MM的实验室检测概述
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仪器： Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪 试剂：免疫固定电泳试剂 灵敏度：125mg/L
ELP 泳道: 固定液 G 泳道： 抗 IgG 重链抗血清
A 泳道： 抗 IgA 重链抗血清
M 泳道： 抗 IgM 重链抗血清 K 泳道： 抗 轻链抗血清
L 泳道：
抗 轻链抗血清
正常血清
血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （1）
IgA-MM IgD-MM IgM-MM POEMS综合征
50-60%
40%-50% 80% 10%－30% 阴性
MGUS
可有
本周氏蛋白
• 1844年Henry Bence Jones 在一个骨髓瘤患者尿中发现 • 一种具有特殊凝溶性质的蛋白
– 40－60℃发生沉淀，加热煮沸时溶解，冷却后又沉淀
– 轻链二聚体
*感染引起的
免疫缺陷
血清蛋白免疫固定电泳特殊病例
免疫固定结果显示为单独的 成分
轻链病
免疫固定电泳对骨髓瘤进行分型，敏感性是 SPEP的10倍，不能定量
尿蛋白检测
• 尿常规：蛋白尿、血尿、管型尿 • 尿蛋白：尿液中出现的自由轻链即本-周蛋白
各型MM本周蛋白阳性率
分型 尿本周蛋白阳性率
IgG-MM
IF
在区 发现疑似M蛋白
确认IgM 型M蛋白
血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （2）
IF
在区发现疑似双克隆M蛋白
确认IgM + IgM 型 双克隆M蛋白
血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （3）
单克隆M蛋白出现在Alpha2-Beta区带
IgG Lambda型M蛋白
血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （4）
多发性骨髓瘤的实验室检测
北京朝阳医院西区 检验科 2016.04.14
多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)
• MM是一种恶性浆细胞病，其肿瘤细胞起源于骨髓 中的浆细胞，而浆细胞是B淋巴细胞发育到最终功 能阶段的细胞。 • 发病率占所有肿瘤的1~2% ，血液肿瘤的10% • 常见于中、老年人(50-70岁居多,40岁以下少见)。
• 大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白
本周氏蛋白
骨髓瘤 巨球蛋白血症 CLL慢性白血病 MGUS .....
起因
浆细胞增生症
血液中出现游离轻链 尿液中出现
肾小管损伤 淀粉样病变 结果 影响
轻链沉淀病
正常免疫球蛋白的合成
一条重链 浆细胞
组合
一分子免疫球蛋白 一条轻链
过剩轻链
异常免疫球蛋白的合成
一种重链 恶变的浆 细胞 一种轻链
α 1抗胰蛋 触珠蛋 白酶 白 α 1酸性糖 铜蓝蛋 蛋白 白
α 1脂蛋 抗糜蛋白 白 酶
α 2巨球 IgA、IgM、IgD、纤 蛋白 维蛋白原、β 1脂蛋白、 血凝素
琼脂糖凝胶电泳原理
-------+-0 ----
阴极
Biblioteka Baidu
+ 阳极
蛋白加样位置
电场作用力
正常的电泳图谱
出现单克隆免疫球蛋白的电泳图谱
临床表现
骨痛、病理性骨折：最常见 肾功能受损、肾衰 贫血 血钙水平异常 免疫功能失调，感染 心、脑脏器微循环障碍，心脑血管病变
多发性骨髓瘤的现状
就诊晚
误诊率 高
2/3 确诊时 已达中晚期 1/3非血液科 首诊 骨折 预后差 增加负担 感染发生率高 肾脏病变不可逆
重视实验诊断 早发现 早治疗
（monoclonal proteins, M蛋白）
血清蛋白电泳（SPEP）：M蛋白形成异常浓集带， 位于γ 区内，或β 、α 2 区内可见一窄底的高峰 。由于尿液可以浓缩许多倍，因此检查游离轻链时 尿蛋白电泳（UPEP）比SPEP灵敏。80%的MM患者可 发现M蛋白
Alb 白蛋白 前白蛋 白 α1 α2 β 转铁蛋白 C3a、 C3b γ IgG CRP
法通过免疫比浊法分别测定出血清中的游离轻链κ 和λ 的
比率。 2.κ /λ 正常范围为0.26-1.65，比值低于0.26或高于1.65 都说明κ 和λ 轻链量的异常。提示MM克隆性增殖。 3.用于诊断并监测95%以上的各种类型的MM，淀粉样变、寡
分泌型、不分泌型或轻链型MM。是严格CR的标准之一。
出现在a2区域的单克隆免疫球蛋白
炎症症状 肾病综合征 出现游离轻链
出现在 b 区域的单克隆免疫球蛋白
游离轻链病
检测结果阐述
电泳的结果是以%的形式给出的, 但是对于临床诊断, 结果 必须要以浓度的形式给出g/L M蛋白的诊断标准 IgG≥35g/L IgA ≥ 20g/L IgM ≥ 15g/L
•
尿蛋白检测结果异常(检测到单克隆游离轻链),查看患者是 否做过血清蛋白电泳,如果有必要需要进行血清的免疫固定 电泳
免疫固定电泳
一种电泳加沉淀反应技术。
可用于各种蛋白质的鉴定。
将血清直接加于电泳后蛋白质区带表面， 抗原与对应抗体直接发生沉淀反应，形成的
复合物嵌于固相支持物中。
血清免疫固定电泳
骨髓检查
骨穿：骨髓原、幼浆细胞（骨髓瘤细胞）明显增多。骨髓瘤
细胞在骨髓内呈弥漫性分布，或灶性、斑片状分布。 需要多次多部位穿刺，以免漏诊 数量：国内标准为浆细胞>15%,并有异常浆细胞或组织活检证 实。国外最低标准为异常浆细胞≥10%或组织活检证实
形态：细胞浆呈灰蓝色，可见多核（2-3个核），核仁1-4
死亡率 ↑↑
MM的实验室诊断
• • • • • • 常规检查 生化检查 骨髓检查 M蛋白鉴定 分型诊断 免疫分型 • • • • • 浆细胞标记指数 染色体测定 基因异常检测 IL-6检测 影像学检查
常规检查 血液生化 检查
血常规：Wbc 减少、贫血、Plt 减低 血沉： 加快 红细胞呈缗钱样排列 血清钙磷和碱性磷酸酶：增高 血清β2微球蛋白：增高 肾功能：BUN、Cr升高 血液流变学检查：血清粘滞度增加 CRP：升高 高尿酸血症 血清总蛋白、白蛋白 LDH增高
个，初浆区消失，胞浆内可有少数嗜苯胺蓝颗粒，偶 见嗜酸性球状包涵体或大小不等的空泡。核染色质疏 松，有时凝集成大块，但不呈车轮状排列
多发性骨髓瘤血象
多发性骨髓瘤骨髓象
（浆细胞样骨髓瘤细胞）
多发性骨髓瘤骨髓象
血M蛋白鉴定
• M蛋白是单克隆浆细胞恶性增殖产生的均一蛋白。
• MM常为单株浆细胞的前体细胞恶性增生，形成庞大的单克 隆浆细胞群，此种浆细胞可分泌大量结构均一的免疫球蛋白 或肽链亚单位，临床上称之为单克隆免疫球蛋白
蛋白浓度出现异常时,必须 要进行其它的补充检测 免疫固定电泳
IgD ＞2.0g/L
IgE ＞2.0g/L 本-周蛋白阳性＞1.0g/24h
为什么要做免疫固定电泳
M蛋白？ 什么类型？
什么情况下必须要进行免疫固定电泳检测? •
• 在血清蛋白电泳时,检测到异常条带的出现,或者是某一个条 带的蛋白出现异常增加 电泳结果显示为低免疫球蛋白血症, 或者免疫球蛋白定量 结果显示可能是游离轻链病
* 纤维蛋白原，严格避免血浆标本
血清蛋白免疫固定电泳应用 特殊情况
寡克隆免疫球蛋白电泳图谱
多条(>2)窄的条带，通常比较微弱。
由于个别免疫球蛋白克隆增生。
IF
Ig G型寡克隆电泳图谱
寡克隆条带在以下情况时常会出现 :
治疗引起的免 疫缺陷
*自体免疫疾病
• 骨髓或者器官移植
• 风湿性关节炎 • 干燥综合症 • 红斑狼疮 • 病毒: HIV,病毒性肝炎, EBV, CMV … • 细菌和寄生虫感染: 脑膜炎, 脑炎…
组合
单克隆免疫球蛋白
大量过剩轻链
肾毒性、异常沉积
本周氏蛋白阳性患者
• 多表现为肾脏损害
• 极易误诊为慢性肾炎
• 轻链有3种形式出现在血清或尿中
– 正常的轻链过剩
• 慢性肝病、红斑狼疮等多克隆增殖性疾病
– 伴随轻链 – 单一轻链
参考泳道 重链
复合轻链
游离轻链
血清游离轻链（sFLC）的检测
1.是一种检测体内是否存在克隆性浆细胞的高度敏感的方
ELP 泳道: 固定液 G 泳道： 抗 IgG 重链抗血清
A 泳道： 抗 IgA 重链抗血清
M 泳道： 抗 IgM 重链抗血清 K 泳道： 抗 轻链抗血清
L 泳道：
抗 轻链抗血清
正常血清
血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （1）
IgA-MM IgD-MM IgM-MM POEMS综合征
50-60%
40%-50% 80% 10%－30% 阴性
MGUS
可有
本周氏蛋白
• 1844年Henry Bence Jones 在一个骨髓瘤患者尿中发现 • 一种具有特殊凝溶性质的蛋白
– 40－60℃发生沉淀，加热煮沸时溶解，冷却后又沉淀
– 轻链二聚体
*感染引起的
免疫缺陷
血清蛋白免疫固定电泳特殊病例
免疫固定结果显示为单独的 成分
轻链病
免疫固定电泳对骨髓瘤进行分型，敏感性是 SPEP的10倍，不能定量
尿蛋白检测
• 尿常规：蛋白尿、血尿、管型尿 • 尿蛋白：尿液中出现的自由轻链即本-周蛋白
各型MM本周蛋白阳性率
分型 尿本周蛋白阳性率
IgG-MM
IF
在区 发现疑似M蛋白
确认IgM 型M蛋白
血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （2）
IF
在区发现疑似双克隆M蛋白
确认IgM + IgM 型 双克隆M蛋白
血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （3）
单克隆M蛋白出现在Alpha2-Beta区带
IgG Lambda型M蛋白
血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （4）
多发性骨髓瘤的实验室检测
北京朝阳医院西区 检验科 2016.04.14
多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)
• MM是一种恶性浆细胞病，其肿瘤细胞起源于骨髓 中的浆细胞，而浆细胞是B淋巴细胞发育到最终功 能阶段的细胞。 • 发病率占所有肿瘤的1~2% ，血液肿瘤的10% • 常见于中、老年人(50-70岁居多,40岁以下少见)。
• 大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白
本周氏蛋白
骨髓瘤 巨球蛋白血症 CLL慢性白血病 MGUS .....
起因
浆细胞增生症
血液中出现游离轻链 尿液中出现
肾小管损伤 淀粉样病变 结果 影响
轻链沉淀病
正常免疫球蛋白的合成
一条重链 浆细胞
组合
一分子免疫球蛋白 一条轻链
过剩轻链
异常免疫球蛋白的合成
一种重链 恶变的浆 细胞 一种轻链
α 1抗胰蛋 触珠蛋 白酶 白 α 1酸性糖 铜蓝蛋 蛋白 白
α 1脂蛋 抗糜蛋白 白 酶
α 2巨球 IgA、IgM、IgD、纤 蛋白 维蛋白原、β 1脂蛋白、 血凝素
琼脂糖凝胶电泳原理
-------+-0 ----
阴极
Biblioteka Baidu
+ 阳极
蛋白加样位置
电场作用力
正常的电泳图谱
出现单克隆免疫球蛋白的电泳图谱
临床表现
骨痛、病理性骨折：最常见 肾功能受损、肾衰 贫血 血钙水平异常 免疫功能失调，感染 心、脑脏器微循环障碍，心脑血管病变
多发性骨髓瘤的现状
就诊晚
误诊率 高
2/3 确诊时 已达中晚期 1/3非血液科 首诊 骨折 预后差 增加负担 感染发生率高 肾脏病变不可逆
重视实验诊断 早发现 早治疗
（monoclonal proteins, M蛋白）
血清蛋白电泳（SPEP）：M蛋白形成异常浓集带， 位于γ 区内，或β 、α 2 区内可见一窄底的高峰 。由于尿液可以浓缩许多倍，因此检查游离轻链时 尿蛋白电泳（UPEP）比SPEP灵敏。80%的MM患者可 发现M蛋白
Alb 白蛋白 前白蛋 白 α1 α2 β 转铁蛋白 C3a、 C3b γ IgG CRP
法通过免疫比浊法分别测定出血清中的游离轻链κ 和λ 的
比率。 2.κ /λ 正常范围为0.26-1.65，比值低于0.26或高于1.65 都说明κ 和λ 轻链量的异常。提示MM克隆性增殖。 3.用于诊断并监测95%以上的各种类型的MM，淀粉样变、寡
分泌型、不分泌型或轻链型MM。是严格CR的标准之一。
出现在a2区域的单克隆免疫球蛋白
炎症症状 肾病综合征 出现游离轻链
出现在 b 区域的单克隆免疫球蛋白
游离轻链病
检测结果阐述
电泳的结果是以%的形式给出的, 但是对于临床诊断, 结果 必须要以浓度的形式给出g/L M蛋白的诊断标准 IgG≥35g/L IgA ≥ 20g/L IgM ≥ 15g/L
•
尿蛋白检测结果异常(检测到单克隆游离轻链),查看患者是 否做过血清蛋白电泳,如果有必要需要进行血清的免疫固定 电泳
免疫固定电泳
一种电泳加沉淀反应技术。
可用于各种蛋白质的鉴定。
将血清直接加于电泳后蛋白质区带表面， 抗原与对应抗体直接发生沉淀反应，形成的
复合物嵌于固相支持物中。
血清免疫固定电泳
骨髓检查
骨穿：骨髓原、幼浆细胞（骨髓瘤细胞）明显增多。骨髓瘤
细胞在骨髓内呈弥漫性分布，或灶性、斑片状分布。 需要多次多部位穿刺，以免漏诊 数量：国内标准为浆细胞>15%,并有异常浆细胞或组织活检证 实。国外最低标准为异常浆细胞≥10%或组织活检证实
形态：细胞浆呈灰蓝色，可见多核（2-3个核），核仁1-4
死亡率 ↑↑
MM的实验室诊断
• • • • • • 常规检查 生化检查 骨髓检查 M蛋白鉴定 分型诊断 免疫分型 • • • • • 浆细胞标记指数 染色体测定 基因异常检测 IL-6检测 影像学检查
常规检查 血液生化 检查
血常规：Wbc 减少、贫血、Plt 减低 血沉： 加快 红细胞呈缗钱样排列 血清钙磷和碱性磷酸酶：增高 血清β2微球蛋白：增高 肾功能：BUN、Cr升高 血液流变学检查：血清粘滞度增加 CRP：升高 高尿酸血症 血清总蛋白、白蛋白 LDH增高
个，初浆区消失，胞浆内可有少数嗜苯胺蓝颗粒，偶 见嗜酸性球状包涵体或大小不等的空泡。核染色质疏 松，有时凝集成大块，但不呈车轮状排列
多发性骨髓瘤血象
多发性骨髓瘤骨髓象
（浆细胞样骨髓瘤细胞）
多发性骨髓瘤骨髓象
血M蛋白鉴定
• M蛋白是单克隆浆细胞恶性增殖产生的均一蛋白。
• MM常为单株浆细胞的前体细胞恶性增生，形成庞大的单克 隆浆细胞群，此种浆细胞可分泌大量结构均一的免疫球蛋白 或肽链亚单位，临床上称之为单克隆免疫球蛋白
蛋白浓度出现异常时,必须 要进行其它的补充检测 免疫固定电泳
IgD ＞2.0g/L
IgE ＞2.0g/L 本-周蛋白阳性＞1.0g/24h
为什么要做免疫固定电泳
M蛋白？ 什么类型？
什么情况下必须要进行免疫固定电泳检测? •
• 在血清蛋白电泳时,检测到异常条带的出现,或者是某一个条 带的蛋白出现异常增加 电泳结果显示为低免疫球蛋白血症, 或者免疫球蛋白定量 结果显示可能是游离轻链病
* 纤维蛋白原，严格避免血浆标本
血清蛋白免疫固定电泳应用 特殊情况
寡克隆免疫球蛋白电泳图谱
多条(>2)窄的条带，通常比较微弱。
由于个别免疫球蛋白克隆增生。
IF
Ig G型寡克隆电泳图谱
寡克隆条带在以下情况时常会出现 :
治疗引起的免 疫缺陷
*自体免疫疾病
• 骨髓或者器官移植
• 风湿性关节炎 • 干燥综合症 • 红斑狼疮 • 病毒: HIV,病毒性肝炎, EBV, CMV … • 细菌和寄生虫感染: 脑膜炎, 脑炎…
组合
单克隆免疫球蛋白
大量过剩轻链
肾毒性、异常沉积
本周氏蛋白阳性患者
• 多表现为肾脏损害
• 极易误诊为慢性肾炎
• 轻链有3种形式出现在血清或尿中
– 正常的轻链过剩
• 慢性肝病、红斑狼疮等多克隆增殖性疾病
– 伴随轻链 – 单一轻链
参考泳道 重链
复合轻链
游离轻链
血清游离轻链（sFLC）的检测
1.是一种检测体内是否存在克隆性浆细胞的高度敏感的方