伽马氨基丁酸的测定
γ-氨基丁酸的高效液相色谱测定法
二、γ-氨基丁酸的高效液相色谱测定法本方法适用于保健食品中γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid）的测定。
本方法γ-氨基丁酸的检出限为10ng。
1.方法提要γ-氨基丁酸用异硫氰酸苯酯柱前衍生，衍生物采用氨基酸分析柱分离，二元流动相梯度洗脱，248nm波长下紫外检测器检测，以保留时间定性，以峰面积外标法定量。
2.仪器（1）高效液相色谱仪，配紫外检测器。
（2）旋涡混合器3.试剂本方法除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
（1）乙腈：色谱纯。
（2）异硫氰酸苯酯乙腈溶液：吸取0.5mL异硫氰酸苯酯，加入40mL乙腈溶解。
（3）盐酸溶液（0.1mol/L）：取分析纯浓盐酸8.3mL，加水稀释至1L。
（4）三乙胺-乙腈溶液：15mL三乙胺与85mL乙腈混合而成。
（5）γ-氨基丁酸标准品：纯度99.9%，Sigma公司。
（6）γ-氨基丁酸标准溶液：精确称取γ-氨基丁酸10mg，置于10mL容量瓶中，加0.1mol/L 盐酸溶液溶解并稀释到刻度，摇匀，得浓度为1mg/mL的标准储备溶液。
将此标准储备液用0.1mol/L盐酸溶液稀释成浓度分别为10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、80.0μg/mL的标准溶液系列。
（7）醋酸钠溶液：0.05mol/L，用作流动相A。
（8）乙腈-水溶液：乙腈-水（80+20），用作流动相B。
（9）正己烷。
4．测定步骤（1）供试样品溶液的制备1）提取：称取适量样品(相当于γ-氨基丁酸4mg，精密至0.001g)，置于100mL三角烧瓶中，加入盐酸溶液(0.1mol/L)适量，40℃超声提取20min，冷却，转移至100mL容量瓶，加盐酸溶液(0.1mol/L)至刻度，摇匀，静置，取适量过滤，得样品提取液。
2）衍生化：取样品提取液0.2mL，置于5mL具塞试管中，加异硫氰酸苯酯-乙腈溶液0.4mL，再加三乙胺-乙腈溶液1.4mL，摇匀，放置1小时，然后加入正己烷2mL，漩涡混合1min，静置，取下层液体作为待测溶液。
伽马氨基丁酸的成分
伽马氨基丁酸的成分近年来，酵素产品在养生行业异军突起，迅速风靡全国，而其效性离不开其所蕴含的各种成分。
研究发现，食用酵素所含功能性成分又广又多，γ-氨基丁酸不仅是其中的一种营养成分，更是酵素发酵过程中检测好酵素的一个推荐指标。
因此，今天我们就来介绍下什么是γ-氨基丁酸以及在酵素中添加γ-氨基丁酸又何有作用。
一、γ-氨基丁酸是什么英文名称：γ-aminobutyric acid （GABA）化学名称：4-氨基丁酸别名：氨酪酸、哌啶酸分子式：C₄H₉NO₂分子量：103.1γ-氨基丁酸是一种天然活性成分，也是一种非蛋白质氨基酸，广泛分布于动植物体内，如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有γ-氨基丁酸，它参与多种代谢活动，具有很高的生理活性。
早在2009年9月27日，卫生部的2009年12号公告，就已批准γ-氨基丁酸为新资源食品原料，允许应用于饮料、可可制品、巧克力和巧克力制品、糖果、焙烤食品、膨化食品，但不包含婴幼儿食品。
但是对在食品对γ-氨基丁酸的使用是有条件的，公告中要求，必须通过生物合成法，以L-谷氨酸钠为原料经希氏乳杆菌（Lactobacillus hilgardii）发酵、加热杀菌、冷却、活性炭处理、过滤、加入调配辅料（淀粉）、喷雾干燥等步骤生产而成。
二、γ-氨基丁酸的功效目前国内外对γ-氨基丁酸功效的研究已经非常深入，作为一种新型的特殊功能性因子，γ-氨基丁酸被广泛应用于医药、保健、饲料、化工等领域，其生理功效主要包括以下几点。
1、镇静神经、抗焦虑医学家已经证明γ-氨基丁酸是中枢神经系统的抑制性传递物质，是脑组织中最重要的神经递质之一。
其作用是降低神经元活性，防止神经细胞过热，γ-氨基丁酸能结合抗焦虑的脑受体并使之激活，然后与另外一些物质协同作用，阻止与焦虑相关的信息抵达脑指示中枢。
大量研究证明，γ-氨基丁酸可以缩短入睡时间，并且延长慢波睡眠Ⅱ期和快动眼睡眠期，帮助人体快速入眠。
伽马氨基丁酸的测定
操作要点: 选取籽粒饱满的稻米，去皮后用Pearlest 精米机处理40s 成为精米。
为了抑制发芽后的发酵味，用1% 的次氯酸钠水溶液洗1min，用灭菌的去离子水反复冲洗 3 遍。
将处理好的精米用纱布包好，恒温浸泡，转入培养皿中发芽，保持培养皿湿润，每3h 上下翻动一次。
发芽结束后将培养皿放入55℃烘箱终止活性，干燥一定时间，取出粉碎。
1.2.2GABA 含量测定样品准备:将粉碎后的样品过60 目筛，称取2g，加入5% 三氯乙酸水溶液5mL，30℃振荡提取2h，离心(转速10000r/min)10min，取上清液待测色谱条件:单泵，流速为0.9mL/min;色谱柱为Venusil MP－C18(4.6 ×250mm)，柱温30℃;流动相为1.6g NaAc ·3H2O 溶于600mL 水中，pH7.2，甲醇200mL，乙氰200mL;检测波长338nm。
衍生化:吸取硼酸缓冲液(0.4mol/L，pH10.4)1000μL，样品200μL，OPA 衍生试剂( OPA 80mg，β－巯基乙醇80μL，乙腈10mL)200μL，混合均匀，暗室中室温反应5min 后进样20μL。
GABA 标准曲线的绘制:用配制好的250mg/L的标准液分别稀释50、40、30、20、10、6、5 倍，柱前衍生，吸取20μL 进样，重复三次，以GABA 的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
衍生试剂（邻苯二甲醛OPA）的配制０．５Ｍ硼酸钾溶液：称取３．１０００ｇ硼酸，２．６０００ｇ氢氧化钾于烧杯中，用双蒸水溶解，定容于１００ｍＬ容量瓶中，摇匀，用硝酸调节ｐＨ到９．５邻苯二甲醛（ＯＰＡ）溶液：称取０．３０００ｇＯＰＡ，溶解于５ｍＬ甲醇，再溶解于１００ｍＬ０．５Ｍ硼酸钾溶液中，然后加入０．２５ｍＬ２－巯基乙醇［１９］，混匀，避光４℃冰箱中保存（最多可保留１周，最好现配现用）γ-氨基丁酸的分离提取米糠中加入3～5 倍体积0.01mol/L 柠檬酸缓冲液(pH6.0)，37℃水浴电动搅拌抽提4h，减压抽滤，以4000r/min 离心30min，取出上清加入10% 磺基水杨酸离心弃沉淀，冷冻干燥后为黄粽色固体，将其溶解于蒸馏水中、上SephadexG-25层析柱(1.5×74cm)分离，蒸馏水洗脱，收集与茚三酮溶液反应呈阳性的洗脱液，浓缩，G A B A定性检查，所得样品调节pH 值约为4，上磺酸型阳离子交换柱(2.0 ×30cm)，冰乙酸一吡啶缓冲液进行pH线性梯度洗脱，收集含G A B A 洗脱液，浓缩，硅胶H 薄板层析鉴定。
乳制品中γ-氨基丁酸含量的测定
102 I FOOD INDUSTRY I 乳制品中γ-氨基丁酸含量的测定文 陈盛上海必诺检测技术服务有限公司入400mL 4mol 钾/钠醋酸缓冲液混合均匀，定容至1L 储备液待用；最后向溶液中加入还原剂，充入氮气2分钟。
清洗溶液：600mL 异丙醇与400mL 去离子水混合。
1.2标准溶液配制 标准品 ：γ-氨基丁酸标准品，天津埃尔塔公司。
标准储备液：分别称取 0.0100g 标准品（4.3）置于10.0mL 棕色容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，标准储备液浓度为1.0mg/mL ，4ºC 冰箱中保存，有效期3个月。
标准工作液：分别取各标准储备液（4.4.1）1.0mL 至10.0mL 棕色容量瓶中，用水定容至刻度，此标准工作液浓度为100μg/mL ，4ºC 冰箱中保存，有效期1个月。
1.3仪器和设备氨基酸分析仪：赛卡姆（北京）科学仪器有限公司。
电子天平：BP211D ，Sartorius 公司。
漩涡混合器——TALBOYS （上海安谱科学仪器有限公司）；氮吹仪（上海安谱科学仪器有限公司）；鼓风干燥箱（上海安谱科学仪器有限公司）。
1.4分析步骤1.4.1样品前处理称取试样1g （精确到0.0001g ）置于水解瓶中，加入10mL6mol/L 盐酸溶液（1.2.1），并加入3-4滴苯酚。
将水解瓶放入冰箱冷冻室内，冷冻约3min-5min 后，抽真空后充入氮气（重复抽真空-充入氮气3次），在充氮气状态下拧紧螺丝盖。
将水解瓶置于110℃±1℃的鼓风干燥箱内，水解22hγ-氨基丁酸（γ-a m i n o b u t y r i cacid ，GABA ）是中枢神经系统中非常重要的活性物质，具有多种生理功能。
γ-氨基丁酸是中枢神经系统的一种抑制性神经递质，在调节神经元兴奋度上起着重要作用，具有安神、降血压、改善肝肾功能、促进睡眠、缓解焦虑、抗抑郁等多种生理功效。
现有的食品中，γ-氨基丁酸检测的手段主要有酶法、比色法、液相色谱法及液相色谱-串联质谱法。
GABA的测定
Berthelot显色反应：利用苯酚和次氯酸钠与游离氨的反应，生成有色化合物来测定不同体系中微量氨及其盐类，灵敏度高。
标准γ-氨基丁酸溶液经Berthelot显色反应可在645nm 附近出现最大吸收峰。
y=0.4408X - 0.0077，相关系数R2=0.9945选择甲醇作为脱色剂，加入AlCl3有效地除去叶中的水溶性色素后，用分光光度计测出。
1、样品测定：称取研磨后的荞麦叶粉末0.5g，加入装有3mL甲醇的离心管中，室温振荡10min，5000r/min离心15min，弃上清；再加入2mL甲醇，室温振荡10min，5000r/min离心15min，弃上清；待沉淀完全干燥后，加3mL去离子水，40℃水浴中振荡提取10min，5000r/min离心15min，取上清；再加2mL去离子水，40℃水浴中振荡提取10min，5000r/min离心15min，取上清；两次提取的上清液合并定容至10mL，低温（4℃）保存备用。
每次取2mL低温保存液，加入0.5mol/L的AlCl3溶液8mL，待沉淀完全后，室温振荡5in，12000r/min离心5min，取上清液加入1 mol/L的KOH溶液1.2mL，室温振荡5in，12000r/min 离心5min，上清液即为待测样品提取液。
用相同的操作将10mL低温保存液全部提取完毕。
取全部叶样品提取液，稀释至25mL，在630nm波长下测得吸光度。
2、标准曲线的绘制:分别称取γ-氨基丁酸标准样品1.250g、1.000g、0.750g用去离子水溶解，定容至250mL，配置成不同浓度的标准样品溶液。
每次取不同浓度γ-氨基丁酸标准样品溶液1mL，依次加入pH8.0的缓冲液4mL、6%苯酚1.4mL，混匀移入40℃水浴锅，加滴5%次氯酸钠2.2mL，恒温显色20min后用水稀释至10mL。
然后从低到高，依次测量吸光度，绘制标准曲线。
纵坐标为吸光度，横坐标为浓度。
人体γ-氨基丁酸测定方法
人体γ-氨基丁酸测定方法
人体γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyric acid，简称GABA）是一
种重要的神经递质，在中枢神经系统中发挥着重要的调节作用。
测
定人体γ-氨基丁酸的方法有多种，下面我将从多个角度介绍几种
常用的测定方法。
1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是一种常用的分离和测定
化合物的方法，可以用于测定人体中的γ-氨基丁酸。
该方法通过
将样品中的γ-氨基丁酸与特定的色谱柱相互作用，实现化合物的
分离和定量测定。
2. 气相色谱法（GC）：GC也是一种常用的分析方法，可以用
于测定人体中的γ-氨基丁酸。
该方法通过将样品中的γ-氨基丁酸
蒸发成气体，然后通过柱子进行分离，并利用检测器进行定量测定。
3. 酶联免疫吸附法（ELISA）：ELISA是一种常用的免疫分析
方法，可以用于测定人体中的γ-氨基丁酸。
该方法利用特异性抗
体与γ-氨基丁酸结合，形成免疫复合物，然后通过颜色反应或荧
光信号进行定量测定。
4. 质谱法（MS）：质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定人体中的γ-氨基丁酸。
该方法通过将样品中的γ-氨基丁酸离子化，然后利用质谱仪进行分析和定量测定。
需要注意的是，不同的测定方法在准确性、灵敏度、特异性和操作难度上可能有所差异。
因此，在选择合适的测定方法时，需要考虑具体的实验条件、设备和实验目的，以确保得到可靠的测定结果。
乳制品中γ-氨基丁酸含量的测定
乳制品中γ-氨基丁酸含量的测定
陈盛
【期刊名称】《食品界》
【年(卷),期】2024()1
【摘要】γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是中枢神经系统中非常重要的活性物质,具有多种生理功能。
γ-氨基丁酸是中枢神经系统的一种抑制性神经递质,在调节神经元兴奋度上起着重要作用,具有安神、降血压、改善肝肾功能、促进睡眠、缓解焦虑、抗抑郁等多种生理功效。
【总页数】3页(P102-104)
【作者】陈盛
【作者单位】上海必诺检测技术服务有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R28
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2.柱前衍生-高效液相色谱法检测测定沉香叶中γ-氨基丁酸的含量
3.高效液相色谱-串联质谱法测定稻米和米糠中γ-氨基丁酸含量及相关性分析
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5.HPLC法测定青稞中γ-氨基丁酸含量的研究
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酶标仪法测定γ-氨基丁酸
酶标仪法测定γ-氨基丁酸梁慧;薛正莲;周扬;汪冬冬;叶杨【摘要】通过诱变所获得的乳酸菌突变株较多,经96孔板发酵后用传统的分光光度计法测定γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量效率低、成本高.为快速、高效地测定GABA的含量,基于Berthelot反应,该实验采用酶标仪法测定GABA含量并对影响该方法的主要因素进行优化.确定了在测定GABA的适宜反应体系中0.2 mol/L pH10.0硼酸盐缓冲液为0.75 mL,6％的重蒸苯酚为2.5 mL,有效氯5.2％的NaClO溶液为2 mL时,酶标仪测定可获得较高的GABA含量,同时进行了精密度试验.最后,通过对诱变后的75株突变株经96孔板发酵后,分别使用分光光度计与酶标仪测定发酵液中GABA的含量并进行拟合,以验证该方法的可行性.得出2种方法的相关系数R=0.949 3,显示2种测定方法具有很好的一致性.该实验结果表明酶标仪法能简便、快速、准确地测定发酵液中GABA的含量,为后续高通量选育GABA乳酸菌奠定了基础.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2014(040)007【总页数】5页(P156-160)【关键词】γ-氨基丁酸;测定;分光光度计;酶标仪;优化【作者】梁慧;薛正莲;周扬;汪冬冬;叶杨【作者单位】安徽工程大学生物与化学工程学院,微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽芜湖,241000;安徽工程大学生物与化学工程学院,微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽芜湖,241000;安徽工程大学生物与化学工程学院,微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽芜湖,241000;安徽工程大学生物与化学工程学院,微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽芜湖,241000;安徽工程大学生物与化学工程学院,微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽芜湖,241000【正文语种】中文γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)是一种非蛋白质天然氨基酸，又称哌啶酸、氨酪酸，化学名4-氨基丁酸，是一种非蛋白质组成的天然氨基酸，在动物、植物和微生物中广泛存在［1-2］。
人(Human)γ氨基丁酸(GABA)ELISA检测试剂盒说明书
人（Human）γ氨基丁酸（GABA）ELISA检测试剂盒说明书人（Human）γ氨基丁酸（GABA）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被γ氨基丁酸（GABA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的γ氨基丁酸（GABA）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管无样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗体HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无停止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8μmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
γ-氨基丁酸企标及检测方法(PFI)
γ-氨基丁酸企标及检测方法1 γ-氨基丁酸企标要求除应符合卫生部公告2009年第12号的规定外，应符合重金属和微生物要求。
1.1 性状本品为白色至淡黄色粉末，具有本品特有的滋味及气味，无异味。
日本富尔玛株式会社研发部生产管理部附录A«γ-氨基丁酸含量的测定»１．原理高效液相色谱仪·氨基酸分析系统（HPLC-PC）是包括高性能输送液体装置（泵）的HPLC 系统，并在通常的分离部位安装柱后衍生检测装置。
２．器具及试验试剂【器具】・精密天平称・过滤器・高效液相色谱仪·氨基酸分析系统【试验试剂】・4-氨基丁酸（γ-氨基丁酸、GABA）・柠檬酸三钠・高氯酸・n-癸酸３．各种溶液的调制【柠檬酸缓冲液（pH2.2）的调制】①在9.8ｇ柠檬酸三钠中加入400ml蒸馏水溶解。
②在上述①中加入8ml高氯酸、50μL n-癸酸、得到500mL溶液，用高氯酸调制为pH2.20。
【4-氨基丁酸标准溶液的调制】ⅰ称量4-氨基丁酸(实验试剂)放入容量瓶中，用蒸馏水定溶。
ⅱ将上述ⅰ放入容量瓶中，用上述柠檬酸缓冲液定溶。
ⅲ用膜片过滤器过滤。
【样品溶液的调制】・用蒸馏水稀释样品。
然后，在最后的稀释阶段使用上述柠檬酸缓冲液。
４．试验方法Ⅰ)使上述3中调制的「4-氨基丁酸标准溶液」及「样品溶液」流入高效液相色谱仪·氨基酸分析系统。
并且，此时的条件如下。
【HPLC条件】・分析柱：Shim-pack Amino-Na（6.0×100mm）・捕氨柱：Shim-pack ISC-30/S0504 (4.0×50mm)・移动相：岛津Na型氨基酸移动相试剂盒(AA-MA,AA-MB,AA-MC)・反应液1（AA-RA）：岛津氨基酸分析试剂盒碳酸－硼酸缓冲液（pH10）・反应液2（AA-RB）：岛津氨基酸分析试剂盒OPA试验试剂・检验器：荧光检验Eｘ350nm、Em450nmⅡ)根据「4-氨基丁酸标准溶液」的保持时间和面积、用１点绝对校准曲线法算出样品4-氨基丁酸（GABA）的浓度。
γ-氨基丁酸测定
茶叶中γ- 氨基丁酸的提取测定方法研究进展黄怀生陈金华李志刚.福建茶叶，2006,3:7-9γ- 氨基丁酸(G ABA)是一种非蛋白质(non-protein）氨基酸，具极强的生理活性，广泛存在于自然界的动植物体内。
(}ABA对降低血压、改善肝脏功能、促进乙醇代谢具有良好的功效，可用于高血压等疾病的辅助治疗。
植物在缺氧、冷害、热刺激、机械刺激、干旱、盐胁迫等多种逆境条件下GABA 含量增加。
在逆境条件下GABA 积累的机制及其对植物体缓解逆境胁迫的作用引起人们的关注。
现代科学研究早已证明：伽玛氨基丁酸有如下作用一、健脑作用，由于伽玛氨基丁酸为谷氨酸的三羧循环提供了另外一种途径（GABASHUNT），所以能有效的改善脑血流通，增加氧的供给，促进脑的代谢功能，可用于治疗因脑中风、头部外伤后遗症、脑动脉硬化后遗症等产生的头痛、耳鸣、意识模糊等病症。
并对改善肝脏、肾脏的功能也有作用。
二、降压作用，伽玛氨基丁酸(GABA)能促进脑部血流，增加氧气供给，促进脑的代谢，另一方面作用于延髓的血管运动中枢，使血压下降，同时抑制抗利尿荷尔蒙激素的分泌，扩张血管，降低血压。
三、促进儿童生长激素分泌的作用，具有激活运动员的潜能功能，在神经系统的发育过程中具有营养作用，是一种神经营养因子。
四、治疗癫痫。
研究发现，当人体中缺乏伽玛氨基丁酸时，容易诱发癫痫。
五、改善脂质代谢，防止动脉硬化的功能，在临床上可以作为改善脑动脉硬化引起的各种症状的药物使用：改善高血脂症、防止肥胖。
六、醒酒功能。
七、防止皮肤老化、清除体臭的功能八、增强风味之功能，其具有类似于谷氨酸甜味，能够增强食品风味。
九、伽玛氨基丁酸还有更多的功能正在研究之中...张晖，徐永，姚惠源等[11]通过对点样量、展开体系、显色方法等研究，解决了利用纸层析法定量测定了γ- 氨基丁酸误差大、重现性差的问题，从而建立了以纸层析法定量测定γ- 氨基丁酸的方法。
表明，此法定量测定γ- 氨基丁酸简单易行，耗费低廉，可作为食品中γ- 氨基丁酸分析测定的手段。
氨基丁酸测定方法
γ-氨基丁酸含量的测定1. 原理：将γ-氨基丁酸水溶液样品用微量进样器点在层析纸上，垂直置于盛有展开剂的密闭槽中，因毛细管的作用原理，溶剂沿层析纸向上移动，并带动样品中各组分向上移动，由于各组分性质不同，移动的距离也不同，从而使样品中的各组分相互分离开来，经过加温后展开剂中的茚三酮与氨基酸作用呈显紫红色斑点,显示出各斑点的位置，剪取与标准相同 Rf值的紫红色斑点，用洗脱剂溶出，在512nm处测定样品与各浓度标准的光密度,制作标准曲线,或通过曲线方程求出样品中的γ-氨基丁酸含量。
2.仪器与试剂：2.1 仪器紫外分光光度计电热恒温干燥箱层析缸2.2 试剂γ-氨基丁酸标准品: （7mg/ml）层析纸：（新华1#）展开剂: 正丁醇: 冰醋酸: 水(6:1:3内含0.5%茚三酮)洗脱剂: 75%乙醇: CuSO4.5H2O = 38:2(V/W)3.操作步骤3.1 展开剂的处理：按上述比例混合转移至分液漏斗振摇后静置分层,弃去水层,取上层有机相放置2天后使用。
3.2 样品的测定：准确称取样品1.5克(精确到0.0001)加水溶解于50ml容量瓶中,超声波溶解10分钟,加水至刻度备用。
测定时精密吸取4μl与制作标准曲线时同时点样。
3.3 标准曲线的制作：精确吸取γ-氨基丁酸标准液2μl 4μl 6μl。
分别点样于层析纸距层析纸底部2厘米处，样品间距为2.5厘米，点样完毕后制成圆筒，先悬于层析缸中1小时，再放入层析缸中，以上行法在30℃恒温条件下展开至距层析纸上端2厘米处，取出风干后置烘箱加热显色，分别剪取各标准斑点以及与标准斑点相同 Rf值的样品斑点，用5ml洗脱剂振摇溶出，以相同面积的层析纸作为空白，在512nm处测定样品与各标准的光密度,制作标准曲线,通过计算求出样品中的γ-氨基丁酸含量。
4.结果的计算X = A×5/4×WX: 样品中的γ-氨基丁酸含量 %A: 曲线上求得的γ-氨基丁酸含量μg W：样品用量 g。
γ氨基丁酸鉴定方法
γ氨基丁酸鉴定方法
γ-氨基丁酸（GABA）是一种重要的神经递质，在中枢神经系统中具有多种生理功能。
因此，对GABA的鉴定方法进行研究具有重要的意义。
以下是γ-氨基丁酸鉴定方法的详细介绍：
一、概述
γ-氨基丁酸鉴定方法主要包括化学分析法、色谱法、质谱法等。
这些方法各有优缺点，需要根据具体需求和条件进行选择。
二、化学分析法
化学分析法是鉴定GABA的经典方法之一，主要包括滴定法、分光光度法等。
滴定法是通过滴定反应来确定GABA的含量，具有操作简便、结果准确等优点。
分光光度法则是通过测定GABA在特定波长下的吸光度来确定其含量，具有灵敏度高、操作简便等优点。
三、色谱法
色谱法是一种分离和鉴定复杂混合物中各组分的方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）等。
HPLC具有分离效果好、分辨率高等优点，常用于分离和鉴定GABA及其代谢物。
GC则主要用于分析气体样品，如呼吸气等，可直接检测样品中的GABA。
四、质谱法
质谱法是一种基于质荷比进行物质鉴定的方法，具有灵敏度高、分辨率高等优点。
通过质谱法可以鉴定GABA的分子量、分子式等信息，有助于深入了解其结构特征和性质。
五、其他方法
除了以上方法外，还有核磁共振法、红外光谱法等可用于鉴定GABA。
这些方法各有特点，可以根据具体需求进行选择。
比色法快速测定γ-氨基丁酸含量
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食品研究与开ｊ ｉ ２
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2.γ-氨基丁酸(GABA)的分布及测定方法
γ-氨基丁酸（GABA）的分布及测定方法周青生物化工2110805057一、分布：γ-氨基丁酸在动、植物体内都有分布，在动物体内，GABA主要分布于神经组织中，在哺乳动物的脑组织内分布最为集中，其含量是单胺类含量的1000倍，而在外围器官中含量很少。
在植物体内，GABA是细胞自由氨基酸库的重要组分，胞液中有几种构型，可形成类似脯氨酸的环状结构。
高等植物组织中GABA含量通常在0.3～32.5μmol／g之间，超过许多蛋白质类氨基酸的含量。
在一些与根瘤菌共生固氮植物的根瘤中，GABA以结合态形式存在，苜蓿中结合态形式的GABA高达干重的6.6%[1]。
除此之外，GABA还存在于以下植物中，见表一。
①薄层色谱：原理：用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上，对具有吸收或能产生荧光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以检测其浓度。
方法：展开剂是正丁醇：醋酸：水=4：1：1。
分别吸取5μl γ-氨基丁酸标准品溶液和样品洗脱液，点于自制的硅胶薄层板上，以正丁醇：醋酸：水体积比为4：1：1为展开剂展开，取出晾干，用体积分数0.2％茚三酮乙醇溶液显色，105℃烘数分钟，直至获最大斑点，用Camag TLC scanner 3 扫描仪扫描。
扫描条件为：反射式双波长锯齿扫描,扫描波长λS=515nm,参比波长λR=680nm，狭缝50×0.45 mm。
黄怀生用最小二乘法对标准溶液点样量和色谱峰面积值进行回归分析，其相关系数可达到0.99以上[14]。
黄美娥[15]用此方法测得得蕨菜叶、茎中γ-氨基丁酸的质量分数分别为0.319％、0．141％。
采用双波长扫描法[16]，可以避免分离度不佳的其他氨基酸的相互干扰；二、双波长扫描可以排除背景干扰使基线平直；三、能提高灵敏度。
②纸电泳法：原理：纸上电泳法，以纸为支持剂，使带电的γ-氨基丁酸于纸上在外电场作用下定向移动，从而达到分离目的。
方法：取上清液用于点样于滤纸上，以标准GABA溶液做对照，在电压300V、室温条件下电泳60min，电泳缓冲液为吡啶-冰醋酸混合溶液[吡啶：冰醋酸：蒸馏水(体积比)=2：2：121，pH4.7]。
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操作要点: 选取籽粒饱满的稻米，去皮后用Pearlest 精米机处理40s 成为精米。
为了抑制发芽后的发酵味，用1% 的次氯酸钠水溶液洗1min，用灭菌的去离子水反复冲洗 3 遍。
将处理好的精米用纱布包好，恒温浸泡，转入培养皿中发芽，保持培养皿湿润，每3h 上下翻动一次。
发芽结束后将培养皿放入55℃烘箱终止活性，干燥一定时间，取出粉碎。
1.2.2
GABA 含量测定
样品准备:将粉碎后的样品过60 目筛，称取2g，加入5% 三氯乙酸水溶液5mL，
30℃振荡提取2h，离心(转速10000r/min)10min，取上清液待测
色谱条件:单泵，流速为0.9mL/min;色谱柱为Venusil MP－C18(4.6 ×250mm)，柱温30℃;流动相为1.6g NaAc ·3H2O 溶于600mL 水中，pH7.2，甲醇200mL，乙氰200mL;检测波长338nm。
衍生化:吸取硼酸缓冲液(0.4mol/L，pH10.4)
1000μL，样品200μL，OPA 衍生试剂( OPA 80mg，β－巯基乙醇80μL，乙腈10mL)200μL，混合均匀，暗室中室温反应5min 后进样20μL。
GABA 标准曲线的绘制:用配制好的250mg/L
的标准液分别稀释50、40、30、20、10、6、5 倍，柱前衍生，吸取20μL 进样，重复三次，以GABA 的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
衍生试剂（邻苯二甲醛OPA）的配制
０．５Ｍ硼酸钾溶液：称取３．１０００ｇ硼酸，２．６０００ｇ氢氧化钾于烧杯中，用双蒸水溶解，定容于１００ｍＬ容量瓶中，摇匀，用硝酸调节ｐＨ到９．５
邻苯二甲醛（ＯＰＡ）溶液：称取０．３０００ｇＯＰＡ，溶解于５ｍＬ甲醇，再溶解于１００ｍＬ０．５Ｍ硼酸钾溶液中，然后加入０．２５ｍＬ２－巯基乙醇［１９］，混匀，避光４℃冰箱中保存（最多可保留１周，最好现配现用）
γ- 氨基丁酸的分离提取
米糠中加入3～5 倍体积0.01mol/L 柠檬酸缓冲液(pH6.0)，37℃水浴电动搅拌抽提4h，减压抽滤，以4000r/min 离心30min，取出上清加入10% 磺基水杨酸离心弃沉淀，冷冻干燥后为黄粽色固体，将其溶解于蒸馏水中、上SephadexG-25层析柱(1.5×74cm)分离，蒸馏水洗脱，收集与茚三酮溶液反应呈阳性的洗脱液，浓缩，G A B A定性检查，所得样品调节pH 值约为4，上磺酸型阳离子交换柱(2.0 ×30cm)，冰乙酸一吡啶缓冲液进行pH线性梯度洗脱，收集含G A B A 洗脱液，浓缩，硅胶H 薄板层析鉴定。
1.2.2
γ- 氨基丁酸含量的测定
比色法按Tsushida 中的方法[3]略加以改进；取样液300μl，加0.2mol/L pH10.0 硼酸盐缓冲液200μl，6% 重蒸酚100μl，混匀后再加入0.8ml 5% NaClO 溶液，振荡。
于沸水浴中加热10min 后置冰浴5min，待溶液出现兰绿色后，加入2.0ml 60% 乙醇溶液，于波长645nm 处比色，并以已知浓度标准G A B A 溶液绘制标准曲线
仪器测定方法；用日定-838-50 型氨基酸自动分析仪测定。
硅胶H 薄层层析，按文献[ 4 ]方法进行[4]
朱俭,曹凯鸣,周润崎,等.生物化学实验[M].上海:上海科技
出版社,1981.43-45.
从米糠中提取γ- 氨基丁酸条件实验
米糠分别用0.01mo/L pH5.0、pH6.0 柠檬酸缓冲液、
0.01mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液及蒸馏水抽提，测定比较在不同温度(25、37、50、60℃)条件下，不同搅拌抽提时
间(0.5、2、4、6h)，米糠提取液中γ- 氨基丁酸的含量
及水提取液中氨基酸的组成及含量分析。