慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Ｓ ＥＮ ｎ ．ｅ ，ＬＩ Ｋｅ Ｈ Ｈｏ ｇ ｆ ｎ Ｕ ， ＲＡＯ ．ｉｎ ， Ｚｉ１ａ ｇ ＳＵＮ Ｙａ ，ＹＡＯ ｉｔｉ ＸＩ ｎ Ｋａ．ａ。 ＡＯ ｎ Ｄｏ ｇ ・
，
（ ． ａ ｃ ｒＲｅｅ ｒｈＩｓｉ ｔ ，２ Ｉｓｉ ｔ ｆＣ ｍｐ ｒｔ ｅＭｅ ｉｉｅ＆ Ｃ ｎｅ ｆ ｐ ｒ ｎａ ｉ ｌ， ｏ ｔｅｎ Ｍｅ ｉａ ｉｅｓｔ １ Ｃ ｎ ｅ ｓａｃ ｎ ｔｕｅ ． ｎｔ ｕｅ ｏ ｏ ａａｉ ｄｃｎ ｔ ｔ ｖ ｅ ｔｒｏ ｅｉ ｔｌ ｍａｓ Ｓ ｕｈ ｒ ｄｃ ｌ ｖｒｉ Ｅｘ ｍｅ Ａｎ Ｕｎ ｙ， Ｇｕ ｎ ｚ ｏ １ ５ ５，Ｃ ｉａ ．Ｇｕ ｎ ｄ ｎ ｄｃ ｌＬ ｂ ｒｔｒ ｉ ｌ ｅ ｔｒ ｏｈ ｎ５ ８ ４ ，Ｃ ｉａ ａ ｇｈ ｕ５ ０ １ ｈｎ ；３ ａ ｇ ｏ ｇＭｅ ｉａ ａ ｏａｏｙＡｎｍａ ｎｅ ，Ｆ ｓ ａ ２ ２ ８ ｈｎ ） Ｃ
对 不 同基 因建 立 相 应 转 基 因小 鼠 以实 现 恒 定 或 条 件性 的转 基 因过 表 达 或 Ｒ Ａ干 涉 （ Ｎ ｉ， 进 而 在 体 内解 析 相 Ｎ Ｒ Ａ）并 应 基 因功 能 和建 立 人 类 疾 病 模 型 等 奠 定 了坚 实 基 础 。
【 关键词】 红色荧光蛋 白； 慢病毒载体法 ； 转基 因小 鼠 【 中图分类号】Ｑ ８ Ｑ １ ７ ．８ ２ 【 文献标识码 】Ａ 【 文章编号 】１７ — ５ （０ ０ ０ － １－５ ６ １７ ６ ２ １ ）２０ ２０ ８ ０
【 ｓｒｃ】 ０ｂｅｔ ｅ Ｔ ｓ ｂｉ ｅｈ ｏ ｇ ｌｔｒ ｏ ｇｎｒｔ ｇｔ ｎｇｎｃｍｃ ｙｌ ｔ ｉ ｓ ｄａ ｄ Ａｂｔａｔ ｊｃｉ ｏｅｔ ｌ ｈａｔｃｎｌ ｉ ｐａｏｍ ｆ ｅｅａ ｎ ｒ ｓｅ ｉ ｉ ｂ ｎｉｒ ・ ｉｅ ｖ ａ ｓ ｏｃ ｆ ｒ ｉ ａ ｅ ｅ ｖ ｕ ｍｅ ｔ
２１ ０ ０年 ２月
中 国 比较 医学 杂 志
Ｃ ＮＥＳ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰ ＨＩ ＥＪ ＡＲＡＴＩ ＤＩ Ｉ ＶＥ ＭＥ Ｃ ＮＥ
Ｆ ｂｕ ｒ ｅ ｒ ａｙ，２ １ ００ Ｖｏ ． Ｏ Ｎｏ ２ Ｉ２ ．
第２ Ｏ卷
第 ２期
慢病 毒 载体 法 制备 红色荧 光 蛋 白转 基 因小 鼠
ｍ ＲＦＰ ａ ｓ ｅ ｉ ｉ ｅ Ｇｅ ｒ ｔ ｄ ｂｙ Ｌｅ ｔｖ ｒ ｓ Ｍ ｅ ａ ｅ ｎ ｌ ｅ ｙ Ｔｒ ｎ ｇ ｎ ｃ Ｍ ｃ ｎｅ ａ ｅ ｎ ｉ ｉ ｕ － ｄｉ ｔ ｄ Ｇｅ ｅ Ｄｅ ｉ ｒ ｖ
ＪＡ Ｊ ｎ ｓ ｕ ｎ Ｉ ｕ ．ｈ ａ ｇ ，ＸＩ ａ ．ａ ｇ ，Ｌ Ｎ Ｘｉｏ ｌ ＡＯ Ｇ ｏ ｆ ｎ Ｉ ａ — ｎ ，ＺＨＡ ｈ ｎ ，ＹＡＯ Ｚ ｉ ａ ｇ ｉ ＮＧ Ｓ ｅ ｇ ｈ — ｎ ，ＤＵ Ｗｅ — ｎ ， ｆ ｎｔ ｇ ｉ
贾俊 双 ，肖高 芳 ， 晓琳 张 晟 姚 志 芳 杜 文婷 申红 芬 刘 科 林 ， ， ， ， ， ，
饶 子 亮 ，孙பைடு நூலகம் 妍 ，姚 开泰 ， 东 肖
（ 方 医科 大学 １ 南 ．肿 瘤 研 究 所 ，．比较 医学 研 究 所 暨 实 验 动 物 中 心 ， 州 ２ 广 ３ ．广 东 省 医学 实 验 动 物 中 心 ， 州 广 ５８４ ） ２２ ８ ５０１ ； １５ ５
【 要 】 目的 摘
利 用 慢 病 毒 介 导 的转 基 因方 法 制 备 红 色 荧 光 蛋 白 （ Ｆ ） 基 因小 鼠 ， 建 立 转 基 因 小 鼠的 ｍＲ Ｐ 转 并
技 术 平 台 。 方法 将 携 带 ｍＲ Ｐ基 因 的慢 病 毒 注 入 Ｉ Ｒ鼠单 细 胞 受 精 卵 卵 周 隙 以感 染 受 精 卵 ， 胎 移 植 进 假 孕 母 Ｆ Ｃ 胚
ｄ ｌ ｅ ｆ ｏｅｇ ｅ ｅ（ ） ｉｔ ｚｇ ｔｓ ｅｉ ｒ ｏ ｒｉｎ ｇ ｎ Ｓ ｎｏ ｙ ｏｅ ．Ｍｅｈ ｄ Ｍｏ ｏ ｒ ｅ ｕ ｒｓｅ ｔｐｏｅｎ （ ｖｙ ｆ ｔｏ ｓ ｎ ｍｅｉ ｒｄ ｆ ｏｅｃ ｎ ｒｔｉ ｍＲＦ ｃ ｌ Ｐ）ｔ ｎ ｇ ｎｃ ｍｉｅｗｅｅ ｒ ｓｅ ｉ ａ ｃ ｒ ｇ ｎ ｒｔｄ ｂ ｕ ｚ ｎ ｌｉｊｃｉｎ ｏ ｅ ｔ ｉ ｓ ｈ ｒｏｉｇ ｍＲＦ ｅ ｅ ｉｔ ｉｇｅｃ ｅｔｉｅ ｇ ｓ ｏ Ｃ ｍｉｅ ｔ ｎｅ ｔ ｅ ｅａｅ ｙｓ ｂ ｏ ａ ｎｅ ｔ ｆｌｎｉ ｒ ａｂ ｒ ｏ ｖｕ ｎ Ｐ ｇ ｎ ｎｏ ｓｎ ｌ・ｄｌｆｒｉｚｄ ｅｇ ｆＩ Ｒ ｃ ｏ ｉｆｃ ｌ
鼠 以 获 得仔 代 鼠 ， 后 应 用 小 动 物 活体 成 像 仪 、 视 荧 光 显 微 镜 和 Ｐ Ｒ等 鉴 定 并 获 得 ｍＲ Ｐ转 基 因 鼠 。结 果 移 然 体 Ｃ Ｆ
植 卵周 隙 注射 有 慢 病 毒 的胚 胎 ４ ０枚 给 ２只假 孕 母 鼠 ， 获得 仔 鼠 ６只 ； 用 体 视 荧 光 显 微 镜 检 测 ｍ Ｆ 共 利 Ｒ Ｐ表 达 ， 蛋 在 白 水平 证 实 ６只 Ｆ ０代 中 ， ２只 （ ３和 Ｒ ） 鼠耳 高 表 达 ｍ Ｆ ， 余 的 弱 表 达 ｍ Ｆ （ １ Ｒ Ｒ ４ Ｒ Ｐ其 Ｒ Ｐ Ｒ 、 ２和 Ｒ ） 荧 光 强 度 ５或 （ ６ 与野 生 型 Ｉ Ｒ 鼠无 明 显 差 别 ， Ｄ Ａ水 平 检 测 证 实 ， Ｒ） Ｃ 而 Ｎ ６只 Ｆ ０代 中 ， ５只 （ １ Ｒ 、 ３ Ｒ Ｒ 、 ２ Ｒ 、 ４和 Ｒ ） 因组 中 整 合 ５基 有 外 源转 基 因 ｈ ｂｍＲ Ｐ， 示 基 因型 鉴 定 结 果 很 好 验证 了体 视 荧 光 显 微 镜 鉴 定 结 果 。此 外 ， Ｒ Ｐ转 基 因 首 建 鼠 Ｕ— Ｆ 预 ｍ Ｆ 基 因组 中整 合 的 ｍＲ Ｐ基 因 可稳 定 遗 传 和 表 达 。结 论 Ｆ 建 立 了慢 病 毒 法 快 速 制 备 转 基 因小 鼠 的 技 术 平 台 ， 为 针 这
，
（ ． ａ ｃ ｒＲｅｅ ｒｈＩｓｉ ｔ ，２ Ｉｓｉ ｔ ｆＣ ｍｐ ｒｔ ｅＭｅ ｉｉｅ＆ Ｃ ｎｅ ｆ ｐ ｒ ｎａ ｉ ｌ， ｏ ｔｅｎ Ｍｅ ｉａ ｉｅｓｔ １ Ｃ ｎ ｅ ｓａｃ ｎ ｔｕｅ ． ｎｔ ｕｅ ｏ ｏ ａａｉ ｄｃｎ ｔ ｔ ｖ ｅ ｔｒｏ ｅｉ ｔｌ ｍａｓ Ｓ ｕｈ ｒ ｄｃ ｌ ｖｒｉ Ｅｘ ｍｅ Ａｎ Ｕｎ ｙ， Ｇｕ ｎ ｚ ｏ １ ５ ５，Ｃ ｉａ ．Ｇｕ ｎ ｄ ｎ ｄｃ ｌＬ ｂ ｒｔｒ ｉ ｌ ｅ ｔｒ ｏｈ ｎ５ ８ ４ ，Ｃ ｉａ ａ ｇｈ ｕ５ ０ １ ｈｎ ；３ ａ ｇ ｏ ｇＭｅ ｉａ ａ ｏａｏｙＡｎｍａ ｎｅ ，Ｆ ｓ ａ ２ ２ ８ ｈｎ ） Ｃ
对 不 同基 因建 立 相 应 转 基 因小 鼠 以实 现 恒 定 或 条 件性 的转 基 因过 表 达 或 Ｒ Ａ干 涉 （ Ｎ ｉ， 进 而 在 体 内解 析 相 Ｎ Ｒ Ａ）并 应 基 因功 能 和建 立 人 类 疾 病 模 型 等 奠 定 了坚 实 基 础 。
【 关键词】 红色荧光蛋 白； 慢病毒载体法 ； 转基 因小 鼠 【 中图分类号】Ｑ ８ Ｑ １ ７ ．８ ２ 【 文献标识码 】Ａ 【 文章编号 】１７ — ５ （０ ０ ０ － １－５ ６ １７ ６ ２ １ ）２０ ２０ ８ ０
【 ｓｒｃ】 ０ｂｅｔ ｅ Ｔ ｓ ｂｉ ｅｈ ｏ ｇ ｌｔｒ ｏ ｇｎｒｔ ｇｔ ｎｇｎｃｍｃ ｙｌ ｔ ｉ ｓ ｄａ ｄ Ａｂｔａｔ ｊｃｉ ｏｅｔ ｌ ｈａｔｃｎｌ ｉ ｐａｏｍ ｆ ｅｅａ ｎ ｒ ｓｅ ｉ ｉ ｂ ｎｉｒ ・ ｉｅ ｖ ａ ｓ ｏｃ ｆ ｒ ｉ ａ ｅ ｅ ｖ ｕ ｍｅ ｔ
２１ ０ ０年 ２月
中 国 比较 医学 杂 志
Ｃ ＮＥＳ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰ ＨＩ ＥＪ ＡＲＡＴＩ ＤＩ Ｉ ＶＥ ＭＥ Ｃ ＮＥ
Ｆ ｂｕ ｒ ｅ ｒ ａｙ，２ １ ００ Ｖｏ ． Ｏ Ｎｏ ２ Ｉ２ ．
第２ Ｏ卷
第 ２期
慢病 毒 载体 法 制备 红色荧 光 蛋 白转 基 因小 鼠
ｍ ＲＦＰ ａ ｓ ｅ ｉ ｉ ｅ Ｇｅ ｒ ｔ ｄ ｂｙ Ｌｅ ｔｖ ｒ ｓ Ｍ ｅ ａ ｅ ｎ ｌ ｅ ｙ Ｔｒ ｎ ｇ ｎ ｃ Ｍ ｃ ｎｅ ａ ｅ ｎ ｉ ｉ ｕ － ｄｉ ｔ ｄ Ｇｅ ｅ Ｄｅ ｉ ｒ ｖ
ＪＡ Ｊ ｎ ｓ ｕ ｎ Ｉ ｕ ．ｈ ａ ｇ ，ＸＩ ａ ．ａ ｇ ，Ｌ Ｎ Ｘｉｏ ｌ ＡＯ Ｇ ｏ ｆ ｎ Ｉ ａ — ｎ ，ＺＨＡ ｈ ｎ ，ＹＡＯ Ｚ ｉ ａ ｇ ｉ ＮＧ Ｓ ｅ ｇ ｈ — ｎ ，ＤＵ Ｗｅ — ｎ ， ｆ ｎｔ ｇ ｉ
贾俊 双 ，肖高 芳 ， 晓琳 张 晟 姚 志 芳 杜 文婷 申红 芬 刘 科 林 ， ， ， ， ， ，
饶 子 亮 ，孙பைடு நூலகம் 妍 ，姚 开泰 ， 东 肖
（ 方 医科 大学 １ 南 ．肿 瘤 研 究 所 ，．比较 医学 研 究 所 暨 实 验 动 物 中 心 ， 州 ２ 广 ３ ．广 东 省 医学 实 验 动 物 中 心 ， 州 广 ５８４ ） ２２ ８ ５０１ ； １５ ５
【 要 】 目的 摘
利 用 慢 病 毒 介 导 的转 基 因方 法 制 备 红 色 荧 光 蛋 白 （ Ｆ ） 基 因小 鼠 ， 建 立 转 基 因 小 鼠的 ｍＲ Ｐ 转 并
技 术 平 台 。 方法 将 携 带 ｍＲ Ｐ基 因 的慢 病 毒 注 入 Ｉ Ｒ鼠单 细 胞 受 精 卵 卵 周 隙 以感 染 受 精 卵 ， 胎 移 植 进 假 孕 母 Ｆ Ｃ 胚
ｄ ｌ ｅ ｆ ｏｅｇ ｅ ｅ（ ） ｉｔ ｚｇ ｔｓ ｅｉ ｒ ｏ ｒｉｎ ｇ ｎ Ｓ ｎｏ ｙ ｏｅ ．Ｍｅｈ ｄ Ｍｏ ｏ ｒ ｅ ｕ ｒｓｅ ｔｐｏｅｎ （ ｖｙ ｆ ｔｏ ｓ ｎ ｍｅｉ ｒｄ ｆ ｏｅｃ ｎ ｒｔｉ ｍＲＦ ｃ ｌ Ｐ）ｔ ｎ ｇ ｎｃ ｍｉｅｗｅｅ ｒ ｓｅ ｉ ａ ｃ ｒ ｇ ｎ ｒｔｄ ｂ ｕ ｚ ｎ ｌｉｊｃｉｎ ｏ ｅ ｔ ｉ ｓ ｈ ｒｏｉｇ ｍＲＦ ｅ ｅ ｉｔ ｉｇｅｃ ｅｔｉｅ ｇ ｓ ｏ Ｃ ｍｉｅ ｔ ｎｅ ｔ ｅ ｅａｅ ｙｓ ｂ ｏ ａ ｎｅ ｔ ｆｌｎｉ ｒ ａｂ ｒ ｏ ｖｕ ｎ Ｐ ｇ ｎ ｎｏ ｓｎ ｌ・ｄｌｆｒｉｚｄ ｅｇ ｆＩ Ｒ ｃ ｏ ｉｆｃ ｌ
鼠 以 获 得仔 代 鼠 ， 后 应 用 小 动 物 活体 成 像 仪 、 视 荧 光 显 微 镜 和 Ｐ Ｒ等 鉴 定 并 获 得 ｍＲ Ｐ转 基 因 鼠 。结 果 移 然 体 Ｃ Ｆ
植 卵周 隙 注射 有 慢 病 毒 的胚 胎 ４ ０枚 给 ２只假 孕 母 鼠 ， 获得 仔 鼠 ６只 ； 用 体 视 荧 光 显 微 镜 检 测 ｍ Ｆ 共 利 Ｒ Ｐ表 达 ， 蛋 在 白 水平 证 实 ６只 Ｆ ０代 中 ， ２只 （ ３和 Ｒ ） 鼠耳 高 表 达 ｍ Ｆ ， 余 的 弱 表 达 ｍ Ｆ （ １ Ｒ Ｒ ４ Ｒ Ｐ其 Ｒ Ｐ Ｒ 、 ２和 Ｒ ） 荧 光 强 度 ５或 （ ６ 与野 生 型 Ｉ Ｒ 鼠无 明 显 差 别 ， Ｄ Ａ水 平 检 测 证 实 ， Ｒ） Ｃ 而 Ｎ ６只 Ｆ ０代 中 ， ５只 （ １ Ｒ 、 ３ Ｒ Ｒ 、 ２ Ｒ 、 ４和 Ｒ ） 因组 中 整 合 ５基 有 外 源转 基 因 ｈ ｂｍＲ Ｐ， 示 基 因型 鉴 定 结 果 很 好 验证 了体 视 荧 光 显 微 镜 鉴 定 结 果 。此 外 ， Ｒ Ｐ转 基 因 首 建 鼠 Ｕ— Ｆ 预 ｍ Ｆ 基 因组 中整 合 的 ｍＲ Ｐ基 因 可稳 定 遗 传 和 表 达 。结 论 Ｆ 建 立 了慢 病 毒 法 快 速 制 备 转 基 因小 鼠 的 技 术 平 台 ， 为 针 这