临床检验主管技师 微生物检验 第十七章 厌氧性细菌及检验

第十七章厌氧性细菌及检验

本章内容

一、概述

厌氧菌的分类

厌氧菌的临床意义

厌氧菌感染

厌氧菌标本的采集与送检

厌氧菌的分离与鉴定

厌氧环境的指示

二、常见厌氧菌

破伤风杆菌

产气荚膜梭菌

肉毒梭菌

艰难梭菌

厌氧球菌

无芽胞厌氧菌

厌氧菌概述

一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。

G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。致病性属条件致病性的内源性感染。

厌氧菌概述——分类

《伯杰系统细菌学手册》分类标准：

无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。

据耐氧性分类

（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

厌氧菌概述——临床意义及感染

感染类型

外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。

内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

感染的危险因素：

组织缺氧缺血；

机体免疫功能下降；

某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；

长期应用某些抗菌药物；

深部需氧菌感染。

感染的临床指征：

感染局部产生大量气体；

多发生在黏膜附近；

深部外伤后继发感染；

分泌物有恶臭或为暗红色；

常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；

镜检有细菌，常规培养阴性。

厌氧菌概述——标本的采集与送检

重要原则：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。

适宜标

本

血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖

获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿

刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等不宜标

本

鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的

脓液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便（艰难梭菌除外）

等

厌氧菌概述——标本的采集与送检

采集

多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。

厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长。

送检

针筒运送：液体标本。

无菌小瓶运送：液体标本。

棉拭子运送：需使用特制运送培养基。

厌氧罐/厌氧袋运送：较大组织块或床边接种的培养皿等。

标本送到实验室后，应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h。如不能及时接种，应室温保存。

厌氧菌概述——分离与鉴定

直接镜检

根据形态和染色性，结合标本性状与气味，初步对标本中可能有的细菌作出估计。

分离培养

初代培养和次代培养两个阶段。

初代培养的一般原则：

（1）先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择；

（2）尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基；

（3）最好多选1～2种覆盖面不同的选择性培养基；

（4）尽量保证培养基新鲜；

（5）要考虑到微需氧菌存在的可能。

非选择培养基：心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等。

选择培养基：KVLB血平板（即上述非选择培养基中加卡那霉素和万古霉素），KVLB冻溶血平板（产黑素类杆菌早期产生黑色素），七叶苷胆汁平板（BBE，用于脆弱类杆菌），FS培养基（梭杆菌选择培养基），卵黄（EYA）及兔血平板（RBA）（用于产气荚膜梭菌），CCFA培养基（艰难梭菌选择培养基）等。

分离培养

每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%～10% CO2环境中培养，以便正确地培养出病原菌，从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。

厌氧培养法

（1）厌氧罐培养法

（2）气袋法

（3）气体喷射法

（4）厌氧手套箱培养法

（5）其他培养法

鉴定试验

1.形态、染色

2.菌落性状

3.抗生素敏感性鉴定试验：常用卡那霉素及甲硝唑。

4.生化特性：主要包括糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂肪酸酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验、胆汁肉汤生长试验以及硫化氢试验等。

5.气-液相色谱：分析厌氧菌的终末代谢产物。

厌氧状态的指示

1.化学法：亚甲蓝和刃天青。

无氧时均呈白色，有氧时亚甲蓝呈蓝色，刃天青呈粉红色。

2.微生物法：专性需氧菌。

不属于厌氧菌的是

A.梭菌属

B.类杆菌属

C.肠杆菌属

D.消化球菌属

E.韦荣球菌属

『正确答案』C

『答案解析』肠杆菌属为需氧或兼性厌氧的细菌。

厌氧培养时，厌氧环境的微生物质量控制需要的细菌是

A.专性厌氧菌

B.专性需氧菌

C.微需氧菌

D.兼性厌氧菌

E.嗜二氧化碳菌

『正确答案』B

『答案解析』厌氧培养时，厌氧环境的微生物质量控制需要的细菌是专性需氧菌。

人体厌氧菌感染的危险因素不包括

A.组织缺氧或氧化还原电势降低

B.机体免疫功能下降

C.长期应用抗菌药物

D.紫外光下照射

E.深部需氧菌感染

『正确答案』D

『答案解析』紫外光有杀灭细菌的作用，并不属于厌氧菌感染的危险因素。

厌氧培养状态化学指示剂是