实验七：土壤无机磷的测定

实验七：土壤无机磷的测定

一、实验方法及目的

采用SMT法测定土壤无机磷；掌握土壤无机磷的测定方法及分光光度法。

二、实验原理

1）样品的前处理：用1mol/L的HCL溶液将土壤中无机磷转移到提取液中。

2）提取液中正磷酸盐的测定：

在酸性条件下，试液中的P（正磷酸盐）与钼酸形成配合物-磷钼杂多酸（又叫磷钼酸杂聚配合物）。H3PO4 + 12H2MoO4 = H3P(Mo3O10)4 + 12H2O P多时呈黄色，少时无色在一定酸度下，加入还原剂后，杂多酸中的Mo 被还原，产生特殊兰色（钼兰），其中一部分Mo6+被还原成Mo5+或Mo3+，或Mo3+、Mo5+都有。在钼兰的吸收光谱曲线中有两个吸收峰(660nm或880nm)。测定时可以根据分光光度计的性能选用。我国国标采用700nm波长。

三、实验仪器与药品

1仪器：多用调速振荡器，离心机，分光光度计。

2试剂：

1）1mol•L-1HCl溶液：准确移取83.3ml浓HCl溶于定容至1L；

2）（1+1）硫酸溶液

3）磷标准贮备液（50.0 μg.mL-1）：称取0.2197±0.001g于110℃干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解后转移至1000mL容量瓶中，加入大约800mL水、加5mL1+1硫酸用水稀释至标线并混匀。1.00mL此标准溶液含50.0 μg磷。

4）抗坏血酸（10%）：溶解10g抗坏血酸(C6H8O6)于水中，并稀释至100mL。此溶液贮于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周。如不变色可长时间使用。

5）钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24•4H2O]于100mL水中。溶解0.35g酒石酸锑钾[KSbC4H4O7•½H2O]于100mL水中。在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300mL硫酸(1+1)中，加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。此溶液贮存于棕色试剂瓶中，在冷处可保存二个月。

6）过100目筛土样0.2g。

四、实验步骤

1）土壤干样前处理：称取0.2g土壤样品于50ml离心管中，加入1mol•L-1HCl 溶液20mL，塞紧塞子。在多用调速振荡器上振荡30mim，取出在离心机上以3000r/min的转速离心10mim，得到上清液。如果不能在24h内进行，将上清液储存在冰箱中备用。

2）标准曲线的绘制：

A磷标准使用溶液的配制（含磷2.0μg/mL）：将10.0mL的磷标准溶液(磷标准贮备溶液：含磷50.0μg/mL)转移至250mL容量瓶中，用水稀释至标线并混匀。

B取数支25mI具塞比色管，分别加入磷酸盐标准使用液0、0.5（1μg）、1.00、

3.00、5.00、10.0、15.0ml，加水至25mL

C 显色：向比色管中加入0.5mL10%抗坏血酸溶液，混匀。30s后加1mL钼酸盐溶液充分份昆匀，放置l5min。

D 测量：用10mm比色皿，于700nm波长处，以零浓度溶液为参比，测量吸光度，以其测定的吸光值为纵坐标，相应磷浓度为横坐标，绘制标准曲线。

磷标准溶液吸光度值

3）样品测定

取上清液2ml(使含磷量不超过30μg)加入25mL比色管中，用水稀释至标线。以下按绘制校准曲线的步骤进行显色和测量。减去空白试验的吸光度，并从校准曲线上查出含磷量。

五、实验结果

土壤中无机磷含量（g·kg-1）=C×0.025×（20/V）/m 式中：C——上清液正磷酸盐浓度；V——取上清液体积（ml）；m——土壤质量（g）

结果记录表