放入离心机中离心，离心速度为2000r/min，持续时间为5分钟。
3. 液面读数：观察离心后的血液，看到血清在上面，血细胞在下面，用经过充气气压法标定后的血球比重做血红蛋白浓度计算的前提，因此需要记录液面高度。
4. 定比加水：将10ml蒸馏水加入试管中，然后快速倒入附带标有“定比加水”标记的化学试剂，使试管中的液体达到刻度线，现场观察是否达到刻度线即可。
5. 震荡：轻轻地摇动试管，使加入的化学试剂充分与血红蛋白结合。
6. 放置：让试管静置10分钟，使检验结果稳定。
7. 比色：用比色卡将试管中的液体与一系列已知浓度的标准溶液进行比色，并根据比色卡上的颜色计算血中的血红蛋白浓度。
实验结果：实验结果表明，血液样本的血红蛋白浓度为135g/L。
实验结论：通过血红蛋白浓度的测定，可以了解一个人的健康状况，尤其是贫血等疾病。
而这种测定方法简单、快捷、准确，因此在医疗保健行业具有广泛应用。
血红总蛋白实验报告
血红总蛋白实验报告本实验旨在进一步了解血红蛋白的结构和功能，并通过实验方法来测定血红蛋白的浓度。
实验原理：血红蛋白是一种含有铁离子的蛋白质，通过与氧气结合和释放来完成氧气在人体内的运输。
实验中我们使用的是反射光度法来测定血红蛋白的浓度。
在测定前，需要将血红蛋白与一种试剂反应，形成一种具有特定颜色的化合物，然后通过测定该化合物的光吸收值来计算血红蛋白的浓度。
实验步骤：1. 首先将一定量的血红蛋白溶液与试剂混合均匀，并将混合液离心，以除去悬浮的杂质。
2. 将离心后的混合液取出一部分，放入分光光度计中，设置波长为特定值，测定光吸收值。
3. 观察吸光度与血红蛋白浓度之间的关系，并通过标准曲线法来计算未知血红蛋白溶液的浓度。
实验结果：我们首先根据实验操作步骤依次进行了实验，并测定了不同浓度的血红蛋白溶液的吸光度。
通过实验数据，我们绘制出了一个标准曲线，该曲线反映了血红蛋白溶液浓度与吸光度之间的线性关系。
然后，我们通过该标准曲线来计算了未知血红蛋白溶液的浓度，得到了一个相对准确的结果。
讨论与分析：在该实验中，我们使用了反射光度法来测定血红蛋白的浓度。
通过与试剂的反应，我们得到了一种具有特定颜色的化合物，并通过测定其光吸收值来计算血红蛋白的浓度。
在实验过程中，我们需要注意实验条件的控制，以获得准确可靠的结果。
实验中的误差主要来自以下几个因素：首先，实验操作中可能存在的人为误差，例如在混合血红蛋白和试剂时没有完全均匀混合，或者在离心过程中没有完全除去杂质。
其次，仪器仪表的误差也会对实验结果造成影响，例如分光光度计的波长精度和光路的校准等。
此外，血红蛋白溶液的质量也会对实验结果产生影响，例如血红蛋白的纯度和保存条件等。
为了减小误差，我们需要注意以下几个方面：首先，实验操作时要仔细并按照操作步骤进行，确保血红蛋白和试剂完全混合，并通过离心去除杂质。
其次，在测定光吸收值时要保持仪器的稳定，并在使用前进行校准，以保证测量结果的准确性。
实验报告 血红蛋白
实验报告血红蛋白实验报告：血红蛋白引言血红蛋白是人体内一种重要的蛋白质，它存在于红细胞内，主要负责运输氧气到全身各个组织和器官。
血红蛋白的结构和功能对人体的健康起着至关重要的作用。
本实验旨在探究血红蛋白的结构和功能，并通过实验数据来验证其在氧气运输过程中的重要性。
材料和方法1. 实验所需材料：新鲜的血液样本、离心管、显微镜、氧气检测仪器等。
2. 实验步骤：a. 从被试者身上抽取一定量的血液样本，放入离心管中进行离心分离。
b. 取得红细胞样本后，将其放置于显微镜下进行观察，观察血红蛋白的形态和结构。
c. 利用氧气检测仪器对血液样本中的氧气含量进行检测，以验证血红蛋白在氧气运输中的作用。
结果通过观察显微镜下的红细胞样本，我们发现血红蛋白呈现出红色的颗粒状结构，这种结构有利于血红蛋白与氧气的结合和释放。
同时，实验数据显示，当血液样本中的血红蛋白含量较低时，氧气的运输能力也相应下降，从而影响到人体各个组织和器官的正常功能。
讨论血红蛋白的结构和功能对人体的健康至关重要。
它能够通过与氧气的结合和释放来实现氧气的运输，从而维持人体各个部位的正常代谢和功能。
通过本次实验，我们进一步验证了血红蛋白在氧气运输中的重要性，这也为研究和治疗与血红蛋白相关的疾病提供了重要的理论基础。
结论血红蛋白是人体内一种重要的蛋白质，它通过与氧气的结合和释放来实现氧气的运输。
本次实验结果表明，血红蛋白的结构和功能对人体的健康起着至关重要的作用。
我们希望通过对血红蛋白的进一步研究，能够更好地理解其在人体内的作用机制，并为相关疾病的治疗提供更多的理论依据。
家兔血红蛋白含量的测定实验报告
家兔血红蛋白含量的测定实验报告酸化血红蛋白稀释测定法（改良沙利氏法）[目的与原理]掌握测定家兔血红蛋白含量的原理和方法，应用改良沙利氏法测定不同家兔血红蛋白含量。
本实验是应用比色法测定鱼的血红蛋白量。
血红蛋白本身的色泽，常随所结合的氧量多少而改变，不便比色。
但是加入稀盐酸于血液中可使血红蛋白变成不易变色的高铁血红蛋白，这就可以与标准色相比，从而测出其含量。
通常以每100ml 血液中含血红蛋白克数来表示，正常鱼血红蛋白含量为7—8g。
[实验对象]家兔。
[试剂与器材]血红蛋白比色计，搪瓷盘，注射器，凹瓷盘，小试管，试管架，蒸馏水，75%酒精，棉球，0.1mol/L盐酸（配置盐酸用具），蒸馏水，滴管，纱布，烧杯，抗凝剂（1%肝素钠溶液或10%草酸钾溶液）。
[实验步骤]1、了解血红蛋白比色计的构成血红蛋白计主要包括吸血管、比色计和比色管等部件。
吸血管为一厚壁毛细玻璃管，其上有10μl、20μl的刻度，尾端连有橡皮头，供吸血用。
比色计的两侧，装有标准浓度的高铁血红蛋白溶液，也有用比色玻璃柱（或片）来代替的。
比色管可插在比色计中，与两侧的标准比色柱进行比色。
比色管的两侧通常刻有两行刻度。
一行为血红蛋白的绝对值，以g计数（每100毫升血液中所含血红蛋白的克数）来表示，刻度范围为2～22。
另一行为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，刻度范围为10%～160%。
目前测定常用绝对值来表示。
2、用蒸馏水将比色管洗净，吸血管则依次用蒸馏水，95%酒精和乙醚洗净干燥备用。
3、用滴管加0.1mol/L盐酸4—6滴到刻度比色管内，约加到管下端刻度“2”或“10%”处为止。
4、采血：采血方法见实验49，用吸血管吸血至20μl刻度（要准确）。
用绵球仔细将管尖端外面的血拭去。
5、将吸血管中血液轻轻地滴到比色管中盐酸底部，并用上层较清的盐酸溶液反复清洗吸血管3次。
使吸血管内的血液完全洗净。
切勿带入空气，以至形成气泡影响比色。
变性血红蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握变性血红蛋白检测的基本原理和方法。
2. 学习使用分光光度计进行定量分析。
3. 分析变性血红蛋白与正常血红蛋白的差异性，了解其生物学意义。
二、实验原理血红蛋白是红细胞中的一种含铁的蛋白质，主要负责氧气的运输。
在正常生理状态下，血红蛋白以氧合状态存在，呈红色。
当血红蛋白受到某些因素（如氧化剂、药物等）的作用时，会发生构象变化，导致其失去携带氧气的能力，形成变性血红蛋白。
本实验通过检测变性血红蛋白的吸光度，判断其含量，从而了解血红蛋白的变性程度。
三、实验材料1. 实验试剂：盐酸溶液、氰化钾溶液、蒸馏水、标准血红蛋白溶液、变性血红蛋白溶液。
2. 实验仪器：分光光度计、移液器、试管、试管架、烧杯等。
四、实验步骤1. 准备标准曲线：取一系列试管，分别加入不同浓度的标准血红蛋白溶液，然后加入一定量的盐酸溶液，充分混合。
以蒸馏水为空白对照，在540nm波长处测定吸光度，以血红蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品处理：取一定量的变性血红蛋白溶液，加入适量盐酸溶液，充分混合。
3. 测定吸光度：以蒸馏水为空白对照，在540nm波长处测定变性血红蛋白溶液的吸光度。
4. 计算变性血红蛋白含量：根据标准曲线，计算样品中变性血红蛋白的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：绘制标准曲线后，发现吸光度与血红蛋白浓度呈线性关系，相关系数R²为0.999。
2. 变性血红蛋白含量：根据标准曲线，计算得出样品中变性血红蛋白的含量为X mg/mL。
3. 分析与讨论：（1）本实验结果表明，变性血红蛋白在540nm波长处的吸光度与其含量呈线性关系，说明分光光度法可用于检测变性血红蛋白的含量。
（2）通过本实验，我们了解到变性血红蛋白与正常血红蛋白在吸光度上存在差异，变性血红蛋白的吸光度较低，这与其失去携带氧气的能力有关。
（3）在临床医学中，变性血红蛋白的检测有助于诊断某些疾病，如高铁血红蛋白血症等。
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实验报告血红蛋白篇一：生化实验报告实验5 血红蛋白凝胶过滤实验报告课程名称：生化实验B实验日期：班级：姓名学号：血红蛋白凝胶过滤一、背景及目的血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质。
存在于脊椎动物、某些无脊椎动物血液和豆科植物根瘤中。
人体内的血红蛋白由两个α亚基和两个β亚基组成。
每个亚基均成球状，内部有一个血红素。
血红素上的亚铁离子可以可逆的与氧分子结合，起到运输氧气的作用。
当携带氧气时，血红蛋白呈鲜红色，无氧时为暗红色。
凝胶过滤法又称凝胶排阻层析或分子筛层析，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。
层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。
一般是大分子先流出来，小分子后流出来。
凝胶过滤的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。
对于高分子物质有很好的分离效果。
影响分离效果的因素主要有以下几点：1.基质的(本文来自：小草范文网:实验报告血红蛋白)颗粒大小、均匀度2.筛孔直径和床体积的大小3.洗脱液的流速4.样品的种类等，5.缓冲液的pH6.而最直接的影响是 Kav 值的差异性， Kav 值差异性大，分离效果好； Kav 值差异性小，则分离效果很差，或根本不能分开。
影响凝胶过滤的因素主要有：1、层析柱的选择：长的层析柱分辨率要比短的高，但层析柱长度不能过长。
2、加样量：加样过多，会造成洗脱峰的重叠；加样过少，提纯后各组分量少、浓度较低。
3、凝胶柱的鉴定：凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡。
4、洗脱速度：洗脱速度应保持适中。
目前凝胶过滤技术的应用主要是以下几点：1、脱盐2、用于分离提纯3、测定高分子物质的分子量4、高分子溶液的浓缩5、蛋白质的复性二、实验原理层析法是基于不同物质在流动相和固定相之间的分配系数不同而将混合组分分离的技术。
当流动相(液体或气体)流经固定相(多孔的固体或覆盖在固体支持物上的液体)时，各组分沿固定相移动的速度不同而分离。
能用于微量样品的分析和大量样品的纯化制备。
按操作形式可以划分为：柱层析、纸层析、薄层层析、高效液相层析等。
按流动相与固定相的不同划分：气相层析、液相层析。
按层析的机理可以划分为：吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。
2凝胶过滤是一种按分子量大小分离物质的层析方法。
该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱，大分子不能进入凝胶颗粒的静止相中，只能在凝胶颗粒间随流动相移动，因而可以被较快洗出，而小分子则能够自由进出凝胶颗粒，并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡，因此需要花费较长时间流经柱床，从而使不同大小的分子得到分离。
本实验利用凝胶过滤的特点，先向层析柱中加入FeSO4溶液，形成一个还原带，然后加入血红蛋白样品（血红蛋白与高铁氰化钾的混合液）。
由于血红蛋白分子量大，在凝胶床中流速快，当其流经还原带时，褐色的高铁血红蛋白立即被还原为紫红色的亚铁血红蛋白。
亚铁血红蛋白继续下移，与缓冲液溶解的O2结合，形成鲜红色的氧合血红蛋白。
铁氰化钾是小分子量化合物，呈黄色带远远地落在后边。
这样，就可以形121 百度百科凝胶过滤层析 /81744.htm 百度百科层析 /15375.htm#2象直观地观察到凝胶过滤的分离效果。
本实验操作简便，直观性强，趣味性浓，通过肉眼就可以检验分离效果。
三、仪器与试剂、实验材料1、仪器⑴层析柱⑵恒流泵（HL-2恒流泵，上海沪西分析仪器厂）⑶胶头滴管⑷ 50ml烧杯 3个⑸玻璃棒2、试剂⑴磷酸缓冲液（老师已配好）⑵还原层试剂（1:1的40nM FeSO4和80 mMNa2H2EDTA,0.2MNaHPO4, ,老师提供）⑶ Sephadex G-253、实验材料血红蛋白样品（1ml抗凝血加10ml pH7的20mM磷酸缓冲液，再加入固体铁氰化钾，浓度达5mg/ml，老师提供）四、实验步骤1、凝胶溶胀：老师已准备好2 、检验：旋上层析柱下端柱帽，加少量去离子水，看水是否顺利流出，如果流速过缓，用洗耳球自上端吹气，使其畅通。
上下端倒置，按上述步骤检验。
3、装柱及平衡：取下上端柱帽，装入5cm左右的洗脱液，溶胀好的凝胶边搅拌边倒入柱中，同时开始洗脱，使柱中的凝胶一直处在溶液中，装柱长15cm左右。
溶液液面应该高于凝胶面3-5cm，防止凝胶因脱水而毁柱。
实验中沉降完成后，液面高于凝胶面4cm左右。
此时观察柱面，上下均一，无界面，裂隙。
旋上上端柱帽，细管管接上磷酸盐缓冲液，下端柱帽的细管接恒流泵，开始平衡洗脱。
过程中调节好流速，6滴/分。
平衡过程20分钟。
4、上样：事先剪好略小于层析柱内径的滤纸片，打开上柱帽，将滤纸片放入层析柱中，使其自然飘落覆盖在凝胶面上，防止上样时液滴对床面的冲击。
确定流速后准备上样。
利用恒流泵排气键加速洗脱，直至洗脱液面与胶床液面相切，停止洗脱。
用滴管加0.7ml还原试剂，小心注入胶床液面中央。
开始洗脱，待液面与凝胶床面相齐时，关泵。
上1ml磷酸缓冲液,开启泵,至液面与胶面相齐。
关泵。
上0.7ml血红蛋白样，开泵，至液面与胶面相齐，关泵。
上1ml磷酸缓冲液,开启泵,至液面与胶面相齐。
关泵。
上5ml的磷酸缓冲液。
接上上端柱帽与磷酸缓冲液，连续洗脱，观察现象，并用烧杯分别收集血红蛋白样品与铁氰化钾。
5、待黄色液体全部流出，开排气键，加速洗脱10分钟五、结果1、实验现象还原层上样时，溶液呈黄色，当还原液面与凝胶床面相切时，床面以下两厘米左右呈现黄色。
加上褐色的血红蛋白样品时，开启泵。
此时褐色下渗，在未加入缓冲液之前，褐色带下端已经开始变为暗红色。
层析柱上的色带由上至下依次为黄色，褐色，暗红色。
当上5ml缓冲液并开始洗脱时候，褐色全部变为暗红色，红色带下端颜色变浅。
此时即为两个色带，上端黄色下端暗红。
开始洗脱七分钟时，暗红带下端开始变鲜红色，随时间推移，暗红带全部转变为鲜红色。
过程中，红色带在下，黄色带在上。
两色带一直下移。
色带边界不是很清晰，而且与其他组的同学相比，鲜红色较浅。
随色带的下移，两色带间距变大。
当开始流出红色液体时，用小烧杯接收，待红色全部流出用了30分钟。
当开始有黄色液滴流出时，用小烧杯接收，黄色液体全部流出用了7分钟。
2、现象解释血红蛋白样品中的铁离子最初为三价，显褐色。
当经过还原带时，三价铁被还原成二价，生成暗红色的还原型血红蛋白。
还原型血红蛋白继续下移，与缓冲液中的氧气结合生成鲜红色的氧合血红蛋白。
血红蛋白分子量很大，分子直径大，不能进入凝胶孔穴内部，只能在凝胶颗粒间移动，所以洗脱速度较快。
而铁氰化钾分子量小，分子直径小，能够进入凝胶颗粒孔穴内部，故洗脱速度较慢。
3、凝胶过滤效果相比于其他组的实验现象，我们组的效果不是太好。
刚开始的时候，两个色带分离效果不好，没有形成比较清晰的界限，但在最后终于是分开了，而且随着时间的推移，两色带间距拉大。
理论上讲，两色带的间距应该保持不变，间距变大的原因，可能是胶床面上的滤纸片没有放平，而且床柱的内部有裂隙，在外部无法观察到。
最后变成的鲜红色带相对颜色较浅，分析原因，是因为在加血红蛋白样品时没有震动试管，而血红蛋白分子又容易沉降，导致加入的血红蛋白样品较少。
六、思考题总结分析柱层析技术操作的关键步骤和操作要领和技巧。
1、装柱。
如果装柱不均匀（没有填严实），使得柱子出现太多气泡，导致分离效果不好。
湿法装柱比干法装柱效果要好。
这就要求在湿装时，要边搅拌边加入填柱料（硅胶或凝胶）。
而干法装柱时则要注意密实程度。
填完后应该从侧面敲打，使床柱更密实。
要求柱面上下均一，无界面，裂隙。
装柱后加滤纸片的时候应使其自然飘落在凝胶液面上。
2、恒流泵流速。
根据实验要求的不同要选择不同的流速。
像本次试验要求流速6滴/分，如果过快的话，分子小的物质来不及扩散，随分子大的物质一起被洗脱下来，达不到分离目的。
如果过慢，则耗时太长。
3、上样。
上样的时候每次加样之前一定要停止洗脱。
否则很可能造成液面到达胶面以下而毁柱。
另外加样的时候要用滴管把液体送到接近滤纸的地方再轻轻滴加，防止液体冲击对胶面造成影响。
七、参考文献1 、百度百科凝胶过滤层析2 、百度百科层析 /15375.htm#23 、赵武玲主编，《基础生物化学》，中国农业大学出版社，XX年9月第一版4 、有参考胡老师课件八、实验小结这次实验差点就失败了，应该是装柱的时候出了点问题，而在取血红蛋白样品的时候也没有提前摇匀。
实验前应该多考虑，多思考，并在实验中注意团队合作。
老师在实验前讲了好多道理，给了我们很大的启发。
我喜欢这样不单单教授理论知识的老师。
在实验之前老师提出了一个问题，血红蛋白中的亚铁离子为什么不会被氧气氧化。
查了好多资料，可惜看不太懂，无法理解，还是自己的基础知识没有学充分啊。
篇二：血红蛋白测定血红蛋白测定【实验目的】掌握血红蛋白测定的临床意义熟悉毛细管采血过程，分光光度计的操作了解血红蛋白测定的注意事项【实验原理】血液在血红蛋白转化液中表面活性剂的作用下溶血后，血红蛋白（除SHb外）被高铁氰-化钾（K3Fe（CN）6）氧化为高铁血红蛋白（Hi），Hi 再与氰化钾（KCN）中的氰离子（CN）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。
HiCN 最大吸收波峰在540nm,最小吸收谷为504nm。
可用分光光度计直接测定或用HiCN 标准液比色法测定。
即可求出待测血红蛋白浓度。
此法称HiCN法。
【试剂】血红蛋白转化液（文齐氏液，Van kampen-Zijlstra’液）：-氰化钾50 mg ，提供氰离子（CN）高铁氰化钾200 mg ，氧化剂无水磷酸二氢钾140 mg ，缓冲液成分，维持溶液的pH 值，【实验操作】（1）取一支试管加入5.0ml HiCN试剂，取全血20μl，加入到5.0ml HiCN试剂中，混匀后静置5 min，使血红蛋白转化完全。
0 （2）分光光度计，波长540nm ，比色杯光径1.0cm ，杯温20-30C，以蒸馏水或空白转化液调零，测定样品吸光度值（A）。
【计算】根据比尔定律，浓度与吸光度成正比，所以实际操作中我们还可以直接用待测液的吸光度A测/标准液的吸光度A 标＝待测液的浓度C测/标准液的浓度C标来直接计算待测液的浓度。
【参考值】男性：120 ~160g／L ，女性：110 ~150g／L ，新生儿：170 ~200g／L 。
【临床意义】照书上写图1 红细胞和血红蛋白的生理变化曲线红细胞计数医学决定水平：高于6.8×1012/L，应采取相应治疗措施；低于3.5×1012/L可诊断贫血；低于1.5×1012/L应考虑输血。