鲢鱼肌肉脂肪酸分离方法效果比较及组成特征分析(精)

Ｃ１８Ｈ∞０２
Ｃ１８Ｈ加２
ＣｌｓＨ３６０２
Ｈｅｐｔａｄｅｃａｎｏｉｅ ａｃｉｄ，１６－ｍｅｔｈｙｌ－，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
９，１２－Ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ（Ｚ＇ｚ）一，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ １ ｌ－Ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏｉｅ ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ，㈤一
Ｃ１９Ｈ弭０２
鱼油色谱图１～３显示所测样品峰响应值依次
分子式分－－Ｆ２誓喜募霍毒嚣篇
Ｄｏｄｅｃａｎｏｉｅ ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
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Ｄｏｄｅｅａｎｅ，１，１－ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ
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Ｔｒｉｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
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Ｃ１３Ｈ２６０２
口
研完与鲒‘墨
《水产养殖））２００８年第４期
清液相，蒸发至溶液清亮，将脂类１０ ｍＬ容量瓶定 容后用于分析。 １．２．２脂肪酸甲酯化处理酸法甲酯化：取鱼油粗 品（２０～５０ ＩｘＬ）力［ＩＡ．１％硫酸一甲醇（ＶⅣ）２ ｍＬ，７０ ℃水浴加热６０ ｍｉｎ，加２ ｍＬ正己烷，混匀，静置分 层，收集上清液，即为待测样品。
Ｍｅｔｈｙｌ∞－５，１ ｌ，１４，１７－－ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏａｔｅ
Ｃ笠Ｈ扣２ Ｃ２ｌＨ棚２ Ｃ２ＩＨ加２ Ｃ２ｌＨ棚２
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Ｃ２ｌＨ４２０２
不同方法提取鱼油的鲢鱼脂肪酸，其总离子流
《水产养殖）２００８年第４期
研究与鲒硅
图ｌ超声波法提取鱼油总离子流图
图３氯仿一甲醇法提取鱼油总离子流图
表３三种方法提取鱼油所测脂肪酸成分含量分析
序列号
脂肪酸种类
图２索氏提取法提取鱼油总离子流图
图如（图１～３）。同时通过ＮＩＳＴ０２．Ｌ谱图库，参考相 关文献进行谱图解析，确认鱼油中各个脂肪酸化学 结构，并用峰面积归一化法进行定量分析，求得三 种不同方法检测结果中各脂肪酸在总脂肪酸中的 相对百分含量及其差异（见表３）。
本研究以鲢鱼为研究对象，通过比较鱼油的不 同提取方法（超声波萃取法，索氏提取法，氯仿一甲
醇法）和不同甲酯化方法（酸法甲酯化和碱法甲酯 化），旨在优化鱼油提取工艺。同时，针对采用上述 方法获得的结果对鲢鱼肌肉脂肪酸组成特征特性和 营养价值进行综合分析评价，旨在为鱼类水产品营 养素的开发和应用提供理论依据和技术参数。 １材料和方法 １．１材料与试剂
ａｃ岫ｅｔｈｙｌ ｅ８钯Ｌ
２５ ４ｆ…ａＵ，国７，一１，０，１３，１６＇１９一Ｄｏｃｏｓａｌｌｅｘａｅｎ。ｉｃ
ｃ。胡一棚一。２
２６
百度文库
Ｔｏｔａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ
２１４ ２３０ ２２８ ２４０ ２４２ ２５６ ２７０ ２６８ ２７０ ２８２ ２８２ ２７８ ２８４ ２８４ ２９８ ２９４ ２９６ ２９８ ３３２ ３１６ ３２０ ３１８ ３２４ ３２６
表２鲢鱼脂肪酸甲酯化条件比较
由表２显示：３种甲酯化方法中所测定的ＳＦＡ 量所占总脂肪酸含量：酸法含量最高达３５．０％，ＢＦ３ 法含量次之为３４．６５％，碱法含量最低为２８．７３％； ＭＵＦＡ量占总脂肪酸含量：碱法含量为１９．８８％，ＢＦ， 法含量为１７．２１％，酸法含量为１７．０５％；ＰＵＦＡ量占 总脂肪酸含量：碱法测定量为１９．５８％，酸法测定量 为１９．１％，ＢＦ３法测定量为１４．３３％。ＰＵＦＡ含量是评 定脂肪酸价值的一个重要指标，此组数据可知碱法 甲酯化所测定出的ＰＵＦＡ含量最高，显示了碱法分 离效果显著优于酸法和ＢＦｌ法。 ２．３鲢鱼肌肉脂肪酸组分和含量检测
Ｃ。９Ｈ如２ Ｃ１９Ｈ扣２
Ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
Ｃ。９ＨⅪ０２
５，８，１ ｌ，１４－Ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ Ｍｅｔｈｙｌ ｅｉｅｏｓａ－５，８，１ １，１４，１７－ｐｅｎｔａｅｎｏａｔｅ ７，１０，１３－Ｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
碱法甲酯化：取鱼油粗品（２０～５０恤Ｌ）加入２ ｍＬ石油醚和苯混合溶剂（１：ｌ ｖ厂ｖ），溶解，加２ ｍＬ
０．４ ｍｏ儿氢氧化钾一甲醇溶液，混匀，室温静置３０
ｍｉｎ。ｌ ｈ，分层后取上清液，用于气相色谱分析。 三氟化硼一甲醇法甲酯化：取鱼油粗品（２０。５０
山）加３ ｍＬ氢氧化钠一甲醇溶液，充氮气混匀，６５℃ 水浴２０ ｍｉｎ，冷却至室温，加４ ｍＬ三氟化硼一甲醇 混合溶液，６５℃水浴５ ｍｉｎ，冷却至室温，加５ ｍＬ 氯化钠饱和的正己烷，振荡１ ｍｉｎ，静置分层，取上 清液，用于气相色谱分析。 １．２．３ ＧＣ—ＭＳ测定条件程序升温条件：初温１２０ ｏＣ；以６℃／ｍｉｎ升至２１０℃；以３ ｏＣ／ｍｉｎ升至２４０ ｏＣ；再以６ ｏＣ／ｍｉｎ升至２６０℃，保持５ ｍｉｎ。分流／不 分流进样口：温度２７０ ｏＣ，分流比１００：１，进样量 为０．５。１仙Ｌ。载气：高纯Ｈｅ（９９．９９９％），流量Ｏ．８ ｍＬ／ｍｉｎ。质谱条件：屯离方式ＥＩ。离子源温度：１５０ ℃。电子能量：７０ ｅｖ。倍增电压：１．１ ｋＶ。扫描质量
隆
鱼油中含有丰富的‘Ｉ，一３不饱和脂肪酸，如二十 碳五烯酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ＥＰＡ）、二十二碳六 烯酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ＤＨＡ），对促进人类健康 有多种重要功能㈣。研究证实，ＤＨＡ能直接影响人 类大脑功能，促进学习记忆能力；同时对多种疾病 （如动脉粥样硬化和某些肿瘤）具有预防和治疗功效 ０－４１１。ＥＰＡ对体内合成前列腺素和凝血烷等激素具有 重要作用，这类激素直接参与体内渗透压调节（ｏｓ— ｍｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）。心血管功能和神经发育等…习。
索氏法提取鱼油：取样品５．Ｏ ｇ，滤纸封好，放入 索氏提取器提取筒内，８０℃水浴用石油醚回流提 取２－４ ｈ，回收溶剂蒸发石油醚，室温静置后用于分 析。
氯仿一甲醇法提取鱼油：取样品５．０ ｇ置广口 瓶，加５０ ｍＬ含有１０ ｍｇ，Ｌ ＢＨＴ氯仿一甲醇混合液
（２：１ Ｗ），振荡，静置浸提２４ ｈ，分液漏斗过滤，
采用超声波萃取法、索氏提取法和氯仿一甲醇 法３种方法从鲢鱼肌肉中提取鱼油。采用碱法甲酯 化，经气相色谱分析，将检测鱼油中脂肪酸中饱和 脂肪酸（ＳＥＡ）、单不饱和脂肪酸（ＭＵＦＡ）、多不饱和 脂肪酸（ＰＵＦＡ）含量见表１。３种方法饱和脂肪酸与 不饱和脂肪酸质量含量比值依次为１．４６＞１．２８＞
０．９２。
范围（ｍ／ｚ１：４０。４２５锄ｕ，扫描周期：０．２ ｓ。接口温
度：２５０ ｏＣ。 １．２．４脂肪酸定性与定量分析通过质谱工作站 检索ＮＩＳＴ０２质谱库进行定性分析，确定鲢鱼肌肉 脂肪酸总离子流图中各色谱峰归属。然后采用峰面 积归一化法进行定量分析，求得各个脂肪酸在总脂 肪酸中的相对百分含量，每一样品重复分析３次， 所获结果取其平均值。 ２实验结果 ２．１鱼油脂肪酸提取方法比较
Ｃ１４Ｈ加２
Ｃ１４Ｈ≈０２ Ｃ１丑ａ０２
５
Ｍｅｔｈｙｌ ｔｅｔｒａｄｅｅａｎｏａｔｅ
６
Ｍｅｔｈｙｌ ９－ｍｅｔｈｙｈｅｔｒａｄｅｃａｎｏａｔｅ
７
Ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
Ｃ１５Ｈ３００２
Ｃ－６Ｈ棚２ Ｃ１７Ｈ如２
８
９－Ｈｅｘａｄｅｃｅｎｏｉｅ ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
ｊ饱和脂肪酸，８种单不饱和脂肪酸和１０种多不饱和脂肪酸。３种分离方法间存在明显分离效果差异，所获得不饱和脂肪酸含量占．洮
拍旨肪酸含量分别为４１．３９％、３６．１５０／＇ｏ和３３＿５５％。
侥
ｊ 关键词：脂肪酸；脂肪分离；超声波提取
喀
： 中图分类号：￥９１７
文献标识码：Ａ 文章编号：１００４－２０９１（２００８）０４－ｏｏｏｌ一０６
１０ ｍＬ氯仿一甲醇混合液（２：ｌ ＶⅣ）洗涤，加入１２ ｍＬ生理盐水（０．８％），振荡，静置澄清，收集下层澄
资助项目：国家自然科学基金面上项目（３０７７１６４４，３０６４００１５）；长沙市科技局重点项目（Ｋ０５１１２７—７２）． 作者简介：符贵红（１９８２一），女，主要从事鱼类分子发育生物学研究．
体重５００ ｇ左右鲜活鲢鱼购自水产品市场，经 实验室暂养１ ｄ，鳃部放血，去鳞片和表皮，取背部 肌肉切碎混合，以５一１０ ｇ为１个分析样。气相色谱 仪为日本岛津ＧＣ一２０１０型，ＤＢ一５毛细管色谱柱 （３０ ｍｘ０．５３ ｍｍｘｌ仙ｍ）。石油醚、正己烷、甲醇、氯 仿、氢氧化钾均为分析纯。 １．２方法 １．２．１鲢鱼脂肪酸提取超声波萃取法提取鱼油： 取样品５．０ ｇ，石油醚浸泡４８ ｈ，振荡，于３０ ｒａｉｎ、２０ ｍｉｎ、２０ ｍｉｎ抽提，混合提取液，５ ０００ ｄｍｉｎ，离心５ ｍｉｎ，取上清液，蒸发石油醚，室温静置４ ｈ后用于分 析。
由表ｌ显示：３种鱼油提取方法中所测定的 ＳＦＡ含量占总脂肪酸含量：氯仿一甲醇法量最高为 ３６．２３％。超声波萃取法其次为２８．３７％，索氏提取法
７口
表１三种方法提取于脂肪酸效果比较
含量最低为２８．１６％；ＭＵＦＡ量占总脂肪酸含量：超 声波萃取法为１７．２５％，索氏提取法含量为１７．０５ ％，氯仿一甲醇法１５．５７％；ＰＵＦＡ量占总脂肪酸含量： 超声波萃取法为２４．１４％，索氏提取法含量为 １７．０５％，氯仿一甲醇法１５．５７％。ＰＵＦＡ含量是评定脂’ 肪酸价值的一个重要指标，此组数据可知超声波萃 取法所测定出的ＰＵＦＡ含量最高，显示了超声波萃 取法分离效果显著优于其它两种方法。 ２．２鱼油脂肪酸甲酯化方法研究
《水产养殖）ｚｏｏｓ年第４期
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符贵红，，褚武英ｔ，成 嘉ｔ，刘 臻－，刘 芳－，肖调义ｚ，张建社，
Ｃ１７Ｈ３２０２
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６－Ｈｅｘａｄｅｃｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，７－ｍｅｔｈｙｌ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ㈤
Ｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅｏｃｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ，２－ｈｅｘｙｌ－，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
Ｃ１７Ｈ∞０２
Ｃ１８Ｈ加２ Ｃ１８Ｈ如２
５，８，１ １－Ｈｅｐｔａｄｅｃａｔｒｉｅｎｏｉｅ ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ Ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｅ ａｃｉｄ，１４－ｍｅｔｈｙｌ一，ｍｅｔｈｙ Ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ，１５一ｍｅｔｈｙｌ一，ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ
鲢鱼富含人类必须氨基酸、多聚不饱和脂肪酸 以及其他矿物元素，一直以来为人类重要的食物和 营养源。随着人们对健康与营养水平要求提高，从 鱼类中摄取多聚不饱和脂肪酸已日益受到关注。为 提高鱼类脂肪酸分离提取以及做为功能食品进行 开发生产，掌握和优化鱼类脂肪酸分离提取方法显 得十分重要嗍。目前，鱼油脂肪酸不同提取方法在鱼 类中已经被广泛应用，如陈欣旧采取超声波法提取 鲤鱼鱼油并从中分离并鉴定出２０种脂肪酸；姜波 等Ｉ·６１用超声波法提取鲫鱼鱼油脂肪酸进行了分析； 姚婷等旧采用氯仿一甲醇法提取海水鱼和淡水鱼鱼 油进行不饱和脂肪酸含量研究，证实鱼油脂肪酸成 分含量受到鱼品种不同而具差异性；罗永康等㈣对 ７种淡水鱼肌肉和内脏脂肪酸组成进行分析，结果 显示鲢鱼肌肉脂肪酸组成中多烯酸含量高于鲤鱼， 鲫鱼，草鱼，青鱼等淡水鱼类，而单烯酸含量低于其 它几种鱼。
３种甲酯化方法各有其优缺点，且适用范围各 不相同，不同文献和参考资料中使用酸碱浓度、ＢＦ， 浓度和反应ｕＣｆ日３长短都具有较大差异【ｌ研。将其条件 优化后，不同方法甲酯化所测脂肪酸中饱和脂肪 酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量差异如 表２所示。比较碱法、酸法、三氟化硼甲酯（ＢＦ３）化 样品测定结果，其不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸质量 含量比值依次为：１．３７＞１．０３＞Ｏ．９１。
Ｋ
：
（１．长沙大学生物工程与环境科学系，湖南长沙４１０００３；２．湖南农业大学动物科技学院，湖南长沙４１０００８）
瞧
：
Ｋ
ｊ 摘要：采用３种不同方法，即超声波提取法、索氏提取法和氯仿一甲醇法，从鲢鱼肌肉中提取鱼油，继而进行酸性和碱性甲啦
批，经气相色谱／质谱联用技术，对其脂肪酸组成特征进行了定性和定量分析。结果表明，鲢鱼肌肉含有２５种脂肪酸，其中包括７稚