土壤无机磷的分级测定

土壤有机磷测定方法
土壤全磷含量约10～1000 g/kg，与土层、质地、发育、利用方式与强度等有关。

土壤磷分为无机磷和有机磷两大部分，根据我国土壤普查资料，一般耕作土壤中，有机磷含量约占全磷量的25%～56%。

土壤有机磷测定，是指土壤有机磷是土壤全磷的重要组成部分，主要是植素、核酸等含磷有机物中的磷。

通常采用间接测定法，主要有烧灼法和浸提法。

烧灼法是用高温（550°C）或低温（250°C）烧灼，使有机磷矿化，然后用酸溶解，酸液中的磷来自有机磷和无机磷两部分；未经灼烧的土壤用同浓度酸浸提，酸液中的磷只来源于无机部分；两者相减即为土壤有机磷的含量。

浸提法先用硫酸再用氢氧化钠浸提出酸溶及碱溶有机和无机磷，减去其中无机磷从而得到有机磷含量。

两种方法均使用钼锑抗比色法测定溶液中的磷。

烧灼法的主要缺点是在烧灼过程中可能改变矿物态磷的溶解度，尤其是在高度风化的土壤中测定结果偏高；而且有机磷含量高时，高温可使部分磷挥发从而引入误差。

浸提法克服了烧灼法不适用于高度风化的热带土壤的缺点，其优点是将总有机磷进一步区分为酸溶性有机磷和碱溶性有机磷，二者的和即为土壤有机磷总量；缺点是浸提不易完全而且有机磷可能水解。

一、方法原理
土壤经550℃灼烧，使有机磷化合物转化为无机态磷，然后与未经灼烧的同一土样，分别用0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液浸提后测定磷量，所得结果的差值即为有机磷。

二、主要仪器
高温电炉、烘箱、分光光度计。

三、试剂
0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液。

取浓H2SO46ml溶解于1000ml水中，标定。

四、操作步骤
称取通过60目的风干土样品1.000g置于15ml瓷坩埚中，在550℃高温电炉内灼烧1h，取出冷却，用0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液100ml将土样洗入200ml容量瓶中。

另外称取 1.000g同一土壤样品，放置在另一个200ml容量瓶中，加入
0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液100ml。

两瓶的溶液摇匀后，分别将瓶塞松放在瓶口上，一起放入40℃烘箱内保温1h。

取出，冷却至室温，加水定容，过滤。

吸取两瓶的滤液各10.00ml（含5~25μgP）分别放入50ml容量瓶中，用水稀释至约30ml，用钼锑抗比色法测定磷。

五、结果计算
分别算出灼烧与未灼烧土壤的含磷量，然后经灼烧的结果减去未灼烧的结果，其差值即为有机磷的含量。

（计算公式同土壤有效磷）
土壤无机磷分级测定方法
在农田土壤中，无机磷是主体，一般占土壤全磷的60%～80%，主要包括土壤中残存的原生含磷矿物、各种次生的无机磷酸盐和磷酸根离子，大致有3种形态: 水溶态、吸附态和矿物态。

以矿物态为主。

土壤水溶态磷是可供植物直接吸收利用的磷，其含量极低，一般只有0.1～1mg/kg，最低甚至只有0.1ug/kg。

它的补给主要依赖于磷酸盐矿物的溶解和吸附固定态磷的释放。

黑土的成土母质多为黄土状沉积物，地表有较高的风化度，土壤偏酸性，存在大量游离氧化铁，很大一部分磷酸铁被氧化铁薄膜包裹成为闭蓄态磷。

因此，黑土无机磷中O-P含量最高。

O-P只有在外界强烈的风化作用下磷素才能释放，而冻融作用没有使O-P释放磷素，相反在增施有效磷的情况下，O-P增加最多。

黑土风化程度较高，因此Fe-P相对较多，而Ca-P相对较少。

冻融作用有利于Al-P的形成，特别是增施有效磷后，促进了更多的活性磷被铝固定，Al-P绝对含量增加明显。

一、方法原理
土壤无机形态磷分级测定方法的基本原理，是利用不同化学浸提剂的的特性，将土壤中各种形态的无机磷酸盐加以逐级分离。

土壤样品首先用1mol/L NH4CI浸提，提出的部分为水溶性磷，断键的和结合松弛的磷。

除新施磷肥的土壤外，在一般自然土壤中，这部分磷量很少，通常不必测定这一级出液中的磷。

第二级用0.5mol/L NH4F浸提，所浸提剂在pH8.2条件下，F-与Al3+形成配合物，与Fe3+的配合能力很弱，这样使Al-P(铝结合的磷酸盐)基本上可以与Fe-P(铁结合的磷酸盐)分离。

第三级用0.1mol/L NaOH浸提，由于Fe-P与NaOH的水解反
应，使Fe-P中的磷酸根转化而释放。

继而用0.3mol/L柠檬酸钠和连二亚硫酸钠溶液浸提OP(闭蓄态磷酸盐)。

这部分磷是被氧化铁胶膜所包蔽，利用连二亚硫酸钠强烈的还原作用，使包蔽的氧化铁还原成亚铁，继而被柠檬酸钠配合，使氧化亚铁包裹不断剥离，而浸提出全部闭蓄态磷。

以上Al-P、Fe-P和O-P的浸提都是在碱性条件下进行的，基性的Ca-P(钙结合的磷酸盐)几乎不被溶解。

此后,土壤再用0.5mol/L H2SO4浸提，在这一强酸性溶液中，Ca-P(包括氟磷灰石)绝大部分被浸提出来。

二、主要仪器
往复振荡机、离心机(100mL离心管，6000r/min)、电动搅拌机、恒温水浴；pH计、分光光度计或比色计。

三、主要试剂
(1)1 mol/L NHCI溶液。

称取NHCl(化学纯)53.3g溶于约800mL水中，稀释至1L。

(2)0.5mol/LNH4F溶液。

称取NH4F(化学纯)18.5g溶于约80mL水中，稀释至990mL，用4mol/LNH4OH调至pH8.2(用pH计测定)，再稀释至1L。

(3)0.1mol/L1NaOH溶液。

称NaOH(化学纯)4.0g溶于约800mL水中，冷却后稀释至1L，标定。

(4)0.30mol/L柠檬酸钠溶液。

称柠檬酸钠(Na3C6H5O2·2H2O，CP)882g溶于约900mL热水中，冷却后稀释至1L。

(5)连二亚硫酸钠(Na2S2O4·2H2O，俗称保险粉)。

极不稳定，易氧化和分解，受潮或露置空气中会失效，注意防湿密封贮存于阴凉处。

(6)0.5mol/L(1/2H2SO4)溶液。

加浓H2SO415mL于约80mnL水中冷却后稀释至LL，标定。

(7)0.5mol/L NaOH溶液。

称NaOH（化学纯）20g溶于约800ml水中，冷却后稀释至1L，标定。

(8)饱和NaCl溶液。

称NaCl(化学纯)400g溶于1L水中，待溶解至饱和后过滤。

(9)三酸混合液。

H2SO4:HClO4:HNO3以1:2:7的体积比混合。

(10)0.8mol/L1HBO3溶液。

称H3BO3(分析纯)49.0g溶于约900mL热水中，冷
却后稀释至1L。

四、操作步骤
(1)Al-P的测定。

称取通过100目的风干土样1.0000g，置于100mL离心管中，加入1.0mol/LNH4Cl溶液50mL，在20-25℃下振荡30min，离心(约3500r/min，8min)，弃去上层清液(必要时也可以测定)。

再在NH4Cl浸提过的土样中加入0.5mol/LNH4F(pH8.2)溶液50mL，在20~25℃下振荡1h，取出离心(约3500r/min，8min)，将上层清液倾入小塑料瓶中。

吸取上述浸出液20mL于50mL容量瓶中，加入0.8mol/LH3BO3溶液20mL，再加2、6二硝基酚指示剂2滴，用稀HCl和稀NaOH溶液调节pH至待测液呈微黄，用钼锑抗法测定，同时作空白试验。

工作曲线的绘制：由于加入H3BO3溶液可以完全消除浸出液中F的干扰，因此在磷标准系列溶液中不必另加NH4F和H3BO3溶液。

工作曲线的绘制同5.2.2.4(3)。

(2)Fe-P的测定。

浸提过Al-P的土样用饱和NaCl溶液洗两次(每次25mL，离心后弃去)，然后加入0.1molL-1NaOH溶液50mL，在20~25℃振荡2h，静置16h，再振荡2h，离心(约4500r/min/，10min)。

倾出上层清液于三角瓶中，并在浸出液中加浓H2SO4(在结果计算时应考虑加入H2SO4的体积)1.5mL，摇匀后放置过夜，过滤，以除去凝絮的有机质。

吸取适量滤液(1)，用钼锑抗比色测定磷。

(3)O-P的测定。

浸提液Fe-P的土样用饱和NaCl溶液洗两次(每次25mL，离心后弃去)，然后加0.3mol/L柠檬酸钠溶液40mL，充分搅拌碎土块，再加连二亚硫酸钠1.0g，放入80~90℃水浴中，待离心管内溶液温度和水浴温度平衡后，用电动搅拌机搅拌15min，再加入0.5mol/L1NaOH溶液10mL(连续搅拌10min)，冷却后离心(约4500r/min，10min)，将上层清液倾入100mL容量瓶中。

土样用饱和NaCl溶液洗两次(每次20mL)，离心后上层清液一并倒入容量瓶中，用水定容。

吸取上述浸出液10mL于50mL三角瓶中，加入三酸混合液10mL，瓶口放一小漏斗，在电炉上消煮，逐步升高温度，待HNO3和HCO4全部分解，有H2SO4回流时即可取下。

冷却后成白色固体，加入50mL水，煮沸，使全部溶解后，用0.1mol/L1(1/2H2SO4)溶液洗入100mL容量瓶中，定容。

吸取30mL溶液于50mL 容量瓶中，用钼锑抗比色法测定磷，同时做空白试验。

(4)Ca-P的测定。

浸提过O-P的土样加入0.5mol/L(1/2H2SO4)溶液50mL，在
20~25℃振荡1h，离心，倾出上层清液于三角瓶中。

吸取适量浸出液于50mL容量瓶中，用钼锑抗比色法测定磷。

注1.根据经验，一般自然土壤在各级磷比色时，浸出液的吸取量(mL)大致如下(供参考)：
Al-P Fe-P O-P Ca-P
酸性土壤20 5~10 30 10~20 中性土壤20 5 30 10~25 石灰性土壤20 30 30 1~5。