实验五 DMEM培养液的配制
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
精品课件
精品课件
【配方】
DMEM干粉
NaHCO3 L-谷氨酰胺 超纯水
1瓶(1,000mL量) 3.7gLeabharlann Baidu0.2g 1,000mL
精品课件
【配制方法】
取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入 新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至15~ 30℃； 将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下 沉，剪开袋口，将干粉倒入500mL的大烧 杯中，用超纯水冲洗袋2~3次； 放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充 分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解；
【NaOH的配制过程】
NaOH
10g
超纯水 250mL
边加边搅拌，溶解过程会产热。
精品课件
【课程安排】
1、每组确定本组的D-Hank’s液是否有？
是否已过滤除菌；
2、每组的EDTA需要高压灭菌；
3、需要配制新鲜的1M HCl和1M NaOH
溶液，以及7.4％的NaHCO3溶液； 4、需要重新灭菌5mL枪头；
精品课件
精品课件
精品课件
精品课件
实验五 1M HCl的配制 1M NaOH的配制
【实验材料】
250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次 性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl
精品课件
【HCl的配制过程】
用5mL的移液器准确移取盐酸21mL， 加入到279mL超纯水中。
实验五 DMEM培养液的配制
【能力目标】 熟练掌握DMEM细胞培养液的配制。
精品课件
【实验材料】
500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水 瓶 酸度计 50mL小烧杯3个 孔径0.22μ 微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去 子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉 素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力 拌器 电子天平 药匙
5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把，
小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把，
高压灭菌；
精品课件
【课程安排】 6、每组准备培养皿两套，干烤灭菌； 7、需要重新配制双抗溶液。
精品课件
精品课件
【配制方法】
根据配方要求，加入准确称取的NaHCO3 1.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分摇匀至完全 溶解； 加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素 和链霉素的最终使用浓度达到100μg/mL； 加入培养基总体积约10％的已灭活的小 牛血清；
精品课件
【配制方法】
用浓度为7.4％的NaHCO3溶液调整溶液 的pH值为7.2~7.4，加超纯水定容，并将 培养液转入盐水瓶； 用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的 盐水瓶，封口，4℃保存备用。
精品课件
【配方】
DMEM干粉
NaHCO3 L-谷氨酰胺 超纯水
1瓶(1,000mL量) 3.7gLeabharlann Baidu0.2g 1,000mL
精品课件
【配制方法】
取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入 新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至15~ 30℃； 将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下 沉，剪开袋口，将干粉倒入500mL的大烧 杯中，用超纯水冲洗袋2~3次； 放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充 分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解；
【NaOH的配制过程】
NaOH
10g
超纯水 250mL
边加边搅拌，溶解过程会产热。
精品课件
【课程安排】
1、每组确定本组的D-Hank’s液是否有？
是否已过滤除菌；
2、每组的EDTA需要高压灭菌；
3、需要配制新鲜的1M HCl和1M NaOH
溶液，以及7.4％的NaHCO3溶液； 4、需要重新灭菌5mL枪头；
精品课件
精品课件
精品课件
精品课件
实验五 1M HCl的配制 1M NaOH的配制
【实验材料】
250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次 性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl
精品课件
【HCl的配制过程】
用5mL的移液器准确移取盐酸21mL， 加入到279mL超纯水中。
实验五 DMEM培养液的配制
【能力目标】 熟练掌握DMEM细胞培养液的配制。
精品课件
【实验材料】
500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水 瓶 酸度计 50mL小烧杯3个 孔径0.22μ 微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去 子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉 素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力 拌器 电子天平 药匙
5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把，
小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把，
高压灭菌；
精品课件
【课程安排】 6、每组准备培养皿两套，干烤灭菌； 7、需要重新配制双抗溶液。
精品课件
精品课件
【配制方法】
根据配方要求，加入准确称取的NaHCO3 1.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分摇匀至完全 溶解； 加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素 和链霉素的最终使用浓度达到100μg/mL； 加入培养基总体积约10％的已灭活的小 牛血清；
精品课件
【配制方法】
用浓度为7.4％的NaHCO3溶液调整溶液 的pH值为7.2~7.4，加超纯水定容，并将 培养液转入盐水瓶； 用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的 盐水瓶，封口，4℃保存备用。