第四节金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌检验PPT
食品中金黄色葡萄球菌的检测是常见的检验案例，旨在确保食品安全和预防食物中毒事 件。
详细描述
食品中金黄色葡萄球菌的检测通常采用增菌、分离培养、生化鉴定和血清学试验等步骤。 通过对食品样品进行选择性增菌，提高目标菌的浓度，然后进行分离培养，获得单菌落。
对分离到的菌落进行生化鉴定和血清学试验，以确定是否为金黄色葡萄球菌。
03
金黄色葡萄球菌检验流程
样本采集
采集部位
采集疑似感染的金黄色葡萄球菌 的样本，如皮肤、伤口、血液等。
采集方法
使用无菌棉签或注射器采集样本， 避免交叉污染。
采集量
采集足够量的样本，以满足实验需 求。
样本处理
增菌培养
将采集的样本接种在选择性培养基上， 进行增菌培养，以促进金黄色葡萄球 菌的生长。
仪器自动化检测法
总结词
仪器自动化检测法利用自动化仪器对样品进行快速、高效的检测，提高检测通量 和准确性。
详细描述
仪器自动化检测法包括全自动微生物鉴定仪、全自动免疫分析仪等。这些仪器能 够快速处理大量样品，提供准确的结果。同时，仪器自动化也减少了人为误差和 操作时间，提高了检测效率。但仪器成本较高，需要定期维护和校准。
特性
金黄色葡萄球菌具有高度的耐盐 性和耐高低温性，可在不同环境 下生存和繁殖，对多种抗生素具 有一定的耐药性。
常见感染途径
01
02
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食品污染
金黄色葡萄球菌常常污染 食品，如肉类、乳制品、 蛋类等，通过摄入被污染 的食物导致感染。
皮肤接触
金黄色葡萄球菌也可通过 破损的皮肤或黏膜侵入人 体，引起皮肤感染和伤口 感染。
分离纯化
革兰染色
对分离纯化的菌落进行革兰染色，初 步判断是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌检测课件
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金黄色葡萄球菌检测课件
• 金黄色葡萄球菌简介 • 金黄色葡萄球菌检测方法 • 金黄色葡萄球菌检测标准与流程
• 金黄色葡萄球菌检测的挑战与解 决方案
• 金黄色葡萄球菌检测的案例分析
01 金黄色葡萄球菌简介
定义与特性
定义
金黄色葡萄球菌是一种常见的革 兰氏阳性菌，属于葡萄球菌属。
特性
该菌具有高度耐盐性，可在高盐 环境下生存和繁殖；同时对干燥 和高温具有一定的抵抗力。
检测限值
根据食品种类和风险等级，设定金黄 色葡萄球菌的检测限值，以确保食品 的安全性。
采样与处理
采样方案
根据食品种类、生产工艺和风险评估，制定合理的采样方案，确保采样的代表性 和有效性。
样品处理
采集的样品应及时处理，避免污染和腐败，同时要保证样品的原有微生物状态不 被破坏。
检测流程
增菌培养
分离纯化
检测成本较高
一些先进的检测技术虽然准确率高，但成本也相对较高，对于一些资 源有限的机构来说可能难以承受。
解决方案
采用灵敏度和特异性更高 的检测方法
积极探索和研发新的检测技术 ，提高检测方法的灵敏度和特 异性，降低漏检和误检的风险 。
规范操作流程
制定详细的操作规程，确保采 集和处理样品的每个环节都符 合标准，降低样本污染的风险 。
分子生物学检测法
高灵敏度、高特异性，但仪器昂贵 、操作复杂。适用于科研和某些特 定领域的金黄色葡萄球菌检测。
03 金黄色葡萄球菌检测标准与流程
检测标准
检测方法
准确性要求
金黄色葡萄球菌的检测应采用国际或 国家规定的标准方法，如国标、行标 等。
检测结果应准确可靠，符合实际污染 情况，避免出现假阳性或假阴性。
金黄色葡萄球菌检测ppt
• 3、生化特性：
• 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲 基红反应阳性，VP反应弱阳性。
• 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化 明胶。
• 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感 性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
四金黄色葡萄球菌的流行病学
• 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人 和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌， 其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康 人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染 的机会很多。
• 近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引 起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
二金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型
• 对分型进行简单的了解 • １、血清学分型： • 金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 • 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。 • 多糖抗原有特异性。 • 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶
阴性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。 • ２、噬菌体分型： • ３、根据肠毒素分型： • ４、根据血浆凝固酶分型：
•
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：
• 季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、 蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引 起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%， 所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
• 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：
• 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染； 食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生 了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受 到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其 他部位的污染。
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
01
引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
04
微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
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样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
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04
项目四 金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色ppt课件
阴性反应
阳性反应
不凝固
少量、零 散凝固
明显的块 状凝固
巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
项目四 金黄色葡萄球菌检验 革兰氏染色
一、革兰氏染色步骤 涂片
热固定
初染
媒染
脱色
复染
革兰氏染色阴性
革兰氏染色阳性
细菌涂片
乙醇(或丙酮) 脱色
草酸铵结晶紫初 染
卢哥氏碘液媒 染
番红复染 番红复染
菌体呈红色者为G
－
菌体仍呈深紫色者 为G+
二、革兰氏染色原理 G＋菌细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障 ，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留 结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结 构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结 晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
77阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应少量少量零散凝零散凝明显的明显的块状凝块状凝巨大巨大完全凝固完全凝固倒置不流倒置不流动动88项目四项目四金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验革兰氏染色革兰氏染色1010一革兰氏染色步骤一革兰氏染色步骤涂片涂片1111热固定热固定121213131414脱色脱色1515复染复染1616革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性革兰氏染色阳性革兰氏染色阳性1717菌体呈红色者菌体呈红色者为为gg番红复番红复番红复番红复菌体仍呈深紫菌体仍呈深紫乙醇乙醇或丙酮酮脱色脱色细菌涂细菌涂片片草酸铵结晶草酸铵结晶1818二革兰氏染色原理二革兰氏染色原理gg菌细胞壁厚肽聚糖网状分子形成一种透性障菌细胞壁厚肽聚糖网状分子形成一种透性障当乙醇脱色时肽聚糖脱水而孔障缩小故保留当乙醇脱色时肽聚糖脱水而孔障缩小故保留结晶紫结晶紫碘复合物在细胞膜上
金黄色葡萄球菌检测实验报告
金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。
本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。
二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。
2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。
3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。
2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。
临床样本：直接进行涂片或适当稀释。
2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。
3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。
4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。
观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。
5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。
7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。
五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。
在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。
第四节 金黄色葡萄球菌检验
生物学特性—菌体形态及培养特征
革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检 时呈单个、成对、四联或不规则的簇群，如葡萄。
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞 团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取 决于生长的条件。
生物学特性—菌体形态及培养特征
• 大多数菌株最适温度30-37℃，最适pH 为7.0-7.5；
• 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； • 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。 • 一般用含10%氯化钠的大豆肉汤增菌或 7.5%氯化钠肉汤增菌。
生物学特性—生化特征
• 所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的 菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。 • 产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶 菌酶，大多数菌株可水解天然的动物蛋白， 例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和 多肽类如明胶，水解脂类、吐温类和磷脂 蛋白质，并释放脂肪酸；
分布
• 在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动 物的排泄物中都可找到。
• 作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和 动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的 皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受 其污染的机会很多。
• 传播媒介为被该菌污染的食品，主要为淀粉类(如 剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、 蛋类等。被污染的食物在室温20℃-22℃放置5小 时以上时，病菌大量繁殖，并产生肠毒素。
检测步骤—分离
• BP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮 源、硫、维生素和痕量矿物元素。 丙酮酸钠是一种生长促进剂。 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分 解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色。 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环。 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的 其它菌株有抑制作用。
金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌检验1. 概述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境和人体皮肤表面。
虽然大多数的金黄色葡萄球菌对人体无害，但一些菌株具有致病性，可以引起多种感染，包括皮肤感染、肺炎、血流感染等。
因此，对金黄色葡萄球菌的检验具有重要意义，能及早发现和控制感染的传播。
本文将介绍金黄色葡萄球菌检验的一些常用方法和技术。
2. 菌种的采集和处理2.1 采集样本金黄色葡萄球菌通常从病人的感染部位或者其他潜在的感染源采集样本。
常见的样本类型包括：皮肤切口分泌物、鼻拭子、血液、尿液等。
2.2 样本处理在进行金黄色葡萄球菌的检验之前，需要对采集的样本进行适当的处理。
处理方法取决于样本的类型和检验的目的。
常见的处理步骤包括：•鼻拭子：将鼻拭子放置在含有缓冲液的管中，将管子旋紧，并轻轻摇动一段时间，使细菌尽可能地释放到缓冲液中。
•血液：采集静脉血样本，将血液转移到无菌包装的管中，并立即将管子送到实验室进行处理。
•皮肤分泌物：使用无菌棉签或拭子采集患者分泌物，放入管中并送到实验室。
3. 常用的金黄色葡萄球菌检验方法3.1 培养方法金黄色葡萄球菌通常通过培养方法来进行检验。
常用的培养基包括牛肉肝脏套，Columbia血琼脂和Mannitol盐琼脂。
在封闭器具中加热灭菌后，将菌种均匀涂布于培养基上，并在适宜的温度（通常为37摄氏度）下孵育24-48小时，观察是否有金黄色小圆菌落的形成。
3.2 利用PCR技术检测PCR（聚合酶链式反应）是一种敏感且快速的方法，可以检测金黄色葡萄球菌的DNA。
通过PCR技术，可以快速鉴定金黄色葡萄球菌的存在和菌株的特性。
这种方法特别适用于高致病性金黄色葡萄球菌的检测。
3.3 人类源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测金黄色葡萄球菌通常通过其特有的毒力基因来引起感染。
通过PCR技术，可以检测和鉴定菌株中的毒力基因。
常见的毒力基因包括PVL、TSST-1、ETA等。
实验金黄色葡萄球菌的检验
实验金黄色葡萄球菌的检验YUKI was compiled on the morning of December 16, 2020实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。
此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。
3 实验材料检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。
培养基 %氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。
仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。
4 检样程序5 操作步骤样品的处理称取 25 g 样品至盛有 225 mL %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。
若样品为液态，吸取 25 mL 样品至盛有225 mL %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
增菌和分离培养将上述样品匀液于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。
金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。
2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。
金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。
- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。
- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。
3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。
通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。
金黄色葡萄球菌的测定方法验证报告
方法验证报告公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013(5)胰酪胨（或胰蛋白胨17g 植物蛋白胨（或大豆蛋白胨） 3g 氯化钠 100g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖 2.5g蒸馏水1000m L制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH 为7.2~7.3，分装，121C 、20min高压灭菌。
2.1.2氯化钠肉汤(75g/L)成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 氯化钠 75g 蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，调pH 为7.4,分装，121°C 、20min 高压灭菌。
2.1.3BairdParker 平板成胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 酵母浸膏1g 丙酮酸钠 10g甘氨酸 12g1. 目的验证平皿鉴定法测定公共用品用具微生物中的金黄色葡萄球菌，来判断在本实验室此方法的适用性。
2.培养基和试剂2.1培养基和试剂2.1.1胰酪胨大豆肉汤成分：氯化锂（LiCl.6H2O）琼脂5g 20g蒸馏水950mL增菌剂的配制：卵黄盐水（30%,体积分数）50mL与除菌过滤的亚碲酸钾溶液（质量浓度=1%）10mL混合，保存于冰箱内。
制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25°C校正pH至7.0±0.2。
分每瓶95mL,121C高压灭菌15min,临用时加热熔化琼脂，每95mL加入预热至50C的卵黄亚碲酸钾增菌5mL,摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存，不得超过48h。
2.1.4血琼脂培养基成分：营养琼脂100mL脱纤维羊血（或兔血）10mL制法：将营养琼脂加热溶化,待冷至50C左右以无菌方法加人脱纤维羊血摇匀，制成平板，置冰箱内备用。
2.1.5革兰氏染色液2.1.5.1结晶紫染色液成分：结晶紫1g乙醇（95%,体积分数）20mL草酸铵水溶液（质量浓度=1%）80mL制法：将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合2.1.5.2革兰氏碘液成分：碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL制法：将碘与碘化钾先进行混合，加人蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。
金黄色葡萄球菌的检验
金黄色葡萄球菌的检验(定性检测)一．金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；无芽孢，无鞭毛、无荚膜、不运动；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
普通平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
主要存在于主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。
二、培养基7.5%的氯化钠（三角瓶135mL）；BP平板培养基；血平板培养基；BHI肉浸液肉汤培养基（试管5个）。
三、金黄色葡萄球菌的定性检测主要包含四个步骤：样品处理；增殖培养；平板分离培养；鉴定（染色镜检和血浆凝固酶实验）。
1.样品的处理和增殖培养：样品为冷冻鱼丸，每组称量15g，放于研钵中，用研磨棒捣碎，放于135mL 7.5%的氯化钠肉汤中进行增菌培养，36℃±1℃培养18h～24h后，可观察到金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。
2.血平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于血平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个血平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个血平板）。
金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征：菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，金黄色（有时为白色），菌落周围为完全透明溶血圈。
3.BP平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于BP平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个BP平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个BP平板）。
金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落特征：菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈，用接种针触碰有奶油树脂的硬度。
微生物检测技术-金黄色葡萄球菌检测
国内检测标准
GB 4789.10-2010
食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 20944.32008
食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素的测定 第3部分：黄曲霉毒素 M1的测定
GB/T 23511.42008
食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定 第4部分：脱氢乙酸含量的 测定
样品中的快速检测。
纳米技术
纳米材料如纳米金、纳米孔等在 金黄色葡萄球菌检测中展现出巨 大潜力，具有高灵敏度、低检测
限和快速响应等优点。
未来研究方向
开发更高效、特异性的检测方法
01
针对金黄色葡萄球菌的不同表型和基因型，开发更高效、特异
性的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。
集成化与自动化
02
将多种检测方法集成于一体，实现金黄色葡萄球菌的自动化检
治疗方案的选择。同时，对于流行病学调查和疾病监测也具有重要意义。
05
CATALOGUE
金黄色葡萄球菌检测技术展望
新技术发展与应用
基因组学技术
利用全基因组测序技术，能够快 速准确地检测金黄色葡萄球菌，
并识别其耐药性和毒力基因。
生物传感器技术
生物传感器能够实时、快速地检 测金黄色葡萄球菌，具有高灵敏 度和特异性，适用于食品和环境
测，提高检测效率，降低人工误差。
多重耐药性研究
03
深入研究金黄色葡萄球菌的多重耐药性机制，为遏制耐药性的
传播提供科学依据和技术支持。
对公共卫生的影响与意义
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，通过改进检测技 术，能够及时发现和控制食品中的污染，保障公众的食品 安全。
预防疾病传播
[基础科学]金黄色葡萄球菌检验
![[基础科学]金黄色葡萄球菌检验](https://img.taocdn.com/s3/m/e1bc626c3069a45177232f60ddccda38366be17a.png)
概况
• 葡萄球菌属微球菌科,本菌有19个菌种,从
人体上可检出12个种.
• 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的
粘膜相关系,有些种是人及动物的条件致病 菌.
• 金黄色葡萄球菌对人类有致病性,通常被称
为病原性球菌.金黄色葡萄球菌可引起化脓 性炎症,又称为化脓性球菌.
金黄色葡萄球菌的生物学特性
肉汤培养物作为对照.
• 结果如可疑,挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL
BHI,36℃±1℃培养18h～48h,重复实验.
结果报告
• 如血浆凝固酶试验阳性,可判定为金黄色葡
萄球菌 .
• 报告在25g〔mL〕样品中检出或未检出金黄
色葡萄球菌.
谢谢!
浆凝固酶,使血浆中纤维蛋白原转变为纤蛋白, 附着于细菌表面 ,产生凝固.
• 金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与
细胞壁结合的凝固酶,为结合凝固酶；另一种是 菌细胞释放于培养基中,为游离凝固酶.二者的 抗原性不同.
血浆凝固酶试验
• 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1个或
以上,分别接种到5mL BHI和营养琼脂小斜 面,36℃±1℃培养18 h～24 h.
报告
增菌培养基
• 7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基,
因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性,因而能在此增 菌液中生长,除某些嗜高盐的海洋菌外,大多数细 菌都被增菌液中的高盐所抑制.
• 胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%,以胰酪胨替代
牛肉浸粉,并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进葡 萄球菌的生长.
样品的稀释
• 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸
盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯 内,8000r/min～10000 r/min均质1min～2min,或放 入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质 器拍打1min～2min,制成1:10的样品匀液.
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，简称SA），是一种常见的致病菌，可引起人体多种感染疾病，如皮肤感染、软组织感染和食源性疾病等。
因此，快速、准确地诊断和鉴定SA的存在非常重要，不仅是保障人类健康的关键，也是食品、药品等行业的质量控制的重要保障。
SA的检验技术包括传统培养鉴定、分子生物学方法鉴定等，下面分别介绍。
一、传统培养鉴定1.概述传统培养鉴定方法通过对细菌在液体或固体培养基上的形态、生化代谢和生长特性等进行分析，来确定细菌种类和数量。
该方法操作简单、成本低廉，适合用于常规样品的检测。
2.样品处理对于皮肤、鼻腔等来源的样品，可以将样品用生理盐水进行处理，通过溶解和过滤的方式获得拍平涂片，然后接种于液体和固体培养基上进行培养。
对于食品、药品等物品样品，需要先进行样品预处理，如研磨、加试剂等处理，以提高检测效果。
3.培养基传统SA的培养基包括营养琼脂（Nutrient agar）、大肠杆菌肉汤（Luria-Bertani broth）、普兰尼克琼脂（tryptic soy agar）等，其中普兰尼克琼脂是比较常用的一种。
4.鉴定方法常见的SA鉴定方法有以下几种：（1）目测识别：SA属于黄色或金黄色，对光有反射。
（2）形态鉴定：SA呈球形，成群分布，可以用显微镜观察。
（3）生化鉴定：SA产生多种酶和氧化还原酶等特殊代谢酶，如可溶性蛋白酶、卵白素酶等，通过对这些酶的检测进行SA的鉴定。
（4）生长特性：SA生长速度较快，一般在37℃条件下生长速度更快，一般24小时内能形成典型的菌落。
二、分子生物学方法鉴定分子生物学方法是指利用DNA序列差异、RNA表达水平、蛋白质组数据等高分辨率生物信息学技术，对细菌进行鉴定和分类。
与传统培养鉴定相比，其速度和准确性更高，但成本较高，不适合于大规模的检测。
2.核酸特异性PCR检测法核酸特异性PCR检测法是一种基于聚合酶链反应（PCR）的SA检测方法。
金黄色葡萄球菌的检查
金黄色葡萄球菌的检查同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。
金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。
本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。
看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。
所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。
金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样：在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。
增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。
接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。
以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。
当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。
若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。
1. 革兰染色镜检革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。
排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。
2. 血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。
检查时，轻轻将试管倾斜（动作勿大），仔细观察，阴性对照管血浆应流动自如，阳性对照管血浆应凝固状，若试验管液血浆凝固为血浆凝固酶试验阳性；否则为阴性。
金黄色葡萄球菌的检验
金黄色葡萄球菌的检验注：本方法源自奶牛乳房炎防治技术指南(试行)（农医发[20l0]29号）1主要试剂和试验方法：1.1革兰氏染色：1.1.1涂片、火焰固定。
1.1.2草酸铵结晶紫染1min。
草酸铵结晶紫染液的配制：溶液A：结晶紫2g，95％酒精20mL，溶液B：草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。
将A、B溶液混合，用滤纸过滤后即可使用。
1.1.3自来水冲洗。
1.1.4加碘液掩盖涂面染约1min。
1.1.5水洗，用吸水纸吸去水分。
1.1.6加95％酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20s后水洗，吸去水分。
1.1.7沙黄液（稀）染2min后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
革兰氏阳性菌染色为蓝色，革兰氏阴性菌染色为红色。
1.2触酶试验：取槽置于干净的试管内或玻片上，然后加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培育物中，马上观看结果。
有大量气泡产生者为阳性，无则为阴性。
1.3血浆凝固酶试验：吸取0.5mI。
兔血浆与0.5mlj金黄色葡萄球菌浸液肉汤24h培育物充分混匀，置361℃培育，每隔半小时观看一次，连续观看6h，消失凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流淌，判为阳性。
同时做阴阳性对比。
2乳样的采集选取消失临床症状（或者怀疑为亚临床型乳房炎）乳房炎奶牛，先用温水，再用0.2％新洁尔灭擦洗乳房，最终用70％的酒精擦拭乳头。
采样者同时进行手指擦拭消毒。
每个乳室先挤去头2-3把奶，以排解污染的杂菌，每头奶牛取乳样5mI.于无菌乳样杯中，待检。
3病原菌的分别培育初步诊断：将少量乳汁涂片、革兰氏染色、镜检。
如发觉圆球形革兰氏阳性细菌可怀疑为葡萄球菌。
分别培育：将乳样摇匀，分别取适量接种于养分肉汤（10％血清）、鲜血琼脂、麦康凯琼脂培育基（平板）后，置于37℃温箱培育24～48h。
观看每个平板中细菌生长的状况，记录菌落生长表现。
一般琼脂平板上，37℃，24～72h培育后，可见到潮湿、光滑、隆起的圆形金黄色菌落。
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量淀粉的食物，肠毒素易生成。
第四节金黄色葡萄球菌检验
耐受力
➢ 几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金黄色葡 萄球菌都有严重的破坏作用
➢ 肠毒素可耐受100℃ 30分钟不被破坏。 ➢ 对于加工过的食品或食品加工设备而言，此菌或
金黄色葡萄球菌检验
第四节金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于 葡萄球菌属（Staphylococcus），可引起多种 严重感染。有“嗜肉菌"的别称。 ➢
第四节金黄色葡萄球菌检验
概况
➢ 葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种，从人体 上可检出12个种。
➢ 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品， 如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时， 经8-10小时即可相当数量的肠毒素。
第四节金黄色葡萄球菌检验
分布
➢ 在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动 物的排泄物中都可找到。
➢ 作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和 动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的 皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受 其污染的机会很多。
℃±1 ℃， 18h~24h
Baird-Parker平板，血平板
36℃±1 ℃
B-P平板18h~24h或45h~48h 血平板 18h~24h
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂斜面 血浆凝固酶试验
结果报告 第四节金黄色葡萄球菌检验
检测步骤—增菌
➢ 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的 氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增 菌。
第四节金黄色葡萄球菌检验
检测步骤—分离
➢ 血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此 在血平板上产生明显的溶血环。
➢ 传播媒介为被该菌污染的食品，主要为淀粉类(如 剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、 蛋类等。被污染的食物在室温20℃-22℃放置5小 时以上时，病菌大量繁殖，并产生肠毒素。
第四节金黄色葡萄球菌检验
流行病学
➢ 季节分布，多见于春夏季； ➢ 中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中 毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率 83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
其肠毒素的存在通常作为卫生条件差的一种指标。
第四节金黄色葡萄球菌检验
检验程序与操作方法
➢ 根据中华人民共和国国家标准： 《食品卫生微生物学检验》 GB4789.10-2010 金黄色葡萄球菌检验
第四节金黄色葡萄球菌检验
操作流程
检样25g(mL) +稀释液225mL，均质
7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤
化钠肉汤增菌。
第四节金黄色葡萄球菌检验
生物学特性—生化特征
➢ 所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的菌株通 常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
➢ 产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶， 大多数菌株可水解天然的动物蛋白，例如血红蛋 白、纤维蛋白、卵白、酪朊和多肽类如明胶，水 解脂类、吐温类和磷脂蛋白质，并释放脂肪酸；
触酶试验（过氧化氢酶试验）
➢ 原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化 氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气 泡。
第四节金黄色葡萄球菌检验
生物学特性—致病性
➢ 金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小 板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有 关； d.脱氧核糖核酸酶：脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来 作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素， 分为A、B、C、D、E五第四种节金。黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常 见的病原菌，临床表现多种多样，可引起局 部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、 心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
第四节金黄色葡萄球菌检验
葡萄球菌皮肤感染
第四节金黄色葡萄球菌检验
致病性
➢ 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾 病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕 吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
第四节金黄色葡萄球菌检验
➢ 在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β型 溶血。
➢ 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围 有白色沉淀环的菌落。
➢ 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸 不产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不 产生靛基质，触酶阳性。
➢ 致病菌可产生凝血浆酶。
第四节金黄色葡萄球菌检验
第四节金黄色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞 团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取 决于生长的条件。
第四节金黄色葡萄球菌检验
生物学特性—菌体形态及培养特征
➢ 大多数菌株最适温度30-37℃，最适pH为7.07.5；
➢ 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； ➢ 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。 ➢ 一般用含10%氯化钠的大豆肉汤增菌或7.5%氯
➢ 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的粘膜相 关系，有些种是人及动物的条件致病菌。
➢ 金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称为病 原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症， 又称为化脓性球菌。
第四节金黄色葡萄球菌检验
生物学特性—菌体形态及培养特征
革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检 时呈单个、成对、四联或不规则的簇群，如葡萄 。
第四节金黄色葡萄球菌检验
流行病学
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问 题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物 中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更 多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非 常多。
第四节金黄色葡萄球菌检验
流行病学
肠毒素形成条件： ✓ 存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越