微生物学检验厌氧性细菌及检验
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厌氧菌－－鉴定
菌体形态： 菌落性状：形状、色素、荧光、溶血 药敏鉴定试验： 卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属 多耐药 聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链 球菌 生化反应 气相色谱技术
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破伤风芽孢梭菌－－主要性状
革兰阳性细长杆菌，有周鞭毛，芽孢位 于菌体顶端，圆形大于菌体，呈“火柴 棒状” 专性厌氧 在血平板上呈扩散生长，菌落边缘不整 齐，呈羽毛状 在疱肉培养基中，肉渣变黑，有腐败恶 臭味
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产气荚膜梭菌－－临床意义
致病物质：荚膜、多种毒素和侵袭性酶 所致疾病： 气性坏疽 食物中毒 坏死性肠炎
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产气荚膜梭菌－－检查方法
标本涂片染色镜检：观察形态、染色性、 荚膜 分离培养：注意观察双圈溶血环 生化反应：汹涌发酵现象 动物实验： 培养物→小鼠腹腔注射→处死小鼠→培 养→解剖小鼠→肉眼观察泡沫肝＋涂片 染色镜检
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厌氧菌－－厌氧培养法
厌氧罐培养法 厌氧器袋法 厌氧手套箱法 疱肉培养法
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肉眼观察 染色镜检
标本
血标本
厌氧培养
分离培养
增菌
厌氧培养
挑取菌落
需氧培养
厌氧培养
生长
不生长
生长
专性厌氧菌
专性厌氧菌
形态染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱
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厌氧菌－－标本观察和涂片镜检
毒素注射小鼠→小鼠出现症状 保护试验：
毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
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产气荚膜梭菌－－形态与培养
革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽孢位于 菌体中央或次级端，小于菌体，无鞭毛 专性厌氧 血平板菌落特征：圆形、凸起、光滑、 湿润，双层溶血环 卵黄琼脂平板：Nagler反应 牛乳培养基：“汹涌发酵”现象 生化反应：生化反应活泼，分解多种糖
在牛乳培养基产生“汹涌发酵”现象的 是 A 破伤风梭菌 B 产气荚膜梭菌 C 肉毒梭菌 D 艰难梭菌 E 诺维梭菌
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厌氧性球菌
消化球菌属：革兰阳性球菌 消化链球菌属：革兰阳性球菌 韦荣球菌属：革兰阴性球菌
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测验1
正常人肠道中数量最多的细菌是 A 大肠埃希菌 B 乳酸杆菌 C 粪肠球菌 D 无芽孢厌氧菌 E 芽孢厌氧菌
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测验2
在无芽孢厌氧菌感染中，临床标本检出 阳性率最高的是： A 脆弱类杆菌 B 双歧杆菌 C 丙酸杆菌 D 梭形杆菌 E 消化链球菌
肉眼观察：观察标本的性状（脓性、带 血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等） 涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细 菌形态、染色性，以便选择培养基和培 养方法
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厌氧菌－－分离培养
初代培养： 厌氧培养48h 次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试 验，每个菌落接种2个平板，分别进行需 氧培养和厌氧培养，挑取有氧培养中不 生长、厌氧培养生长的菌落进行鉴定
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破伤风芽孢梭菌－－临床意义
致病物质： 破伤风痉挛毒素，属神经毒素，阻止中 枢抑制性神经介质的释放，导致骨骼肌 强制性痉挛 所致疾病：破伤风 感染途径：伤口 致病条件：伤口内形成厌氧微环境
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破伤风芽孢梭菌－－检查方法
显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 分离培养：厌氧培养，菌落特征 动物实验： 毒力试验：
运送 针筒运送法 无氧小瓶运送法 标本充盈运送法 组织块运送法 厌氧袋运送法 棉拭运送法
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厌氧菌－－常用培养基
非选择性培养基 心脑浸液＋％5脱纤维羊血＋氯化血红素＋维 生素K 选择培养基 七叶苷胆汁平板－－培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板－－培养 FS培养基－－培养梭杆菌属 VS培养基－－培养韦容球菌 CCFA培养基－－培养艰难梭菌
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肉毒梭菌－－检验程序
毒素测定
标本 分离培养
可疑菌落
疱肉培养 毒素测定
革兰染色
生化反应
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肉毒梭菌－－检验方法
标本采集：可疑食物、呕吐物等 分离培养：疱肉培养、分离培养 毒素测定 毒素定性检验：
毒素注射小鼠→小鼠出现症状 毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
毒素型别鉴定： 鉴定依据：形态、芽孢特征、疱肉培养 物、肉毒毒素
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艰难梭菌
革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无 荚膜 严格厌氧 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 脂酶－、卵磷脂酶－ 人和动物肠道中的正常菌群 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性 粗大杆菌并有芽孢，具有诊断价值
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革兰阴性无芽孢厌氧菌
类杆菌属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌 普雷沃菌属 卟啉单胞菌属 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间 膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒
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革兰阳性无芽孢厌氧菌
丙酸杆菌属 痤疮丙酸杆菌寄居人和动物皮肤、皮脂 腺等部位，与痤疮有关 优杆菌属 乳杆菌属：女性生殖道主要正常菌群 双歧杆菌属：人和动物肠道中重要的正 常菌群，对维持人体内微生态平衡发挥 重要作用
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肉毒梭菌－－形态与培养
革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，芽孢位于 菌体次级端，大于菌体，呈“网球拍状” 无荚膜 专性厌氧 菌落大而不规则；消化肉渣，肉渣变黑， 有腐败恶臭
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肉毒梭菌－－临床意义
致病物质：肉毒毒素，为神经毒素，引 起肌肉驰缓型麻痹。 毒素分为8个型别，我国以A型最多见 所致疾病 肉毒食物中毒 婴儿肉毒病
微生物学检验厌氧性细菌及 检验
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厌氧菌特点
特点 种类 分布 致病
芽胞厌氧菌 1个菌属 自然界 外源性感染 多以外毒素致病
无芽孢厌氧菌 40多属 人和动物体内 内源性感染 多为条件致病菌
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厌氧菌－－标本采集与送检
采集 部位恰当 正确采集 避免污染 严格厌氧 及时送检
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测验3
下列对厌氧要求不严格的细菌是 A 双歧杆菌 B 产气荚膜梭菌 C 破伤风梭菌 D 艰难梭菌 E 产黑色素类普雷沃菌
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测验4
下列哪种细菌是条件致病菌 A 脆弱类杆菌 B 淋病奈瑟菌 C 溶血性链球菌 D 肠产毒素性大肠杆菌 E 乙型副伤寒沙门菌
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测验5
厌氧菌－－鉴定
菌体形态： 菌落性状：形状、色素、荧光、溶血 药敏鉴定试验： 卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属 多耐药 聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链 球菌 生化反应 气相色谱技术
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破伤风芽孢梭菌－－主要性状
革兰阳性细长杆菌，有周鞭毛，芽孢位 于菌体顶端，圆形大于菌体，呈“火柴 棒状” 专性厌氧 在血平板上呈扩散生长，菌落边缘不整 齐，呈羽毛状 在疱肉培养基中，肉渣变黑，有腐败恶 臭味
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产气荚膜梭菌－－临床意义
致病物质：荚膜、多种毒素和侵袭性酶 所致疾病： 气性坏疽 食物中毒 坏死性肠炎
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产气荚膜梭菌－－检查方法
标本涂片染色镜检：观察形态、染色性、 荚膜 分离培养：注意观察双圈溶血环 生化反应：汹涌发酵现象 动物实验： 培养物→小鼠腹腔注射→处死小鼠→培 养→解剖小鼠→肉眼观察泡沫肝＋涂片 染色镜检
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厌氧菌－－厌氧培养法
厌氧罐培养法 厌氧器袋法 厌氧手套箱法 疱肉培养法
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肉眼观察 染色镜检
标本
血标本
厌氧培养
分离培养
增菌
厌氧培养
挑取菌落
需氧培养
厌氧培养
生长
不生长
生长
专性厌氧菌
专性厌氧菌
形态染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱
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厌氧菌－－标本观察和涂片镜检
毒素注射小鼠→小鼠出现症状 保护试验：
毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
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产气荚膜梭菌－－形态与培养
革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽孢位于 菌体中央或次级端，小于菌体，无鞭毛 专性厌氧 血平板菌落特征：圆形、凸起、光滑、 湿润，双层溶血环 卵黄琼脂平板：Nagler反应 牛乳培养基：“汹涌发酵”现象 生化反应：生化反应活泼，分解多种糖
在牛乳培养基产生“汹涌发酵”现象的 是 A 破伤风梭菌 B 产气荚膜梭菌 C 肉毒梭菌 D 艰难梭菌 E 诺维梭菌
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厌氧性球菌
消化球菌属：革兰阳性球菌 消化链球菌属：革兰阳性球菌 韦荣球菌属：革兰阴性球菌
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测验1
正常人肠道中数量最多的细菌是 A 大肠埃希菌 B 乳酸杆菌 C 粪肠球菌 D 无芽孢厌氧菌 E 芽孢厌氧菌
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测验2
在无芽孢厌氧菌感染中，临床标本检出 阳性率最高的是： A 脆弱类杆菌 B 双歧杆菌 C 丙酸杆菌 D 梭形杆菌 E 消化链球菌
肉眼观察：观察标本的性状（脓性、带 血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等） 涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细 菌形态、染色性，以便选择培养基和培 养方法
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厌氧菌－－分离培养
初代培养： 厌氧培养48h 次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试 验，每个菌落接种2个平板，分别进行需 氧培养和厌氧培养，挑取有氧培养中不 生长、厌氧培养生长的菌落进行鉴定
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破伤风芽孢梭菌－－临床意义
致病物质： 破伤风痉挛毒素，属神经毒素，阻止中 枢抑制性神经介质的释放，导致骨骼肌 强制性痉挛 所致疾病：破伤风 感染途径：伤口 致病条件：伤口内形成厌氧微环境
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破伤风芽孢梭菌－－检查方法
显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 分离培养：厌氧培养，菌落特征 动物实验： 毒力试验：
运送 针筒运送法 无氧小瓶运送法 标本充盈运送法 组织块运送法 厌氧袋运送法 棉拭运送法
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厌氧菌－－常用培养基
非选择性培养基 心脑浸液＋％5脱纤维羊血＋氯化血红素＋维 生素K 选择培养基 七叶苷胆汁平板－－培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板－－培养 FS培养基－－培养梭杆菌属 VS培养基－－培养韦容球菌 CCFA培养基－－培养艰难梭菌
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肉毒梭菌－－检验程序
毒素测定
标本 分离培养
可疑菌落
疱肉培养 毒素测定
革兰染色
生化反应
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肉毒梭菌－－检验方法
标本采集：可疑食物、呕吐物等 分离培养：疱肉培养、分离培养 毒素测定 毒素定性检验：
毒素注射小鼠→小鼠出现症状 毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
毒素型别鉴定： 鉴定依据：形态、芽孢特征、疱肉培养 物、肉毒毒素
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艰难梭菌
革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无 荚膜 严格厌氧 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 脂酶－、卵磷脂酶－ 人和动物肠道中的正常菌群 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性 粗大杆菌并有芽孢，具有诊断价值
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革兰阴性无芽孢厌氧菌
类杆菌属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌 普雷沃菌属 卟啉单胞菌属 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间 膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒
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革兰阳性无芽孢厌氧菌
丙酸杆菌属 痤疮丙酸杆菌寄居人和动物皮肤、皮脂 腺等部位，与痤疮有关 优杆菌属 乳杆菌属：女性生殖道主要正常菌群 双歧杆菌属：人和动物肠道中重要的正 常菌群，对维持人体内微生态平衡发挥 重要作用
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肉毒梭菌－－形态与培养
革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，芽孢位于 菌体次级端，大于菌体，呈“网球拍状” 无荚膜 专性厌氧 菌落大而不规则；消化肉渣，肉渣变黑， 有腐败恶臭
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肉毒梭菌－－临床意义
致病物质：肉毒毒素，为神经毒素，引 起肌肉驰缓型麻痹。 毒素分为8个型别，我国以A型最多见 所致疾病 肉毒食物中毒 婴儿肉毒病
微生物学检验厌氧性细菌及 检验
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厌氧菌特点
特点 种类 分布 致病
芽胞厌氧菌 1个菌属 自然界 外源性感染 多以外毒素致病
无芽孢厌氧菌 40多属 人和动物体内 内源性感染 多为条件致病菌
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厌氧菌－－标本采集与送检
采集 部位恰当 正确采集 避免污染 严格厌氧 及时送检
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测验3
下列对厌氧要求不严格的细菌是 A 双歧杆菌 B 产气荚膜梭菌 C 破伤风梭菌 D 艰难梭菌 E 产黑色素类普雷沃菌
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测验4
下列哪种细菌是条件致病菌 A 脆弱类杆菌 B 淋病奈瑟菌 C 溶血性链球菌 D 肠产毒素性大肠杆菌 E 乙型副伤寒沙门菌
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测验5