免疫组织化学 考试重点

2012年周未班复习要点第一部分名词解释1、IHC 免疫组织化学(Immunohistochemistry;IHC)或称免疫细胞化学(ICC)是根据特异性抗原抗体反应的原理来定位组织或细胞内的抗原或抗体成分。

2、CB 柠檬酸缓冲液（0.01mol/L pH6.0,CB）,主要用于免疫组织化学抗原修复的缓冲液。

3、AR 抗原修复(antigen retrieval;AR)是以高温、高压对常规固定石蜡切片进行抗原修复，可以提高抗原抗体阳性检测率的方法。

4、TBS Tris-HCI缓冲液,常用浓度为0.02M,pH7.8 主耍用于IHC的冲洗和底物溶液的配制。

5、PBS 为0.01mol/L,pH7.4磷酸盐缓冲液,主耍用于免疫组织化学的洗涤。

6、酶消化酶消化主耍用于IHC前暴露抗原决定簇,有利于抗原抗体的检测,提高阳性检测率的方法。

7、抗原决定簇抗原决定簇（antigenic determinant）又称抗原表位（epitope），是可与相应抗体或淋巴细胞抗原识别受体相结合的部位，是决定和控制抗原特异性的特殊化学基因。

8、基因工程抗体基因工程抗体又称重组技术，它是在充分认识Ig基因结构与功能基础上，应用DNA重组技术和蛋白质工程技术，按照客观需求在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子。

9、功能性决定簇在一个具有三维空间结构的天然蛋白质抗原分子中,由于存在于抗原分子表面的抗原决定簇易被免疫细胞所识别,故此称为功能性决定簇。

10、单克隆抗体单克隆抗体是通过细胞融合技术使小鼠脾免疫细胞与小鼠骨髓瘤细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，在体外培养的条件下分泌产生的针对单一抗原决定簇,由单个B淋巴细胞增殖而形成的细胞纯系产生的抗体。

11、多克隆抗体多克隆抗体(polyclonal antibodies,PcAb)为免疫动物的全血清(抗血清)含有多个抗原决定簇。

12、隐蔽性抗原决定簇抗原决定簇则被抗原分子本身包绕掩盖在内部，正常情况下不能被免疫细胞所识别，称此为隐蔽性抗原决定簇。

13、免疫优势决定簇在某些因素的影响下，这些隐蔽性抗原决定簇可以暴露出来，刺激机体免疫系统发生免疫应答，称此为免疫优势决定簇（immuno-dominant determinant）。

14、抗体抗体(antibody)是机体通过体液免疫应答，由B淋巴细胞活化增殖、分化的浆细胞合成和分泌，并能与刺激抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白（Ig）。

15、抗原抗原是指进入机体能刺激机体的免疫系统发生反应，从而引起机体产生或形成致敏淋巴细胞，并能和这些抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。

16、石蜡切片新鲜经适当固定、脫水、透明、浸蜡后用石蜡包埋的组织蜡块，用石蜡切片机切成一定厚度（2-5um）的组织切片形式，是常规病理中的重要切片形式，也是免疫组化研究中较常用的切片形式，它能满足免疫组化的连续切片要求。

17、冰冻切片将新鲜组织置于-25℃左右的恒温箱中，待组织完全冷冻后，即可连续切片。

优点是能较完整地保存抗原性。

18、细胞涂片是将细胞培养的活细胞或穿刺细胞,通过一定方式转移到干净的载玻片上的过程。

19、切片粘合剂免疫组化染色时间长，需高温、高压抗原修复或酶消化等前处理，并要反复洗涤，切片在试剂中长时间浸泡经多次洗涤，极易造成脱片而影响实验的成败。

因而需截玻片上涂一层具粘附力的化学试剂,例如多聚赖氨酸、APES等。

20、PLP液PLP液(过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液), 该固定液适于含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。

21、PFG液PFG液含对苯醌、多聚甲醛、25%戊二醛、0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液,适于多种肽类抗原的免疫细胞化学，尤其是免疫电镜的研究。

22、载体把一个目的DNA 片段从基因组或DNA 中切割下来以后,在连接酶作用下和外源DNA 片段或基因拼接，起运送的DNA 称载体。

23、引物所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物两端的位置。

24、探针在化学及生物学意义上的探针，是指能与特定的靶分子发生特异性相互作用的分子，并可以被特殊的方法所探知。

25、EnVision法又称ELPS法，EnVision复合物是利用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)，将HRP或AKP和第二抗体标记在一个多聚化合物上，即形成酶-多聚化合物-第二抗体巨大复合物。

26、Epos法是采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)为骨架，将特异性抗体和HRP结合在一起，形成HRP—多聚化合物—特异性抗体巨大复合物，该复合物内不含第二抗体及亲和素。

27、CSA法也称酪胺信号放大，主要原理是酪胺的过氧化物酶反应,即HRP在H2O2存在下催化酪胺盐,形成共价键结合位点,而产生大量的酶促产物，如经几次这样的循环放大，可以网络许许多多的酶分子，最后通过显色反应，其敏感性得到几何级放大。

28、UIP法其基本原理及工作流程与EnVision法相似。

不同的是UIP复合物为HRP-氨基酸-抗鼠或抗兔IgG复合物（N-Histofine复合物），因N-Histofine复合物分子量较EnVision 复合物分子量稍小，理论上具有更强的穿透力。

29、PowerVision法原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密，形成串珠状多聚物,因此分子量较小。

其特点是简便、敏感。

30、免疫荧光直接法用已知特异性抗体与荧光素结合，制成特异性荧光抗体。

直接用于细胞或组织抗原的检查，此法特异性高，其缺点是一种荧光抗体只能检查一种抗原，敏感性较差。

31、免疫荧光间接法先用特异性抗体与组织标本反应，随后用缓冲盐水洗去未与抗原结合的抗体，再用间接荧光抗体与结合在抗原上的抗体结合，形成抗原-抗体-荧光抗体的复合物。

由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体显著多于直接法，从而提高了敏感性。

32、PAP法抗HRP抗体与HRP交联，制备成五环的PAP复合物(3个HRP和2个IgG分子), PAP复合物中的抗HRP抗体和第一抗体必需为同一种属动物的IgG，这样桥抗体才能作为“桥”将PAP复合物连接在第一抗体上,如特异性一抗为鼠来源的,那么PAP 复合物必须用鼠的。

33、APAAP法抗AKP抗体与AKP交联，制备成五环的APAAP复合物(3个HRP 和2个IgG分子), A P A AP复合物中的抗HRP抗体和第一抗体必需为同一种属动物的IgG，这样桥抗体才能作为“桥”将AP A AP复合物连接在第一抗体上,如特异性一抗为鼠来源的,那么APAAP复合物必须用鼠的。

34、ABC法 ABC是亲和素、生物素、过氧化酶复合物法（avidin biotin-peroxidase complex，ABC）在BAB法和LAB法的基础上改良的，其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。

生物素标记的第二抗体与ABC复合结合，酶显色反应。

35、LSAB法LSAB法或称S-P法、SABC法，它是采用生物素标记的第二抗体与结合有HRP或AKP酶的链霉亲和素（streptavidin）连接来测定细胞及组织中的抗原,与ABC法最大的区别是将酶直接连到链霉亲和素上。

36、 APAAP一种碱性磷酸酶(AKP)抗碱性磷酸酶方法,先制备成抗AKP酶抗体,该抗体再与AKP结合，形成APAAP复合物,用于IHC-APAAP法的检测。

37、酶标记抗体法酶标记抗体法是将酶(HRP或AKP)结合在特异性一抗或二抗上，制备成酶标记抗体，通过抗原抗体反应使抗原抗体复合物上带有酶分子，再借助酶对底物的特异性催化作用，在抗原抗体反应部位形成不溶性有色产物。

38、酶标直接法直接法是将酶标记在特异性抗体上，然后用酶标记抗体直接与组织细胞内相应抗原特异性结合，形成抗原-抗体-HRP复合物，最后用酶底物显色。

39、酶标间接法间接法是将酶标记在二抗上, 再与第一抗体(已与相应抗原反应形成复合物的IgG)反应，然后进行显色反应。

此法要求第二抗体与特异性抗体（一抗）应是不同种属的动物产生。

40、非标记抗体免疫酶法该方法先用酶(HRP或AKP)去免疫动物(羊,兔和鼠等),使其产生高效价、特异性的抗酶抗体,再将该抗酶抗体与酶结合,是酶标记抗体法的重大改进。

41、酶桥法酶免疫动物制备成效价高，特异性强的抗酶抗体。

在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作“桥梁”，将他们连接起来，再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的定位。

42、DAB/H2O2为HRP免疫组化染色的底物(H2O2)和供氢体(DAB),其浓度为0.05%DAB和0.03% H2O2最终产生棕黄色或棕褐色,如在DAB/H2O2加入一定量的重金属离子,可改变终产物的颜色。

43、AEC/H2O2 AEC(3－氨基－9－乙基卡吧唑)为HRP的显色液,AEC为供氢体,H2O2为底物,终颜色为红色，不能用醇溶性胶封片。

44、NBT/BCIP 主要用于IHC(AKP)或ISH碱性磷酸酶检测的底物-供氢系统,终产物为紫蓝色。

NBT即四氮唑蓝(Nitro-Blue-Tetrazolium)。

BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(5-bromo-4-chioro-3-indolyl-phosphate)。

45、HRP为辣根过氧化物酶是免疫酶组织化学常用酶，其供氢体/底物有好几种类型，常用DAB、AEC/H2O2。

46、AKP 碱性磷酸酶是IHC显示系统常用的酶，NBT/BCIP是该酶的底物-供氢系统,终产物为紫蓝色。

47. SPA葡萄球菌A蛋白主耍用于免疫组化的连接二抗。

48. PAG15nm金标记葡萄球菌A蛋白(SPA),颗粒大小为20nm的金标复合物，主要用于光镜和免疫电镜IGS和IGSS法的主要标记探针。

49. IGSS 免疫金银染色(Immunogold-silver staining)，是免疫组织化学最为敏感的方法之一,首先用金标抗体与特异性一抗或抗原特异性结合,再用银进行增强。

50. 荧光有些物质，当用紫外线照射时，它吸收了某种波长的光后还会发射出各种顔色和不同强度的光，而当紫外线停止照射后，这种光也随之消失，这种光称为荧光(fluorescence)。

51、荧光抗体用一定的方法将荧光素或荧光蛋白结合到特异性一抗或二抗上,用于免疫荧光组化染色的直接法或间接法。

52、自发性荧光组织在短波长光照射下自行发射出的荧光。

组织中的蛋白质和脂类在紫外线照射下能发射出微弱的淡蓝色荧光。

53、stokes移位光子能量hv EM发射后，返回荧光团基态So。