免疫组织化学 考试重点

2012年周未班复习要点

第一部分名词解释

1、IHC 免疫组织化学(Immunohistochemistry;IHC)或称免疫细胞化学(ICC)是根据特异性抗原抗体反应的原理来定位组织或细胞内的抗原或抗体成分。

2、CB 柠檬酸缓冲液（0.01mol/L pH6.0,CB）,主要用于免疫组织化学抗原修复的缓冲液。

3、AR 抗原修复(antigen retrieval;AR)是以高温、高压对常规固定石蜡切片进行抗原修复，可以提高抗原抗体阳性检测率的方法。

4、TBS Tris-HCI缓冲液,常用浓度为0.02M,pH7.8 主耍用于IHC的冲洗和底物溶液的配制。

5、PBS 为0.01mol/L,pH7.4磷酸盐缓冲液,主耍用于免疫组织化学的洗涤。

6、酶消化酶消化主耍用于IHC前暴露抗原决定簇,有利于抗原抗体的检测,提高阳性检测率的方法。

7、抗原决定簇抗原决定簇（antigenic determinant）又称抗原表位（epitope），是可与相应抗体或淋巴细胞抗原识别受体相结合的部位，是决定和控制抗原特异性的特殊化学基因。

8、基因工程抗体基因工程抗体又称重组技术，它是在充分认识Ig基因结构与功能基础上，应用DNA重组技术和蛋白质工程技术，按照客观需求在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子。

9、功能性决定簇在一个具有三维空间结构的天然蛋白质抗原分子中,由于存在于抗原分子表面的抗原决定簇易被免疫细胞所识别,故此称为功能性决定簇。

10、单克隆抗体单克隆抗体是通过细胞融合技术使小鼠脾免疫细胞与小鼠骨髓瘤细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，在体外培养的条件下分泌产生的针对单一抗原决定簇,由单个B淋巴细胞增殖而形成的细胞纯系产生的抗体。

11、多克隆抗体多克隆抗体(polyclonal antibodies,PcAb)为免疫动物的全血清(抗血清)含有多个抗原决定簇。

12、隐蔽性抗原决定簇抗原决定簇则被抗原分子本身包绕掩盖在内部，正常情况下不能被免疫细胞所识别，称此为隐蔽性抗原决定簇。

13、免疫优势决定簇在某些因素的影响下，这些隐蔽性抗原决定簇可以暴露出来，刺激机体免疫系统发生免疫应答，称此为免疫优势决定簇（immuno-dominant determinant）。

14、抗体抗体(antibody)是机体通过体液免疫应答，由B淋巴细胞活化增殖、分化的浆细胞合成和分泌，并能与刺激抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白（Ig）。

15、抗原抗原是指进入机体能刺激机体的免疫系统发生反应，从而引起机体产生或形成致敏淋巴细胞，并能和这些抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。

16、石蜡切片新鲜经适当固定、脫水、透明、浸蜡后用石蜡包埋的组织蜡块，用石蜡切片机切成一定厚度（2-5um）的组织切片形式，是常规病理中的重要切片形式，也是免疫组化研究中较常用的切片形式，它能满足免疫组化的连续切片要求。

17、冰冻切片将新鲜组织置于-25℃左右的恒温箱中，待组织完全冷冻后，即可连续切片。优点是能较完整地保存抗原性。

18、细胞涂片是将细胞培养的活细胞或穿刺细胞,通过一定方式转移到干净的载玻片上的过程。

19、切片粘合剂免疫组化染色时间长，需高温、高压抗原修复或酶消化等前处理，并要反复洗涤，切片在试剂中长时间浸泡经多次洗涤，极易造成脱片而影响实验的成败。因而需截玻片上涂一层具粘附力的化学试剂,例如多聚赖氨酸、APES等。

20、PLP液PLP液(过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液), 该固定液适于含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。

21、PFG液PFG液含对苯醌、多聚甲醛、25%戊二醛、0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液,适于多种肽类抗原的免疫细胞化学，尤其是免疫电镜的研究。

22、载体把一个目的DNA 片段从基因组或DNA 中切割下来以后,在连接酶作用下和外源DNA 片段或基因拼接，起运送的DNA 称载体。

23、引物所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物两端的位置。

24、探针在化学及生物学意义上的探针，是指能与特定的靶分子发生特异性相互作用的分子，并可以被特殊的方法所探知。

25、EnVision法又称ELPS法，EnVision复合物是利用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)，将HRP或AKP和第二抗体标记在一个多聚化合物上，即形成酶-多聚化合物-第二抗体巨大复合物。

26、Epos法是采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)为骨架，将特异性抗体和HRP结合在一起，形成HRP—多聚化合物—特异性抗体巨大复合物，该复合物内不含第二抗体及亲和素。

27、CSA法也称酪胺信号放大，主要原理是酪胺的过氧化物酶反应,即HRP在H2O2存在下催化酪胺盐,形成共价键结合位点,而产生大量的酶促产物，如经几次这样的循环放大，可以网络许许多多的酶分子，最后通过显色反应，其敏感性得到几何级放大。

28、UIP法其基本原理及工作流程与EnVision法相似。不同的是UIP复合物为HRP-氨基酸-抗鼠或抗兔IgG复合物（N-Histofine复合物），因N-Histofine复合物分子量较EnVision 复合物分子量稍小，理论上具有更强的穿透力。

29、PowerVision法原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密，形成串珠状多聚物,因此分子量较小。其特点是简便、敏感。

30、免疫荧光直接法用已知特异性抗体与荧光素结合，制成特异性荧光抗体。直接用于细胞或组织抗原的检查，此法特异性高，其缺点是一种荧光抗体只能检查一种抗原，敏感性较差。

31、免疫荧光间接法先用特异性抗体与组织标本反应，随后用缓冲盐水洗去未与抗原结合的抗体，再用间接荧光抗体与结合在抗原上的抗体结合，形成抗原-抗体-荧光抗体的复合物。由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体显著多于直接法，从而提高了敏感性。

32、PAP法抗HRP抗体与HRP交联，制备成五环的PAP复合物(3个HRP和2个IgG分子), PAP复合物中的抗HRP抗体和第一抗体必需为同一种属动物的IgG，这样桥抗体才能作为“桥”将PAP复合物连接在第一抗体上,如特异性一抗为鼠来源的,那么PAP 复合物必须用鼠的。

33、APAAP法抗AKP抗体与AKP交联，制备成五环的APAAP复合物(3个HRP 和2个IgG分子), A P A AP复合物中的抗HRP抗体和第一抗体必需为同一种属动物的IgG，这样桥抗体才能作为“桥”将AP A AP复合物连接在第一抗体上,如特异性一抗为鼠来源的,那么APAAP复合物必须用鼠的。

34、ABC法 ABC是亲和素、生物素、过氧化酶复合物法（avidin biotin-peroxidase complex，ABC）在BAB法和LAB法的基础上改良的，其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。生物素标记的第二抗体与ABC复合结合，酶显色反应。

35、LSAB法LSAB法或称S-P法、SABC法，它是采用生物素标记的第二抗体与结合有HRP或AKP酶的链霉亲和素（streptavidin）连接来测定细胞及组织中的抗原,与ABC法最大的区别是将酶直接连到链霉亲和素上。