生物实验报告-ABO血型鉴定

生物实验报告

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实验题目：ABO血型鉴定

实验目的：1.掌握血涂片的制作，了解各种血细胞的结构特点

2.掌握ABO血型的鉴定方法

实验原理：人类的ABO血型遗传是由基因决定的。很多時间，一个基因只包含两个等位基因。但是，控制血型的基因

I则有三个不同等位基因。即同一时间内，一个位点

可以有其中任何两个等位基因出现。

等位基因A使红血球产生抗原A；

等位基因B使红血球产生抗原B；

等位基因O使红血球不产生抗原；

等位基因A和B为等显性，O对A和B均为隐性。

ＡＢＯ血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无Ａ抗

原和Ｂ抗原或AB抗原，将血型分为Ａ型、Ｂ型、Ａ

Ｂ型及Ｏ型四种。本实验采用红细胞凝集试验，用已

知抗Ａ和抗Ｂ单克隆抗体来测定红细胞上有无相应

的Ａ抗原或Ｂ抗原或AB抗原来确定ABO血型。

抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞膜上抗

原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种

抗体。A抗原加抗A单克隆抗体或B抗原加抗B单克

隆抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜

上有无A或/和B抗原→判断血型

抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成

肉眼可见的颗粒状凝集团块.

实验对象：血液

实验器材：受检者血液

抗A、抗B单克隆抗体

载玻片、脱脂棉、针、酒精棉球、生物显微镜、冰

箱等。

实验方法及步骤：

1.血涂片的制作

用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采血针刺破指尖或耳垂，从采血针眼处挤出绿豆大小血滴，用清洁玻片面的一端轻轻

接触血滴，使血滴附于玻片面上（注意勿触及皮肤，否则血在玻片上就不能成滴）。

⏹以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，

在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。

⏹涂片在空气中干燥后置于染色架上，滴加瑞氏染色液，使

涂片被染色液覆盖。

⏹染1分钟后，再加等量的缓冲液于染色液上，浸染约5-8

分钟此时涂片表面呈现一层古铜色。

⏹用蒸馏水迅速冲洗，见涂片呈粉红色后，自然晾干。

2.血细胞观察

制作良好的血涂片厚薄适宜，血膜分布均匀，呈粉红色。选一厚薄适宜部位置显微镜下观察。先用低倍镜观察全片，了解涂片染色、细胞分布情况，再用高倍镜观察。

⏹红细胞数量最多，体积小而圆、均匀分布，呈红色的圆

盘状，边缘厚，着色较深，中央薄，着色较浅，无细胞核、细胞器，胞质内充满血红蛋白。

⏹白细胞白细胞数量较红细胞数量少，但胞体大，细胞核

明显，极易与红细胞区别开。

⏹嗜中性粒细胞是白细胞中较多的一种，约占白细胞总数

50-70%。体积比红细胞大，主要的特征是胞质中的特殊颗

粒细小，分布均匀，着淡紫红色。胞核着深紫红色，一般

分3—5叶，叶间以染色质丝相连。核分叶的多少与该细胞

年龄有关，如核为杆状，则为嗜中性粒细胞的幼稚型。

⏹嗜酸性粒细胞比中性粒细胞略大，数量少，约占7%以下。

核常分两叶，着紫蓝色。主要特点是胞质内充满粗大、圆

形的颗粒，色鲜红或桔红。

⏹嗜碱性粒细胞数量很少，约占1%以下。在一般血涂片上

不易找到，体积比上述2种白细胞稍小。胞质中分散着许

多大小不一的深紫蓝色颗粒。胞核形状不定,圆形或分叶，

也染成紫色，但染色略浅，一般都被颗粒遮盖，形状不清

⏹淋巴细胞数量较多，约占20%-40%，可见中、小型，淋

巴细胞。其中小淋巴细胞最多,略大于红细胞。核大而圆,

几乎占据整个细胞，染成深蓝紫色。胞质极少，仅在核的

一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质。中淋巴细胞比红

细胞大，胞质较小淋巴细胞的稍多，着色较浅。核圆形或

卵圆形，位于细胞中部，也染成深蓝紫色。

⏹单核细胞数量少，约占2%-8%，是细胞中体积最大的一

种，胞核呈肾形、马蹄形，常在细胞一侧，着色比淋巴细

胞浅。

⏹血小板为形状不规则的细胞小体，其周围部分为浅蓝色，

中央有细小的紫色颗粒，常聚集成群，分布于红细胞之间。

高倍镜下一般只能看到成堆的紫色颗粒，在油镜下才能看

到颗粒周围的浅色胞质部分。

3.血型鉴定

⏹标记凹载玻片：左上角写A，右上角写B。

⏹分别吸取抗A、抗B单克隆抗体各1滴滴于双凹载玻片左

端和右端。

⏹采血针刺破左手无名指尖或耳垂，待血液出来后，用2支

毛细滴管吸取或消毒后的牙签挑取血液，分别加入到玻片

左、右两侧的单克隆抗体试剂内，并用牙签搅拌，使单克

隆抗体试剂与血液混匀。（切勿混用毛细滴管和牙签！）然

后置室温下5min后观察结果。

⏹肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀，

则多为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多为不

凝集。

⏹进一步在低倍镜下观察：在低倍镜下，如果观察到红细胞

凝集成团，或尚有少数游离细胞，则为凝集现象；如果红

细胞均为游离状态，则为不凝集。根据镜下所见有无凝集

现象判定血型。

⏹判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝

集，判断其血型。

注意事项：

玻片、试管都要标记！！！，A及B标准血清/抗A、抗B单克隆抗体绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯！

所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。

红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。

一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。

离心时间、速度严格要求，以防假阳性或假阴性结果。

要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时