胎盘组织中总RNA的提取
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胎盘组织中总RNA的提取
1:将适量的胎盘组织放入研钵中,加入液氮后研磨至粉末,移入玻璃匀浆器中后,Trizol试剂2ml左右,室温放置5min。12000rpm、4℃、离心10min。将上清移入另一离心管中。
2:加入200μl氯仿,小心的盖上离心管,剧烈地振荡30sec混匀,室温放置5min.
3: 12000rpm、4℃、离心样本10min。此时混合物分成三部分:底层为苯酚-氯仿相层,中间层和上层水相层。RNA完全存在于水相中,收集上清,用氯仿重复一次,离心15min。
4:RNA的沉淀。把小于80%的水相转移至一新的离心管中,并弃去下面的有机相(小心避免吸到中间层)。往水相中加入等体积的异丙醇,混匀,室温下放置样本5min,12000rpm、4℃、离心10min。
5:弃上清,防止RNA沉淀丢失。
6:洗涤RNA。用1mlDEPC水配制的70%的乙醇洗涤二次。涡旋混匀样本,7500g、4℃、离心10min。
7:RNA沉淀的溶解。小心的吸走乙醇,短暂地在室温下置2-5min让RNA风干。不要用离心干燥装置或真空干燥装置,因为过度干燥会导致很难用水重新溶解RNA。稍微干燥后,用30μl DEPC水后放入60℃水浴锅内温预10min,并存于-70℃。