膜片钳配置
膜片钳系统 操作规程
膜片钳系统简明操作规程1.准备（1）相关液体：大部分细胞外液的pH为7.4，电极内液的pH为7.2-7.3；培养细胞的缓冲体系为HEPES，而急性分离细胞或者组织切片的缓冲体系多为碳酸盐体系；至于渗透压，细胞内应高于细胞外（如340mOsmd: 330mOsmd）使细胞微肿胀从而利于封接。
所有液体均应用微孔滤膜过滤，ICS应冻存；如果采用碳酸盐体系，那么实验过程必须灌流。
（2）电极：所用电极控制在2-5MΩ，电阻值越大则tip越细，利于封接而不利于破膜，反之，电阻值越小则tip越粗，利于破膜而不利于封接（注意小细胞有时电极电阻也可大于5MΩ）；电极直径最好为5-10μm，即对于400倍的显微镜下2-4mm；电极末端可用火烧平，防止刮掉氯化银。
2. 封接准备（1）打开Clampex的Membrane Test，设定封接测试脉冲电流方波的幅度和频率。
（2）在玻璃微电极内维持一定的正压，用微操作器使电极进入记录液，在Membrane Test中可见测试脉冲方波，观察电极电阻大小。
（3）关闭Membrane Test，用Auto调节Pipette Offset，使METER 中的I （pA）=0。
如果I不显示为0，则可继续手工精确调节补偿的失调电位数值，直至I为0。
3. 封接（1）打开Membrane Test，使玻璃微电极逐渐接触细胞，去除正压并轻轻给予负压以形成稳定封接。
此时，封接测试脉冲消失，仅出现电极电容瞬变值。
封接电阻在1GΩ以上。
（2）补偿电极电容：用Cp Fast和Cp Slow对电极电容进行补偿。
可选Leak Subtraction去除漏电流。
4. 破膜（1）继续给予负压活用Zap功能电击打破细胞膜。
出现膜电容放电。
缓慢撤除电机内负压。
（2）用Auto对膜电容进行补偿，必要时手工进行细微调节。
（3）进行串联电阻补偿：选上Rs Compensation和Disable if oscillation detected，增大Prediction和Compensation对串联电阻进行补偿。
膜片钳配置
供货清单膜片钳系统Cat.No Description Qty 膜片钳放大器(德国HEKA)EPC-10 DOUBLE 1 双探头电脑全自动控制放大器。
2 具有Lockin功能，能精确测量膜电容测量。
3、钳制电压范围：±200mv，调幅最小为1mV4、钳制电流调整：±100nA/±2nA5、快速补偿电容：0-15pF(50G欧反馈电阻)5、慢补偿电容：0.2-1000pF(50G欧反馈电阻)6、全细胞反馈电容：1-255pF(1000M欧反馈电阻)3-1000pF(1M欧反馈电阻)1PatchMaster软件，多通道数据采集(8个A/D通道)与输出刺激(3个D/A输出通道)可输出多种多样的刺激波形P/N漏检功能具有全细胞和细胞贴附模式下进行膜电容测定的LOCK IN放大器的功能具有离子成像测定的扩展功能,扩展后可控制光源和对荧光测定进行控制的功能1IGOR Pro 5.0膜片钳数据分析软件数据分析软件 1显微操作仪（加拿大BURLEIGH）PCS-5400 1, 适合膜片钳实验操作，粗调部分手动，微调部分驱动；2，微操移动的最小步进为60纳米；3，压电晶体的形变范围300微米；4，带有与膜片钳放大器的探头适配器5，垂直水平旋转平台，方便更换电极1拉制器（日本NARISHIGE）PC-10 垂直拉制仪PC-10 Pipette Puller (220-240V): Vertical Type两步拉制仪,可以拉出尖端小于0.1um的电极1膜片钳放大器（德国HEKA）EPC－10 1 单探头电脑全自动控制放大器。
2 具有Lockin功能，能精确测量膜电容测量。
3、钳制电压范围：±200mv，调幅最小为1mV4、钳制电流调整：±100nA/±2nA5、快速补偿电容：0-15pF(50G欧反馈电阻)5、慢补偿电容：0.2-1000pF(50G欧反馈电阻)6、全细胞反馈电容：1-255pF(1000M欧反馈电阻)3-1000pF(1M欧反馈电阻)1PatchMaster软件，多通道数据采集(8个A/D通道)与输出刺激(3个D/A输出通道)可输出多种多样的刺激波形P/N漏检功能具有全细胞和细胞贴附模式下进行膜电容测定的LOCK IN放大器的功能具有离子成像测定的扩展功能,扩展后可控制光源和对荧光测定进行控制的功能1IGOR Pro 5.0膜片钳数据分析软件数据分析软件1显微操作仪（美国SUTTER）MP285 1 压电晶体技术驱动,精度60nm。
膜片钳技术参数
膜片钳技术参数一、膜片钳放大器系统（1）膜片钳放大器*1. 双电极膜片钳放大器用于细胞内和细胞外记录、膜片钳记录(全细胞、巨膜片、游离膜片)、电流测定法/伏安法、离子选择电极的测量、人工脂双层记录2. 电压钳模式下提供4种反馈电阻（50 MΩ、500 MΩ、5 GΩ、50 GΩ），可以测定0.2 pA～200 nA范围的电流。
电流钳模式下提供3种反馈电阻（50 MΩ、500 MΩ、5 GΩ），可以测定2 nA～200 nA 范围的电流。
3. 膜片钳放大器具有两个相同且独立的探头，为计算机控制，多数功能可通过点击鼠标而自动完成。
4. 全细胞膜电容补偿范围：Rf=500M时，Cm 1-100pF/Rs 400k-1000M串联电阻补偿范围：带宽：0.32-16kHz;校正值：0.4-1000M(500M时)5. 输出增益范围：主输出：1,2,5,10,20,50,100,200, 500, 1000, 2000；主输出滤波频率范围：4－极Bessel低通滤波(Hz)：2Hz-30kHz （2）数模转换器1转换器为即插即用型设备，能被Windows系统自动识别。
*2 为一台单独的仪器，不跟膜片钳放大器组合为一台仪器。
具有丰富数量的模拟/数字输入/输出端口，方便在软件中进行额外的附加控制。
3 16位高分辨率、低噪声转换器。
模拟信号输入通道数：8；模拟信号输出通道数：8；数字输出通道数：8。
4 采样速率：1 Hz - 500 kHz。
5 输入电阻: 1 MΩ；输入型号；TTL兼容制系统,方便外接其他刺激器，隔离器等。
输出电阻：< 0.5Ω6 输出电流：±4mA；数字化噪音< 1 mV7 系统自带消除噪音功能。
最大输入信号±10 V；消除最大噪音幅度20 V；噪音消除：线频率50Hz和谐波至10 kHz；取消相应时间< 1 s（3）记录和分析软件*1. 分析程序可对数据脱机处理，不需要使用密码锁2. 既包含采样程序又包含分析程序3. 膜测试功能在记录每条扫描线时可计算串联电阻Ra和膜电容4. 如果施加了漏减功能，则可同时自动记录下漏减前后的电流5. 在对每条扫描线进行记录时，可采用两个不同的采样频率进行6. 可以设置灵活的基础刺激和条件刺激方式用来不间断记录长时程增强效应和长时程抑制效应（LTP/LTD）。
膜片钳
㈢分析
1.事件检测方法——50％阈值检测法： 将阈值水平设在开放水平与关闭水平中间
2.单通道电流幅度和电导的分析 ➢目的：揭示通道的通透性机制；帮助区分通道的类 型、通道不同的亚单位组成以及突变等 ➢单通道电流的分析—— 幅度直方图 ➢单通道电导的计算 ⑴斜率电导：步阶电压（voltage step）；斜坡电压 （voltage ramp） ⑵拟合电流幅度直方图：高斯拟合
Rs的影响：使膜电位对命令电压的反应时间延迟；产生 电压降，影响钳制电位的数值；与膜电容形成一个单极 RC滤波器，限制了摄取电流信号的频带宽。
膜电阻（Rm）：指电流通过细胞膜时所遇到的阻力。 在静息状态下，Rm主要来自脂质双分子层的电阻。
3. 膜漏电流去除：
➢电容器（capacitor）：
被绝缘体隔开的两个导体 的组合，其储存电荷的能 力用电容（capacitance） 表示。
㈡ Ag/AgCl电极
Ag + Cl-
电子从Ag/AgCl 电极流向浴液
AgCl +e电子从浴液流向Ag/AgCl电极
➢长时间导通电流，AgCl会消耗掉，要定期镀AgCl： 含Cl-的溶液，长度为1～1.5cm
➢玻璃微电极尾端烧灼，防止AgCl被刮掉
电极电阻
二、封接
测试脉冲（20mV） 产生的电极电流
原因：离子通道的开放导致膜电阻迅速降低，电流 和电压的关系偏离了欧姆定律。
分外向整流和内向整流
外向整流：指随膜电位的去极化，I-V曲线靠近y轴
内向整流：指随膜电位的去极化，I-V曲线靠近x轴
（2）离子通道的激活（activation） （3）离子通道的失活（inactivation） 衰减（decay）：通道在激活因素持续存在条件下的 失活。用衰减的时间常数来表示 稳态失活（steady-state inactivaion）：反映通道 失活数目的电压依赖性，可用失活曲线表示 （4）通道失活后的恢复 通道失活后，必须将激活因素去除并维持一定时间， 才能使通道脱离失活状态，再次给予激活因素时通道 才能恢复开放。维持时间即通道失活后的恢复时间。 （5）离子通道的去激活（deactivation） 指在激活因素结束时通道的关闭过程，所记录到的电 流称尾电流。有些离子通道的尾电流也具有电压依赖 性，关闭过程呈指数分布。
膜片钳
细胞是动植物和人体的基本组成单元，离子通道是细胞与外界以及与细胞内通信的重要手段。
离子和离子通道是细胞兴奋的基础，亦即产生生物电信号的基础。
生物电信号通常用电学方法进行测量，因而形成了一门学科—细胞电生理学。
最近50年，三次主要的技术革命推动了细胞电生理学的进展：细胞内记录，电压钳技术和膜片钳技术。
膜片钳技术是在电压钳技术的基础上发展起来的。
1976年德国马普生物物理化学研究所Neher和Sakmann首次在青蛙肌细胞上用双电极钳制膜电位的同时，记录到乙酰胆碱（Acetylcholine, ACh）激活的单通道离子电流，从而产生O 了膜片钳（Patch Clamp）技术。
1980年Sigworth等在记录电极内施加5-50cm H2的负压吸引，得到10-100GΩ的高阻封接（Giga-seal），大大降低了记录时的噪声水平，实现了单根电极既钳制膜片电位又记录单通道电流的突破。
1981年Hamill和Neher等对该技术进行了改进，引进了膜片游离技术和全细胞记录技术，从而使该技术更趋完善，具有1pA的电流灵敏度、1μm的空间分辨率和10μs 的时间分辨率。
1983年10月，《Single-Channel Recording》一书的问世，奠定了膜片钳技术的里程碑，为细胞生理的研究带来了一场革命性的变化，膜片钳技术象基因克隆技术一样，给生命科学研究带来了巨大的动力。
Sakmann 和Neher也因其杰出的工作和突出贡献，荣获1991年诺贝尔医学和生理学奖。
1995年，《Single-Channel Recording》一书再版，增添了大量膜片钳技术的新内容，几乎当时国际上所有的知名膜片钳专家都参与了编写，成为目前膜片钳技术研究领域的最经典著作。
膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起来，由于电极尖端与细胞膜的高阻封接，在电极尖端笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离，因此，此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管，用一个极为敏感的电流监视器（膜片钳放大器）测量此电流强度，该电流强度就代表单一离子通道电流。
6、膜片钳实验流程
膜片钳记录系统仪器简介：膜片钳技术是细胞电生理方面的高端技术，是研究细胞膜离子通道的重要工具。
目前细胞膜离子通道的研究已经应用到了药物作用、环境对细胞膜离子通道的影响、神经网络研究以及疾病的诊断和治疗等多个领域。
膜片钳技术是神经科学、心血管、药物学和药效学、功能基因组学和许多遗传病深入研究的有力手段。
仪器名称：膜片钳记录分析系统主要设备：PC-2B放大器、AXON200B放大器、正置显微镜、倒置显微镜、NIR-DIC 成像系统、水镜头、微操纵器、微电极拉制仪、抛光仪、振动切片机等。
仪器功能及应用范围：单细胞膜片钳记录（急性分离细胞、培养细胞）、脑片膜片钳记录（盲法、可视法）收费标准：培训费：1个月以内—500元；1~3个月—1000元。
指导操作：院内20元/小时，院外40元/小时。
独立操作：院内60元/天，院外120元/天（由两位指导老师认可培训合格，方可进行独立操作）。
开放时间：周一至周五管理规定：⑴膜片钳记录分析系统属于高端精密仪器，因此任何进入本室进行膜片钳实验的人员，必须经过本室专门人员培训合格认可后，经允许方可进行膜片钳放大器、微操纵器、拉制仪、切片机、显微镜等仪器的操作。
⑵在实验过程中，必须严格按照实验流程进行操作，不得擅自更改操作步骤，不许自行调改仪器设置，以免造成仪器毁损。
⑶仪器损坏赔偿事宜按照我室赔偿制度进行处理。
⑷统一安排实验时间，使用仪器后作登记。
⑸实验人员负责当天的水电安全和室内卫生。
脑片膜片钳实验流程(PC-2B)一、脑片制作1.配制新鲜蔗糖溶液（4°C）和NaCl孵育液（室温，20~25°C）各1L。
2.用丙酮浸泡刀片30 min。
3.麻醉动物：爪蟾—MS-222，大鼠—乌拉坦。
4.解剖动物，取脑组织。
5.切片：根据不同的动物和组织选择不同的方案。
方案一：低熔点琼脂包埋组织后进行切片。
方案二：普通琼脂作托进行切片。
6.处理脑片：蔗糖溶液中40～60min（4°C或32°C）。
膜片钳系统的基本组成
膜片钳系统的基本组成背景介绍膜片钳系统是一种常用的工业机械装备，用于夹持和固定薄膜、薄片等材料。
它由多个组件组成，每个组件都发挥着特定的作用，实现了膜片钳系统的生产功能。
本文将详细介绍膜片钳系统的基本组成。
一、膜片钳系统的组件膜片钳系统主要由以下几个组件组成：1. 膜片钳本体膜片钳的本体是整个系统的核心部件，负责夹持和固定薄膜、薄片等材料。
常见的膜片钳本体包括机械式膜片钳、气动膜片钳和电动膜片钳等。
机械式膜片钳通过人工操作实现夹持和固定，气动膜片钳通过气压控制夹持和固定，而电动膜片钳则通过电力驱动实现夹持和固定。
2. 控制系统控制系统负责控制膜片钳的工作状态，包括夹持力的调整、夹持时间的控制等。
控制系统根据实际需求，可以采用手动、自动或半自动的方式进行。
3. 传感器传感器常用于膜片钳系统中，用于监测夹持力、夹持位置等参数。
通过传感器的反馈信号，可以实时调整膜片钳的工作状态，确保夹持效果的稳定和可靠。
4. 操作界面操作界面是膜片钳系统的用户接口，提供了对系统进行设置和控制的功能。
操作界面通常采用触摸屏、按钮等形式，操作简单、直观。
5. 外壳和支架外壳和支架是膜片钳系统的配件，用于保护系统内部组件和提供稳定的支撑。
外壳材料通常选用防腐蚀、耐磨损的材料，而支架则需要具备足够的强度和稳定性。
6. 输送系统输送系统用于将待夹持的薄膜、薄片等材料输送到膜片钳工作区域，以便进行夹持和固定。
输送系统可以采用机械输送、气动输送或电动输送等方式，根据不同的需求进行选择。
二、膜片钳系统的工作原理膜片钳系统的工作原理可以简单描述如下：1.当待夹持的材料进入膜片钳工作区域后，传感器会检测到材料的位置。
2.控制系统根据传感器反馈的信号，调整膜片钳的夹持力和夹持时间。
3.膜片钳本体开始工作，通过机械、气动或电动的方式夹持和固定材料。
4.完成夹持和固定后，膜片钳本体松开夹持力，材料被释放出来。
5.输送系统将已夹持和固定的材料移除，并将下一个待处理的材料输送到膜片钳工作区域，重新进行夹持和固定。
膜片钳技术概述
2）屏蔽罩：用铜丝网制成，防止周围环境 的杂散点场对膜片钳放大器的探头电路的干扰。 有的膜片钳实验所测试的细胞或某种物质是光 敏感的，或者膜片钳实验是与光学测量联合进 行测需要采取光屏蔽，则屏蔽罩的外壁用黑色 布遮盖或在暗室里操作以减少强光的干扰。
2、光学部分
倒置显微镜 优点： 具有较好的视觉效果 便于将玻璃微电极与细胞的顶部接处。 具有较好的机械稳定性。
荧光染料Fu ra-2 可被紫外光激发发射出 荧光, 它可选择性地结合钙离子, 而与钙离子 结合的Fu ra-2 越多, 以相同紫外光激发出的 荧光就越弱, 因此可根据荧光强度的变化计算 出单位体积中钙离子浓度的变化。具体过程为: 在做全细胞记录之前, 以孵育或经电极扩散的 方法使荧光染料Fu ra-2 进入细胞, 然后对该 细胞内荧光强度、细胞膜离子通道电流及细胞 膜电容等多种指标变化情况进行观测,并分析 这些变化间的相互关系。
电极电容Cp极小，只有几各pF，相应的 电路时间常数甚小，因而对于Cp瞬态补偿称为 快电容补偿，细胞膜电容的值约为1µF／cm2， 由于此时的充电电流需要流经串联电阻Rs（Rs 的值约为几个兆欧），时间常数较大，故Cm 的补偿称为慢电容补偿。此外，串联电阻Rs因 跨接在Cp和Cm之间，当有电流经过时，将产 生可观的压降，如当Rs＝5MΩ ，I＝2mA时， 可导致钳制电位误差达10mV；消除这种误差的
3、电子部件：包括膜片钳放大器、刺激器、示
波器及记录系统。 膜片钳放大器：
是膜片钳实验中一个核心仪器，通过它 把生物电信号放大。从原理来说，膜片钳放大 器的探头电路即I-V变换器有两种基本结构形 式，即电阻反馈式和电容反馈式，前者是一种 典型的结构，但是相比较而言，后者降低了噪 声，所以特别适用超低噪声的单通道记录。
膜片钳原理技 术
膜片钳全细胞记录
双向离子条件 高Na+电极内液
Na+
Na+ Ca2+
Na/Ca
3Na+
Cell model to record outward current of Na+-Ca2+exchanger
双向/生电性
Ca2+
Ca2+
ATP
NCX
Na+
SARCOLEMMA
Ca2+ ATP Ca2+
Sarcoplasmic reticulum
8 Amiloride Ni 6
2+
—○— —●— —□— —■—
Amiloride 10 M Amiloride 30 M Amiloride 100 M Before drug
4
2
0 1 -2 2 3 4 5 6 7 8 9 10
11 (min)
-4
Amiloride
KB-R7943对豚鼠心室肌细胞Na+-Ca2+交换电流的作用
Cell membrane Cell
Inside-out recording
Patch-pipette
The internal face of the lipid bi-layer faces the bath solution
Outside-out recording
Patch-pipette
channel
Ca2+
正 向 转 运
Ca2+
NCX NCX
3 Na+
ATP
SARCOLEMMA
3 Na+
2
全自动膜片钳系统手册
高通量higher throughput节省成本cost saving 节省时间time saving 自动化automatic 高品质数据better results 全自动膜片钳系统Automated Patch Clamp System Revolutionizing Ion Channel Drug Discovery以离子通道为靶点的药物开发的革命性工具CONTENTS 目录112344556888911131415151518182021封底全自动膜片钳技术及其在药物筛选中的应用全自动膜片钳技术原理全自动膜片钳在药物筛选中的应用Molecular Devices 公司开发的仪器设备为以离子通道为靶点的药物开发提供了完整的解决方案IonWorks Barracuda - 高通量膜片钳系统的新突破简介主要用途产品特征应用实例IonWorks Quattro - 全自动高通量膜片钳药物筛选系统简介主要用途产品特征应用实例重要参考文献IonWorks 的全球用户PatchXpress 7000A - 全自动平行膜片钳系统简介产品特点主要用途应用实例重要参考文献PatchXpress 的全球用户公司简介1膜片钳技术被称为研究离子通道的“金标准”。
是研究离子通道的最重要的技术。
目前膜片钳技术已从传统的常规膜片钳技术 （Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｐａｔｃｈ ｃｌａｍｐ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ） 发展到全自动膜片钳技术 （Ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｐａｔｃｈ ｃｌａｍｐ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ） 。
全自动膜片钳技术及其在药物筛选中的应用不同的全自动膜片钳系统的所采用的技术原理也不完全相同。
大体有以下几种。
１． 全自动膜片钳技术原理将一定密度的细胞悬液灌注在玻璃电极中，下降到电极尖端的单个细胞通过在电极外施加负压与玻璃电极尖端形成稳定的高阻封接，系统自动判断封接形成是否良好并自动打破露在玻璃微电极尖端外的细胞膜形成全细胞模式。
膜片钳PPT课件
（二） 受体:细胞膜或细胞内能与某些化学物质(递质、调质、激素) 特
异性结合并产生生物效应的特殊分子。细胞膜上涉及到离子通道的主要受体：
Glu能离子型受体
激动剂
拮抗剂
AMPA
GluR1 Glu
CNQX
GluR2 AMPA
GluR3
GluR4
Kainate
GluR5 Glu
CNQX
GluR6 KA
• 配制切片液及灌流液ACSF，冻存切片液至冰水混合态 • 二元气饱和ACSF • 动物麻醉、断头、取脑、切片 • ACSF中孵育脑片至少30min • 拉制玻璃电极 • 脑片入记录槽，持续ACSF灌流1-3ml/min • 低倍镜定位，IR-DIC镜选择靶细胞
2021
23
• 玻璃微电极充灌电极内液(预配)，并固定于电极夹持器 • 维持电极正压，入液，补偿液接电位 • 操纵电极尖端至靶细胞上方，压之有凹痕（快） • 撤正压，予负压，予半量钳制电压，GΩ（1min 内）封接
1. 结构研究：生化确定蛋白质氨基酸序列+X线衍 射确定结构+……
2.功能研究：电生理技术（膜片钳） +……
3.结构和功能相结合：电生理技术（膜片钳） +转 基因技术+……
2021
3
电流钳----测电压
向细胞内注入恒定或变化的电流，记录相应膜电位变化
电压钳----测电流
为负反馈系统。注入电流，同时钳制电压于固定的某值，此时注入电流恰 好与离子通道开放产生的离子流大小相等，方向相反，以此得知该离子流大 小及方向。
后予全量钳制电压
• 补偿C-fast，破膜 • 补偿C-slow，稳定10-15min
膜片钳系统的基本组成
膜片钳系统的基本组成膜片钳系统是一种常用的夹持装置，广泛应用于精密加工、测量检测、光学仪器等领域。
膜片钳系统的基本组成包括夹持部分、支撑结构部分和控制部分。
下面将对每个部分进行详细介绍。
一、夹持部分夹持部分是膜片钳系统最主要的组成部分，其作用是夹持被加工物件或被检测物件，保证其位置和姿态的稳定性。
夹持部分主要由膜片、压板、弹簧和固定块等组成。
1. 膜片膜片是膜片钳系统中最重要的零件之一，它的作用是通过变形来实现对被加工物件或被检测物件的夹紧。
膜片通常由高强度不锈钢材料制成，其表面经过特殊处理，具有较高的硬度和抗磨损性能。
2. 压板压板是将膜片与被加工物件或被检测物件连接在一起的零件。
它通常由铝合金或不锈钢材料制成，并具有较好的刚性和耐磨性能。
3. 弹簧弹簧是膜片钳系统中用来提供夹紧力的零件之一。
它的作用是将压板和膜片连接在一起，并通过变形来产生夹紧力。
弹簧通常由高强度不锈钢材料制成，其具有较好的弹性和耐久性。
4. 固定块固定块是膜片钳系统中用来固定夹持部分的零件之一。
它通常由铝合金或不锈钢材料制成，其具有较好的刚性和耐腐蚀性能。
二、支撑结构部分支撑结构部分是膜片钳系统中用来支撑夹持部分和保证其稳定性的组成部分。
支撑结构部分主要由基座、导轨、调节杆等组成。
1. 基座基座是支撑结构部分中最主要的组成部分，它的作用是固定整个膜片钳系统并提供稳定的支撑。
基座通常由铝合金或不锈钢材料制成，其具有较好的刚性和耐腐蚀性能。
2. 导轨导轨是支撑结构部分中用来引导夹持部分运动的组成部分。
导轨通常由不锈钢材料制成，其具有较好的刚性和耐磨损性能。
3. 调节杆调节杆是支撑结构部分中用来调节夹紧力和位置的组成部分。
调节杆通常由铝合金或不锈钢材料制成，其具有较好的刚性和耐腐蚀性能。
三、控制部分控制部分是膜片钳系统中用来控制夹紧力和位置的组成部分。
控制部分主要由气压缸、电磁阀、传感器等组成。
1. 气压缸气压缸是控制部分中最主要的组成部分之一，它的作用是通过气体压力来产生夹紧力。
膜片钳灌流液配制,细胞培养液等试剂配制
膜片钳灌流液配制，细胞培养液等试剂配制pH 用Tris碱调至7.4在离子置换实验中，用同样毫摩尔浓度的NaI（分子量149.9，10.49g/L）、NaBr（分子量102.7，7.2g/L）和葡萄糖酸钠（分子量218.1，15.27g/L）替代灌流液中的NaCl。
MgCl2和CaCl2中的Cl-含量很少，可以忽略不计。
表2 电极内液（pipette solution）*首先将1.366g N-methyl-D-glucamine 加入到80ml三蒸水中*用35.4%浓盐酸（约12滴）调溶液pH至8.0左右*再用1M HCl（约12滴）调溶液pH至4.5至5.5，加入HCl时必须缓慢小心，以防溶液pH下降过速。
停止加HCl后pH仍会降低一点*加入除ATP以外的其他成分，三蒸水配制100ml，用3M tris碱调溶液pH至7.25*过滤，分装，每支0.5ml*ATP用三蒸水配成100mM的储存液，过滤，分装，每支约12μl，放置于-20o C，使用前取10μl加入电极内液0.5ml中，使终浓度为2mM。
表3 human perfusion medium（HPM液）---(用途同PBS)pH用NaOH调至7.40.22μm 的微孔滤过膜除菌，分装无菌容器内，保存4o C，细胞培养用。
4、【RPMI1640溶液】（配置前想看包装上的说明）1、储存于4o C，用三蒸水配制（每袋/1L）2、取约900ml三蒸水，倒入全部的1640粉，袋壁上的粉用三蒸水溶解，缓慢搅拌3、加入2g NaHCO3（2g/L），缓慢溶解后取出磁力棒，加三蒸水定容至1L，再继续搅拌约1-2hrs4、用1M NaOH或1N HCL调pH至7.1-7.2（因为过滤时会增高0.1-0.3）。
溶液最终pH为7.45、过滤、分装后保存-20o C6、使用前配制成1640生长液，如配500ml含：1640液445ml+血清50ml+清链霉素5ml【小牛血清】胎牛血清（杭州四季青），使用前解冻后，36o C振荡灭活30mins，分装后保存在-20o C【冻存液】由60%1640液，30%胎牛血清，10%DMSO（二甲基亚砜）组成，使用前新鲜配制，4o C预冷30mins。
膜片钳灌流液配制,细胞培养液等试剂配制
膜片钳灌流液配制，细胞培养液等试剂配制pH 用Tris碱调至7.4在离子置换实验中，用同样毫摩尔浓度的NaI（分子量149.9，10.49g/L）、NaBr（分子量102.7，7.2g/L）和葡萄糖酸钠（分子量218.1，15.27g/L）替代灌流液中的NaCl。
MgCl2和CaCl2中的Cl-含量很少，可以忽略不计。
表2 电极内液（pipette solution）*首先将1.366g N-methyl-D-glucamine 加入到80ml三蒸水中*用35.4%浓盐酸（约12滴）调溶液pH至8.0左右*再用1M HCl（约12滴）调溶液pH至4.5至5.5，加入HCl时必须缓慢小心，以防溶液pH下降过速。
停止加HCl后pH仍会降低一点*加入除ATP以外的其他成分，三蒸水配制100ml，用3M tris碱调溶液pH至7.25*过滤，分装，每支0.5ml*ATP用三蒸水配成100mM的储存液，过滤，分装，每支约12μl，放置于-20o C，使用前取10μl加入电极内液0.5ml中，使终浓度为2mM。
表3 human perfusion medium（HPM液）---(用途同PBS)pH用NaOH调至7.40.22μm 的微孔滤过膜除菌，分装无菌容器内，保存4o C，细胞培养用。
4、【RPMI1640溶液】（配置前想看包装上的说明）1、储存于4o C，用三蒸水配制（每袋/1L）2、取约900ml三蒸水，倒入全部的1640粉，袋壁上的粉用三蒸水溶解，缓慢搅拌3、加入2g NaHCO3（2g/L），缓慢溶解后取出磁力棒，加三蒸水定容至1L，再继续搅拌约1-2hrs4、用1M NaOH或1N HCL调pH至7.1-7.2（因为过滤时会增高0.1-0.3）。
溶液最终pH为7.45、过滤、分装后保存-20o C6、使用前配制成1640生长液，如配500ml含：1640液445ml+血清50ml+清链霉素5ml【小牛血清】胎牛血清（杭州四季青），使用前解冻后，36o C振荡灭活30mins，分装后保存在-20o C【冻存液】由60%1640液，30%胎牛血清，10%DMSO（二甲基亚砜）组成，使用前新鲜配制，4o C预冷30mins。
膜片钳实验规则
膜片钳实验系统配置一个电生理配置有4个主要的需求：环境需求：保持标本的健康的手段。
光学需求：显现标本以供观察的手段。
机械结构需求：稳定定位微电极的手段。
电子学需求：放大和测量信号的手段。
我们将配置分成两种类型的“典型”配置：胞外记录和单通道膜片钳记录。
胞外记录的配置该配置主要用于记录脑片的场电位。
一般目标是将一个相对粗糙的电极放置在组织的胞外空间，同时尽可能模仿体内的组织环境。
因此，需要一个相当复杂的小空腔，用来对组织进行温暖、氧化、灌注。
而另一方面，光学和机械结构需求则简单得多。
一个解剖用显微镜，至少15cm的工作距离(配合近似垂直放置的微操纵器)，通常已经可以看到切片或大体的形态学特征。
由于对定位时手的震动和电极的精确放置都没有苛刻要求，微操纵器可以选用相对粗糙的机械类型。
但是，在记录过程中，微操纵器不允许有一点漂移和震动。
需要使用低噪声的电压放大器。
由于信号的范围可能在10 uV 到10 mV 范围内，低噪声电压放大器的增益至少要达到1000。
单通道膜片钳记录配置标准的膜片钳配置在许多方面与胞外记录恰好颠倒过来了。
由于对环境的控制非常少，实验通常在室温下、一个无灌注的培养皿中进行。
光学和机械需求则根据实际的细胞的大小(10或20 um)有特殊的规定。
显微镜应该有放大300或400倍的能力，并需要某种对照增强能力(Nomarski, Phase or Hoffman)。
omarski(微分干涉)对于电极的精确放置是最好的，因为它的影像依赖于视野一个很窄的深度上，这有助于精确定位(定位不好，影像是模糊的)。
Phase(相差法)用于精确定位程度要求低一些的场合，但提供了更好的对比度。
Hoffman方法提供了较便宜的，稍微退化点的Nomarski版本。
最好使用倒置显微镜：(1)这样能使电极顶端更容易被看到，因为物镜在chamber的下方，(2)提供了更大更坚固的平台，用来固定微操纵器。
微操纵器应提供良好的，平滑的移动(最多每秒2um)。
简易膜片钳系统技术参数
简易膜片钳系统技术参数
1、弱电流放大器
a)噪声：
100 fArms @ 1 kHz (gain 2.25 GΩ)
380 fArms @ 10 kHz (gain 2.25 GΩ)
3.2 pArms @ 100 kHz (gain 2.25 GΩ)
b)输入电流范围：
±200 pA (gain 2.25 GΩ) ±20 nA (gain 22.5 MΩ)
c)采样频率：200 kHz
d)接口：USB 线
2、法拉第盒子
a)尺寸：要求较小，可置于普通桌面, 小于20*15*10 cm
b)材质：金属，要求屏蔽外界信号干扰，
3、样品池
a)材质：绝缘塑料材质，密封性好，不透水溶液
b)性能：可拆卸更换薄膜
4、微孔薄膜
a)材质：聚四氟乙烯膜
b)微孔大小：50um，80um，110um
5、数据采集和分析软件
a)既包含采样程序又包含分析程序，集采样、分析功能于一体
b)分析程序可对数据脱机处理，不需要使用密码锁，可对采集的各种
信号进行数据处理、分析、作图、统计检验等
c)适用于Windows7及以上操作系统
6、4 技术服务要求
a)设备安装调试: 在买方指定的地点完成安装调试，并配合买方进行测
试验收。
b)质保期保修12个月，终身维修。
c)维修响应时间: 接到维修通知后，1个工作日内做出响应，3个工作
日内到场排除故障。
d)交货地点：用户指定位置。
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供货清单
膜片钳系统
Cat.No Description Qty 膜片钳放大器(德国HEKA)
EPC-10 DOUBLE 1 双探头电脑全自动控制放大器。
2 具有Lockin功能，能精确测量膜电容测量。
3、钳制电压范围：±200mv，调幅最小为1mV
4、钳制电流调整：±100nA/±2nA
5、快速补偿电容：0-15pF(50G欧反馈电阻)
5、慢补偿电容：0.2-1000pF(50G欧反馈电阻)
6、全细胞反馈电容：1-255pF(1000M欧反馈电阻)
3-1000pF(1M欧反馈电阻)
1
PatchMaster软件，多通道数据采集(8个A/D通道)与输出刺激(3个D/A输出通道)
可输出多种多样的刺激波形
P/N漏检功能
具有全细胞和细胞贴附模式下进行膜电容测定的LOCK IN放大器的功能
具有离子成像测定的扩展功能,扩展后可控制光源和对荧光测定进行控制的功能
1
IGOR Pro 5.0膜片钳数据分析软件
数据分析软件 1
显微操作仪（加拿大BURLEIGH）
PCS-5400 1, 适合膜片钳实验操作，粗调部分手动，微调部分驱动；
2，微操移动的最小步进为60纳米；
3，压电晶体的形变范围300微米；
4，带有与膜片钳放大器的探头适配器
5，垂直水平旋转平台，方便更换电极
1
拉制器（日本NARISHIGE）
PC-10 垂直拉制仪
PC-10 Pipette Puller (220-240V): Vertical Type
两步拉制仪,可以拉出尖端小于0.1um的电极
1
膜片钳放大器（德国HEKA）
EPC－10 1 单探头电脑全自动控制放大器。
2 具有Lockin功能，能精确测量膜电容测量。
3、钳制电压范围：±200mv，调幅最小为1mV
4、钳制电流调整：±100nA/±2nA
5、快速补偿电容：0-15pF(50G欧反馈电阻)
5、慢补偿电容：0.2-1000pF(50G欧反馈电阻)
6、全细胞反馈电容：1-255pF(1000M欧反馈电阻)
3-1000pF(1M欧反馈电阻)
1
PatchMaster软件，多通道数据采集(8个A/D通道)与输出刺激(3个D/A输出通道)
可输出多种多样的刺激波形
P/N漏检功能
具有全细胞和细胞贴附模式下进行膜电容测定的LOCK IN放大器的功能
具有离子成像测定的扩展功能,扩展后可控制光源和对荧光测定进行控制的功能
1
IGOR Pro 5.0膜片钳数据分析软件
数据分析软件
1
显微操作仪（美国SUTTER）
MP285 1 压电晶体技术驱动,精度60nm。
2 3轴微调范围300 um/3轴粗调范围25mm
3 垂直水平旋转平台，方便更换电极
4 SSH可满足脑片实验特殊的下针角度
5 xy移动平台(只1台)
1
拉制器（美国SUTTER）
P-97 可编写并存贮多达100个拉制程序
提供膜片钳微电极与细胞内记录电极的拉制程序样例
具有湿度控制室，与外界隔开，防治湿度大幅度变化对拉制的影响
每次拉制都产生两个对称的电极，重复性好
可进行两次以上的循环拉制，有效控制微电极杆部的长度
能拉制稳定、可靠的尖端小于0.1微米的电极
具真空荧光显示
拉制程序可写保护锁，防止不经意的改动
Ramp检测――当使用新灯丝或新玻璃时，能对加热设置进行自检验
自带的供气装置有湿度控制和过滤系统
质量控制：电镜检测电极尖端变化小于0.1微米，一般大约为0.06微米
1
抛光仪（日本NARISHIGE）
MF-830 垂直抛光。
目镜：15X，物镜变焦倍数5X和35X。
加热操作器移动距离：X轴14mm，Y轴14mm，Z轴14mm。
电极操作器移动距离：Y轴12mm，Z轴28mm
操作方便，设计轻便。
1
灌流系统
(美国ALA)
VC3-8PG 8道灌流系统1 电压控制4阀加药系统，包含控制器，冲洗阀，4-1路汇流腔，电
缆，可提供8道加药。
2 可手动或通过LIH1600电动控制。
3 适合快速加药或灌流
1
（德国Eppendorf）
电动加样器
0.5ul-10ul
5ul-100ul
50-1000ul
2
膜片钳电极（美国SUTTER）
BF150-110-10
硼硅配盐玻璃,带芯，外径１.5mm,内径1.1mm,长度10cm
3 微量注射泵（美国WPI）
UMP3-2 UltraMicroPump III (two) and Micro4 Controller
微控制器1台
双道注射泵
0.5微升-1毫升注射范围 1
15867 Footswitch for Micro4
控制器脚踏板 1
40500 RS-232 Cable, 9-pin "D" connector
电脑连接线 1
14011 Luer Valve Assortment Kit
连接接口套盒 1
SGE001RN Syringe with Replaceable Beveled Needle - 1.0 µL
1微升带针注射器 2
SGE010RNS Syringe with Replaceable Beveled Needle - 10 µL
10微升带针注射器 2
SGE050RN Syringe with Replaceable Beveled Needle - 50 µL
50微升带针注射器 2
SGE100RN Syringe with Replaceable Beveled Needle - 100 µL
100微升带针注射器 2
RN001 Replacement Needle for syringe SGE001RN
1微升针头10
RN010 Replacement Needle for syringe SGE010RN(S)
10微升针头10
RN025 Replacement Needle for syringes SGE025RN, SGE050RN, SGE0100RN
50,100微升针头20
RPE-KIT Retinal Pigment Epithelium (RPE) injection kit
视网膜色素层微注射器套盒 1
IO-KIT Intraocular (IO) injection kit
眼内注射器套盒 1
NANOFIL NanoFil Syringe, 10 microliter
10微升微量注射器 2
NF35BV-2 35 G beveled NanoFil needle (pkg of 2)
针头 4
DMP Manual Microsyringe Pump with Digital Display
手动数码显示微注射器 1
KITE-L Kite Manual Manipulator (left-handed)
左手手动微操 1
M2 12 mm Clamp 1
M10 Magnetic Stand
磁性底座 1
KITE-TB-R Kite (right-handed) + Tilting Base Combo
右手手动微操带底座 1
PG52151-4 PATCH CLAMP CAPILLARY GLASS
OD/ID 1.5/1.1 2
PG52165-4 PATCH CLAMP CAPILLARY GLASS
OD/ID 1.65/1.1 2
77020 Glass Handling Forceps
微管夹 1
E215 Storage Jar for 1.5 mm OD Mi-cropi-pettes
微管储存盒 1
RBMS-300C Brain Matrix, Rat, 175-300g, coronal slices, stainless steel
冠状脑模具,不锈钢,适合175-300克老鼠 1
RBMS-300S Brain Matrix, Rat, 175-300g, sagittal slices, stainless steel
矢状脑模具,不锈钢,适合175-300克老鼠 1
SYS-PM015R Pressure Manometer (15 psi), Rechargeable*
充电式微电压检测仪 1
CBL102 3.5 mm Phone plug-to-BNC Cable
连接线 1
FD35-100 FluoroDish Sterile Culture Dish, clear wall, 35 mm, 23 mm well, box of 100
薄壁培养皿 2
502040 Cover Slips, 5 mm
5mm盖片 5
502041 Cover Slips, 8 mm
8mm盖片 5
ATC1000 Animal Temperature Controller
动物体温控制器 1
502196 Medium Heating Plate with built-in RTD sensor, 15 x 25 cm 1
加药用手动微操MX10L 加药用手动微操（美国Siskiyou）
1左手位的加药微操
2 微调精度1um 1。