急性髓系白血病AML-MRD的监测(流式细胞术)

流式细胞仪检测儿童急性髓系白血病微小残留病的研究进展

ｄｅｒ
Ｖｅｌｄｅｎ等¨６。应用ＦＣＭ对９４例ＡＭＬ儿童进行微小
残留病连续监测。结果表明，初次诱导化疗后的微小残留病水平可以预测临床长期结果：微小残留病阴性组（微小残留病＜０．１％），微小残留病弱阳性组（０．１％≤微小残留病＜０．５％）和微小残留病强阳性组（微小残留病≥０．５％）的３年无复发生存率分别为（８５±８）％，（６４±１０）％和（１４± ９）％（Ｐ＜０．００１）；相应的总体生存率分别为（９５±５）％，（７０±１０）％和（４０±１３）％（Ｐ＜０．００１）。在包括年龄、细胞核型、ＦＭＳ样酪氨酸激酶３（ＦＬＴ３）基因内部串联重复（ＩＴＤ）突变和初诊时白细胞计数在内的多因素分析表明，初次化疗结束后的微小残留病水平是独立的预后因素。本研究组采用四色ＦＣＭ的方法，对５５例初诊时具有异常免疫表型的非Ｍ３型ＡＭＬ患儿的骨髓标本进行微小残留病监测旧…。根据初次诱导（柔红霉素＋阿糖胞苷＋依托泊苷，ＤＡＥ）化疗后的微小残留病水平，可将患者分成低风险组（微小残留病＜０．２５％）和高风险组（微小残留病≥ ０．２５％），其５年累积复发率分别为２１．２％和６６．８％（Ｐ＝０．００２）。在多因素分析中，初次诱导化疗后的微小残留病水平是其他所有研究参数（包括年龄、细胞遗传学状态、初诊白
主堡』Ｌ型苤查！！！ｊ生ｊ旦笠ｉ！鲞箜！塑￡地！』里！ｉ堕！：丛！堕！垫！！：∑！！：ｉ！：塑垒！
・２３１・
．综述．流式细胞仪检测儿来自急性髓系白血病微小残留病的研究进展
冯建华徐晓军汤永民
ｌｅｕｋｅｍｉａ，ＡＭＬ）发病率ＦＣＭ检测微小残留病的优点是能够准确定量残留白血病细胞。另外，ＦＣＭ可以区分存活和凋亡细胞，并有助于了解标本中正常造血细胞状态的概况。ＦＣＭ检测微小残留病存在的一个问题是ＬＡＩＰ表达模式的不稳定性。研究表明，相当高比例的ＡＭＬ患者的抗原表达模式会在疾病过程中发生转变，即“抗原漂移”。２０“ｏ。对于医疗资源以及技术有限的国家或地区，可以采用三色或四色ＦＣＭ集中于治疗早期（例如诱导治疗中期；初次诱导后）检测微小残留病，从而降低检测成本，同时可以避免因治疗后期（例如巩固治疗后）抗原漂移或再生骨髓中正常幼稚细胞干扰而造成假阴性或假阳性结果。然而上述操作却不利于长程随访监测。此外，治疗早期的微小残留病水平比较适合反映“白血病细胞清除速度”，其代表白血病细胞对化疗的敏感程度，而目前尚无公开资料支持“快速的白血病细胞清除”与获得微小残留病阴性结果之间存在联系嵋”…。因此用于微小残留病检测的抗体组合不应局限于初诊时检测到的一种免疫表型，同时也应该包括所有检测时间点的多种抗体组合Ⅲ‘２“。理论上，所采用的每组免疫学标志物即抗体数目越多，则识别白血病细胞的特异性就越高。有研究表明，采用６色ＦＣＭ技术分析不仅可以提高检测敏感度，同时也可因ＬＡＩＰ组合的优化而改善白细胞克隆定性信息的质量‘２“。采用每组８色的ＬＡＩＰ表型，则识别白血病细胞的特异性更高，目前已经开始采用８色ＦＣＭ进行微小残留病的监测。然而，若每组表型使用的标记数过多，则ＦＣＭ的检测成本将超过ＰＣＲ，因此已有研究使用标准或特异性的个体化抗体组合用于检测微小残留病。此外，ＦＣＭ检测微小残留病的质量具有一定程度的操作者依赖性，需要娴熟的流式细胞术分析专业技术予以保证。为得到可靠结果，检测过程、试剂、分析必须标准化，包括开发流式细胞数据自动分析软件’２５，同时需要各个实验室之间的对照研究，特别是多中心研究。二、ＦＣＭ检测微小残留病的临床应用１．临床预后和治疗指导意义：近年来的研究证实，骨髓中白血病细胞的动态消减和微小残留病水平可用于判断预后、评估复发风险。Ｓｉｅｖｅｒｓ等¨４Ｊ的回顾性研究采用标准三

MRD检测与AML预后的相关性研究

MRD检测与AML预后的相关性研究MRD检测与AML预后的相关性研究近年来，随着分子生物学和基因测序技术的快速发展，分子标志物成为白血病预后评估的重要依据之一。

最小残留病(Minimal Residual Disease, MRD) 检测是一种能够确定白血病患者骨髓中残余白血病细胞数量的技术，它在急性髓系白血病（Acute Myeloid Leukemia, AML）的治疗与预后评估中具有重要意义。

AML是一种常见的恶性肿瘤，通常由骨髓干细胞的增殖异常引起。

治疗包括化疗、移植以及靶向药物等，根据患者的基因异常情况和预后风险的评估，在治疗过程中对AML患者进行MRD检测具有重要的指导意义。

MRD检测通常通过骨髓样本的流式细胞术或者聚合酶链反应（PCR）来进行。

在AML患者的诊断和治疗过程中，MRD检测可用于评估治疗的疗效，判断是否需要调整治疗方案，并预测患者的预后。

研究表明，MRD的检测结果与AML患者的预后密切相关。

具体来说，MRD阴性（即未检测到MRD）的AML患者相较于MRD阳性（即检测到MRD）的患者，其生存率明显提高。

这说明在AML的治疗过程中，MRD阳性可能预示着患者仍存在残留病变，而MRD阴性可能意味着患者病情得到较好控制，预后较好。

此外，MRD检测还用于指导AML患者的化疗方案选择和监测治疗的效果。

通过定期进行MRD检测，可以及早发现患者是否存在残留病变，及时调整治疗方案。

这种个体化的治疗策略可以提高治疗效果，并减少治疗相关的不良反应。

虽然MRD检测在AML预后的评估中具有很大潜力，但目前仍存在一些挑战。

首先，MRD的检测方法需要高度灵敏，能够检测到极低浓度的残余病变。

其次，MRD检测没有统一的标准，不同实验室和研究机构采用的方法与指标可能不同，这给结果的可比性带来困扰。

此外，由于AML的异质性，MRD检测方法和指标还需要进一步优化。

综上所述，MRD检测在AML预后评估中起着重要的作用。

成人急性白血病自体造血干细胞移植中国专家共识

成人急性白血病自体造血干细胞移植中国专家共识（2024年版）自体造血干细胞移植是成人急性白血病缓解后的治疗方法之一。

与异基因造血干细胞移植相比，auto-HSCT具有不受供者限制、不发生移植物抗宿主病、移植相关死亡率低等优点；与多疗程的巩固化疗相比，auto-HSCT能显著缩短治疗时间、减轻患者经济负担，提升患者生活质量。

但目前，我国成人AL患者接受auto-HSCT数量较少。

为提高临床医师对auto-HSCT在成人AL治疗中作用和地位的认识、提高auto-HSCT临床疗效，中华医学会血液学分会造血干细胞应用学组制定并发布本共识。

一、 auto-HSCT治疗成人AL的适应证auto-HSCT适用与否取决于患者对治疗的耐受性、疾病危险度分层、移植前疾病状态及有无合适供者等因素。

适合移植的AL患者需全程监测微小残留病/可检测残留病（MRD）状态，MRD持续阴性（连续检测至少两次以上）患者方可行auto-HSCT。

MRD检测手段主要包括多参数流式细胞术（MFC）、实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）技术、数字PCR（dd-PCR）及二代测序（NGS）技术等高通量检测技术，其中dd-PCR和NGS尚处于临床研究阶段，未被常规用于MRD评估。

高龄（≥65岁）并非auto-HSCT的绝对禁忌，除年龄外，还应考虑患者体能状况及心、肺、肝、肾等脏器功能，建议结合造血干细胞移植合并症指数（HCT-CI）等特定风险评估模型进行综合评估。

（一）急性髓系白血病（AML）auto-HSCT的成人AML适应证包括：①预后良好/中等组，1个疗程诱导化疗获得第1次完全缓解（CR1）且MRD持续阴性患者；②预后良好/中等组，2个疗程化疗获得CR1且MRD持续阴性患者；③首次复发后达第2次CR （CR2）且PML-RARα融合基因阴性的急性早幼粒细胞白血病（APL）患者。

（二）急性淋巴细胞白血病（ALL）auto-HSCT的ALL适应证包括：①预后良好组费城染色体阴性（Ph-）获得CR1、MRD持续阴性且充分巩固强化治疗后的患者；②预后不良组Ph-、MRD持续阴性且无合适供者或不适合allo-HSCT的CR1患者；③治疗3个月内标准化疗后实现完全分子学缓解并持续至移植的费城染色体阳性（Ph+）患者。

白血病微小残留检测及其质量控制(流式细胞术)

1. 快速、简便
2. 流式细胞术是直接进行定量，更为精确；而PCR是根据产物的量进行推算。
3. 流式细胞术检测时可以区别活细胞和经化疗将要死亡的细胞以及死亡细胞的碎片（而这些死亡的细胞以及细胞碎片在PCR检测中都可能形成阳性信号）。
上海市临床检验中心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Fluorescent Standard
Obtain Results
Troubleshoot Maintenance
Color Compensation
Generate Report
FAIL
Process/ Method Control
PASS
Test Reimbursement
上海市临床检验中心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Elaine Coustan-Smith, etal. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2000, 96(8):2691-2696
流式细胞术检测白血病MRD原理
利用抗原表达的差异，以直观的方式区分白血病细胞和正常的骨髓细胞（正常生理状态下和骨髓重建期）
跨系表达的抗原质的差异时相混乱的抗原与染色体异常相关的抗原抗原表达量异常高量的差异抗原表达量异常低
上海市临床检验中心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
差异

成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)中国诊疗指南(2023年版)

▪ 完全缓解伴不完全血液学恢复（CRi）：骨髓原始细胞小于5%，外周血原始细胞及髓外病灶消失，中性粒细胞<1×109/L，或PLT<100×109/L。如果同时使用CRh和CRi，CRi只包括不符合CRh的患者。
▪ 骨髓无白血病状态（MLFS）：骨髓原始细胞小于5%，外周血原始细胞及髓外病灶消失，对血象恢复没有要求。
AML（非急性早幼粒细胞白血病）患者的治疗
4．联合靶向药物的治疗方案： ▪ 研究显示在化疗方案的基础上联合靶向药物可以提高缓解率及
MRD转阴比例，因此，可以酌情考虑在化疗基础上联合靶向药物，中高危组联合维奈克拉（1~2周）； ▪ 高危组接受标准强化诱导治疗缓解率低于低中危组，亦可采用维奈克拉联合去甲基化药物诱导治疗；FLT3突变患者可以联合FLT3 抑制剂；IDH突变患者可以联合IDH抑制剂（证据等级2b）。
AML（非急性早幼粒细胞白血病）患者的治疗
（4）其他巩固治疗方案： ①中大剂量Ara-C（1~2 g·m-2·12 h-1，6个剂量）为基础的方案：与蒽环/蒽醌类等药物联合应用，2~3个疗程后行标准剂量化疗，总的缓解后化疗周期≥4个疗程（证据等级1b）。 ②标准剂量化疗（Ara-C联合蒽环/蒽醌类、HHT、鬼臼类等），总的缓解后化疗周期≥6个疗程或标准剂量化疗巩固3~4个疗程后行（或不行）自体造血干细胞移植（证据等级2b）。
▪ 初诊不能耐受强烈治疗的患者经过低强度诱导治疗达完全缓解后，如果可以耐受强化疗，应按照可以耐受强化疗患者的治疗方案选择。
AML（非急性早幼粒细胞白血病）患者的治疗
AML（非急性早幼粒细胞诱导治疗 1．常规的诱导治疗方案：标准剂量阿糖胞苷（Ara-C）100~200 mg·m2·d-1×7 d联合去甲氧柔红霉素（IDA）12 mg·m-2·d-1×3 d或柔红霉素（DNR）60~90 mg·m-2·d-1×3 d（证据等级1a）。 2．含中剂量Ara-C的诱导治疗方案：高三尖杉酯碱（HHT）2 mg·m2·d-1×7 d，DNR 40 mg·m-2·d-1×3 d，Ara-C前4 d为100 mg·m-2·d-1，第5、6、7天为1 g·m-2·12 h-1（证据等级1a）。

四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(完整版)

四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版）白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。

白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。

白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。

采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。

准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。

鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。

已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。

目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。

鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。

一、四色方案的基本要求理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。

流式细胞技术在急性髓系白血病微小残留病检测中的应用

的治疗干预，对患者缓解后的治疗有着更加实际的
意义。
传统形态学分类是最基本的ＭＲＤ监测方法，但其敏感度较低，仅为１０＿。，临床上用来评价疗效及提示预后的意义有限。近年来大量关于ＭＲＤ监
高检出率，但是也只适用于有特殊遗传学改变的患者。ＰＣＲ技术操作简便，敏感性高，分辨率一般可以达到１Ｏ～１Ｏ一，但假阳性率也高，只适用于有特殊遗传学改变的患者。对于没有特殊遗传学特点
第３６卷第２期２０１３年２月
新疆医科大学学报ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉｎｊｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｖｏ１．３６ＮＯ．２
Ｆｅｂ．２０１３
・
综述・
流式细胞技术在急性髓系白血病微小残留病检测中的应用
李元媛综述王慧君，秘营昌审校
３０００２０）
（中国医学科学院血液病医院血液学研究所，天津
中图分类号：Ｒ７３３．７
文献标识码：Ａ
文章编号：１００９ — ５５５１（２０１３）０２０２５５ — ０４
急性髓系白血病（ＡＭＬ）占急性白血病的６０
～
适用于大多数急性淋巴细胞白血病患者和超过８Ｏ的ＡＭＬ病例。在ＡＭＬ患者ＭＲＤ监测中应用越来越广；既可以单独应用，在有特殊分子标志的患者还可以与ＰＣＲ技术联合。可以单独根据ＭＦＣ监测ＭＲＤ的结果判断ＡＭＬ患者的疗效，也可以将ＭＦＣ监测结果与遗传学指标结合对患者进行预

《急性髓系白血病微小残留病检测与临床解读中国专家共识》PPT课件

预测复发风险
微小残留病检测可以检测患者体内残留的白血病细胞，有助于预测患者的复发风险，为制定个性化治疗方案提供依据。
微小残留病检测在巩固治疗中的应用
监测病情变化
在巩固治疗期间，通过微小残留病检测可以实时监测患者病情变化，及时发现复发迹象，调整治疗方案。
指导治疗决策
根据微小残留病检测结果，医生可以判断患者是否需要继续巩固治疗或调整治疗方案，提高治疗效果。
《急性髓系白血病微小残留病检测与临床解读中国专家共识》
2024-01-08 汇报人：xxx
contents
目录
• 引言 • 急性髓系白血病概述 • 微小残留病检测方法及原理 • 微小残留病检测结果解读 • 微小残留病检测在急性髓系白血病治疗
中的应用 • 微小残留病检测的挑战与展望 • 总结与建议
共识由国内急性髓系白血病领域的临床专家、实验室检测专家以及方法学专家共同组成。
制定流程
通过文献回顾、专家讨论和会议研讨等方式，对急性髓系白血病 MRD检测的相关问题进行深入探讨，并最终形成共识意见。
证据等级和推荐强
度
根据现有研究证据的质量和数量，对共识意见进行证据等级和推荐强度的评估，以确保共识的科学性和实用性。
未来发展方向及展望
技术创新
多学科合作
继续研发高灵敏度、高特异性的检测技术，提高微小残留病检测的准确性。
加强临床医学、生物学、生物信息学等多学科的交叉合作，推动微小残留病检测技术的快速发展。
标准化与规范化
普及与应用
建立统一的检测标准和规范，提高不同实验室和检测方法之间结果的可比性和一致性。
灵敏度与特异性
当前微小残留病检测方法在灵敏度和特异性方面仍存在一定局限性，难以准确检测出低水平的残留病灶。

列出mrd检测方法(一)

列出mrd检测方法(一)MRD检测方法MRD（Minimal Residual Disease）是指在治疗后仍残留在患者体内的极小数量的癌细胞或其他致病微生物。

准确检测MRD对于判断患者的治疗反应和预后具有重要意义。

以下是一些常用的MRD检测方法：流式细胞术（Flow Cytometry）•流式细胞术是一种基于免疫荧光标记的技术，用于检测细胞表面标记物。

•通过在血液或骨髓细胞中使用特定的抗体标记淋巴细胞亚群或白血病细胞，并通过仪器测量它们的荧光强度来判断是否存在MRD。

•优势：高灵敏度，可以同时检测多个标记物。

•缺点：不能准确区分MRD来源于异常克隆细胞还是正常克隆细胞。

定量聚合酶链反应（qPCR）•定量聚合酶链反应是一种可以检测特定DNA序列的方法。

•通过使用合适的引物和荧光探针，对靶DNA进行扩增，并测定荧光信号来定量目标序列。

•优势：高灵敏度，可以定量测定MRD的数量。

•缺点：需要已知的特异性引物和标准品，适用于特定的疾病类型。

基于DNA测序的方法•基于高通量测序的方法对MRD的检测具有高灵敏度和高分辨率的优势。

•可以通过对患者骨髓或血液中的DNA进行测序，通过比对准确鉴定MRD。

•优势：高灵敏度和高分辨率，可以鉴定MRD的突变谱。

•缺点：设备和技术要求较高。

表面增强拉曼散射光谱（SERS）•表面增强拉曼散射光谱是一种能够检测极小分子浓度的方法。

•通过将样本与纳米结构表面接触，利用拉曼散射光谱的特征峰来检测MRD。

•优势：高灵敏度，可以检测极小数量的MRD。

•缺点：技术要求较高，实验条件较为复杂。

多重肽核酸聚合酶链反应（MPCR）•多重肽核酸聚合酶链反应是一种能够同时检测多个序列的方法。

•通过设计具有高特异性的引物和探针，可以同时检测多个与MRD 相关的序列。

•优势：高通量，可以同时检测多个目标序列。

•缺点：需要已知的特异性引物和标准品。

以上是一些常用的MRD检测方法，每种方法都具有不同的优势和限制。

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微小残留病检测的挑战与解决方案
技术挑战与改进方向
灵敏度与特异性
提高检测方法的灵敏度和特异性，减少假阳性和假阴性结果。
多参数检测
开发能够同时检测多种标志物的技术，提高检测的全面性和准确性。
标准化与质量控制
建立标准化的操作流程和质量控制体系，确保检测结果的准确性和可重复性。
临床解读的困难与对策
其他检测技术
免疫学技术
利用免疫学原理，通过特异性抗体与白血病细胞结合，实现对微小残留病的检测。包括免疫荧光、免疫组化等方法。
细胞遗传学技术
新兴技术
包括基于新一代测序技术的基因突变检测、基于质谱技术的蛋白质组学分析等，为微小残留病的检测提供了新的手段。
利用染色体核型分析、FISH等技术对白血病细胞的遗传学异常进行检测，从而评估微小残留病的情况。
临床解读
深入探讨了微小残留病检测结果与预后的关系，以及如何根据检测结果调整治疗方案。
专家建议
针对目前存在的问题和挑战，提出了具体的改进措施和建议，包括完善检测标准、提高检测灵敏度、加强临床与实验室沟通等。
展望未来发展趋势
技术创新
随着科技的不断发展，新的检测技术将不断涌现，如单细胞测序、液体活检等，有望提高微小残留病检测的准确性和灵敏度。
缺点
对操作人员技术要求较高，且抗体选择和标记方法可能影响检测结果。
分子生物学技术检测
原理
利用PCR、RT-PCR等分子生物学技术对白血病特异性基因或融合基因进行扩增和检测，从而实现对微小残留病的分
子水平监测。
优点
具有高灵敏度、高特异性等优点，能够在分子水平上检测白血病细胞的残留情况。
缺点
可能受到样本质量、引物设计等因素的影响，且部分方法操作复杂、成本较高。

急性白血病系别判断的流式细胞免疫分型

用于ALAL，也适用于单系AL的诊断； • （2）针对标志在系别诊断中的贡献（特异性和覆盖率）综合给予分值； • （3）将诊断标准量化，简单易行，降低室间差异。
三、急性白血病系别诊断标准
• EGIL诊断标准缺点： • （1）关于阳性定义，因为影响因素众多，有时存在歧义； • （2）对于某些覆盖率低、特异性高的标志，给予分值低或者未纳入，如CD64、CD14； • （3）对某些常见伴系表达标志予以极低分值，如CD7，未考虑荧光强度的差异； • （4）对于相对特异、在某系别易于伴发的标志，未考虑差异对待，如cCD79a、CD10
三、急性白血病系别诊断标准
• 鉴于几乎没有任何标志是绝对敏感和特异的，做全标志有助于降低误诊风险，因此在系别筛查时如果出现系别标志表达过多或者过少，或者伴系表达标志的强度超过标本中残留的正常细胞时，首先应该做全两个诊断标准涉及的相关系别标志，必要时甚至需要增加CD371等新的髓系标志。
• 在此过程中可以选择一步法或者两步法。选择一步法的实验室，以目前常用3激光8 色机型为例，可供参考的5管法见表3；选择两步法的实验室，第一步进行系别筛查，包括髓系MPO（或者CD33）和CD117，T系CD7和cCD3、B系CD19和CD22，根据采用仪器型号不同可能有差异，4色方案可以参考2015年4色流式细胞术中国专家共识，3激光8色推荐方案见表3。
三、急性白血病系别诊断标准
三、急性白血病系别诊断标准
• 注意几个标志的FCM检测： • （1）MPO：使用克隆号8E6、MPO-7的抗体需要小心，因为均有在B-ALL表达的
报道；阳性阈值虽然大多数沿用10%，但是建议结合荧光强度，并且不典型病例应该做全其他髓系标志，并结合细胞化学和免疫组化MPO检测结果；FCM破膜处理可能会使粒细胞的侧向角光散射（side scatter，SSC）降低，从而影响CD45/SSC设原始细胞门的精确度，导致假阳性结果，正确的方法应结合原始细胞标志修订设门。

2022年欧洲白血病网络急性髓系白血病诊治指南更新要点解读(全文)

2022年欧洲白血病网络急性髓系白血病诊治指南更新要点解读（全文）2010年以及2017年版欧洲白血病网络（ELN）急性髓系白血病（AML）诊治指南（ELN AML指南）在临床上得到了广泛的应用。

近年来，随着对AML分子生物学发病机制的深入探索，AML在诊断、危险度分层、微小残留病（MRD）评估以及分子靶向药物应用等方面取得了巨大的进步，故有必要对之前版本的ELN AML指南进行修订。

2022年ELN AML指南近期在Blood杂志在线发表，来自10个国家的23位专家对ELN AML 指南进行了修订。

本文就AML诊断与危险度分层、疗效标准以及治疗推荐的更新要点进行相关解读。

1 基于分子生物学的精准诊断2022年ELN AML指南中，分型诊断采用AML国际共识分类标准（ICC），对AML原始细胞的诊断阈值以及新的基因突变诊断意义进行了明确。

强调在定义AML分类时优先考虑基因突变。

根据最新ICC诊断要求，存在重现性基因异常（PML-RARA、CBFB-MYH11、RUNX1-RUNX1T1融合基因等）时，诊断AML要求骨髓或外周血原始细胞比例≥0.10的临界值，并且这一诊断标准可扩展应用于伴有RARA、KMT2A、MECOM等基因重现性改变的患者。

为与慢性粒细胞白血病（CML）加速期相鉴别，对伴有BCR-ABL1融合基因的AML仍要求原始细胞比例≥0.20。

这与既往只要伴有特定重现性基因异常而无论骨髓原始细胞比例如何均可诊断AML有所区别。

2022年ELN AML指南分型首次提出一种新的诊断类型——骨髓增生异常综合征（MDS）/AML，即骨髓或外周血原始细胞比例在0.10~0.19，而之前这类患者被诊断为MDS伴原始细胞增多2（MDS-EB-2）型（2016年版世界卫生组织分类）。

2022年ELN AML指南分型诊断非常强调分子生物学检测在AML诊断中的临床意义。

对于骨髓或外周血髓系原始细胞比例≥0.10的患者，首先要明确是否存在重现性基因异常，之后依次判定是否存在TP53基因突变[变异等位基因频率（VAF）≥10%]、是否伴有髓系发育不良相关基因改变（如ASXL1、BCOR、EZH2等突变）、是否存在髓系发育不良相关细胞遗传学异常[如复杂核型、-7/del（7q）、del（5q）、-17等]，如果不伴有上述分子生物学异常，则可诊断为AML（MDS/AML）非特指型。

血液科常见疾病复发指标

血液科常见疾病复发指标在血液科领域，复发是患者及医生都非常关注的问题。

许多血液疾病都有可能在治疗后出现复发，因此对于复发指标的研究和监测显得尤为重要。

本文将探讨血液科常见疾病的复发指标，希望能对相关领域的医生和患者提供一些参考和启示。

一、急性白血病（AML）复发指标急性白血病是一种造血干细胞恶性克隆疾病，治疗往往需要化疗和造血干细胞移植。

在AML患者中，复发是一种常见现象。

以下是一些常见的AML复发指标：1. 微小残余病（MRD）检测：MRD检测通过分析骨髓或外周血样本中残留的白血病细胞，可以判断患者的治疗效果和复发风险。

目前，流式细胞术和聚合酶链反应（PCR）是常用的MRD检测方法。

2. 骨髓形态学检查：骨髓形态学检查是诊断和判断AML患者复发的重要手段。

通过分析骨髓细胞的形态结构和染色情况，可以确定是否存在白血病细胞的复发。

3. 染色体和基因异常：AML患者中常见的染色体和基因异常可以被用作判断复发的指标。

例如，染色体异常t(8;21)和inv(16)与AML复发的风险增加相关。

4. 患者症状和体征：除了实验室指标，患者的症状和体征也是判断AML复发的重要依据。

例如，骨髓抑制、疲劳、发热等都可能是AML复发的表现。

二、慢性骨髓增殖性肿瘤（MPN）复发指标MPN是一组造血干细胞克隆性疾病，包括骨髓纤维化、原发性骨髓增生异常和冷凝集性红细胞增多症等。

以下是一些常见的MPN复发指标：1. 血液学指标：血红蛋白、白细胞计数和血小板计数等血液学指标的变化可以反映MPN患者的复发情况。

例如，血小板计数的持续上升可能是骨髓纤维化的复发表现。

2. 骨髓活检：骨髓活检是判断MPN患者复发的可靠方法。

通过分析骨髓细胞的形态结构和增殖情况，可以确定是否存在肿瘤细胞的复发。

3. JAK2突变检测：JAK2突变是MPN患者中常见的基因异常。

监测JAK2突变的存在和变化可以帮助判断患者的复发风险。

4. 脾脏大小变化：MPN患者在复发时常常出现脾脏肿大。

多参数流式细胞仪检测急性髓细胞白血病微小残留病:挑战与对策

多参数流式细胞仪检测急性髓细胞白血病微小残留病：挑战与对策常英军;赵晓甦【摘要】多参数流式细胞仪(FCM)是急性白血病微小残留病(MRD)检测的重要手段之一,但在检测急性髓细胞白血病(AML) MRD方面还存在诸多问题.本文讨论了FCM检测AML MRD面临的挑战,并提出相应的对策.【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2016(031)006【总页数】4页(P581-584)【关键词】白血病,髓样,急性;微小残留病;流式细胞术【作者】常英军;赵晓甦【作者单位】北京大学人民医院北京大学血液病研究所造血干细胞移植治疗血液病北京市重点实验室,北京100044;北京大学血液协同创新中心,北京100044;北京大学人民医院北京大学血液病研究所造血干细胞移植治疗血液病北京市重点实验室,北京100044【正文语种】中文【中图分类】R733.72常英军，北京大学人民医院、北京大学血液病研究所、北京市造血干细胞移植重点实验室主任医师，教授，硕士研究生导师。

北京大学血液学系副主任，中华医学会血液学分会第九届青年委员会副主任委员，美国免疫学会国际会员，中国病理生理学会实验血液学会委员，中华医学会细胞生物学分会青年委员等。

长期从事恶性血液病诊治及造血干细胞移植临床及基础研究工作。

目前承担“863”项目、国家自然科学基金面上项目、北京市自然科学基金、首都特色项目及国际合作项目等课题。

获国家科技进步二等奖1项，中华医学科技一、二等奖各1项及中国抗癌协会科技二等奖1项。

现为《New England Journal of Medicine》、《Oncotarget》、《J Hematol & Oncol》、《Clinical and Experimental Immunology》、《Immunobiology》、《Annals of Hematology》、《Human Immunolgy》以及《BMC Hematology》等杂志审稿专家；《中华血液学杂志》、《临床荟萃》等杂志编委。

AML和MDS的抗体靶向治疗

AM1和MDS的抗体靶向治疗急性髓系白血病(AM1)和骨髓增生异常综合征(MDS)仍然是一种未得到满足的临床需求。

根据修订的国际预后评分量表(IPSS-R),高风险的MDS和具有不利特征的AM1的预后仍然令人沮丧，这些不利特征包括年龄、既往髓系疾病、不良遗传风险和并发基因突变。

事实上，具有极高IPSS-R风险的MDS患者的中位总生存期(OS)仅为0.8年，而年轻患者的新发AM1患者的五年生存率为40%,大于70岁患者的5年生存率不到5%,这突显了亟需新的治疗策略的迫切性。

免疫反应的改变在AM1/MDS发病机制中起着重要作用，这为免疫治疗提供了新的选择。

当前，在免疫系统调节因子中，CD47、免疫检查点和to11样受体2(T1R2)是AM1和MDS的主要靶点。

其他几种表面分子(即CD33、CDI23、CD45和CD70)的多种抗体药物形式，包括裸抗、双特异性T细胞结合器、三特异性抗体以及ADC正在研究中，作为单一疗法或与其它药物联合使用。

它们代表着AM1和高风险MDS治疗的未来。

AM1/MDS的免疫系统功能障碍免疫系统的失调可能通过多种途径影响AM1和MDS的发病机制。

MDS的骨髓微环境以适应性和先天性免疫效应细胞的扰动为特征，一些细胞亚型，如1型先天性淋巴细胞(I1C1)减少以及其他细胞类型，如髓源性抑制细胞(MDSC)增加。

MDSCs增强了caspase-1的危险相关分子模式刺激，其通过分泌颗粒酶B和I1-IO以及通过促进to11样受体(T1R)、CD33和CXCR2的信号传导来促进细胞死亡。

在AM1中也观察到I1C1的功能障碍。

AM1细胞通过多种机制改变免疫微环境，包括免疫检查点上调和人类白细胞抗原(H1A)I类和II类下调，从而逃避免疫监控。

总之，这些证据表明，先天性和适应性免疫应答的改变在AM1和MDS的发病机制中起着重要作用，这也为我们提供了潜在的免疫治疗新靶点。

AM1/MDS的潜在治疗靶点免疫系统调节剂正在成为血液系统恶性肿瘤免疫治疗的主要靶点,包括CD47、免疫检查点和T1R2。

CD7、CD56、CD19在AML预后及MRD监测中的意义

ＩＹ－－ＡＭＬ有不同的临床特点，ＣＤ７ＡＭＬ和ＣＤ５６ＡＭＬ预后差；ＣＤ７、ＣＤ５６可以作为ＭＲＤ监测的重要指标。
关键词：白血病；免疫分型；流式细胞术；微小残留病
中图分类号：Ｒ７３３．７文献标识码：Ａ
一
１８２４一
ＣｈｉｎＪＬａｂＤｉａｇｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１３，Ｖｏｌ１７，Ｎｏ．１０
文章编号：１００７ —４２８７（２０１３）ｉ０一Ｉ８２４ —０３
ＣＤ７、ＣＤ５６、ＣＤ１９在ＡＭＬ预后及ＭＲＤ监测中的意义
孔令环，韩梅，肖中平，陈琳
（吉林省人民医院血液风湿科，吉林长春１３００２１）摘要：目的临床意义。方法探讨急性髓系白血病伴淋系抗原（ＬｙＡＭＬ）表达者在预后及白血病微小残留病（ＭＲＤ）监测中的利用流式细胞术（ＦＣＭ）对８６例ＡＭＬ进行免疫分型，并以ＣＤ７、ＣＤ５６、ＣＤ１９为标志进行ＭＲＤ检
ｇＹａｎｄＲｈｅｕｍａｔｉｃｓ，ＪｉｌｉｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＬｙ一ＡＭＬｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｐｒｏｇｎｏｓｉｓａｎｄＭＲＤｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．

运用流式细胞术检测急性髓性白血病微小残留病

２
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ
ｄｅｔｅｃｔ
ｔｈｅ
ＡＭＬ－ＭＲＤ
ｗｉｔｈ
ｌｅｕｋｅｍｉａ
ａｓｓｏｄａ删
ｐｒｅｓｅｎｔ
ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ（ＬＡＩＰ）ｂｙｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｅｒｆｌｏｗ
ａｎａｌｙｓｉｓａｉｍｅｄａｔｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙｏｆｗｉｔｈＡＭＬａｎｄｍｏｒｅａｂｒｏａｄｃｌｉｎｉｃａｌ
结论：Ｉ．确定，２１种白血病相关免疫表璀。２．进一步明确了ＬＤ值在确定白血病相关免疫表型上的重要意义，影响Ｉ，Ｄ的主要因素是初诊时自ｆｆ｛｛病相关免疫表型的表达率和此表型在正常对照骨髓细胞的表达率，并且以后者为主。３．９２．９％（５３／５７）的初诊白血病患者骨髓中可以检测出至少一种免疫表型，主要为非同步表达和跨系表达。表型的分布与亚型无明显关系。４．正常骨髓细胞中存在相同的免疫表型，但位置相对固定且表达率低，可以作为残留病分析的参照物。５．流式细胞术分析ＡＭＬ—ＭＲＤ要遵循一定的原则，特别要注意非同步表达在寻找残留病细胞中地意义，参考正常的细胞群在流式散点图上的分布可以提供有意义的残留病信息。６．流式细胞术可广泛的应用于ＡＭＬ—ＭＲＤ的检测中。关键词：微小残稻病：急性髓系白血病：流式细胞术；白ｍ病相关免疫表型
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（ＬＤ），ｉ．ｅ．ＬＤ＝ｌｏｇ（ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
ｔｅｕｋｅｍｉｃｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ／ｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆ
ＡＭＬｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎｎｏｒｍａｌｂｏｎｅｗｅｒｅｄｅｆｉｎｅｄａｓ
ｍａｒｒｏｗ）．ＩｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｗｉｔｈＬＤ≥２．０
ｏｒ