微生物检验第十七章 厌氧性细菌及检验讲义

第十七章厌氧性细菌及检验

本章内容

一、概述

厌氧菌的分类

厌氧菌的临床意义

厌氧菌感染

厌氧菌标本的采集与送检

厌氧菌的分离与鉴定

厌氧环境的指示

二、常见厌氧菌

破伤风杆菌

产气荚膜梭菌

肉毒梭菌

艰难梭菌

厌氧球菌

无芽胞厌氧菌

厌氧菌概述

一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。

G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。致病性属条件致病性的内源性感染。

厌氧菌概述——分类

《伯杰系统细菌学手册》分类标准：

无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。

据耐氧性分类

（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

厌氧菌概述——临床意义及感染

感染类型

外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。

内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

感染的危险因素：

组织缺氧缺血；

机体免疫功能下降；

某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；

长期应用某些抗菌药物；

深部需氧菌感染。

感染的临床指征：

感染局部产生大量气体；

多发生在黏膜附近；

深部外伤后继发感染；

分泌物有恶臭或为暗红色；

常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；

镜检有细菌，常规培养阴性。

厌氧菌概述——标本的采集与送检

厌氧菌概述——标本的采集与送检

采集

多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。

厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长。送检

针筒运送：液体标本。

无菌小瓶运送：液体标本。

棉拭子运送：需使用特制运送培养基。

厌氧罐/厌氧袋运送：较大组织块或床边接种的培养皿等。

标本送到实验室后，应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h。如不能及时接种，应室温保存。

厌氧菌概述——分离与鉴定

直接镜检

根据形态和染色性，结合标本性状与气味，初步对标本中可能有的细菌作出估计。

分离培养

初代培养和次代培养两个阶段。

初代培养的一般原则：

（1）先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择；

（2）尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基；

（3）最好多选1～2种覆盖面不同的选择性培养基；

（4）尽量保证培养基新鲜；

（5）要考虑到微需氧菌存在的可能。

非选择培养基：心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等。

选择培养基：KVLB血平板（即上述非选择培养基中加卡那霉素和万古霉素），KVLB冻溶血平板（产黑素类杆菌早期产生黑色素），七叶苷胆汁平板（BBE，用于脆弱类杆菌），FS培养基（梭杆菌选择培养基），卵黄（EYA）及兔血平板（RBA）（用于产气荚膜梭菌），CCFA培养基（艰难梭菌选择培养基）等。

分离培养

每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%～10% CO2环境中培养，以便正确地培养出病原菌，从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。

厌氧培养法

（1）厌氧罐培养法

（2）气袋法

（3）气体喷射法

（4）厌氧手套箱培养法

（5）其他培养法

鉴定试验

1.形态、染色

2.菌落性状

3.抗生素敏感性鉴定试验：常用卡那霉素及甲硝唑。

4.生化特性：主要包括糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂肪酸酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验、胆汁肉汤生长试验以及硫化氢试验等。

5.气-液相色谱：分析厌氧菌的终末代谢产物。

厌氧状态的指示

1.化学法：亚甲蓝和刃天青。

无氧时均呈白色，有氧时亚甲蓝呈蓝色，刃天青呈粉红色。

2.微生物法：专性需氧菌。

不属于厌氧菌的是

A.梭菌属

B.类杆菌属

C.肠杆菌属

D.消化球菌属

E.韦荣球菌属

『正确答案』C

『答案解析』肠杆菌属为需氧或兼性厌氧的细菌。

厌氧培养时，厌氧环境的微生物质量控制需要的细菌是

A.专性厌氧菌

B.专性需氧菌

C.微需氧菌

D.兼性厌氧菌

E.嗜二氧化碳菌

『正确答案』B

『答案解析』厌氧培养时，厌氧环境的微生物质量控制需要的细菌是专性需氧菌。

人体厌氧菌感染的危险因素不包括

A.组织缺氧或氧化还原电势降低

B.机体免疫功能下降

C.长期应用抗菌药物

D.紫外光下照射

E.深部需氧菌感染

『正确答案』D

『答案解析』紫外光有杀灭细菌的作用，并不属于厌氧菌感染的危险因素。

厌氧培养状态化学指示剂是

A.伊红

B.美蓝和刃天青

C.溴甲酚紫

D.碱性复红

E.结晶紫

『正确答案』B

『答案解析』厌氧培养状态化学指示剂是美蓝和刃天青。

能存活于大气环境的厌氧菌是

A.革兰阳性有芽胞杆菌

B.革兰阳性无芽胞杆菌

C.革兰阳性厌氧球菌

D.革兰阴性厌氧球菌

E.革兰阴性无芽胞杆菌

『正确答案』A

『答案解析』有芽胞的厌氧菌抵抗力强，在自然界、动物及人体肠道中广泛存在，并且能长期耐受恶劣的环境条件。

不属于厌氧革兰阳性有芽胞梭菌的是

A.破伤风梭菌

B.肉毒梭菌

C.艰难梭菌

D.产气荚膜梭菌

E.枯草杆菌