微生物学实验技术-乳酸菌的分离与纯化-2009
酸奶中乳酸菌的分离检测及纯化
（4）、乳酸菌的检测、纯化培养
(1)、初步检测
恒温培养48小时过后，取出培养平板；选择菌落分布 较好的平板，先对其菌落形态进行观察，初步找出乳酸菌 菌落。乳酸菌的菌落很小，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙， 在产酸菌落周围还能产生CaCO3的溶解圈，如出现圆形稍扁 平的黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。
2、革兰氏染色结果
革兰氏染色结果为蓝紫色，证乳酸菌为革兰氏阳性菌
3、脱脂乳试管检测乳酸杆菌
试管中脱脂牛乳凝固，证为乳酸杆菌
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
另留一管不稀释留作对照（CK）
（2）、分离方法
A．平板划线 接种环挑取10-1菌液，按无菌操作对标有”10-1”的3个平板进
行划操作；划线完毕后，盖上皿盖，倒置放在40℃恒温培养箱中培 养48小时。
B．平板涂布 用无菌移液管分别吸取10-5、10-6、10-7和无菌生理
将7只装9ml无菌水的无菌试管，依次编号1--7，再用无菌移液管 吸10-1的菌悬液1ml放入依次装有9ml无菌水的试管1--6中，稀释混匀 便得到10-2～10-7的稀释液。
酸奶菌悬液的配制
10ml
1.0ml
1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水
（2）、乳酸菌的分离纯化培养
选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40℃ 培养8-24h若牛乳出现凝固，无气泡，显酸性，涂 片镜检细胞杆状或链球状，革兰氏染色显阳性， 则可将其连续传代3次，最终选择出在3-6h能凝固 的牛乳管，作菌种待用。
乳酸菌的分离与纯化实验报告
乳酸菌的分离与纯化实验报告一、实验目的：1. 掌握乳酸菌的分离与纯化方法；2. 学习乳酸菌的形态特征及生长特性；3. 熟悉微生物实验室操作规范和安全注意事项。
二、实验原理：乳酸菌属于革兰氏阳性细菌，可以利用革兰染色方法进行初步鉴定。
乳酸菌的形态特征有很大差异，有的呈短杆状、短圆柱状，有的呈梭形或球形。
乳酸菌的培养基选择要根据实验目的而定，一般常用的是MRS培养基。
常规乳酸菌分离方法有两种：血漂白法和渐进稀释法。
血漂白法是用过氧化氢或次氯酸钠等对血液进行漂白处理后加入培养基进行分离，由于血液中含有多种抑菌物质，故需漂白处理后方能使用。
渐进稀释法则是将混菌液逐步稀释后按一定比例接种于选定的培养基上，经过多次传代，可得到单一的菌落。
三、实验步骤：1. 取适量样品加入1ml生理盐水中，充分摇匀。
2. 再从上述稀释液中取出1ml加入9ml生理盐水中，得到10-2悬液。
3. 再抽取1ml悬液加入9ml生理盐水中，得到10-3悬液。
4. 分别取适量的10-2和10-3悬液接种于MRS培养基上，并分别转移多次，培养时间一般为24-48小时，必要时可延长到72小时。
5. 分离菌落后进行鉴定。
四、结果及分析：实验结果显示，经过分离培养，从10-2和10-3悬液中分别分离出了多个菌落，经过重复转移，逐步稀释，最终获得了单一的菌落，可见分离培养方法的有效性和行之有效的可行性。
鉴定乳酸菌的一般方法包括形态学鉴定、生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
形态学鉴定包括形态、大小、形状和染色等方面；生化特性鉴定则主要包括代谢途径、酸产生量和果糖发酵能力等；分子生物学鉴定则是通过特异性引物扩增菌株中的核酸，进行分子水平鉴定。
五、实验心得：本次实验通过乳酸菌分离、培养和鉴定的过程，使我对乳酸菌的形态特征、生长特性和鉴定方法有了更深入的了解。
同时，要时刻注意实验室的操作规范和安全问题，确保实验顺利进行。
在今后的实验中，我将更加重视实验操作的规范性和安全性。
乳酸菌的分离纯化
1、分离培养基采用MRS培养基, 分离培养基中添加溴甲酚紫作为指示剂;采用稀释平板涂布法进行平板涂布分离, 挑取直径在115mm以下能使培养基中溴甲酚紫变红或变黄的单菌落, 菌落表面光滑的菌株，采用划线法进行分离纯化，获得纯种。
2、MRS 固体培养基：蛋白胨10g，肉膏10g，酵母提取物5g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，K2HPO4 2g，MnSO4·4H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.58g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，琼脂25g，水1000mL。
调pH6.2～6.4，1% CaCO3，121℃灭菌15min。
改良MRS培养基：向MRS培养基中加入1% CaCO3。
10 倍比稀释至10-10，分别吸取稀释液各0.2mL，涂布于含钙MRS 培养基平板上，37℃静置培养48h。
挑取含钙培养基上具有明显钙溶圈的菌落，划线分离纯化2~3 次，最后选择单菌落，经镜检确认为纯种3、MRS 固体培养基: 蛋白胨10g, 牛肉膏10g, 酵母提取物5g, K2HPO4 2g, 柠檬酸二铵2g, 乙酸钠5g, 葡萄糖20 g, 吐温-801mL, MgSO4 #7H2O 0.5g, MnSO4 0.25g, 琼脂25g，蒸馏水1000mL, pH6.2~ 6.4, 3%的CaCO3, 121℃灭菌20min。
稀释倾倒平板法分别接种于MRS固体培养基上，30 ℃培养24h30℃培养24h, 在MRS+3%CaCO3 固体培养基上形成明显的透明圈, 表面光滑湿润。
45、培养基MRS液体培养基(pH5. 0) , 富集培养用; 改良MRS固体培养基(pH6.8) : 在培养基成分中,加入2%的CaCO3菌种分离方法先在MRS( pH5. 0) 液体培养基中进行富集培养, 18～24h后采用改良的MRS固体培养基进行稀释平板法分离,挑取生长在平板中下层且具溶钙圈的乳白色菌落,按常规方法进行纯化,获得纯菌。
乳酸菌的分离培养
乳酸菌的分离培养保加利亚乳杆菌组长：组员：实验目的：1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术及微生物形态观察；2.学习微生物制片、染色的基本技术，掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操作接种技术；3.通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。
4.了解各种灭菌的基本原理和应用范围，以及实验室中常用的灭菌方法。
5.了解酸奶中乳酸菌分离原理, 观察乳酸菌的基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目的测定的方法。
6.了解稀释平板计数的原理，熟练掌握混合平板培养法。
明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。
7．初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法，掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
8.了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法及其优缺点，并了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代谢类型的多样性。
实验原理：乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+和G-菌。
通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。
酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。
细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份的营养物质调制而成的营养基质；灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢；自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。
酸奶中乳酸菌的分离与纯化
酸奶中乳酸菌的分离与纯化一、实验目的1.掌握分离乳酸菌的基本原理和操作技术；2.学习并掌握稀释法和微生物纯培养操作。
二、实验设备及材料培养基材料：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、番茄汁、葡萄糖、吐温、溴甲酚绿、琼脂。
实验材料：无菌水、培养皿、电热套、高压蒸汽灭菌锅、电子分析天平、涂布棒、酒精灯、无菌试管、移液枪、无菌吸管。
三、实验原理乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
大多数不运动，少数以周毛运动。
菌体常排列成链。
根据细胞形态分为球状或杆状，可分为两大类，即乳酸链球菌和乳酸杆菌。
在乳酸菌培养基平板上，乳酸菌菌落大约1～3mm，圆形隆起，表面光滑，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸周围还能产生CaCO3溶解圈。
乳酸菌革兰氏染色后呈蓝色，为革兰氏阳性菌。
四、实验步骤1.乳酸菌培养基的制作配方蛋白胨 2.0g酵母膏 2.0g番茄汁40g葡萄糖 2.0g吐温0.10mL碳酸钙 3.4g溴甲酚绿0.02g琼脂2～4g水200mL①称量：按照培养基配方依次称取药品放入烧杯中。
②熔化：在烧杯中加入略少于200mL水，加热至沸腾。
依次加入药品，用玻璃棒不断搅拌，待其完全溶解后，加入琼脂，搅拌至完全熔化，最后补足所损失的水分。
③分装：将配置的乳酸菌培养基装入三角瓶中。
④加棉塞、包扎⑤灭菌：将乳酸菌培养基在压力0.11MPa，温度121℃条件下灭菌20min。
⑥无菌检查2.倒平板将乳酸菌培养基熔化，待冷却至55～60℃时，倒平板，倒好后，在室温下培养2～3d，或37℃培养24h，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。
3.制备稀释液量取酸奶10mL，放入盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，震摇约20min，使酸奶与无菌水充分混合，将酸奶分散。
用一只1 mL无菌吸管从中吸取1 mL酸奶悬浊液注入盛有9 mL无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。
然后再用一支1 mL无菌吸管从此试管中吸取1 mL注入另一盛有9 mL无菌水的试管中，以此类推，制成10−3、10−4、10−5各种稀释度的酸奶稀释液。
乳酸菌的分离
乳酸菌的分离一、实验目的: (1)了解乳酸菌的菌落特征及细胞形态；(2)了解乳酸菌的分离及鉴定原理。
二、实验内容: 酸乳中乳酸菌的分离及初步鉴定(1)从酸乳中分离乳酸菌；(2)对乳酸菌进行初步鉴定。
三、实验器材:样品：含乳酸菌的酸奶；培养基：BCG牛乳培养基；设备：高压蒸汽灭菌锅，电磁炉，恒温培养箱；仪器用品：1000ml烧杯一个，500ml量筒一个, 无菌培养皿12个, 500ml容量三角瓶2个，25ml无菌移液管1只，20ml无菌试管7只，1ml无菌移液管6只，培养基分装器一个，玻棒2根, 无菌涂布器3只，酒精灯一盏，接种环一个，天平，牛角匙，漏斗，漏斗架，载玻片，盖玻片，pH试纸若干，液体石蜡，棉塞，吸管，牛皮纸，线绳、标签等。
药品：结晶紫，乙醇，草酸氨，碘，碘化钾，番红，番红，NaOH，NaCl。
三、实验原理:自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养,分离,鉴定,保存各种微生物和代谢产物。
此次分离纯化乳酸菌采用BCG牛乳培养基[3]。
乳酸菌分离目的是要在培养基上出现乳酸菌的单个菌落，为此我们采用以下两种方法：平板划线法：平板划线分离法是将混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后繁殖成单菌落；从而得到待分离菌种的纯种。
其原理是将微生物在固体培养基表面多次做”由点到线”稀释而达到分离的目的。
平板涂布法：平板涂布法是将样品经稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个但菌落代表原样品中的一个单细胞。
酸奶中乳酸菌的分离检测及纯化ppt课件
【实验材料、仪器与试剂】
实验材料：市售乳酸饮料或酸奶。 实验仪器：保温箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、 培养皿、试管、涂布器、酒精灯等。 实验试剂：脱脂乳试管、脱脂奶粉、5%蔗糖水、 1.6%溴甲酚紫、95%乙醇溶液、酵母膏、 琼脂、无菌水
【实验步骤】
1、1.6%溴钾酚紫牛乳培养基的制备
2、脱脂乳试管的制备
3、酸奶中乳酸菌的分离 4、乳酸菌的检测、纯化培养
（1）、1.6%溴甲酚紫牛乳培养基的制备
配料： （A）液：脱脂奶粉100g，水500ml，加入1.6%溴甲酚紫、乙醇溶液1ml， 80℃灭菌20min。 （B）液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g ，pH6.8， 121℃湿热灭菌20min。 操作： （1）、按照配方正确称取所需药品放于烧杯中，在搪瓷杯中加入所需水 量，玻棒搅匀，加热溶解，用1N NaOH或1N HCl调pH，加琼脂溶化，加 热过程要不断搅拌，可适当补水。琼脂完全溶解后 倒入250mL的锥形 瓶中，贴上标签，在高压锅中灭菌20min。 （2）、灭好菌的A液和B液趁热充分混合，并在酒精灯的附近趁热倒平板 。
10ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml
10-1
花园酸奶 90ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
另留一管不稀释留作对照（CK）
（2）、分离方法
A．平板划线 接种环挑取10-1菌液，按无菌操作对标有”10-1”的3个平板进 行划操作；划线完毕后，盖上皿盖，倒置放在40℃恒温培养箱中培 养48小时。
B．平板涂布
乳酸菌的分离及饮料的制备
本研究对市售主要品牌酸奶中乳酸菌进行了分离鉴定，并进一步探讨制备酸奶条件（温度、时间等），以达到最佳的天然酸奶质量效果，为广大消费者选购高品质酸奶提供理论支撑。
2．比较采用乳酸菌混合发酵的酸乳比单菌发酵的酸乳口感和风味哪个更佳？为什么？
乳酸菌混合发酵的酸乳口感和风味更佳。酸奶发酵基本原理是通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸。乳酸使牛奶中酪蛋白（约占全乳的2.9%，占乳蛋白的85%）变性凝固而是整个奶液呈凝乳状态。同时，通过发酵还可形成酸奶特有的香味和风味。因此单菌发酵的酸乳口感比较单一，乳酸菌混合发酵的酸乳口感则比较丰富并且风味更佳。
一、实验目的
1.掌握培养基的配制方法和高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
2.掌握菌种的分离纯化方法。
3.了解乳酸菌的生长特征。
4.学会制作乳酸菌饮料的方法。
二、实验内容
乳酸菌的分离纯化
1．无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养
2．菌落观察与镜检
3．筛选生产用菌株
优化酸奶制作条件
.菌落形态观察：乳白色 边缘不整齐，稍呈半球状凸起，实心菌落。
个体形态：半透明 细杆状 链状排列，大量时呈发丝状堆积。初步认为乳杆菌。
2）配制脱脂乳试管培养基，分装试管，包扎，灭菌备用。
脱脂乳试管培养基成分：20g脱脂奶粉，285ml灭菌水。
配制好的脱脂乳培养基分装到15支试管中。
（3）选取经初步鉴定的乳酸菌典型菌落，用接种环挑取转至脱脂乳试管中，40℃培养箱中培养8～24h。若牛乳出现凝固，无汽泡，呈酸性，涂片镜检细胞为杆状或链球状（两种形状的菌种分别选入），革兰氏染色显阳性，则可将其连续传代4～6次，最终选择出在3～6h能凝固的牛乳管，作菌种待用（革兰氏染色方法）
A1组—乳酸菌的培养与分离
三、制作平行梯度（稀释混合平板接种培养法）
取无菌培养皿12个
→编号标明10
-2、 10-3、 10-4、 10-5各三套
→分别吸取1ml
的10-2、 10-3、 10-4、 10-5稀释度的菌悬液对号放入平板中 养基按无菌操作法倒入12个培养皿中
→将经高温消毒的培
→置在实验台上进行转动，使样品中的微 生物与培养基混合均匀→冷凝制成平板→倒置于40℃恒温培养箱培24h
同样量取90ml的蒸馏水于一个三角瓶中，塞上棉花塞。 将试管和三角瓶分别进行牛皮纸包扎
配制营养琼脂蛋白培养基（A2组配）：500ml蒸馏水+15.5g营养琼脂蛋
→微波炉加热溶解→用NaOH溶液调pH=7.0→ 趁热取150ml、100ml分装于两个三角瓶中→塞上棉塞→牛皮纸包扎
白 粉末+2.5g脱脂奶粉
平均 值
3.7～4.5
3.4～4.1
0.9～1.0
0.9～1.0
3.4～4.1 × 0.9～1.0Leabharlann 保加利亚乳杆菌（涂布平板分离）
保加利亚乳杆菌（涂布平板分离）
平板划线分离法
一、进行实验材料的准备
清洗玻璃器皿：培养皿、烧杯、三角瓶、量筒等 配制营养琼脂蛋白培养基（A3组配）：500ml蒸馏水+15.5g营养琼脂蛋
倒平板
四、制作平行梯度（涂布平板分离培养法）
用1ml的的无菌移液管分别吸取10-2、10-3、 10-4稀释度的菌悬液0.2ml 别对号接种于与之对应的3个无菌平板中 布均匀
→分
→用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂
→平置在实验台上→倒置于42℃恒温培养箱培24h
五、实验结果观察及分析
①10-2的培养皿的培养基表面蔓延着一层乳白色的菌落薄层——乳酸菌菌落密集 生长，涂布均匀 ② 10-3、 10-4的培养皿中出现几个面积较小的乳白色的不规则形的菌落——乳酸 菌菌落集中生长
微生物学实验技术乳酸菌的分离与纯化PPT33页
16、自己选择的路、跪着也要把它走 完。 17、一般情况下)不想三年以后的事， 只想现 在的事 。现在 有成就 ，以后 才能更 辉煌。
18、敢于向黑暗宣战的人，心里必ห้องสมุดไป่ตู้ 充满光 明。 19、学习的关键--重复。
20、懦弱的人只会裹足不前，莽撞的 人只能 引为烧 身，只 有真正 勇敢的 人才能 所向披 靡。
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
乳酸菌的分离纯化
乳酸菌的分离纯化乳酸菌的分离与纯化1.实验⽬的2.实验材料2.1试验设备天平、⽜⾓匙、电炉、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏⽃、漏⽃架、玻璃棒、试管、棉塞、培养基、吸管、⽜⽪纸、线绳、标签、500mL锥形瓶两个、250mL锥形瓶两个、试管20只、500mL烧杯两个、250mL烧杯两个、100mL 烧杯两个、酒精灯、⽯棉⽹、接种针（环）。
2.2实验仪器50L的⾼压蒸汽灭菌锅、恒压⼲热灭菌箱、超镜台、光学显微镜、75%酒精棉、冰箱。
2.3实验药品新鲜酸奶、脱脂奶粉或全脂奶粉、蔗糖、 1.6%溴甲酚绿⼄醇溶液、酵母膏、琼脂、结晶紫染液、卢⼽⽒碘液、95%⼄醇、诗坛酸复红染液。
3.试验⽅法及操作过程3.1BCG⽜乳培养基配⽅及灭菌（A）液：脱脂奶粉10克，⽔50ml，加⼊1.6%溴甲酚绿⼄醇溶液1ml，80℃灭菌20min。
（B）液：酵母膏1克，⽔50克，琼脂2克，pH6.8，121℃灭菌2.min。
按照配⽅正确称取所需药品放于烧杯中，在搪瓷杯中加⼊所需⽔量，玻棒搅匀，加热溶解，⽤1N NaOH或1N HCl调pH，⽤pH试纸对照，加琼脂溶化，加热过程要不断搅拌，可适当补⽔。
琼脂完全溶解后倒⼊250mL的锥形瓶中，⽤纱布包扎好（注意不要污染纱布）再⽤⽜⽪纸包扎，贴上标签（必须⽤铅笔写），注明何种培养基。
在⾼压锅中，在1kg/cm2压⼒下维持30min。
3.2倒BCG培养基平板的⽅法将灭好菌的A液和B液趁热充分混合，点燃酒精灯对周围的空⽓进⾏灭菌，并在酒精灯的附近⽤左⼿握着平板⽤拇指和⼩拇指打开⼀个⼩缝，趁热将培养液倒如平板内，倒⼊的量能使培养基刚要覆盖平板底部，倒好后把平板平放到实验台，轻轻晃动是培养基形成⼀个平⾯，等培养基冷却凝固后倒放并贴上标签。
（注意：整个实验要在酒精灯附近做，以保证培养基不染菌）3.3脱脂乳试管的配制与灭菌直接选⽤脱脂乳液或按脱脂奶粉10克与蔗糖5克，⽔95克（蔗糖与⽔的⽐例在1：10的范围内）的⽐例配制，装量以试管的1/3为宜，115℃灭菌15min。
应用微生物学实验
应用微生物学实验————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：实验一、酸奶生产菌的分离纯化及应用一、实验目的和内容了解乳酸菌的生长特性，学习乳酸发酵和制作乳酸菌饮料的方法。
内容包括：1. 从新鲜酸乳中进行乳酸菌的分离纯化；2. 乳酸菌饮料制作；3. 自制乳酸饮料质量的品尝。
二、原理酸奶是采用优质纯鲜牛奶加入白糖均质，经超高温灭菌后接入乳酸菌发酵后制成的一种发酵型乳制品，具备鲜奶的全部营养成分，含有人体必需的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、乳糖酶和活性乳酸菌等。
在发酵过程中，鲜牛奶中的酪蛋白遇酸凝固，成为有弹性的凝块，颜色乳白、气味清香、酸甜可口，别具一番风味。
乳酸菌具有把奶类中的乳糖转化成乳酸的功能，称为乳酸发酵。
在形成乳酸的同时也产生其他一些酸类物质，从而导致了pH 值的下降，当达到乳类蛋白质的等电点时（如牛奶蛋白质的等电点约在pH4.5 左右），引起蛋白质的沉淀，使原来流动性较大的乳类，因凝固作用而变成类似果冻的胶状物，称之为“凝乳”。
不管是何种酸奶，其共同的特点都是含有乳酸菌。
这些乳酸菌在人体的肠道内繁殖时会分泌对人体健康有益的物质，因此酸奶对人体有较多的好处：一是能将牛奶中的乳糖和蛋白质分解，使人体更易消化和吸收；二是酸奶有促进胃液分泌、提高食欲、加强消化的功效；三是乳酸菌能减少某些致癌物质的产生，因而有防癌作用；四是能抑制肠道内腐败菌的繁殖，并减弱腐败菌在肠道内产生的毒素；五是有降低胆固醇的作用，特别适宜高血脂的人饮用。
和普通牛奶相比，酸奶的最大特点是含有大量活着的微生物，是具有生命力“活”着的特殊食品。
酸奶中的微生物根据它们功能分为2大类：1．发酵用乳酸菌：是指那些起源于奶制品长期用于酸奶制造的乳酸菌。
2．生物活性用乳酸菌：是近年从人体分离、驯化而成具有特定生物活性的乳酸菌，基本都是后述的益生菌。
乳酸菌的分离与纯化
乳酸菌的分离与纯化及土豆（大豆）发酵1．乳酸菌的种类、形态、生理生化特征乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
大多数不运动，少数以周毛运动。
菌体常排列成链。
在其发酵产物中只有乳酸的称为同型乳酸发酵，而产物中除乳酸外还有较多乙酸、乙醇、CO２等物质的称为异型乳酸发酵。
有微好氧菌和专性厌氧菌。
根据细胞形态为球状或杆状，可分为两大类，即乳酸链球菌族（Strepto coccea e）和乳酸杆菌（Lactoba cillea e）。
乳酸链球菌族，菌体球状，通常成对或成链，在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。
多数为同型发酵，如链球菌属（Strepto coccus），是与人类关系密切的重要菌群，有些菌是人和温血动物的致病菌；有些是人体的正常菌群存在于口腔和肠道；有些是乳制品及植物发酵食品中的常用菌，常在食品工业中使用，如乳链球菌（S．lactis）。
少数为异型发酵，如肠膜状明串珠菌（Leucono stocme senter oides）是制药工业上生产右旋糖酐（即代血浆）的重要菌种，但也是制糖工业的一种害菌，常使糖汁发粘稠而无法加工。
乳酸杆菌族，菌体杆状，单个或成链，有时成丝状、产生假分枝。
在BCG 牛乳培养基琼脂平板上，乳酸菌菌落大约1-3 mm，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸菌落周围还能产生CaCO3的溶解圈。
乳酸菌革兰氏染色呈阳性，涂片镜检细胞杆状或链球状。
2.实验材料2.1试验设备天平1个、牛角匙、电炉1个、 pH试纸（1套）、 100ml量筒（2个）、漏斗、漏斗架（1套）、玻璃棒（2根）、棉塞、培养基（15个）、无菌移液管（3支）、牛皮纸（5张）、线绳、标签、 500mL锥形瓶3个、 250mL锥形瓶2个、试管20只、 500mL烧杯2个、 250mL烧杯2个、 100mL烧杯2个、酒精灯2个、石棉网1个、接种针（环）2个。
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌的分离鉴定主要包括以下步骤：
1. 菌落筛选：根据菌落的颜色、大小、光泽度和透明程度，挑取含溶钙圈的单菌落。
2. 分离纯化：在MRS或Elliker固体培养基上反复划线分离，直到分离到纯的单一菌落。
3. 革兰氏染色：镜检观察菌体颜色、大小、形状和排列方式。
4. 过氧化氢酶实验：将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性的菌株初步认定为乳酸菌。
5. 保藏：用终浓度为25%甘油冻存管进行菌株的保藏，置于-80℃冰箱中保存备用。
乳酸菌的试验方法主要包括以下步骤：
1. 耐酸性优良菌株筛选试验：将分离纯化的乳酸菌和实验室耐酸性较好的WHH544接种到MRS液体培养基中，接种量为2%，于37℃培养箱中培养24小时，连续活化2代后，以6000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀菌体用灭菌生理盐水洗涤、离心2次后，通过麦氏比浊法调整菌悬液浓度为×108CFU/mL。
2. 其他试验：根据具体研究需求进行相关试验，例如通过不同条件培养，观察菌株生长情况；或通过发酵实验，测定乳酸菌的产酸能力等。
以上内容仅供参考，建议查阅专业微生物学书籍或文献获取更全面和准确的信息。
乳酸菌的分离与发酵09级4班2组2
乳酸菌的分离与发酵09级4班2组2很好的,实用乳酸菌的分离与发酵实验生命科学学院2021级四班2组傅盛晟摘要：本文对乳酸菌的分离与发酵实验进行阐述，从市售酸乳中分离保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，并进行分离与鉴定，最后进行酸乳的发酵实验！实验主要是分离与纯化，鉴定与发酵，最后用分离的菌进行酸乳发酵在与市售酸乳混合菌种进行比较。
关键词：酸奶，乳酸菌，分离鉴定，发酵微生物在厌氧条件下，分解己糖产生乳酸的作用，称为乳酸发酵。
能够引起乳酸发酵的微生物种类很多，其中主要能利用可发酵糖生产乳酸的细菌，即乳酸细菌。
常见的乳酸细菌属于链球菌属（Streptococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobaterium)和明串珠菌属(Leuconostoc)等。
乳酸细菌多是耐氧菌，只在厌氧条件下才进行乳酸发酵，所以在筛选乳酸茵或需要进行乳酸发酵的情况下，应保证提供厌氧条件。
酸奶是以全脂牛奶等为原料，经乳酸细菌发醇而成的一种具有较高营养价值和特殊风味的发醇制品，是具有一定保健作用的食品。
酸奶发酵过程通常是由双菌或多菌的混合培养实现的。
其中的杆菌先分解酪蛋白为氨基酸和小肽．由此促进了球菌的生长，而球菌产生的甲酸又刺激了杆菌产生大量乳酸和部分乙醛，此外球菌还产生了双乙酰这类风味物质，因此，达到了稳定状态的彻合发酵。
酸乳发酵的基本原理是通过乳酸细菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中的酪蛋白(在全乳中的质量分数为2．9％，在乳蛋白中的质量分数为85％)变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。
同时，通过发酵还可以形成酸奶特有的风味和香味(与形成乙醛、丁二酮等有关)。
酸奶发酵中的主要生物化学变化是：乳酸菌将牛奶中的乳糖发酵成乳酸使其PH降至酪蛋白等电点(4.6)附近(4.0~4.6)从而使牛奶形成凝胶状；其次，乳酸菌还会促使部分酷蛋内降解、形成乳酸钙和产生一些脂肪、乙醛、双乙酰和丁二酮等风味物质。
这就是酸奶具有良好的保健作用和适合广大乳糖不耐症患者饮用的主要原因。
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1mL
每管各9mL无菌水
琼脂培养基
取市售新鲜酸乳稀释至10-6，取其中的10-4、
10-5 、 10-6 3个稀释度的稀释液各0.2mL，分别接
入BGC 牛乳培养基琼脂平板上，用无菌玻璃刮
刀依次涂布，置40℃培养48h，如出现圆形稍扁
平的黄色菌落及其周围培养基变黄者初步定为
乳酸菌。
每组准备下列器材（灭菌）
实验九 乳酸菌的分离纯化
目的要求：
学习从新鲜酸乳中分离纯化乳酸菌 的方法 学习乳酸的检测方法
基本原理：
选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、
酸碱度、温度和氧等要求造成只利于该微生物生长， 而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要
的微生物；加入某种指示剂，使待分离微生物在培养
基中形成具有明显特征的菌落。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以 是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单 菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过 稀释涂布平板或平板划线等技术完成。
实验器材：
菌种 市场销售的各种新鲜酸乳(辉山酸奶) BGC 牛乳培养基 脱脂乳粉 蔗糖 脱脂乳试管培养基
操作步骤：
（一）乳酸菌的分离纯化 1.分离 培养基的配制 灭菌 倒平板 接种（涂布法）
制备样品稀释液 培养
BGC 牛乳培养基
（A）溶液：脱脂乳粉 100g，水500mL，加入 1.6%溴甲酚绿(B.G.C)乙醇溶液1mL,80℃灭 菌20min。 （B）溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g， pH6.8, 121℃灭菌20min。 以无菌操作趁热将（A）、（B）溶液混合均 匀后倒平板。
1.培养基 A 溶液（500ml三角瓶，内装125ml） 2.培养基 B 溶液（500ml三角瓶，内装125ml） 3.试管6支（内装9ml水 ） 4.培养皿一包（9个） 5.移液管7支 7.玻璃刮刀2个
2.鉴别
选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40 ℃ 培养8 ~ 24h，若牛乳出现凝固，无气泡，呈酸 性，涂片镜检细胞杆状或链球状（两种形状的 菌种均分别选入），革兰氏染色呈阳性，则可 将其连续传代4~6次，最终选择出在3~6h能凝固 的牛乳管，作菌种待用。
脱脂乳试管培养基
脱脂乳粉与5%蔗糖水为1：10的比例 配制，装量以试管的1/3为宜， 115℃ 灭菌15min。 每组配制脱脂乳试管培养基150mL， 分装15支试管。
（二）乳酸发酵及检测
此部分实验内容为自主设计实验，要求如下： 1. 通过查阅文献资料，了解乳酸的检测方法； 2. 设计实验方案，检测你所分离出的微生物是 否产生乳酸。
3. 完成实验报告。