最新免疫组织化学技术ppt课件

免疫组化结果的判断原则及 对假阴性和假阳性的认识
• 一、 免疫组化结果的判断原则
免疫组化具有特异性强、敏感性高及定 位正确等优点，但随着免疫组化应用的普 及和深入，越来越多的问题也随之出现。 因此，掌握对免疫组化结果的判断原则是 很重要的。
• 1.必须设染色对照 每批染色都要以特异性的阳性
对照和阴性对照为基础，才能对染色结果做出正 确的判断。没有阳性对照，就不能做出真正阴性 结果的判断；同理，没有阴性对照，也就不能做 出真正阳性结果的判断。因而，没有对照的免疫 组化染色，即使做出了判断也是不可信的。
肿瘤细胞与间质细胞、细胞与间质均为黄 色，相互累及一片，色度无深浅之分。这 种标记组织片不能作为免疫组织标记结果 判断依据。
• 非特异性染色的原因常为组织标本固定不佳、抗
体质量问题或稀释度不合理及操作方法不规范等。 因此，免疫组化特异性染色定位非常重要，如前 所述，阳性颗粒应位于细胞胞膜、胞浆或胞核， 阳性细胞与阴性细胞相互交杂，阳性染色强度深 浅不一。如果缺乏细胞间的不均一性染色，即是 呈阳性染色，常提示为非特异性染色。另组织片 边缘反应和出血坏死灶周围阳性反应不能作为诊 断依据。
免疫组织化学技术ppt课 件
• 免疫组织化学（简称免疫组化）是组织化学的
一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特 异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合 后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、 同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观 察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确 定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。
• 5.腺管型 主要见于腺癌和具有腺癌样结
构的胚胎性肿瘤。上皮标记物多为胞浆 表达。胃肠低分化腺癌中有时HE很难鉴 别腺样结构，但用癌胚抗原、上皮膜抗 原或结肠癌相关抗原则容易显示出来。
• 6.腔缘型 阳性颗粒主要位于腺癌腔缘的
微绒毛处，沿腺管腔缘表面内衬一薄层 黄色颗粒，基底部多为阴性。结肠癌相 关抗原在胃肠腺癌、胆囊腺癌、乳腺癌 中常表现为这种类型；卵巢癌相关抗原 在卵巢浆液性腺癌亦是如此；肿瘤相关 粘液抗原在许多腺癌中也显示腔缘阳性。
• 7.菊团型 阳性肿瘤细胞排列呈菊团样结
构，部分阳性细胞围绕血管排列。此型 多见于分化较好的神经内分泌肿瘤和胶 质细胞瘤等，阳性颗粒定位在细胞浆。
四、阳性标记强度特征
• 细胞免疫组化标记的阳性强度根据显色
程度分为弱阳性、中度阳性和强阳性； 也可依据阳性细胞在细胞中所占比例大 致分为：弱阳性，阳性细胞≤25%；中阳 性，阳性细胞25%~50%；强阳性，阳性 细胞>50%。
• （2）肿瘤细胞异常表达： 可选用多种标记去证
实或排除，鉴别其真正组织来源或向某一组织细 胞分化。
• （3）肿瘤细胞吞噬组织抗原：是由于某些恶性肿
瘤细胞摄入周围正常组织细胞成分，虽然后者也 存在某些抗原，但不属于瘤细胞固有成分，胞浆 内抗原定位较模糊，因此应该区别。
• （4）非特异性染色 是指抗原无明确定位，
• 5.复合型 在常规免疫组化标记中，同一
种抗原可以同时表达于Hale Waihona Puke Baidu膜和胞浆、胞 核和胞浆、微绒毛和胞浆，但很少发现 胞膜和胞核同时表达。值得注意的是组 织标本固定不及时造成抗原移位或乳腺 ER和PR修复不充分也可以发生胞核和胞 浆同时阳性。
三、阳性标记组织学特征
• 根据免疫组化阳性细胞的组织学特点，
• 2.弥漫型 阳性细胞呈弥漫性分布，细胞间无连
接，也可以单个细胞散在分布。此型中细胞几 乎都高度表达某种抗原，如淋巴瘤（白细胞共 同抗原）、Hodgkin病（粒细胞相关抗原、Ki1）、胃肠未分化癌癌胚抗原（CEA）及上皮膜 抗原、尤文瘤中CD99等。
• 3.片块型 较常见。阳性细胞多为细胞浆表达，细
五、非特异着色特征
• 以下情况可干扰免疫组化标记结果的观察和判断：
（1）抗体交叉反应： 是由于该抗原决定簇同时 存在于多种组织细胞，如GFAP可同时存在于星 形胶质细胞和唾液腺肌上皮。S-100蛋白则更为严 重，可表达于多种组织细胞。因此，应全面了解 和认识该抗体的功能和标记范围。故抗体交叉反 应只要应用得当仍有助于诊断。
胞间界限较清晰，但相互融合呈片状或团块状结 构。此型可见于上皮源性肿瘤、某些向上皮分化 的间叶源性肿瘤、恶性黑色素瘤、中分化神经内 分泌瘤及核形细胞瘤（如癌肉瘤和神经纤维瘤、 平滑肌肉瘤）。
• 4.网状型 此型主要见于细胞密度较大的
大细胞肿瘤，标记物多为膜抗原。阳性 细胞膜与膜间相互紧靠，而胞核呈阴性 反应，免疫组化标记显示网状结构。
免疫组化阳性细胞或阳性颗粒可呈以下 类型排列：
• 1.局灶型 阳性细胞呈不规则小灶性分布。阳性细胞
可多可少，排列不规则，无固定排列形式，阳性染 色深浅不一。细胞角蛋白、上皮膜抗原在低分化鳞 状细胞癌、腺癌和癌肉瘤；肌动蛋白和结蛋白在低 分化横纹肌肉瘤；NSE、神经丝蛋白、突触素在恶 性神经内分泌肿瘤及低分化星形胶质细胞瘤中胶质 原纤维酸性蛋白（GFAP）和恶性黑色素瘤中S-100 蛋白等均可表现为局灶性阳性。
• 4.微绒毛型 抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒
毛，而胞浆和胞膜可以是阳性或阴性表达。这种 表现形式最常见于各种腺癌，如甲状腺腺癌、乳 腺腺癌、胃肠腺癌、胆道腺癌、卵巢浆液性腺癌 等。其特点是阳性颗粒除靠近腔面阳性外，其余 基底部可呈阴性反应。在肿瘤标记物中多见于上 皮膜抗原、上皮特异性抗原、结肠相关抗原、卵 巢癌抗原等。甲状腺腺癌中甲状腺球蛋白常以该 形式出现。
• 2.胞核型 阳性颗粒定位于细胞核，呈均
匀分布或位于核膜下，有的呈小斑块状 不规则分布。此多见于增殖细胞核抗原、 Ki-67及激素受体中雌激素受体（ER）、 孕激素受体（PR）和基因p53等。
• 3.胞浆型 阳性颗粒主要分布于细胞浆。大部分抗
原均属于此种类型，如细胞角蛋白、波形蛋白、结 蛋白、神经丝蛋白、肌红蛋白、α1-抗胰糜蛋白酶 及前列腺特异性抗原（PSA）等。依据抗原在胞浆 内分布形式，通常表现为弥漫性分布或局限性分布。 前者阳性颗粒弥漫而均匀地分布于整个细胞浆。局 限性是指阳性颗粒呈小斑点状或斑块状局限于细胞 浆中的某一部位、核周或细胞浆的一侧。