胎盘组织中总RNA的提取
组织细胞总RNA提取步骤及方法
组织细胞总RNA提取步骤及方法细胞总RNA提取是一种常用的实验技术，用于分离和提取细胞内的总RNA。
以下是一种常用的细胞总RNA提取方法的步骤：1.收集细胞样品：根据实验需要，收集适量的细胞样品。
可以选择培养细胞、悬浮细胞或组织细胞等。
2. 细胞溶解：将细胞样品转移到离心管中，并使用适当的缓冲液（如TRIzol）进行细胞溶解。
缓冲液中的离子和表面活性剂能够破坏细胞膜，使RNA释放到溶液中。
3.加入氯仿：向细胞溶解液中加入等体积的氯仿，并轻轻倒置离心管混匀。
氯仿会与缓冲液中的酚类结合，形成有机相和水相。
4.离心分离：将混合液在高速离心下离心10-15分钟，使其分成有机相（上层）、界面层（中间层）和水相（下层）。
RNA主要分布在界面层和水相之间。
5.收集上清液：使用滴管、移液器等工具小心收集上层的有机相液体，并转移到新的离心管中。
这一步的目的是尽可能减少界面层和下层的干扰物。
6. 沉淀RNA：将等体积的异丙醇（isopropanol）加入上清液中，并轻轻倒置离心管混匀。
异丙醇能够沉淀RNA，将其从溶液中去除。
7.离心分离：将混合液在高速离心下离心10-15分钟，使RNA沉淀在离心管底部形成一个白色沉淀。
8.去除上清液：小心将上清液倒掉，避免损失RNA沉淀。
9.RNA洗涤：使用70%乙醇洗涤RNA沉淀，将沉淀中的杂质去除。
10. 重新溶解：将洗涤后的RNA沉淀用RNase-free水或缓冲液中重新溶解，以便后续实验使用。
注意要避免酶的污染。
以上是一种常见的细胞总RNA提取方法的步骤。
这个方法简单、操作方便，并且能够高效地提取细胞内的总RNA。
根据实验需要，也可以根据具体步骤来进行微调和改进。
提取总rna的方法
提取总rna的方法
总RNA是指从细胞或组织中提取出的含有所有类型RNA的混合物。
总RNA的提取是RNA研究的重要步骤之一，可以用于分析基因表达、RNA修饰、RNA结构等。
以下是一种常用的总RNA提取方法：材料与试剂：
- 细胞或组织样本
- TRIzol试剂（Invitrogen）
- 氯仿
- 异丙醇
- 离心管
- 离心机
- 热板
步骤：
1. 将细胞或组织样本加入到离心管中，用PBS或生理盐水洗涤
一遍。
2. 加入TRIzol试剂，按照试剂和样本的比例加入。
比例一般为1mL TRIzol/1g细胞或组织。
3. 用均质器将样本均质，使细胞或组织完全破碎，并使其与TRIzol完全混合。
4. 加入氯仿，并彻底混合，使其与TRIzol完全分离。
5. 离心管离心15分钟（4℃，12000rpm），使混合液分为两层，上层为清亮的上清液，下层为混浊的有机相。
6. 将上清液转移至新的离心管中，加入相同体积的异丙醇，混匀。
7. 离心管离心10分钟（4℃，12000rpm），使RNA沉淀在管底。
8. 倒掉上清液，用75%乙醇洗涤RNA沉淀，离心管离心5分钟（4℃，7500rpm）。
9. 将乙醇洗涤RNA沉淀挥干，加入适量的RNase-free水溶解即可。
注意事项：
1. TRIzol是一种强还原剂，需避免与其他化学物质接触。
2. RNA样本处理过程中需注意RNase污染的防止，使用
RNase-free试剂和器材。
3. RNA的保存需避免RNase污染和长时间保存，最好在-80℃低温下保存。
磁珠法动物组织总rna提取试剂
磁珠法动物组织总rna提取试剂磁珠法动物组织总RNA提取试剂是一种常用于从动物组织中提取总RNA的试剂。
总RNA是指包括mRNA、tRNA、rRNA等各种类型的RNA，它们在细胞中起到重要的生物学功能。
动物组织总RNA的提取对于研究基因表达、生物学功能以及疾病研究等领域具有重要意义。
下面将详细介绍磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理、操作流程以及优缺点。
一、原理：磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理是利用磁珠在磁场中的作用来实现RNA的分离和纯化。
磁性珠子（磁珠）是一种微米级别的颗粒，表面含有特异性结合分子（如寡聚核苷酸、抗体等），可以与RNA特异性结合。
通过结合物的磁场作用，可以将RNA与其他杂质分离开，并进行纯化。
二、操作流程：磁珠法动物组织总RNA提取试剂的操作流程通常可以分为样品处理、细胞破碎、RNA结合、磁珠分离、洗涤和洗脱等步骤。
（一）样品处理：首先要将收集到的动物组织样品进行样品处理，如清洗、离心等，以去除表面的杂质并提取细胞。
（二）细胞破碎：将经过样品处理的细胞进行破碎，以释放细胞内的RNA。
目前常用的破碎方法包括机械破碎、酶解和超声破碎等。
选择不同的破碎方法需要根据所研究的组织类型、细胞数量以及目标RNA 的适应性来确定。
（三）RNA结合：将破碎后的细胞溶液与磁珠结合试剂加入，并进行混匀。
通过磁性珠子表面的特异性结合分子与RNA结合，使得RNA能够与磁珠结合。
（四）磁珠分离：通过磁力，将含有磁性珠子的RNA溶液与其他不具有磁性的杂质分离。
可以利用磁力器将磁性珠子收集到一侧，将无磁性的溶液倒掉，从而分离纯化RNA。
（五）洗涤：为了去除残留的污染物，可以进行洗涤步骤。
将洗涤缓冲液加入含有磁珠的管中，再次使用磁力使磁性珠子沉淀，倒掉上清液，然后重复该步骤多次以保证洗涤的彻底性。
（六）洗脱：最后，用洗脱缓冲液将RNA从磁珠上洗脱下来。
将洗脱缓冲液加入磁性珠子所在的管中，轻轻摇晃管子，使RNA溶解在洗脱缓冲液中，从而得到纯化的RNA溶液。
总RNA的提取（Trizol法提取）（PDF）
总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。
若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。
在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water溶解RNA沉淀。
PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。
TaKaRa Taq TM是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。
TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。
Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。
动物组织中总RNA的提取教程文件
(二).鉴定（1.5%琼脂糖电泳鉴定）
操作
1、制胶：1.5%琼脂糖加热溶解冷到
60℃加EB后倒入制胶板中，待凝胶固化
2、加样：15ulRNA提取液+3ul loading buffer
3、电泳80-120v,30分钟
4、紫外灯下观察结果
三.注意事项
防止RNA酶的污染
1、 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干 烤6hr或更长时间。
3.原理
破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗 涤RNA→溶解RNA→鉴定RNA → 保存 RNA
1、 破碎组织:可以用盐酸胍、异硫氰酸 胍、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入 β-ME可以抑制RNA酶活性
2、 分离RNA:一般用酚、氯仿等有机 溶剂，加入少量异戊醇，经过此步， 离心，RNA一般分布于上层，与蛋白 层分开
2、 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗。 3、 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水 冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然 后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。
4、 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理 12hr以上。 5、 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中 手套要勤换,避免在操作中聊天。
关于样本保存
用液氮速冻，再放到超低温冰箱中保存。
RNA保护剂，如RNAlater是具有抑制 RNase和稳定RNA作用的试剂，将采集的组织 样本等直接放入到RNAlater中，即可起到稳定 样本中RNA的作用。
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动物组织中总RNA的提取
通过寡聚脱氧胸苷（OligodT）制备 mRNA
磁珠法动物组织总rna提取试剂
磁珠法动物组织总rna提取试剂动物组织总RNA提取是一项重要的实验步骤，其中磁珠法被广泛应用。
本文将介绍磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理、操作步骤和优势，以及其在科研工作中的应用。
一、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理磁珠法动物组织总RNA提取试剂是一种基于磁性珠子的提取方法。
其原理是利用磁性珠子表面的羧基与RNA中的氨基结合，形成稳定的结合，从而实现RNA的高效提取。
该试剂具有高选择性和高纯度的特点，可有效去除DNA、蛋白质和其他杂质。
二、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的操作步骤1. 准备工作：将动物组织样品切割成小块，并加入适量的细胞裂解缓冲液。
2. 组织裂解：利用机械或化学方法将组织完全裂解，使细胞内的RNA充分释放。
3. 加入磁性珠子：将磁性珠子加入细胞裂解液中，并充分混匀，使珠子均匀分散。
4. 结合RNA：在一定的温度和时间下，RNA与磁性珠子表面的羧基发生结合，形成RNA-磁性珠子复合物。
5. 分离复合物：利用磁性装置将RNA-磁性珠子复合物迅速沉降，然后去除上清液，以实现复合物的分离。
6. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤复合物，去除杂质和残余试剂。
7. 释放RNA：将洗涤后的复合物加入洗脱缓冲液，使RNA从磁性珠子上释放出来。
8. 收集RNA：将释放的RNA收集下来，即可用于后续的实验操作。
三、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的优势1. 高效性：磁珠法能够在较短的时间内提取高纯度的RNA，适用于大规模样品的处理。
2. 纯度高：该方法能够有效去除DNA、蛋白质和其他杂质，获得高纯度的RNA。
3. 灵敏度高：磁珠法能够提取低浓度的RNA，适用于少量样品和低表达基因的研究。
4. 操作简便：该方法操作简单，不需要复杂的仪器设备，适用于实验室内各种规模的科研工作。
5. 可靠性强：磁珠法提取的RNA具有较好的稳定性和可靠性，适合多种分子生物学实验的需求。
四、磁珠法动物组织总RNA提取试剂在科研工作中的应用磁珠法动物组织总RNA提取试剂在生物医学研究中广泛应用。
总rna的提取方法
总rna的提取方法
总RNA（total RNA）是指从细胞或组织中提取出来的包含所有类型的RNA的混合物。
下面是一种常见的总RNA提取方法：
1. 细胞/组织样品准备：收集足够数量的细胞或组织样品，并将其保存在适当的缓冲液中（如RIPA缓冲液）。
2. 细胞破碎：将细胞样品经过离心等步骤，去除缓冲液，然后加入细胞破裂缓冲液（常见的破裂缓冲液成分包括TRIzol、RLT缓冲液等），使用搅拌器或超声波进行细胞破碎。
3. RNA提取：加入氯仿或类似的有机物，进行混匀，离心，使得混合液分为上清液（含有DNA和RNA）和有机相（含有脂质和蛋白质）。
4. 上清液沉淀：将上清液转移至新的管中，加入同等体积的异丙醇，轻轻混匀，离心15分钟以使RNA沉淀。
5. RNA洗涤：轻轻倒掉上清液，用70%乙醇洗涤RNA沉淀，再次离心。
6. RNA溶解：将RNA沉淀干燥，加入适当的RNase-free水溶解RNA。
7. RNA质量检测：使用比色法或荧光法测定RNA浓度和纯度（如比例计算
A260/A280）。
这些步骤是总RNA提取的一般流程，具体的操作步骤可能会因实验目的、样品类型和提取试剂盒等因素而有所不同。
同时，为了确保RNA的完整性和减少污染，实验操作中还应遵循严格的无RNase和无DNA污染的条件。
动物组织中总RNA的提取课件
分溶解RNA。将所得RNA溶液置于-70
度保存待用
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(二).鉴定（1.5%琼脂糖电泳鉴定）
操作
1、制胶：1.5%琼脂糖加热溶解冷到
60℃加EB后倒入制胶板中，待凝胶固化
2、加样：15ulRNA提取液+3ul loading buffer
3、电泳80-120v,30分钟
4、紫外灯下观察结果
纤维素柱上，在低盐浓度或蒸馏水中， mRNA可被洗下，经过两次oligo(dT) 纤维 素柱，可得到较纯的mRNA在构建cDNA文 库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模 板。
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3.原理
破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗 涤RNA→溶解RNA→鉴定RNA → 保存 RNA
1、 破碎组织:可以用盐酸胍、异硫氰酸 胍、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入 β-ME可以抑制RNA酶活性
10min
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3.吸取上层水相转移至干净的eppendorf 管中,加入等体积异丙醇,混匀,室温放置 20min
4. 12000rpm离心10min,弃上清
5.加入1ml 75%乙醇洗涤沉淀. 12000rpm离心3min,弃上清,室温干燥5-
10min
6.加入30-50ulRNase-free ddH2O,充
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三.注意事项
防止RNA酶的污染
1、 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干 烤6hr或更长时间。
2、 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗。 3、 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水 冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然 后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。
组织及细胞总RNA的提取
组织RNA的提取
1）组织切成小块后立即放入液氮中速冻，可于-70℃低温冰箱或液氮中保存待用。
3）室温放置匀浆混合物5分钟，按每1mlTRIZOL加入0.2ml的比例加入三氯甲烷，剧烈混合30s后，室温放置2-3分钟。
4）4℃12，000 rpm离心样品10分钟，可见分层。
将上层无色水相转移至一新的离心管中，每1mlTRIZOL提取的样品中大约可吸出0.5ml水相。
!!! 若蛋白较多，可用等体积酚、氯仿再抽提一次水相。
5）在吸取的水相中加入0.5ml异丙醇，混合均匀，室温静置10分钟。
或-20 1h 6）4℃12，000 rpm离心样品10分钟，可见少量RNA沉淀。
7）弃上清，用1ml 75%的乙醇洗涤沉淀两次。
然后4℃7，12000rpm离心沉淀3-5分钟，弃上清并尽可能地去除残留在管壁上的液体。
8）空气中干燥RNA沉淀5-10分钟，以适量DEPC水（20－30μl）溶解RNA 沉淀。
9）取1μl 进行常规电泳（1％Agrose，洁净梳子，新换电泳液），观察RNA 的质量（28S :18S = 2:1）。
注意事项：
玻璃器皿需干烤，180度10小时或250度 5 小时。
枪头、离心管需经过DEPC处理，并高压消毒。
DEPC处理方法：将1ml DEPC加到1L水中，DEPC为油珠状，37度左右晃动一天即可溶。
用此水浸泡处理各种物品，此水经高压消毒后可用于溶解RNA或者用于RT反应。
DEPC对很多种酶有灭活作用，经高压消毒后失活。
不同组织总rna提取
不同组织总rna提取
总RNA是一种包含所有转录本的RNA样品，对于许多生物学研究非常重要。
不同组织中的总RNA提取方法可能略有不同，以下是一些常见的总RNA提取方法：
1. 经典酚/氯仿法：该方法适用于多种组织，包括动物和植物组织。
它利用酚和氯仿的不同溶解度将RNA从DNA和蛋白质中提取出来。
它需要耗时且冗长的样品制备步骤，但可以获得高质量的RNA。
2. Trizol法：该方法是一种常用的RNA提取方法，适用于多种组织和细胞类型。
它使用一种酚-胍-氯仿混合物将RNA从细胞和组织中提取出来。
这种方法比经典酚/氯仿法更快，也可以获得高质量的RNA。
3. 氯化锂法：该方法适用于小型样品和细胞类型，例如酵母细胞。
它使用氯化锂和酒精的不同溶解度来提取RNA。
这种方法需要较短的制备时间，但可能会影响RNA的质量。
4. 柱式RNA提取法：该方法使用酚/氯仿或Trizol提取RNA，
并通过硅胶柱纯化步骤来去除杂质。
这种方法可以获得高质量的RNA，并且适用于各种组织类型。
总之，不同组织中的总RNA提取方法略有不同，但通常都可以使用上述方法之一。
选择合适的方法取决于实验的具体需求和样品类型。
- 1 -。
总RNA提取的原理步骤
总RNA提取的原理步骤
1.细胞破碎：首先需要破坏细胞膜以释放细胞内的RNA。
这可以通过
物理方法（如机械破碎或超声波破碎）或化学方法（如细胞裂解酶或去涂
膜剂）来实现。
2. 去除DNA：细胞内还存在DNA，因此需要使用RNase-free DNase
对DNA进行降解，以避免后续的RNA提取过程中DNA的污染。
3.分离RNA：接下来需要将RNA与其他细胞组分分离。
这可以通过加
入异丙醇或酚/氯仿混合物等有机溶剂，使RNA以水相形式存在并与有机
相相分离。
4.沉淀RNA：将有机相中的RNA沉淀下来，可以通过离心或使用醇沉
淀法实现。
有机相中的RNA会以颗粒状沉积于管壁上。
5. 洗涤和溶解：沉淀下来的RNA还会残留有一些污染物，因此需要
进行洗涤以去除这些污染物。
通常使用乙醇洗涤来去除盐和其他杂质。
最后，RNA可以通过溶解于适当的缓冲液中，如TE缓冲液或RNase-free水。
6.RNA质量检测：为了评估RNA的质量和纯度，一般会使用紫外吸收
光谱仪测定RNA的吸光度比值（A260/A280），以确定是否含有污染物。
总RNA提取的效率和纯度取决于多种因素，包括样本类型、细胞破碎
方法、RNase的去除和混合物分离的效果等。
因此，在总RNA提取过程中，需要注意严格控制废液的处理、采用无RNase酶的耗材和试剂、严格遵循
操作规程等。
总体而言，总RNA提取是从细胞或组织样本中提取总碱基为基础的RNA混合物的过程，它为后续的转录组学研究、基因表达分析等提供了重要的基础。
总RNA提取实验原理
总RNA提取实验原理、步骤和问题解答Trizol 试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。
它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，裂解细胞并释放出RNA,酸性条件使RNA与DNA分离, 加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。
RNA存在于水样层中。
收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。
在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。
乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。
共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织，各种样品最大使用量( 1ml Trizol )，动物组织( 50mg) ，植物组织(100 mg) ，丝状真菌( 100mg) ，动物细胞(5 ×106～1×107) ，酵母(1 ×107) 。
TRIZOL试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。
例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb 和15 kb 之间不连续的高分子量条带， ( mRNA和hnRNA成分) 两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb (28S) 和~2 kb (18S) ，低分子量RNA介于0.1 和0.3 kb 之间(tRNA, 5S) 。
当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8 。
[ 实验用品]【实验耗材】1、移液枪：1ml、200μl 、20μl 、10μl 、2μl 。
酒精擦拭，头部重点，紫外线照射。
2、吸头：1ml、200μl 、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml 吸头的一个，放置20μl 吸头的一个5、EP管：1.5ml 、0.2ml 、100μl6、试剂瓶：2个60ml 的棕色广口试剂瓶。
青霉素小瓶(分装无水乙醇，高压的DEPC水，－20°C保存)。
7、量筒：50ml、250ml、500ml8、容量250ml、500ml、1000ml9、试管架：5ml、1.5ml 、20μl10、盐水瓶：250ml、500ml 各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水11、铝制饭盒：4个12、塑料小饭盒：1个13、大瓷缸：2个14、锡泊纸：一卷15、卷纸：2 卷16、三角烧瓶：带盖，稍大(融琼脂糖)【实验仪器】天平、振荡器、高速离心机、0.5 ～10ul 、20～200ul 、100～1000ul 加样器。
不同组织总rna提取
不同组织总rna提取
本文介绍总RNA的提取方法，适用于不同的组织样本。
总RNA提取步骤如下：
1. 样品处理：将组织样品切碎并加入荷叶酸/酶混合液，破坏细胞结构，使总RNA易于提取。
2. 离心：将样品离心，得到上清液。
3. 加入异丙醇：将异丙醇加入样品中，使得RNA分子成为可见的粘稠团块，方便后续的提取。
4. 待沉淀：将样品放置在室温下，待RNA沉淀至底部。
5. 去除上清液：将上清液从样品中取出。
6. 加入乙醇：加入乙醇，使RNA固定在底部，最终形成白色固体。
7. 洗涤：用70%的乙醇洗涤RNA，去除杂质和其他污染物。
8. 干燥：将RNA干燥至完全失去水分。
9. 重溶解：将RNA重新溶解在板管中的去离子水中，可用于后续实验。
总RNA提取方法的步骤比较繁琐，但在实验过程中一定要注意严格控制样品温度和处理时间，以避免RNA的降解和污染。
动物组织总RNA提取实验操作
常规动物组织总RNA提取
(Trizol法)
实验操作流程
1摘要
本标准操作规程适用于一般动物组织的总RNA提取，一般情况下能得到高质量的总RNA。
2提取步骤
a)用液氮预冷研钵，组织样品放入加有液氮的研钵中，在液氮下把组织样品充分研磨成
粉末。
b)把样品粉末转入到装有TRIzol裂解液的2.0mL EP管中，（每mL裂解液可加50mg组
织样品）剧烈震荡，充分混匀，平放室温静置5-10min。
c)10000rpm，4℃离心5min。
d)吸取上清液至新的2.0mL EP管中，每毫升裂解液加入200μL氯仿/异戊醇，剧烈颠倒
混匀。
e)10000rpm，4℃离心10min。
f)吸取上清液至新的1.5mL离心管，注意不要吸到中间蛋白层，加入等上清液体积的异
丙醇，轻轻颠倒混匀。
g)放入-20℃冰箱沉淀1h。
h)13600rpm，4℃离心20min。
i) 吸弃上清，加入1mL 75%乙醇，用移液器吹洗沉淀。
j) 10000rpm，4℃离心3min，吸弃上清，短暂离心，吸去残留液体，晾干3-5min。
k)用30-100μL DEPC水或者RNase-free水溶解沉淀。
3设备与试剂
3.1设备
3.2试剂。
动物组织细胞总RNA的提取实验原理及步骤
实验十一动物组织细胞总RNA的提取一、实验原理RNA是基因表达的中间产物，存在于细胞质与核中。
对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。
获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的，如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上取决于RNA的质量。
由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形式存在，所以在提取RNA时要利用高浓度的蛋白质变性剂，迅速破坏细胞结构，使核蛋白与RNA分离，释放出RNA。
再通过酚、氯仿等有机溶剂处理、离心，使RNA与其他细胞组分分离，得到纯化的总RNA。
在提取的过程中要抑制内源和外源的RNase 活性，保护RNA分子不被降解。
因此提取必须在无RNase的环境中进行。
可使用RNase抑制剂，如DEPC是RNase的强抑制剂，常用来抑制外源RNase活性。
提取缓冲液中一般含SDS、酚、氯仿、胍盐等蛋白质变性剂，也能抑制RNase活性。
并有助于除去非核酸成分。
本实验介绍异硫氰酸胍法和TRIzol法提取动物组织总RNA并通过电泳进行鉴定。
二、仪器和试剂1.仪器：超净工作台、高速冷冻离心机、电泳仪、紫外分光光度计、凝胶成像系统、振荡器、移液器、吸头、Ep管、玻璃匀浆器、试管、玻璃器皿洗净后置180℃烘烤8h；不耐高温的器皿（如塑料制品）应用0.1% DEPC浸泡2h,70～80℃烘烤干燥，120℃高压20min，再70～80℃烘烤干燥方可使用。
2.试剂：(1)细胞裂解液：异硫氰酸胍 4mol/L柠檬酸钠（pH7.0） 25mmol/L十二烷基肌氨酸钠 0.5%β-巯基乙醇 0.1mol/L称取柠檬酸钠0.64g，十二烷基肌氨酸钠0.415g，吸取β-巯基乙醇0.7ml，用无Rnase的蒸馏水溶解，定容至50ml。
然后取以上配制的溶液(CBS液)33ml，异硫氰酸胍 25g,混合，完全溶解后4℃保存备用。
(2)10×凝胶缓冲液：吗啉代丙璜酸（MOPS）（pH7.0） 200mmol/LNaAc 100mmol/LEDTA(pH 8.0) 10mmol/L过滤除菌后避光保存。
常见提取总DNARNA的方法与注意事项
常见提取总DNARNA的方法与注意事项提取总DNA和总RNA是分子生物学实验中常见的步骤之一、这些提取方法非常重要，因为它们为后续的分子生物学实验提供了所需的DNA和RNA样品。
下面是一些常见的总DNA和总RNA提取方法以及需要注意的事项。
常见的总DNA提取方法：1. 酚/氯仿提取法（Phenol/Chloroform Extraction）：这是一种经典的总DNA提取方法。
简言之，样品首先通过细胞壁的破碎，并使用蛋白酶和溶液进行蛋白酶消化，然后通过酚酊提取DNA，接着使用氯仿酊沉淀DNA。
注意事项：此方法需要小心使用酚和氯仿，因为它们是有毒的。
同时，操作过程中要注意避免DNA污染，并保持无菌环境。
2. 盐提取法（Salt Precipitation）：这是一种简单且经济高效的总DNA提取方法。
在此方法中，样品首先通过细胞壁的破碎，并且添加了表面活性剂SDS和蛋白酶，然后通过添加高盐浓度的溶液，使DNA沉淀。
最后，使用乙醇洗涤和溶解DNA。
注意事项：在此方法中，需要注意加入足够的高盐浓度缓冲溶液，以确保DNA的完全沉淀。
此外，尽量避免使用SDS和蛋白酶过量，以免残留物干扰后续试验。
3. 硅胶修复法（Silica Method）：这是一种常见且高纯度的总DNA提取方法。
首先，样品通过细胞壁的破裂，然后将DNA结合到硅胶膜上。
接着，通过洗涤步骤去除杂质，最后使用洗脱缓冲液去除DNA。
注意事项：在进行硅胶修复时，要避免DNA的过度结合，以免影响后续的DNA洗涤和洗脱。
此外，使用高质量的硅胶膜可以提高DNA的纯度。
常见的总RNA提取方法：1. 酚/氯仿提取法（Phenol/Chloroform Extraction）：这种方法不仅适用于总DNA提取，也适用于总RNA提取。
与总DNA提取类似，总RNA样品也先通过细胞壁破裂，并使用酚酊和氯仿酊消除蛋白质和残余的DNA，最后通过洗涤步骤提取RNA。
注意事项：和总DNA提取相似，酚和氯仿也是有毒的，操作时要小心。
Agilent实验原理及步骤
Agilent 实验原理及步骤一、总RNA抽提（TRIzol法）1.每2×107细胞加入1 ml Trizol，在旋涡震荡器上混匀；对于组织样品，每100mg组织可以加入1 ml Trizol，用液氮研磨或采用电动匀浆器充分打碎组织块。
2.加入约1/5体积的氯仿，上下颠倒充分混匀1 分钟左右，室温下静置5 分钟。
3.4℃，12,000 rpm 离心15 分钟后小心取出上清液，将上清夜转入新的1.5 ml离心管，加入等体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温静置5 分钟。
（15ml离心管用7,500rpm离心20min）4.4℃，12000 rpm离心10 分钟后，去上清，向沉淀中加入2/5体积的70% 乙醇， 4℃，12000 rpm离心洗涤沉淀15 分钟。
（15ml离心管用7,500rpm离心20min）5.去上清，沉淀室温晾干后加入适量无RNA酶的水充分溶解沉淀，测定OD260和OD280值。
(optional)对于从组织样本抽提的总 RNA，为了更好的去除基因组DNA 的污染，可以采用无RNA 酶的DNA酶I 处理，从而提高样品纯度。
二、总RNA质量检测（琼脂糖电泳以及Lab-on-a-chip电泳检测）（一）琼脂糖胶电泳1、配置用DEPC处理的电泳缓冲液50⨯TAE，高压灭菌后待用。
2、使用电泳槽前用3%H2O2浸泡15min，然后用DEPC处理的水冲洗，倒入适量1⨯TAE电泳缓冲液。
3、称取适量琼脂糖，加入1⨯TAE电泳缓冲液，制备1%的胶（注意使用专用的溶液和相关设备，避免引入外源RNA酶）。
4、用专用6⨯Loading buffer做指示剂，取10µl上样电泳（电压100伏）15min。
5、关闭电源，取出电泳胶，在凝胶成像仪上观测、拍照，保存图像。
6、评价总 RNA或 mRNA质量（见FAQ）。
通过目测28S和18S的亮度比例可以初步评价总RNA的质量。
一般认为28S:18S ≥2可以初步判定总RNA 质量较好，如图1所示。
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胎盘组织中总RNA的提取
1:将适量的胎盘组织放入研钵中，加入液氮后研磨至粉末，移入玻璃匀浆器中后，Trizol试剂2ml左右，室温放置5min。
12000rpm、4℃、离心10min。
将上清移入另一离心管中。
2：加入200μl氯仿，小心的盖上离心管，剧烈地振荡30sec混匀，室温放置5min.
3: 12000rpm、4℃、离心样本10min。
此时混合物分成三部分：底层为苯酚-氯仿相层，中间层和上层水相层。
RNA完全存在于水相中，收集上清，用氯仿重复一次，离心15min。
4：RNA的沉淀。
把小于80%的水相转移至一新的离心管中，并弃去下面的有机相（小心避免吸到中间层）。
往水相中加入等体积的异丙醇，混匀，室温下放置样本5min，12000rpm、4℃、离心10min。
5：弃上清，防止RNA沉淀丢失。
6：洗涤RNA。
用1mlDEPC水配制的70%的乙醇洗涤二次。
涡旋混匀样本，7500g、4℃、离心10min。
7：RNA沉淀的溶解。
小心的吸走乙醇，短暂地在室温下置2-5min让RNA风干。
不要用离心干燥装置或真空干燥装置，因为过度干燥会导致很难用水重新溶解RNA。
稍微干燥后，用30μl DEPC水后放入60℃水浴锅内温预10min，并存于-70℃。