【CN109557065A】一种检测土壤中-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法【专利】
_葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展
第26卷第2期2007年3月 食品与生物技术学报Journal of Food Science and Biotechnology V o l.26 N o.2M ar. 2007 文章编号:1673-1689(2007)02-0107-08 收稿日期:2006-12-29.作者简介:李华(1959-),男,重庆梁平人,教授,博导,主要从事分子生物学及葡萄与葡萄酒方面研究.Email :putj@β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展李华, 高丽(西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100)摘 要:介绍了葡萄和葡萄酒中β-葡萄糖苷酶的研究概况,理化性质、酶活测定方法,以及不同来源的酶活检测的研究概况,并且经过分析提出以对硝基苯基β-D -葡萄糖苷(pN PG )为底物检测葡萄浆果中的β-葡萄糖苷酶酶活的关键影响因素:粗酶液的制备、酶最适反应温度、最佳反应时间、缓冲液类型和pH 及最佳吸收波长。
关键词:葡萄;β-葡萄糖苷酶;活性中图分类号:Q 55文献标识码:AResearch Advance on Methods of determining β-Glucosidase ActivityLi Hua , GAO Li(Colleg e of Enolo gy ,N o rthwest Univ ersity of A g riculture &Fo restry ,Yangling 712100,China )Abstract :Aro ma is one o f the impor tant factors that determining the character and quality o f w ine.β-g lucosidase is a kind of key enzy me w hich releasing aroma precurso rs.In this manuscript ,the prog re sses of the chemical pro perties ,determination methods ,and the source o f β-g lucosidase w ere review ed.On the o ther hand ,the key facto rs that involv e in the β-gluco sidasedetermination method w ith p -Nitrophenyl -β-D -gluco py ranoside as substrate as follow :tem perature ,reactio n tim e ,buffe r type ,pH and abso rb w avelength.Key words :g rape ;β-glucosidase ;activities 典型的葡萄酒风味主要源于葡萄中的挥发性化合物,然而葡萄浆果中存在着游离态和结合态两大类呈香物质。
土壤酶活性测定方法【最新】
土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。
三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。
培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
20min后显色，定容。
一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法[发明专利]
![一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/8ea15b224531b90d6c85ec3a87c24028915f85be.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810891591.4(22)申请日 2018.08.07(71)申请人 浙江农林大学地址 311300 浙江省杭州市临安市环城北路88号(72)发明人 梁辰飞 赵均宁 赵安英 卜爱爱 刘亦荐 陆潇 (74)专利代理机构 安化县梅山专利事务所43005代理人 夏赞希(51)Int.Cl.G01N 21/31(2006.01)(54)发明名称一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法(57)摘要本发明属于土壤检测领域，具体的说是一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖；步骤B、过滤葡萄糖浸提液；步骤C、DNS试剂制取；步骤D、样品测定：通过测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量，在使用葡萄糖的土壤培养实验中，可以不用同位素标记的方法即可测出土壤中存留的葡萄糖余量，而且比较精确，回收率高。
权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 108956499 A 2018.12.07C N 108956499A1.一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖：用电子天平称取15g鲜土样品装入30mL的离心管中，再加入15mL蒸馏水，放在25℃的震荡仪中以150r/min震荡30min后，然后放在3000r/min的速度离心机中离心10min；步骤B、过滤葡萄糖浸提液：用15mL的针筒吸取步骤A离心所得的上清液，再用0.22μ的水系的针头过滤器过滤，将滤液收集在灭菌的10mL离心管中待测；步骤C、DNS试剂制取：将5.0g 3,5-二硝基水杨酸溶于200mL 2mol/L NaOH溶液中，再加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，缓慢混匀后加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL放置在暗处保存备用；步骤D、样品测定：在25ml的比色管里加入步骤B过滤后的葡萄糖浸提液1mL，再加入1mL 蒸馏水和步骤C制取的2mL DNS试剂，将试管内液体混匀之后，放在水浴锅中沸水浴5min，待冷却后用蒸馏水定容至25ml，测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量。
一种检测凋落物β-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法[发明专利]
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专利名称：一种检测凋落物β-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法专利类型：发明专利
发明人：刘兵,耿莉,刘怡,徐杰,曲朝磊,杨艺红,孙辉
申请号：CN202010062495.6
申请日：20200119
公开号：CN112210586A
公开日：
20210112
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测凋落物β‑葡萄糖醛酸苷酶活性的方法，涉及凋落物酶活性检测的技术领域。
该方法包括以下步骤：1)在凋落物碎屑中加入培养缓冲液，低温孵育，离心收集滤液，进一步稀释得到酶活测试液；并制备灭活对照酶液；2)制作MUB浓度与吸光值之间关系的标准曲线；3)将酶活测试液和灭活对照酶液分别添加到酶活测试孔和阴性孔，然后加入4‑MUB‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷工作液，避光震荡孵育，反应结束后加入终止液终止反应，在检测条件下，读取荧光值；4)根据标准曲线，计算β‑葡萄糖醛酸苷酶比酶活。
本发明酶液耗量少、操作强度小；灵敏度呈数量级提高；且测试液pH对上机数据没有影响，能够真实反映凋落物中酶活性。
申请人：南京林业大学
地址：210037 江苏省南京市玄武区龙蟠路159号
国籍：CN
代理机构：南京申云知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：邱兴天
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d-葡萄糖底物uv分光光度法 酶活测定方法
葡萄糖底物UV分光光度法是一种用于测定酶活的常见方法。
本文将介绍葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及其在生物化学和生物医学研究中的应用。
一、原理1. 葡萄糖酶（也称葡萄糖氧化酶）能够催化葡萄糖与氧气在水溶液中发生氧化反应，生成葡萄糖内酯和过氧化氢。
这个氧化反应是可以通过UV分光光度法测定的。
2. 葡萄糖底物UV分光光度法的原理是通过测定在酶催化下葡萄糖与氧气反应所产生的过氧化氢的浓度变化来间接测定酶的活性。
二、步骤1. 样品处理：将待测样品中的葡萄糖与底物混合，使底物的浓度在一定范围内，以确保底物的过量不会影响酶的活性测定。
2. 加入酶液：将一定量的葡萄糖酶加入混合液中，并在一定温度下孵育一段时间，使酶与底物发生反应。
3. 反应停止：加入一种化学试剂使反应停止，同时转化过氧化氢形成一种有色产物。
4. 测定吸光度：使用紫外-可见分光光度计测定产生的有色产物的吸光度，根据标准曲线计算出反应体系中的过氧化氢的浓度。
5. 计算酶活：根据过氧化氢的浓度变化和所加的酶的蛋白质含量等数据，计算出酶的活性。
三、应用1. 生物化学研究中的应用：葡萄糖底物UV分光光度法广泛应用于酶动力学研究中，可以用来测定各种酶的活性及其对底物的亲和力。
2. 生物医学研究中的应用：在生物医学研究中，葡萄糖底物UV分光光度法可以用来研究酶与疾病的关联性，例如糖尿病患者血清中的葡萄糖酶活性与血糖水平的关系。
结论葡萄糖底物UV分光光度法是一种简单、敏感、精确的酶活测定方法，具有广泛的应用前景和重要的科研意义。
通过对葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及应用进行了解和掌握，可以更好地指导实验操作并推动生物化学和生物医学领域的研究进展。
近年来，随着生物技术的不断发展，葡萄糖底物UV分光光度法在生物医学研究中的应用越发广泛。
除了用于酶动力学研究和疾病相关性分析外，葡萄糖底物UV分光光度法还在其他领域展现出了巨大的潜力。
1. 新药研发在新药研发过程中，葡萄糖底物UV分光光度法被用于筛选潜在的药物候选化合物。
一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法[发明专利]
![一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ca3a29bc3c1ec5da51e2701f.png)
专利名称：一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法专利类型：发明专利
发明人：洪军,耿方勇,肖保林
申请号：CN201610142392.4
申请日：20160314
公开号：CN105586388A
公开日：
20160518
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法，具体为：1）配置pH值为5.8的磷酸盐缓冲液，然后室温下依次加入辣根过氧化物酶液、葡萄糖氧化酶液、愈创木酚和葡萄糖溶液；2）采用紫外可见光分光光度计进行时间扫描，获得产物四邻甲氧基连酚的吸光值随时间的变化数据；3）根据朗伯比尔定律将四邻甲氧基连酚的吸光值换算为浓度，然后以时间为横坐标，浓度为纵坐标，在excel中作散点图，添加趋势线，趋势线斜率即为四邻甲氧基连酚的生成速率，该生成速率乘以系数4即得到葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的反应速率，再根据酶活力单位定义进行换算即得到葡萄糖氧化酶酶活性。
该方法具有操作简便，反应现象明显，灵敏度高，重复性好等优点。
申请人：河南大学
地址：475001 河南省开封市明伦街85号
国籍：CN
代理机构：郑州联科专利事务所(普通合伙)
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土壤酶活活性测定方法
土壤月尿酶（urease^）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脉酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用丁脉酶活性的测定。
（二）试剂D甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7） : 184克和147.5克氢氧化钾溶丁蒸僻水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7,用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L） : 62.5克苯酚溶丁少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A）,存丁冰箱中；27克NaOH溶丁100毫升水（B）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸僻水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铉溶丁水并稀释至1000mL,得到1mL含有0.1mg氮的标准液。
（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL,定容至100mL,即稀释了10倍，吸取1, 3, 5, 7, 9, 11, 13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL,再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL 次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟，用水稀释至刻度。
将着色液在紫外分光光度计上丁578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
（2）土壤中脉酶活性的测定称取10 g 土壤置丁100mL容量瓶中。
用2mL甲苯处理15分钟。
往瓶中加入10mL 10%尿素溶液和20mL柠檬酸缓冲液（pH6.7）。
仔细混合后，将瓶放在37C包温箱中，放置3 ho与此同时，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定。
培养结束后，用热至38C的水稀释至刻度。
摇匀，将悬液过滤。
吸取1mL 滤液丁50mL容量瓶中，用蒸僻水加至10mL。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)检测
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）检测
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Soil N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）是一种酸性水解酶，主要分布于土壤微生物的溶酶体中，其活性变化与机体某些病理状态密切相关。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶的测定原理：S-NAG分解对硝基苯β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶活性。
迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶活性变化。
此外，我们还提供其他土壤酶类检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶活性信息。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法土壤酶活性测定方法一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法1. 试剂配制（1）2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。
（2）3，5-二硝基水杨酸溶液1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超过7天）。
（3）1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g N a2HPO4·12H2O 溶于1000mL蒸馏水中。
（4）1/15M 磷酸二氢钾1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。
（5）pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) （6）8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。
（7）甲苯。
（8）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。
然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄糖母液（10mg还原糖/ml）。
取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准葡萄糖液（1mg/ml）；2. 操作步骤（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。
用蒸馏水补足至10mL。
加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。
最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶活性测定：称5.00g土样，置于50mL三角瓶中，注入15.0mL 8%蔗糖溶液，5.0mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
一种高效、快速检测α-葡萄糖苷酶活性的方法[发明专利]
![一种高效、快速检测α-葡萄糖苷酶活性的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9938d50c5627a5e9856a561252d380eb629423f9.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910808644.6(22)申请日 2019.08.29(71)申请人 中山大学地址 510275 广东省广州市海珠区新港西路135号(72)发明人 杨立群 尹林 吴柔君 魏书玥 罗嘉浩 (74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限公司 44102代理人 赵崇杨(51)Int.Cl.G01N 24/08(2006.01)G01N 1/38(2006.01)(54)发明名称一种高效、快速检测α-葡萄糖苷酶活性的方法(57)摘要本发明公开了一种高效、快速检测α-葡萄糖苷酶活性的方法，该方法以寡糖作为反应底物，利用1H NMR法检测α-葡萄糖苷酶分解寡糖产生的葡萄糖的量来计算α-葡萄糖苷酶比活力值。
本发明检测α-葡萄糖苷酶活性具有高效、快速的优点，所采用的底物和反应条件更能体现α-葡萄糖苷酶水解反应的客观性和真实性。
本发明的工艺简单、操作方便，所需材料稳定且廉价。
本发明作为一种高效、快速检测α-葡萄糖苷酶活性的方法，有望应用于α-葡萄糖苷酶活性检测的相关科研及医疗诊断。
权利要求书2页 说明书10页 附图2页CN 110823939 A 2020.02.21C N 110823939A1.一种检测α-葡萄糖苷酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将寡糖底物溶解于pH 4～8缓冲溶液中，得到寡糖底物溶液；S2.将α-葡萄糖苷酶溶解于pH 4～8缓冲溶液中，得到α-葡萄糖苷酶溶液；S3.取等体积比的寡糖底物溶液与α-葡萄糖苷酶溶液，混匀，20～40℃反应1～60分钟；S4.将步骤S3的反应溶液于沸水中煮沸1～10分钟，冷却至20～40℃，再冷冻高速离心；S5.将S4步骤离心所得上清液装入一端封管的毛细管内，然后将另一端封端；S6.将S5步骤所得样品毛细管装入含有内标及氘代试剂的核磁测试管中，进行NMR测试，得到反应溶液的1H NMR谱图；S7.将S1步骤所得寡糖底物溶液重复S5和S6操作，得到寡糖底物溶液的1H NMR谱图；S8.对步骤S6和S7所得的1H NMR谱图进行解析，以下述公式得到每毫克α-葡萄糖苷酶固体样品每分钟产生葡萄糖产物的微摩尔数即α-葡萄糖苷酶的比活力：式中，t为反应时间(min)；w为α-葡萄糖苷酶固体样品的质量(mg)；N0为寡糖的初始物质的量(mmol)；Iβ-Ha为反应t时间后葡萄糖中β-H a质子的峰面积积分；I内标为内标物的质子峰面积积分；I0为寡糖的初始H b质子的峰面积积分。
一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法
一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法任婷月;周万里;张利群;毕春元;李敬龙【摘要】采用SBA-40C型生物传感分析仪建立了一种葡萄糖氧化酶活力的快速测定方法.利用生物传感分析仪检测葡萄糖质量浓度的工作原理,葡萄糖氧化酶专一性地与β-D-葡萄糖反应,产生的过氧化氢在过氧化氢电极表面上发生电子转移,内置电子元件将电信号转变为数字信号,用已知活性单位的葡萄糖氧化酶作为测定标准定标后,即可在仪器上直接测出待测样品的葡萄糖氧化酶活性单位.结果表明:利用生物传感分析仪测定葡萄糖氧化酶活力时,缓冲液最佳pH为6.5,测定时间20 s,操作周期小于60 s,连续10次测定RSD值为0.63％,0 ～ 100 U/mL的范围内线性良好,r=0.999 1.该方法专一性高、简便、快速、准确、重复性好,适用于样品数目较多的葡萄糖氧化酶活力的快速测定.%The purpose of our work was to establish a method for determination of glucose oxidase activity using SBA-40C biosensor analyzer.This novel method was based on the working principle of the SBA-40C biosensor analyzer to detect the contents of glucose.That is,glucose oxidase specifically reacted withβ-D-glucose and produced hydrogen peroxide,then electron transfer occurred on the surface of Peroxide hydrogen electrode,after that the built-in electronic components turned electrical signals into digital signals.A known unit of glucose oxidase was used as measurement standard,the glucose oxidase activity of the tested sample can be detected on the SBA-40C biosensor analyzer directly.Results showed that optimum reaction pH was 6.5,measurement time was 20s,and the operation period was less than 60 s.The RSD value of 10 consecutive was 0.63％,and 0 ～ 100 U/mL was within the scope oflinear good,r =0.9991.The method is special,simple,rapid,accurate,and reproducible,which was suitable for determination of glucose oxidase activity with numerous samples.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)001【总页数】4页(P212-215)【关键词】葡萄糖氧化酶;生物传感分析仪;过氧化氢电极【作者】任婷月;周万里;张利群;毕春元;李敬龙【作者单位】齐鲁工业大学生物工程学院,山东济南,250353;山东省科学院生物研究所山东省生物传感器重点实验室,山东济南,250014;山东省科学院生物研究所山东省生物传感器重点实验室,山东济南,250014;山东省科学院生物研究所山东省生物传感器重点实验室,山东济南,250014;齐鲁工业大学生物工程学院,山东济南,250353【正文语种】中文葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)是一种氧化还原酶，在O2充足条件下，它能够快速专一地催化β-D-葡萄糖为β-D-葡萄糖酸和 H2O2［1］。
一种D-葡萄糖的检测方法和应用[发明专利]
![一种D-葡萄糖的检测方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a0827e7e2a160b4e767f5acfa1c7aa00b42a9d40.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010013434.0(22)申请日 2020.01.07(71)申请人 湖北大学地址 430062 湖北省武汉市武昌区友谊大道368号(72)发明人 程佳吉 王秋实 郝俊杰 林家颖 (74)专利代理机构 北京品源专利代理有限公司11332代理人 巩克栋(51)Int.Cl.G01N 21/19(2006.01)(54)发明名称一种D-葡萄糖的检测方法和应用(57)摘要本发明提供了一种D -葡萄糖的检测方法和应用，所述检测方法包括利用手性半胱氨酸封端的二氧化钼进行检测。
本发明提供的检测方法利用手性半胱氨酸封端的二氧化钼与葡萄糖氧化酶(Gox)配合使用，可以实现对D -葡萄糖的检测，对于其他非D -葡萄糖的糖分子样品无响应，具有高的选择性；同时检测灵敏度高且D -葡萄糖检测限(LOD)较低。
权利要求书2页 说明书6页 附图5页CN 111189783 A 2020.05.22C N 111189783A1.一种D-葡萄糖的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括利用手性半胱氨酸封端的二氧化钼进行检测。
2.根据权利要求1所述的D-葡萄糖的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：(1)绘制标准曲线；(2)将待测样品与手性半胱氨酸封端的二氧化钼混合，检测混合溶液的圆二色光谱；(3)通过步骤(2)中得到的圆二色光谱的CD峰绝对值，对应标准曲线，确定待测样品中D-葡萄糖的浓度。
3.根据权利要求2所述的D-葡萄糖的检测方法，其特征在于，所述标准曲线以D-葡萄糖的浓度为横坐标，以手性半胱氨酸封端的二氧化钼的圆二色光谱的CD峰绝对值为纵坐标。
4.根据权利要求2或3所述的D-葡萄糖的检测方法，其特征在于，所述标准曲线的绘制方法包括如下步骤：(A)分别配置不同浓度的D-葡萄糖溶液，所述D-葡萄糖溶液中包括葡萄糖氧化酶；(B)将D-葡萄糖溶液与手性半胱氨酸封端的二氧化钼混合，利用圆二色光谱检测手性半胱氨酸封端的二氧化钼的CD峰绝对值；(C)以D-葡萄糖的浓度为横坐标，以CD峰绝对值为纵坐标，绘制标准曲线。
一种测定黄芩内源β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法[发明专利]
![一种测定黄芩内源β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/e86d25c80066f5335b812198.png)
专利名称：一种测定黄芩内源β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法专利类型：发明专利
发明人：喻春皓,邹雯燕,陈汝珺,胡涛,夏尧干,钱婷婷,闵志迪,刘娜,周跃,刘星,靳洋烨,付晨伟,纪香峰,庹群
申请号：CN201910866377.8
申请日：20190912
公开号：CN110596030A
公开日：
20191220
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种测定黄芩内源β‑D‑葡萄糖醛酸苷酶活性的方法，包括如下步骤：（1）配制缓冲液、碳酸钠溶液以及对硝基苯酚标准液；（2）提取黄芩粗酶液；（3）以对硝基苯酚浓度为横坐标，最大吸收峰处的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；（4）取缓冲液，粗酶液以及对硝基
苯‑β‑D‑葡萄糖苷酸溶液混合加热反应，反应结束后，采用紫外分光光度计测反应液吸光度；（5）将测得的吸光度，代入标准曲线中，算出反应生成的对硝基苯酚的摩尔浓度，运用公式，算出β‑D‑葡萄糖醛酸苷酶活力。
本发明采用紫外分光光度法来测定一定时间内β‑D‑葡萄糖醛酸苷酶将一定量的底物水解成的对硝基苯酚的量的多少，进而来确定酶活性的强弱。
申请人：淮阴工学院
地址：223005 江苏省淮安市高教园区枚乘东路1号
国籍：CN
代理机构：淮安市科文知识产权事务所
代理人：谢观素
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土壤α-1,4-葡萄糖苷酶测定方法
土壤α-1,4-葡萄糖苷酶测定方法嘿，咱今天就来聊聊土壤α-1,4-葡萄糖苷酶测定方法这档子事儿。
你说这土壤里的玩意儿，平时咱也看不见摸不着，可它还真就挺重要呢！要测定这土壤α-1,4-葡萄糖苷酶，那可得有点门道。
就好像咱要找个藏起来的宝贝，得知道从哪儿下手。
首先呢，得准备好合适的土壤样本，这就跟做饭得先有食材一个道理。
你可别小瞧这一步，要是土壤样本没弄好，那后面的测定可就没准头啦。
然后呢，就得用上一些专门的试剂和仪器啦。
这就好比战士上战场得有趁手的兵器呀！那些个小瓶子小管子的，可都有大用处。
通过它们和土壤样本发生反应，才能让我们看到土壤α-1,4-葡萄糖苷酶的“真面目”。
接下来就是具体操作啦。
这过程啊，可得细心再细心，就跟绣花似的。
温度啦、时间啦，都得把握得恰到好处。
不然，这结果能准吗？你想想，要是做饭火候不对，那菜能好吃吗？这测定方法啊，说起来简单，做起来可不容易呢。
就好像走迷宫，一个不小心就走错路啦。
但咱可不能怕呀，得一步步稳稳地走。
有时候我就想啊，这小小的土壤α-1,4-葡萄糖苷酶，藏在那黑乎乎的土壤里，要是没人去研究它，那它的秘密不就一直被藏着啦？咱搞这个测定，不就是为了更了解土壤，更了解大自然嘛。
你说，要是咱能把这测定方法掌握得透透的，那得有多牛啊！以后再遇到土壤相关的问题，咱就能胸有成竹地说：“嘿，这我懂！”那感觉，多棒啊！而且啊，这测定方法还能不断改进呢。
就像咱的手机一样，一代比一代厉害。
说不定以后会有更简单更准确的方法出现，那可就方便多啦。
总之呢，这土壤α-1,4-葡萄糖苷酶测定方法可真是个有趣又有意义的事儿。
咱得好好研究，让它为咱的农业、环境啥的出份力。
你说是不是这么个理儿呀？咱可不能小瞧了这土壤里的小秘密，得把它们都给挖出来，让它们为咱服务呀！。
体液中α-D-葡萄糖苷的测定方法[发明专利]
![体液中α-D-葡萄糖苷的测定方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/04c1a610941ea76e59fa0425.png)
专利名称：体液中α-D-葡萄糖苷的测定方法专利类型：发明专利
发明人：李立和,齐秀会,张晨磊
申请号：CN201911030070.0
申请日：20191030
公开号：CN110579472A
公开日：
20191217
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了体液中α‑D‑葡萄糖苷的测定方法，属于利用可见光，通过测试反应结果颜色的变化来测试材料的方法。
本发明的技术方案是：试剂II中仅有α‑糖苷酶一种有效组分，其它有效组分同在试剂I中，体液中葡萄糖先与试剂Ⅰ反应生成D‑葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶催化下与4‑氨基安替比林，2,4‑二氯酚生成红色醌亚胺和水，加入试剂Ⅱ后体液中α‑D‑葡萄糖苷在α‑糖苷酶作用下水解成ROH和α‑D‑葡萄糖，α‑D‑葡萄糖在变旋酶作用下生成β‑D‑葡萄糖再与试剂Ⅰ反应生成红色醌亚胺和水，以试剂Ⅰ反应产生的红色醌亚胺为反应空白，由试剂Ⅱ反应产生的红色醌亚胺计算出体液中α‑D‑葡萄糖苷的含量。
申请人：天津市宝坻区人民医院
地址：301800 天津市宝坻区广川路8号
国籍：CN
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一种检测凋落物外切葡聚糖酶活性的方法[发明专利]
![一种检测凋落物外切葡聚糖酶活性的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d31a331c0166f5335a8102d276a20029bd6463a7.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010063065.6(22)申请日 2020.01.19(71)申请人 南京林业大学地址 210037 江苏省南京市玄武区龙蟠路159号(72)发明人 刘兵 李世杰 葛炎 李小丽 刘怡 孙辉 (74)专利代理机构 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274代理人 邱兴天(51)Int.Cl.C12Q 1/34(2006.01)G01N 21/75(2006.01)G01N 21/31(2006.01)G01N 21/64(2006.01)(54)发明名称一种检测凋落物外切葡聚糖酶活性的方法(57)摘要本发明公开了一种检测凋落物外切葡聚糖酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。
本发明提供的检测凋落物外切葡聚糖酶活性的方法包括：称取过筛的凋落物碎屑到离心过滤管中，加入培养缓冲液低温孵育，高速离心后将滤液混合并调节至一定体积；将待测酶液和灭活酶液分别加入黑色酶标板孔内，再加入荧光共轭纤维素二糖苷工作液，在避光条件下震荡孵育后，向各酶标孔加入Tris终止液；采用多功能酶标仪进行荧光检测；计算外切葡聚糖酶活性。
本发明的优点为：优化了反应体系，反应酶液需求少，减少了其它酶活和人为操作干扰，灵敏度高，结果可靠，将反应体系置于酶标板内，避光震荡培养后添加终止液即可上机操作，批量获得结果数据，效率高。
权利要求书2页 说明书7页 附图1页CN 111705109 A 2020.09.25C N 111705109A1.一种检测凋落物外切葡聚糖酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将培养缓冲液加入剪碎过筛后的待测凋落物，于离心过滤管离心得到酶滤液，将酶滤液进一步稀释制成酶活待测液；2)将步骤1)中制得的一部分酶活待测液进行加热灭活，作为灭活酶液；3)配制梯度浓度的MUB荧光标准物质溶液，采用多功能酶标仪进行荧光检测；4)酶标板的酶标孔中分别加入酶活待测液和灭活酶液，再分别加入含有4-MUB-β-D-纤维素二糖苷的荧光底物工作液进行反应，随后加入终止液终止反应；5)采用多功能酶标仪对步骤4)反应结果进行荧光检测；6)以MUB荧光标准物质溶液的梯度浓度和测定的对应吸光值A绘制出荧光标准曲线，得到标准曲线斜率b；7)计算酶活待测液的稀释因子；8)计算酶活待测液的比酶活。
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( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910035291 .0
(22)申请日 2019 .01 .08
(71)申请人 吉林省农业科学院 地址 130033 吉林省长春市生态大街于德斌 饶德民 闫日红 丛博韬 颜秀娟 李明姝 王新风
权利要求书1页 说明书3页
CN 109557065 A
CN 109557065 A
权 利 要 求 书
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1 .一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法，其特征在于，包括如下步骤： 配制50mM醋酸缓冲液，取4 .1g醋酸钠、161μl冰醋酸和无菌去离子水水定容至1000ml并 调节PH至5 .5； 配制200μM的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液，称取6 .762mg的4-甲基伞形酮和 30μl二甲基亚砜溶解溶解，加无菌去离子水稀释定容至100ml； 配制10μM标准品溶液，称取1 .762mg的4-甲基伞形酮和30μl二甲基亚砜溶解，再定容至 1000ml，制得10μM标准品溶液； 将标准品溶液用蒸馏水分别稀释成浓度为0、0 .025μM、0 .05μM、0 .125μM、0 .25 .0μM、0 .5 μM的标准溶液 ，制得标样液 ，分别用移液枪吸取50μl至96孔板中 ，后分别加入200μl醋酸缓 冲液，再分别加入20μl的1M NaOH溶液，然后进行荧光检测，如此重复制作3条标准曲线； 称取2份0 .3g的土壤鲜样于5ml离心管中，其中1份用于烘干测土壤含水量W，另1份加入 3mL醋酸缓冲液均质混匀，在涡旋仪上高速震荡5分钟，再4℃低温4000R离心5分钟； 吸取3份容量为200μl的经离心后的土壤鲜样与醋酸缓冲液混合物的上清液至96黑孔 板中，其中一份再加50μl醋酸缓冲液，一份加50μl的10μM的标样液，另一份加50μl的4-甲基 伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液； 在37℃培养2h后向黑孔板中每孔加入20μl的1M的NaOH溶液，终止反应； 在荧光检测仪读板温度37℃、酶标板震荡时间1min、激发波长350nm、发射波长450nm的 条件下，测定每孔的荧光强度值； 以标样液浓度和测定的吸光值A制作标准曲线，得到斜率b； 通过如下公式计算得酶活性： 酶活性＝[(RS-BU)*(SA-SC)/(QS-SC)]-(NC-BU)]*b*2*3000/(0 .3*W*200)， 其中 ，SC为上清液+50μl的醋酸缓冲液所 测荧光强度值 ，QS为上清液+50μl的标样液所 测荧光强 度值 ，SA为上清液+50μl的 4-甲 基伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液所 测荧光强 度 值，BU为200μl的醋酸缓冲液+50μl醋酸缓冲液所测荧光强度值，RS为200μl的醋酸缓冲液+ 50μl的标准品溶液所测荧光强度值，NC为200μl的醋酸缓冲液+50μl的4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖苷底物溶液所测荧光强度值。 2 .如权利要求1所述的一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法，其特征在于， 1M的NaOH溶液通过20gNaOH+蒸馏水定容至50ml制得。
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CN 109557065 A
说 明 书
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一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法
技术领域 [0001] 本发明涉及酶活性检测技术领域，特别涉及一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性 的分析方法。
背景技术 [0002] 土壤胞外酶在生态系统中扮演着重要角色，其活性高低反映土壤微生物新陈代谢 状况，对于保持土壤肥力和植物生产力极其重。β-D-葡萄糖苷酶，一种更准确检测土壤中βD-葡萄糖苷酶活性的分析方法是目前研究最广泛的一种土壤酶，深度参与土壤有机质的转 化过程 ，主要是由以 纤维素为底物的 微生物分泌 ，水解纤维二糖 和其他水溶性的纤维 糊精 产生形成葡萄糖 ，供微生物自 身生长利 用，能 够指示以 土壤中有机或无机碳为底物的 异养 型呼吸强度，在有机质分解中起重要作用。总的说来，土壤β-D-葡萄糖苷酶的活性反映了土 壤形成的生物气候及生态学条件、土壤生物化学过程的强度及土壤肥力水平。在进行土壤 肥力评价时 ，常常需要测定在不同条件下的β-D-葡萄糖苷酶活性进行说明 ，因此 ，建立一种 相对快速准确的β-D-葡萄糖苷酶活性的检测方法具有很重要的意义。 [0003] 目前在酶检测领域发展成熟的一种方法是以伞形酮作为底物的内置荧光团结合 β-消除反应的检测法，伞形酮又称7-羟基香豆素，是一种强荧光染料，以伞形酮标记底物作 为探针 ，在酶催化作 用下产物发生分子内β- 消除 反应而使底物上的 伞形酮脱落 ，通过荧光 强度的变化反映酶活。该方法被广泛应用于检测多种酶。 [0004] 由于当前多功能酶标仪对荧光强度的检测具有很高的灵敏度，因此缓冲液、土壤、 底物以 及荧光基团 与他 们之间 相互影响的 背景值 ，对与检 测结果的 准 确性具有很大影响。 现今广泛运 用的酶活荧光检 测技术 ，仅仅通过无土对照和无底物对照 ，排除 了土壤及底物 的 背景值 ，对于荧光检 测这种相当灵敏的 检测方法 ，任何的 背景干扰对于结果的 准 确性都 具有相当影响。
(51)Int .Cl . G01N 21/64(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 109557065 A (43)申请公布日 2019.04.02
( 54 )发明 名称 一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分
析方法 ( 57 )摘要
本发明公开了一种检测土壤中β-D-葡萄糖 苷酶活性的分析方法 ，属于酶活性检测技术领 域。该装置包括如下步骤 ：酶活性＝[( RS-BU )* ( SA-SC )/( QS-SC )]-( NC-BU )]*b*2*3000/( 0 .3* W*200 )，其中，SC为上清液+50μl的醋酸缓冲液 所测荧光强度值，QS为上清液+50μl的标样液所 测荧光强度值，SA为上清液+50μl的4-甲基伞形 酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液所测荧光强度值，BU 为200μl的醋酸缓冲液+50μl醋酸缓冲液所测 荧光强度值，RS为200μl的醋酸缓冲液+50μl的 标准品溶液所测荧光强度值，NC为200μl的醋酸 缓冲液+50μl的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷 底物溶液所测荧光强度值。本发明可以减小背景 值 ，能排除 样品 与荧光基团互 作的 背景值 ，排除 缓冲液对标准品的背景值，提高测量结果的准确 性，样品及药品用量少。