中医证的动物模型研究思路

二、阳虚证模型



阳虚则阴盛，阳虚则外寒。因此凡属阳虚证者， 均有寒象。阳虚有肾阳虚、脾阳虚等。由于肾 为先天之本，又为气之根。因此一般阳虚证常 涉及肾阳虚。补阳都从补肾入手，补阳药一般 也都是补肾阳的药物。 肾阳虚的主要表现是全身功能衰退，一般症状 有神倦，畏寒肢冷，腰膝酸软，舌质淡白，脉 沉而弱。因此实验动物模型大都根据这些原理 设计。 阳虚证的发生原理，尚未完全阐明。根据临床 和实验资料，认为与内分泌功能和能量代谢失 调有关。
5.4±1.23
与对照组比，*P<0.05 ；与对照组比，**P<0.01； △与阳虚组比 P<0.01。DNA合成率单位为每分钟cpm／mg· DNA
肝、脾DNA测定原理



分别取出肝、脾，用冷生理盐水洗净，滤纸吸干表 面水分，称重，在冰浴中剪碎，加冷匀浆液 （0.15mol/L NaCl, 0.1mol/L EDTA, pH7.58.0 ），制备匀浆，以纱布过滤，3500r/min离心 15min。 取沉淀加入2ml匀浆液，搅匀，放置达室温，加入纯 化的十二烷基磺酸钠(SDS),使其终浓度为1.6％。 于三角烧瓶中加玻璃珠振荡摇匀，再加固体氯化钠， 浓度达1mol/L,振荡20min, 再加等体积氯仿，剧烈 振荡20min, 3500r/min离心15min。

第二节

现有几种证的动物模型研究简介
一、 阴虚证

造模材料：成年大鼠，200～250 g；小鼠， 7～8周龄，左旋甲状腺素钠或甲状腺素。 造模方法：成年大鼠以甲状腺素1-10 mg／ kg灌胃，连续3周；或小鼠以L－甲状腺素钠 1-20 mg／kg皮下注射，连续4～5d。

原理：甲状腺功能亢进主要表现为肾阴虚证， 通过给实验动物大剂量使用甲状腺素，复制出 甲状腺功能亢进性肾阴虚证动物模型。呈现肝、 肾组织耗氧量增加等。



阳虚证造模后的指标变化： 阳虚小鼠模型建成后，小鼠出现的“阳 虚”症状： 厌食，体重减轻、活动减少、反应迟钝、 卷曲拱背、形寒肢冷、耗氧量减少。游 泳能力和耐冻能力减低，且死亡率随造 型天数而增加。


例：
肾阳虚模型组：氢化可的松25mg/kg肌内注 射 )； 生精胶囊大、中、小剂量组：生精胶囊2.4、 1.2、0.6/kg ，口服；同时肌内注射氢花可的 松25mg/kg； 五子衍宗丸组：五子衍宗九1.2g/kg，口服。 同时肌内注射氢花可的松25mg/kg，
◆另一方面也可用他巴唑制造阳虚模型。




◆贫血患者常表现有血虚，所以用少

量多次放血，或用化学药物损伤动物 的骨髓造血功能，制备动物模型，能 够造成动物疲倦少动，消瘦乏力等与 血虚相关的一些表现，以及血液红细 胞数下降等与临床血虚病人相似的生 理生化变化。 用当归补血汤后可改变这些病理生理 变化。
每日1次，连续4次。



生精胶囊对肾阳虚模型小鼠的影响(X±s；n＝l0)
剂量 体重（g ） 药前 28.9±0.98 28.9±0.87 药后 32.7±4.1 29.8±1.6* 游泳时间 （min） 25.4± 3.0 20.3± 3.3**
组 别
(g/kg) 正常对照组 模型组
2.4
生精胶囊 五子衍宗丸 1.2 0.6 1.2


再如慢性泄泻可致脾虚，用大黄等给 动物长期服用可制备脾虚模型。
健脾温中方药可缓解此脾虚证。



2. 以病拟证：
有些疾病发展到某一阶段，某种证的表现 比较明显。 ◆如甲亢患者常见阴虚火旺，五心烦躁，颧 红，消瘦等阴虚症状，故可用甲状腺激素 制备阴虚模型。 中药生地，玄参，麦冬，龟板等给予此模 型动物，可改善症状。
糖皮质激素型阴虚模型建立法


原理: 临床使用糖皮质激素治疗时，可发生 欣快、失眠，不安，易激动的副作用，这 些症状与阴虚类似。 动物实验发现大剂量醋酸可的松对甲状腺 的作用是先促进后抑制。在用大剂量氢化 可的松制作小鼠阳虚造型时，发现助阳药 对造型早期无效，滋阴药有一定作用。在 造型后期则助阳药有效，滋阴药无效。因 而显示氢化可的松造型早期为阴虚表现。
阴虚证造模后的指标变化：

动物出现体重减轻，体温升高，心率加 速，躁动不安，饮水量、耗氧量增加， 痛阈下降。肝脾核酸合成增加，外周微 循环血管开放数目增加，血流加速，心 肌、肾脏和脑组织β受体数量均增加；红 细胞、肝、肾组织的Na+，K+-ATP酶活 性增高。
益气养阴泻火药对甲亢动物的影响



现有动物证候模型的缺陷

1.模拟的病变与真实疾病病理变化存在差 异。 2. 与人类疾病及证候的临床表现不完全 相同。 3.同一病的证候分型，缺少客观化、可量 化检测指标。



4.部分模型缺乏稳定性，病理、症状变化 可自行缓解。
应用注意

比较成熟、科学合理的中医证 (病)动物 模型甚少。大部分尚处于探索阶段。 对一个药物的药效需要用几个模型从不 同侧面验证。切忌单凭个别动物实验指 标的测定结果就作绝对的肯定或否定。


3. 直接模拟证的病理变化：
如对证的某些病理变化已有所了解，可直 接用药理、化学或物理方法制造这一变化， 以形成与该证接近的病理模型。 如血瘀证，目前一般认为它主要表现为循 环障碍和血液流变学障碍。因此常用一些 方法，人为制造微血流淤滞，血液粘度增 高，使微循环的血流不畅。

病证结合模型研究思路

上层水加入2倍体积无水乙醇，即可见DNA呈 胶链析出。用玻璃棒卷出此白色纤维状粗制 DNA，以丙酮、乙醚冲洗，干燥后称重。
取4－9mg DNA ，加闪烁液，用液体闪烁计 数仪测定脉冲值，按1mg DNA每1min的脉 冲值计算。


甲减型阳虚模型建立法


切除甲状腺造型法 原理 甲状腺功能减退者(甲减)，体内的代谢普 遍减慢，基础代谢率降低，中医辨证甲减患者 大多具有脾肾阳虚症状，以温肾补阳药治疗， 临床症状好转，基础代谢率升高，血浆cAMP 升高。因此切除甲状腺造成的“甲减”动物模 型，可模拟人类的阳虚证。 操作方法 取体重100～150g大鼠。在乙醚麻 醉下切除双侧甲状腺，造成甲减大鼠模型，手 术6～8星期后用于实验。
3. 病与证分别发生，但有时间上的同步 性。如在建立脾虚模型基础上对动物接 种肿瘤细胞株而形成脾虚型肿瘤模型。


病证结合模型模拟临床辨证、辨病相结 合的情况，是在同一动物体上同时复制 具有相互联系的现代医学的病及中医证 候，其实质是一类中西医结合模型。

病证结合模型增加了模型的变量，使研 究的复杂性及提供的信息量均大幅度增 长。
中医“证”的动物模型

第一节

中医证的动物模型研究思路



中医证候动物模型是现代中医学研究的 基础，是中医动物实验的核心。 中医证的动物模型是中药新药有效性评 价的工具，可为中药新药研制和开发、 中药药理研究提供坚实的实验基础. 中医学术发展缓慢的一个重要原因就是 实验研究体系不够完善，缺少自己的科 学规范、指标体系和方法论。中医证候 动物模型的建立可弥补上述缺陷，有利 于促进中医药学的现代化。


1. 同病不同证。 如不同方法造成的消化性溃疡病模型对 不同的辨证施治方药反应不同，认为其 属于不同的证候。 又如用肾动脉狭窄法形成的高血压模型 属肾阴虚型；高肾上腺皮质激素制备的 高血压模型属于肾阳虚型。

2.由病致证。如感染性休克在其演变过 程中分别发生了热厥证、热厥气脱证、 元气外脱证。

造模原理： 大剂量氢化可的松促进动物蛋白质、脂 肪的大量分解， “阳虚”大鼠血浆 ACTH含量昼夜总体水平显著降低，垂体、 肾上腺、生殖腺组织发生退行性病变， 肝、脾重量减轻，RNA和DNA合成减少， 细胞免疫和体液免疫功能降低，外周微 循环血管开放数目减少，血浆cGMP水 平增高，cAMP水平相对降低，血浆皮质 醇水平增高，肝糖原增加。
71.76±18.94(n=21) 385.04±45.36(n＝17)
对照组 甲亢组
98.05±27.09(n=23)* 532.10±71.02(n=17)*
治疗组 80.89±31.11(n=17) 465.03±109.07(n＝15) △* ————————————————————————————— *与对照组比p<0.01 △与甲亢组比p<0.05 肝组织耗氧量：每分钟毫微克分子氧／100mg肝组织
27.8±0.79
26.4± 0.94 27.0±1.0 26.4±1.2
32.6±1.6ΔΔ
32.4±2.7 32.3±1.8Δ 32.6±2.4ΔΔ
23.24±2.9Δ*
23.8± 4.8 23.7 ±3.9Δ 23.1± 4.3
注：与正常对照组比较*P<0.05，**P<0.01；Δ与模型组比较P<0.05，ΔΔP<0.01。

造模材料：小鼠，雄性，体重25～35 g ， 醋酸氢化可的松注射液或可的松、氢化 可的松注射液或地塞米松。 造模方法：可的松或氢化可的松给小鼠 灌服，或肌肉注射15～30mg/kg，每 天1次，连续5～7d; 或给小鼠以醋酸氢 化可的松25～62.5 mg/kg肌肉注射， 连续8～10d。





迄今制备“证”的模型主要采用的方法： 1.按病因、病机理论建立模型：
某些病因、病原可以引起类似于中医某种证的 病理生理变化。例如由某些致病菌，毒素引起的疾 病，发展到某一阶段都会出现中医描述的“热毒” 证。包括面赤身热，口渴便秘或泄泻，小便短赤， 舌红苔黄，烦躁不安，甚至神昏谵语等。因此可通 过向动物体内注射致病菌，如伤寒，副伤寒，甲， 乙三联菌苗，或注射细菌内毒素如大肠杆菌内毒素， 伤寒杆菌内毒素等造模。 清热解毒药对这一方法产生的病理模型变化具 有改善作用。以此方法制备的“热症”模型，可用 于评价清热解毒新药的解热作用。