醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告_0

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告

前言

血清蛋白:

血清蛋白是血液中脂肪酸的载体当身体需要能量或建筑材料时，脂肪细胞将脂肪酸释放到血液中，脂肪酸被血清蛋白捕获并运送到所需的位置

牛血清白蛋白的相对分子质量是10的四次方，这是不确定的，但是是一种聚合物，并且在一些地方测量到70，000，这是一个数据。它将用于聚合酶链反应

牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量为68kD。等电点4.8氮含量16%，糖含量0.08%只含有己糖和己糖胺，脂肪含量仅为0.2%白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸残基形成17个二硫键，在肽链的第34位有一个游离巯基白蛋白可以与各种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合血液中的白蛋白主要起维持渗透压、缓冲液、载体和营养的作用。在动物细胞的无血清培养中，白蛋白的加入可以起到生理和机械的保护作用和载体作用。

醋酸纤维素薄膜电泳:

醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为载体它是纤维素的乙酸酯，由纤维素的羟基乙酰化而成。它溶解在有机溶液如丙酮中，并可被涂覆成厚度为0.1毫米-0.15毫米的均匀微孔膜太稠，吸水性差，分离效果差；如果它太薄，如果它缺乏应有的机械强度，膜就会变脆。

醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。它已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖白蛋白、甲胎蛋白、类固醇激素和同工酶等的分离和分析。虽然其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶电泳，但具有简单、快速的优点。功能:

1。(1)醋酸纤维素膜对蛋白质样品的吸附很少，没有“拖尾”现象。染色后，背景可以完全脱色，各种蛋白染色带可以清晰分离，提高了测定的准确性。

(2)快速节省时间醋酸纤维素膜的亲水性比滤纸差，膜中含有的缓冲溶液少，电渗少，电泳时大部分电流由样品传导，分离速度快，电泳时间短。一般来说，电泳时间只有45-60分钟。染色和脱色后，整个电泳过程只需约90分钟。

(3)灵敏度高，样品消耗少。血清蛋白仅需要2μl血清，即使样品体积小至0.1μl，对于仅含5μg蛋白的样品也可获得清晰的分离带。临床医学检查用它来检测病理条件下微量异常蛋白的变化。(4)应用广泛有些蛋白质不容易用纸电泳分离，如胎儿α球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋白等。醋酸纤维素膜电泳可以更好地分离。(5)电泳染色后，醋酸纤维素膜可浸泡在冰醋酸、乙醇混合溶液或其他溶液中，形成透明的干板，有利于扫描定量和长期保存。2.与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，醋酸纤维素薄膜电泳操作简单，但分离效果不是很好。例如，在醋酸纤维素薄膜电泳中，只有5-6条带能与白蛋白分离，而在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，只有10条带能与白蛋白分离。

1。实验目的

1。掌握电泳分离血清蛋白的原理；

2。掌握血清蛋白醋酸纤维素膜电泳的操作方法二。实验原理

1。电泳是指带电粒子在电场中以相反的电荷移动到电极上的现象

在一定的酸碱度条件下，由于等电点不同，不同的蛋白质具有不同的电荷和不同的性质，因此它们在一定电场中的移动方向和移动速度是不同的，即它们的电泳迁移率是不同的。因此，它们可以分开。影响电泳迁移率的因素:

内在因素:蛋白质携带的净电荷量，蛋白质的大小和形状外在因素:电场强度，溶液的ph值，溶液的离子强度和电渗现象。血清中各种蛋白质的等电点在ph 4.0至7.3之间，在pH8.6的缓冲溶液中带负电，在电场中向正极游动血清中各种蛋白质的等电点不同，所以电荷的数量也不同。此外，各种蛋白质的分子大小不同，因此在同一电场中的游动速度也不同。那些带有小分子和多种电荷的粒子移动得更快。相反，它更慢。

4。醋酸纤维素溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等。)然后涂布成均匀的膜，成为醋酸纤维素膜该膜具有均匀的泡沫状结构，厚度约为120微米，渗透性强，分子运动阻力小。薄膜电泳具有痕量、快速、简便、分辨率高、无拖尾和样品上

吸附现象等优点。它已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血红蛋白、酶、免疫电泳等的分离。

5。醋酸纤维素薄膜电泳可根据电泳速度将血白蛋白分为5个区

带。从阳性端开始，依次为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。每种蛋白质的百分比含量可以通过染色来计算。

3、实验材料和试剂1、实验设备

1。电泳仪:为电泳提供DC电源2.电泳槽:提供电泳的地方

3。血清取样器:可使用盖玻片或微量取样器 4.醋酸纤维素膜:2cm×8cm

5。其他:培养皿(直径9-10厘米)、滤纸、镊子等。2.实验材料和试剂材料:牛血清

1。巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6) 2.0.5%氨基黑10B染色液3。漂洗液

4。透明溶液:使用前立即制备

a溶液:取15 ml冰醋酸(ar)和85 ml无水乙醇(ar)。液体乙:取25毫升冰醋酸和75毫升无水乙醇。5.保存液:液体石蜡

6。定量洗脱液(0.4摩尔/升氢氧化钠溶液)4。实验步骤1。电泳槽的制备

电泳槽有两个独立的槽，每个槽装有缓冲溶液，并与不同的电极相连，红色为正极，黑色为负极每个凹槽有一个可移动的横杆，滤纸的一端放置在横杆上，另一端浸入缓冲溶液中形成滤纸桥。在滤纸桥上点好醋酸纤维素薄膜2.醋酸纤维素膜的润湿

将醋酸纤维素膜完全浸泡在缓冲溶液中约30分钟后，用镊子小心

夹住膜的一端，将其放入折叠好的滤纸中，用滤纸吸取表面液体 3.样品点样

将膜条铺在玻璃板上(无光泽面朝上)，将样品点样器浸在血清中(最好是薄层)，然后在膜条一端1.5-2厘米处轻轻水平放下，并立即提起，从而在膜条上点样一条薄的血清样品。这一步是实验的关键。 4和电泳

将样品点的薄膜施加到阴极电泳槽支架的滤纸桥上(样品点面朝下),另一端施加到阳极支架上(见下图)要求滤膜应紧紧地贴在滤纸桥上，并伸直，中间不应下垂。

连接电泳仪电泳在室温下进行，打开电源开关，通过调节电流强度至0.3毫安/厘米，电泳时间约为1小时。电泳后，关闭电泳仪并切断电源。5.染色:

电泳完成后，取下薄膜，在含有氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡5-10分钟(染色溶液的回收)6。漂洗:

从染色溶液中去除薄膜，在自来水下漂洗以去除多余的染色溶液，然后在含有漂洗溶液的培养皿中漂洗，直到背景蓝色完全去除且条带清晰，从而获得清晰的色带电泳图案。7.透明

将脱色和吹干的薄膜浸入透明的A溶液中2分钟，立即浸入透明的B溶液中1分钟，取出后立即贴在干净的玻璃板上，两者之间无气泡该薄膜在大约2-3分钟内完全透明。如果透明度太慢，可以用滴管取少量透明液体B，在薄膜表面冲洗一次，然后自然晾干，或者用吹风机吹凉晾干，不要有酸味。3将玻璃板放在流动的自来水下，待