敲基因小鼠鼠尾基因鉴定实验报告
p53基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定_乔录新
p53基因敲除⼩⿏的饲养繁殖及鉴定_乔录新第29卷第1期2012年2⽉实验动物科学LABORATORY ANIMAL SCIENCE Vol．29No．1February 2012櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴毷毷毷毷研究·论著p53基因敲除⼩⿏的饲养繁殖及鉴定*乔录新1徐萌1柴梦⾳1乔欣2陈德喜1（1.⾸都医科⼤学附属北京佑安医院，北京100069）（2.⾸都医科⼤学实验动物科学部，北京100069）摘要：⽬的为了繁育和鉴定p53基因敲除⼩⿏，将引进的杂合⼦⼩⿏进⾏饲养繁殖，杂合⼦⽤于继续保种。
⽅法对其幼⿏剪尾提取基因组DNA ，采⽤PCR ⽅法进⾏基因型鉴定。
结果对引进⼩⿏已成功饲养和繁殖，并得到纯合基因缺失型⼩⿏。
结论正确的饲养、繁殖及基因鉴定⽅法对于基因敲除⼩⿏的获得和保种具有重要的意义。
关键词：p53；基因敲除⼩⿏；PCR 中图分类号：Q95-331⽂献标识码：A⽂章编号：1006－6179（2012）01-0022-03收稿⽇期：2011－07－28*基⾦项⽬：国家⾃然科学基⾦⾯上项⽬（No．30870853）作者简介：乔录新（1985－），⼥，在读硕⼠。
主要研究⽅向：感染性疾病。
E-mail ：qiaolx2006@163．com 徐萌（1983－），⼥，实验员。
主要研究⽅向：感染性疾病。
通信作者：陈德喜。
E-mail ：Dexi09@yahoo．comp53基因是迄今发现与⼈类肿瘤相关性最⾼的基因之⼀，有研究显⽰，⼈类⼤约⼀半的肿瘤发⽣与p53基因异常有关，因此p53基因的相关功能成为当前肿瘤分⼦⽣物学研究的热点［1，2］。
p53蛋⽩介导的细胞凋亡通路是⼈类肿瘤发⽣过程中最常改变的通路。
该通路中p53蛋⽩发挥细胞周期调控和DNA 修复功能，在肿瘤调控机制中发挥着重要的作⽤［3，4］。
⽬前对于此⽅⾯的体外研究⼤多在各种p53基因缺失细胞中进⾏，虽然具有很好的效果，但是在模拟体内环境⽅⾯仍有不⾜，因此，我们于2007年从美国匹斯堡⼤学引进p53基因敲除⼩⿏杂合⼦，在⾸都医科⼤学实验动物部SPF 级动物实验室饲养繁殖，经基因鉴定成功培育p53基因敲除⼩⿏，为深⼊研究肿瘤疾病提供了动物模型。
博士实验小白鼠实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着科学技术的不断发展，动物实验在医学、生物学等领域的研究中发挥着重要作用。
小白鼠作为一种常用的实验动物，其行为特征的研究对于揭示动物心理和行为规律具有重要意义。
本研究旨在通过对小白鼠进行一系列行为实验，探讨其认知、情感及社会行为等方面的发展规律。
二、实验目的1. 了解小白鼠的基本行为特征；2. 探讨小白鼠的认知、情感及社会行为的发展规律；3. 为后续相关研究提供实验数据支持。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠（SPF级，雄性，体重20-25g，年龄4-6周）；2. 实验环境：温度（22±2）℃，湿度（50±10）%，光照周期（12h光照/12h黑暗）；3. 实验设备：观察箱、录音设备、视频设备、食物、水等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只；2. 实验设计：（1）认知实验：观察小白鼠对食物的寻找能力、空间记忆能力及视觉辨别能力；（2）情感实验：观察小白鼠对疼痛刺激的反应、情绪变化及社会互动；（3）社会行为实验：观察小白鼠的群体行为、社会等级及亲子关系；3. 数据收集：通过观察箱、录音设备、视频设备等手段记录实验数据；4. 数据分析：采用统计学方法对实验数据进行处理和分析。
五、实验结果1. 认知实验结果：（1）食物寻找能力：实验组小白鼠在寻找食物方面表现出较高的能力，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；（2）空间记忆能力：实验组小白鼠在空间记忆方面表现出较好的能力，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；（3）视觉辨别能力：实验组小白鼠在视觉辨别方面表现出较高的能力，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2. 情感实验结果：（1）疼痛刺激反应：实验组小白鼠对疼痛刺激的反应较为敏感，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；（2）情绪变化：实验组小白鼠在情绪变化方面表现出较大的波动，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；（3）社会互动：实验组小白鼠在社交互动方面表现出较高的积极性，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
敲基因小鼠鼠尾基因鉴定实验报告
碱法提取小鼠总DNA及基因鉴定：一、实验器材：加样枪（1ml、200ul、20ul、10ul）、枪头（大中小一套）、EP管（20ul、1.5ml、10ml）、试管架、浮标、温度计、胶布、手套、记号笔、锥形瓶、称量匙、冰盒二、实验试剂：A液、B液、引物、mix、双蒸水、三蒸水、琼脂糖、TBE（5x、1x、回收液）、核苷酸染料、Marker三、母液配置：1.10M NaOH: NaOH 40g加双蒸水至90ml，待NaOH完全溶解冷却后定容至100ml2.0.5M EDTA：EDTA.Na2盐18.61g, NaOH 1.5g, 加双蒸水至80ml,逐滴加入10M NaOH至EDTA完全溶解后加双蒸水定容至100ml3.1M TrisHCl（pH8.0）：Tris碱12.1g，加水至70ml，边搅拌边加入浓盐酸4ml，然后边逐滴加入1M HCl边测PH值，直至PH升至8.0（+\-0.05），定容至100ml（pH=8.8的TrisHCl中边加入浓盐酸边测PH值至PH=8.0（+\-0.05）为止）四、实验步骤：1.剪取鼠尾（约芝麻大小）储存于-20度冰箱（-20度冰箱，主要是防止DNA降解，4度不行）2.提取DNA：1)配置工作液——20ml体系A液：50ul 10M NaOH 加双蒸水至20ml8ul 0.5M EDTAB液：800ul 1M TrisHCl（pH8.0）加双蒸水至20ml2)加150ulA液（液体应完全浸没标本），95度水浴锅煮1.5h（将EP管插入浮标中后用胶布缠好防止EP管在加热过程中爆开）3)加150ulB液，混匀（上下颠倒3-5下）4)12000r/min 4度离心5分钟（可储存于-20度冰箱）3.PCR（冰上操作）：P1 0.5ul（P为AC3I，G为AAA）1)配置PCR体系——15ul体系P2 0.5ulMix 7.5ul三蒸水4.5ulDNA 2ul2)加2ul上述离心后的上清液至PCR体系，瞬离3)PCR仪扩增，参数设定：预变性：94度——3min变性：94度——30s退火：55度——30s 30个循环延伸：72度——24s72度——5min4度——∞4.琼脂糖凝胶电泳：1)制胶——2%琼脂糖凝胶配方：总体积（ml）20 30 40 50 60 120琼脂糖（g）0.4 0.6 0.8 1 1.2 2.4TBE 1x（ml）20 30 40 50 60 120Tris-base 13.6gTBE 5x配方：硼酸 6.56gEDTA 0.73g双蒸水up to 250mlEg：50孔大胶的配置：琼脂糖2.4g 微波炉加热5min左右冷却至适温后加染料7.5ulTBE 1x 150ml（需考虑蒸发量）2)加样——Marker 0.5ul，样品8ul（加样前吹打2次，从右向左加样）3)电泳——150V，300mA，20min（加样孔在近负极侧）5.成像分析：Image lab 新建核酸凝胶（第一项）最后一项滤光片拨至中间放置凝胶运行保存图像编辑拍照保存6.结果及分析：1)AAA分子量为700+？2)AC3I分子量为400+？3)AAA型——只出现AAA一条带AC3I型——只出现AC3I一条带双阳型——两条带都出现野生型——AAA型老鼠没出现AAA条带或AC3I型老鼠没出现AC3I条带或双阳型两条带均未出现4)出现浅带的原因？判定为阴性还是阳性？我觉得阴性更多。
基因编辑_鼠实验报告
实验名称：基因编辑鼠模型构建及功能研究实验时间：2023年X月X日至2023年X月X日实验地点：XX大学XX实验室实验人员：XXX、XXX、XXX一、实验背景随着分子生物学和基因编辑技术的快速发展，基因编辑技术在疾病模型构建和基因功能研究中发挥着越来越重要的作用。
本实验旨在通过CRISPR/Cas9技术对小鼠进行基因编辑，构建基因敲除和基因过表达模型，研究特定基因在生理和病理过程中的功能。
二、实验目的1. 利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除和基因过表达小鼠模型。
2. 观察基因敲除和基因过表达小鼠的表型变化。
3. 研究特定基因在生理和病理过程中的功能。
三、实验材料1. 实验动物：SPF级C57BL/6小鼠2. 工具：CRISPR/Cas9系统、电穿孔仪、PCR仪、实时荧光定量PCR仪、Western blot试剂盒等3. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR引物、荧光染料、限制性内切酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶等4. 仪器：生物安全柜、离心机、凝胶成像系统、显微镜等四、实验方法1. 基因编辑载体构建（1）设计特异性引物，针对目标基因设计CRISPR/Cas9系统所需的sgRNA。
（2）合成sgRNA和Cas9模板DNA，构建CRISPR/Cas9系统。
（3）将sgRNA和Cas9模板DNA连接到载体上，构建基因编辑载体。
2. 基因编辑小鼠模型构建（1）将基因编辑载体电穿孔转染到小鼠受精卵中。
（2）将转染后的受精卵移植到假孕母鼠体内。
（3）观察出生小鼠的表型，筛选基因敲除和基因过表达小鼠。
3. 基因敲除和基因过表达小鼠表型观察（1）观察基因敲除和基因过表达小鼠的生长发育、行为、生理指标等。
（2）通过组织学、病理学等方法观察基因敲除和基因过表达小鼠的组织结构变化。
4. 基因功能研究（1）通过实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测基因敲除和基因过表达小鼠的基因表达水平。
（2）通过细胞培养、动物模型等方法研究基因敲除和基因过表达小鼠的生理和病理过程。
Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鉴定及繁育方法
Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鉴定及繁育方法周胜强;罗东;黄素芬;易健;刘柏炎【摘要】Objective To investigate the identification and optimal breeding method of caveolin-1 knockout mice, and provide an ideal animal model for further study of the role of caveolin-1 in cerebral ischemic injury and repair. Meth⁃ods The introduced caveolin-1 gene knockout mice were reared in the SPF laboratory and genomic DNA was extracted from mouse tail tissue by the method of boiling lysis. According to the primer sequences provided by the Jackson Laboratory of America for polymerase chain reaction ( PCR) to detect the genotypes, with the four different ways of mating:caveolin-1 +/ -heterozygote intercrossing, heterozygous and homozygous caveolin-1 -/ -hybrid ( orthogonal and pay) as well as homo-zygous intercrossing. The pregnancy rate, shape characteristics of the filial generation mice and homozygous rate of the pa-rental mice were observed. Results Agarose gel electrophoresis results indicated that the size of molecular weight of the PCR products was about 200 bp and 661 bp, which were consistent with the expected target gene fragment, and identified caveolin-1 gene knockout mice of different genotypes successfully. The results of different mating patterns are basically in a-greement with Mendel rule, and the female and male aveolin-1 -/ -homozygous mice had a certain ability to reproduce, three different genotypes of mice had no significant differences between the shape features. Conclusions PCR can fast and reliably identify the genotypes ofcaveolin-1 knockout mice using genomic DNA through the method of boiling lysis. Combi- ning the breeding methods of intercrossing of caveolin-1 heterozygous mice and intercrossing of caveolin-1 homozygous mice may be a good way to obtain enough homozygous mice and homologous wild type mice in a short period.%目的：探讨小凹蛋白-1（caveolin-1）基因敲除小鼠的鉴定方法与最优繁育方式，为深入研究caveo-lin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。
课题-基因敲除小鼠的pcr鉴定
一、技术介绍与研究进展转基因、基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，至今已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，在小鼠模型构建方面日趋完善，并且如同剪切酶和抗体等常规分子生物学试剂的制备技术一样，逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业，催生了数以百计的创新药物和数以千计的优秀文章。
尽管如此，传统技术仍然存在一些难以克服的缺陷，如步骤繁琐、周期漫长、成功率低、费用高昂等，而ZFN和TALEN 等新技术的出现，或有可能将这一局面彻底改变。
二、同源重组技术原理基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为"基因打靶"（gene targeting）或"基因敲除"（gene knockout），利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。
同源重组（homologous recombination）定义：是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。
在基因敲除小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体导入到胚胎干细胞后外源的重组载体与胚胎干细胞中相同的片段会发生同源重组，如图1所示：图1.基因敲除鼠制作同源重组原理示意图三、制作流程图2.基因敲除鼠制作过程示意图1. Knockout载体设计与构建根据研究项目具体情况和要求把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 片段都重组到带有标记基因(如neo 基因，TK 基因等)的载体上，成为重组的Knockout载体。
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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鼠尾鉴定操作步骤
小鼠基因鉴定（KO鼠）1．实验原理：小鼠基因鉴定示意图（1）野生型小鼠，无法p出p1p3片段，且p1p2片段相对于KO型的要小。
（2）杂合KO小鼠，有p1p3产物，但p1p2产物有两条带。
（3）纯合KO小鼠，能p出p1p3产物，且p1p2结果片段较大。
注：p1p3600bp左右，p1p21000bp左右2．实验操作步骤（1）剪子鼠尾（脚趾）：2-3mm1酒精灯、剪子、镊子、1.5EP管、EP管板子、marker笔等（2）小鼠DNA提取：1组织消化：将配置好的消化buffer（裂解液）分别加入到，装有小鼠组织的1.5mlEP管内，每管500ul。
然后按1:500的比例加入蛋白酶K（即每支加入1ul）。
混匀后，55℃水浴消化过夜。
2蛋白酶灭活处理：将过夜消化的样品100℃煮沸，5min。
然后25℃，12000g，离心5-10min。
3苯酚氯仿处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入200ul苯酚和氯仿（抽提液）。
将离心好的样品拿出，每管吸出400-450ul上清转移到相应加入苯酚和氯仿的EP管中。
（尽可能多吸，但保证不能吸到下边沉淀，每管体积一样。
）之后用力摇晃2-3min，避免摇晃过程中将标记磨损掉。
然后25℃，12000g，离心10min。
4等体积氯仿处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入400ul氯仿（等体积氯仿）。
将离心好的样品拿出，每管吸出400ul（视情况而定）上层液体转移到相应加入氯仿的EP管中。
（尽可能多吸，但保证不能吸到下层液体及夹层蛋白，可管子斜置，方便吸取。
每管体积一样。
）用力摇晃2-3min，避免摇晃过程中将标记磨损掉。
然后25℃，12000g，离心10min。
5无水乙醇处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入1ml无水乙醇（2.5倍体积无水乙醇）。
将离心好的样品拿出，每管吸出400ul（视情况而定）上层液体转移到相应加入无水乙醇的EP管中。
小鼠基因筛选实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景基因是生物体内控制遗传信息传递的基本单位，基因突变是生物进化的重要驱动力。
为了研究特定基因的功能，我们采用小鼠作为模型生物，通过基因筛选实验，旨在鉴定和验证与特定表型相关的基因。
二、实验目的1. 构建小鼠基因文库。
2. 通过分子生物学技术筛选与特定表型相关的基因。
3. 验证筛选得到的基因的功能。
三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠。
2. 工具酶：限制性内切酶、DNA连接酶、Taq DNA聚合酶等。
3. 试剂：PCR引物、DNA标记物、DNA探针、克隆载体等。
4. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜等。
四、实验方法1. 构建小鼠基因文库（1）提取小鼠基因组DNA。
（2）使用限制性内切酶切割基因组DNA，获得特定长度的DNA片段。
（3）将切割后的DNA片段连接到克隆载体上，构建小鼠基因文库。
2. 基因筛选（1）根据已知表型，设计特异性引物，用于PCR扩增目的基因。
（2）对小鼠基因文库进行PCR扩增，筛选出与特定表型相关的基因片段。
（3）将筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。
3. 基因功能验证（1）将筛选得到的基因片段克隆到表达载体中，构建重组表达载体。
（2）将重组表达载体转化大肠杆菌，获得表达目的蛋白的菌株。
（3）通过免疫印迹、免疫荧光等技术检测目的蛋白的表达和活性。
五、实验结果1. 成功构建了小鼠基因文库，文库容量达到预期目标。
2. 通过PCR扩增，成功筛选出与特定表型相关的基因片段。
3. 对筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。
4. 通过基因功能验证，成功表达了目的蛋白，并验证了其功能。
六、实验讨论1. 基因筛选实验中，PCR扩增和DNA测序是关键步骤，需要严格控制实验条件，确保结果的准确性。
2. 在基因功能验证过程中，需要选择合适的表达系统和检测方法，以确保目的蛋白的正确表达和活性。
3. 本研究筛选得到的基因可能与特定表型相关，但其具体功能还需进一步研究。
基因检测小鼠实验报告
实验名称：基因检测小鼠模型建立及功能研究实验目的：1. 建立基因敲除小鼠模型，验证目标基因的功能；2. 探究目标基因在特定生理或病理过程中的作用；3. 为后续相关疾病的研究和治疗提供实验动物模型。
实验时间：2023年3月1日-2023年6月30日实验地点：XX大学动物实验中心实验材料：1. 实验小鼠：C57BL/6小鼠；2. 基因敲除质粒：含有目标基因的敲除质粒；3. 酶切试剂：DNA酶、T4连接酶等；4. 载体细胞：小鼠胚胎干细胞；5. 细胞培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清等；6. 实验仪器：PCR仪、凝胶成像系统、显微镜等。
实验方法：1. 基因敲除质粒构建（1）根据目标基因序列设计特异性引物，进行PCR扩增；（2）将扩增得到的DNA片段与载体连接，构建基因敲除质粒；（3）将构建好的质粒进行测序，确保序列正确。
2. 基因敲除小鼠模型建立（1）将基因敲除质粒转染小鼠胚胎干细胞；（2）将转染成功的细胞进行分裂培养，筛选出基因敲除细胞；（3）将基因敲除细胞进行核移植，获得基因敲除小鼠。
3. 功能验证（1）对基因敲除小鼠进行表型分析，观察其生长发育、生理功能等；（2）对基因敲除小鼠进行病理模型建立，观察其病理特征；（3）对基因敲除小鼠进行分子生物学检测，分析目标基因表达水平及蛋白功能。
实验结果：1. 基因敲除质粒构建成功，测序结果显示序列正确。
2. 基因敲除小鼠模型建立成功，经过表型分析，基因敲除小鼠在生长发育、生理功能等方面与野生型小鼠无显著差异。
3. 在病理模型建立过程中，基因敲除小鼠表现出与野生型小鼠相似的病理特征。
4. 分子生物学检测结果显示，基因敲除小鼠目标基因表达水平降低，蛋白功能受到影响。
实验结论：1. 成功构建了基因敲除小鼠模型，为后续相关疾病的研究和治疗提供了实验动物模型；2. 验证了目标基因在特定生理或病理过程中的作用，为进一步研究该基因的功能奠定了基础；3. 本实验结果为相关疾病的发病机制研究提供了参考，有助于寻找新的治疗靶点。
基因敲除小鼠鉴定 解读
基因敲除小鼠鉴定解读基因敲除小鼠鉴定解读，这事儿就像一场神秘的探索之旅。
咱们先得知道啥是基因敲除小鼠。
简单来说，就好比是在小鼠这个小世界里，我们用特殊的手段把某个基因像拆除小零件一样给去掉了。
这时候的小鼠就成了研究这个基因功能的绝佳模型。
那怎么知道这个基因是不是真的被敲除了呢？这就需要鉴定啦。
鉴定基因敲除小鼠，就像检查一件精心打造的艺术品有没有瑕疵。
一种常见的方法是通过基因测序。
这就像是给小鼠的基因密码本进行逐字逐句的校对。
测序的结果就像是一把钥匙，如果发现原本应该存在的基因片段不见了，那很可能这个基因就被成功敲除了。
不过，这可不是唯一的办法哦。
还有一种办法叫PCR检测。
这PCR检测呀，就像是一场基因的放大镜游戏。
我们通过特定的引物，就像是专门寻找特定宝藏的小钩子，去钓出我们感兴趣的基因片段。
如果在基因敲除小鼠里钓不到这个片段，而在正常小鼠里能钓到，那这也是基因敲除成功的一个标志。
这感觉是不是有点像寻宝呢？那鉴定出来之后，又怎么解读这些结果呢？这可就更有趣了。
如果确定基因敲除成功了，就像是我们找到了打开一扇神秘大门的钥匙。
这个时候，我们就能观察小鼠的各种表现了。
比如说，要是敲除的是一个和毛发颜色有关的基因，那小鼠的毛发颜色可能就会变得很奇怪。
这就像一幅画里原本该是红色的花朵，我们把负责红色的颜料给拿走了，那花朵就不是红色的了。
从行为上也能看出很多东西。
假如敲除的基因和小鼠的运动能力有关，那这只基因敲除小鼠可能就会比正常小鼠跑得慢或者动作不协调。
这就好比一辆汽车，如果我们拆掉了发动机里的某个关键零件，汽车肯定就跑不起来或者跑得歪歪扭扭的。
但是呢，解读结果也不是那么简单的事儿。
有时候可能会出现一些假象。
就像我们在雾里看花一样，看起来好像基因被敲除了，但实际上可能还有一些残留的基因功能在悄悄发挥作用。
这时候就需要我们更加仔细地去分析。
比如说，小鼠的某个表型变化可能不仅仅是因为这个基因被敲除了，还可能受到其他因素的影响。
Endoglin基因敲除鼠饲养繁殖及基因鉴定
基因敲除技术常常用于建立某种特定基因缺 失的生物模型，从而进行相关的研究。利用基因 敲除小鼠研究某一基因的生物学功能也已经引起 许多研究者的关注,建立稳定的基因敲除小鼠模 型对于课题组下一步的实验具有重要意义。在我 们的实验中，利用PCR扩增技术以及琼脂糖凝胶 电泳的方法对敲除endoglin基因的C57小鼠进行 基因鉴别，在构建了基因敲除小鼠后,随机抽取心 脏样本，利用WB技术验证小鼠心肌组织中 CD105基因的蛋白表达水平。结果显示，两只WT 小鼠的CD105蛋白的表达量都明显高于两只en doglin +八敲除鼠(P < 0. 05),说明endoglin +/"敲 除鼠的CD105蛋白表达明显下降,证明在CD105 基因半敲除后,在目标类型的表型上完全符合预 期，成功构建了敲除endoglin+/-基因杂合子小鼠 模型，为深入研究endoglin基因在心肌中的生物 学功能奠定了基础。同时也提供了良好的动物模 型,可用于后续糖尿病心肌病的研究。
(endoglin+/")的小鼠有一个正常的寿命⑵。基于 此，我们制作了 endoglin基因敲除杂合子小鼠，为 心血管疾病的研究提供动物疾病模型。
1材料与方法
1.1 试剂与仪器 CD105单克隆抗体购自美国CST公司;甘油
* 基金项目：咸宁市科技计划项目(2019kjl0) * * 通讯作者,E-mail: 190800800 @ qq. com
1.3小鼠的基因型鉴定
引进小鼠均为endoglin+/-小鼠，根据孟德尔 遗传定律，配对繁殖的后代有3种基因型：野生 型、杂合子以及纯合子，但纯合子在胚龄lid时死 亡，所以出生的后代只有两种基因型，需要对子代 野生型和杂合子进行基因型鉴定。 1.3.1鼠尾DNA提取
转基因小鼠鉴定实验
转基因小鼠鉴定实验
在刚出生产出的鼠仔中，属转基因小鼠者，约占全部仔小鼠的20％-30％。
因此，对转基因小鼠必须进行鉴定筛选。
1．转基因整合检测
鉴定转基因小鼠最简单的方法是从小鼠尾尖提取基因组DNA，检测其基因型。
检测方法包括PCR和Shouthern 杂交。
（1）基因组DNA的提取：
1）将离乳期小鼠（>4周龄）麻醉标记。
2）用一只手抓住小鼠，另一只手持消毒剪剪下约1cm的鼠尾。
（2） PCR检测：转基因的初始筛选通常采用PCR检测技术。
该技术操作简便、快速、费用低而有效，适合大量标本的分析。
由于该技术特别敏感，可能产生假阳性结果。
因此，在操作过程中必须特别小心，避免质粒DNA或其它标本的基因组DNA的污染。
假阳性的产生对转基因小鼠的筛选工作将是致命的。
PCR 实验应采用双复管，甚至三复管。
阳性结果最好用Southern杂交技术进一步证实。
（3） Southern blot分析：该技术虽然没有PCR技术那样敏感，且费力费时，但是避免了因污染导致假阳性结果的麻烦，可以得到目的基因整合后的基因组、整合位点数目、转基因拷贝数等的确切信息。
Southern blot的实验操作参见第一章的第八节。
2．转基因表达检测
转基因整合检测是确定目的基因是否整合到了小鼠的基因组中，同时可确定整合的位点和拷贝数，这在遗传学上是十分重要的。
而转基因表达检测是确定目的基因在转基因小鼠器官组织中表达的时空分布。
其检测包括RNA分析技术和蛋白质检测技术。
基因荧光小鼠实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景基因荧光小鼠是一种重要的实验动物模型，通过基因工程技术将荧光蛋白基因导入小鼠基因组中，使小鼠体内特定细胞或组织表达荧光蛋白，从而在活体状态下观察细胞或组织的形态、分布、功能等。
基因荧光小鼠在生物医学研究、疾病模型构建、药物筛选等领域具有广泛的应用价值。
本实验旨在通过基因工程技术构建基因荧光小鼠模型，并对其表达特性、组织分布、体内功能等方面进行研究。
二、实验材料与方法1. 实验材料（1）小鼠：C57BL/6小鼠，雌雄各10只，体重20-25g。
（2）荧光蛋白基因（GFP）：克隆自绿色荧光蛋白（GFP）基因，包含启动子、编码序列和终止子。
（3）载体：pEGFP-N1质粒，含有GFP基因。
（4）试剂：DNA限制性内切酶、DNA连接酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶、PCR试剂盒、细胞培养试剂等。
2. 实验方法（1）荧光蛋白基因克隆采用PCR技术从GFP基因克隆片段中扩增目的基因，并通过限制性内切酶进行酶切，与载体pEGFP-N1进行连接，构建重组质粒pEGFP-N1-GFP。
（2）重组质粒鉴定对重组质粒进行PCR扩增，电泳检测目的基因条带，并进行测序验证。
（3）基因转移采用显微注射技术将重组质粒pEGFP-N1-GFP注入小鼠受精卵，构建基因荧光小鼠。
（4）基因荧光小鼠培育将注射重组质粒的受精卵移植到雌鼠体内，进行胚胎培养和胚胎移植，获得基因荧光小鼠。
（5）基因荧光小鼠表型观察观察基因荧光小鼠的体貌特征、生长发育、组织分布、荧光表达等。
三、实验结果1. 重组质粒构建通过PCR扩增和酶切连接，成功构建了重组质粒pEGFP-N1-GFP，经测序验证，目的基因序列与预期一致。
2. 基因荧光小鼠表型观察（1）体貌特征：基因荧光小鼠外观与普通小鼠无异。
（2）生长发育：基因荧光小鼠生长发育正常，体重增长符合预期。
（3）组织分布：荧光蛋白基因在基因荧光小鼠体内表达，主要分布在肝脏、肾脏、心脏、肺脏等器官。
基因敲除小鼠基因型鉴定--鼠尾血压测量实验前准备2017.2.6
鼠尾基因型鉴定及血压测量前需要准备：1、耳钉（对每一只鼠进行标号）需要购买，耳钉上有编号便于对鼠进行标记；2、我们还需要四个笼位对鼠进行分笼；3、目前第一代小鼠（最早一批有8只到2017.2.11有8周龄）陆续可以进行鉴定，所以我们可以先暂时不让原代雌雄鼠进行交配；4、鼠尾基因型鉴定时需要鼠尾裂解液需要购买，剪鼠尾的剪刀需要购买。
耳钉标、手术剪、饭盒、裂解液试剂盒已购买（2017.2.6）GALNT4基因敲除小鼠子代基因型鉴定1、整理好基因型鉴定方法2、鼠尾血压测定方法。
间接法，即尾动脉容积法：也就是常说的尾压法（Tail-cuff法）。
将传感器套在老鼠尾部，通过充气、放气对尾动脉加压和释压的同时监测血流信号，得出血压值。
原理类似于袖带测压法此方法简单无创，但是测量前要对小鼠加温加压，易引起小鼠燥烦不安，导致血压反射性增高，因此需要在正式实验前训练小鼠3天左右使其适应这一应激状态。
优点：①无创，不需手术，需要测量的时候，把老鼠固定在特定装置里，套上传感器，3分钟就出结果。
尤其适用于需要重复测量的情况。
②相对于直接测量法，成本低，而且操作起来容易。
不足：①测量的是某个时间点的血压，不能得到连续的血压曲线，无法监测血压微小的变化②舒张压的准确度有待商榷。
有文献报道，将间接法和直接法比较，74%的舒张压误差大于5mmHg。
注意了，所有的间接法都有这个问题，跟设备无关。
对舒张压准确度要求非常高的话，请选用直接法。
鼠尾基因型鉴定Protocol1、用耳钉标对P1代每一只小鼠进行区分标记1、高压手术剪、饭盒，耳钉标，手术盘，实验前一天或半天拿到动物房紫外消毒2、准备1.5ml 离心管16个（每只鼠两个离心管，可以多准备几个），离心管置于冰上3、剪鼠尾cm置于冰上的离心管中，如不能及时开始鼠尾的裂解，可以将放入-20℃冰箱中4、匀浆机将鼠尾组织绞碎（四楼有匀浆机），然后加入ul鼠尾裂解液（看试剂盒说明），封口膜封好5、放入55℃的（杂交炉中旋转），孵育过夜6、取出，室温静置10-15min，使样品温度降至室温，将离心管颠倒混匀后13000rpm，室温离心15min，吸取400ul上清至另一新的离心管中7、加入等体积的异丙醇，立即温和的上下翻转，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清8、往离心管中加700ul冰冷的75%乙醇漂洗温和的上下翻转，12000rpm，室温离心5min，将上清液全部吸除9、在超净台中风干约3-5min10、用50-100ul GIBCO纯水（根据DNA量确定用水量）重悬，55℃溶解2h11、检测DNA的浓度，取100-200ng的DNA用作PCR模板。
基因敲除小鼠的PCR鉴定
基因敲除小鼠的PCR鉴定一、实验目的：通过PCR扩增程序及琼脂糖凝胶电泳方法鉴定凝血因子IX基因敲除小鼠的基因型。
二、实验原理：真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因DNAo真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备D\A的原则是既要将DNA 与蛋白质.脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS （十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使D5IA 从溶液中析出。
1.PCR原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核昔酸引物o PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：1）模板DNA的变性：模板DNA经加热至931左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2）模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至551 左右，引物与模板D¥A单链的互补序列配对结合；3）引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以d'TP为反应原料，靶序列为模板，按緘基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2〜4分钟，2〜3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍2 .琼脂糖凝胶电泳原理：在pH8・0~8.3的缓冲液中，核酸分子带负电荷，向正极移动。
由于不同大小和构象的核酸分子电荷密度大致相同，因此在自由泳动时，各种核酸分子的迁移率相似，无法分开。
然而，在浓度适当的凝胶中，由于分子筛效应，使大小和构象不同的核酸迁移率岀现差异，从而把它们分开。
基因验证动物实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景基因作为生物遗传信息的载体，在生物体的生长发育、疾病发生等过程中发挥着重要作用。
近年来，随着分子生物学技术的不断发展，基因功能验证已成为研究基因生物学功能的重要手段。
本研究旨在通过动物实验验证特定基因的功能，以期为该基因在疾病治疗和生物技术领域的研究提供理论依据。
二、实验目的1. 验证特定基因在动物模型中的表达水平。
2. 观察特定基因敲除或过表达对动物模型的影响。
3. 分析特定基因在动物模型中的作用机制。
三、实验材料1. 动物：C57BL/6小鼠（雄性，8-10周龄）。
2. 工具：基因敲除小鼠、基因过表达小鼠、野生型小鼠。
3. 试剂：引物、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、Westernblot试剂盒、细胞培养试剂等。
4. 仪器：PCR仪、荧光定量PCR仪、Western blot仪、凝胶成像系统、显微镜等。
四、实验方法1. 实验分组：将小鼠分为野生型组、基因敲除组和基因过表达组，每组20只。
2. 基因敲除和过表达：采用Cre-loxP系统对基因敲除小鼠进行基因敲除，采用慢病毒转染技术对基因过表达小鼠进行基因过表达。
3. 样本收集：分别于实验第0天、第7天、第14天、第21天收集各组小鼠的血清、肝脏和肾脏样本。
4. 基因表达水平检测：（1）荧光定量PCR：检测基因在mRNA水平上的表达水平。
（2）Western blot：检测基因在蛋白水平上的表达水平。
5. 生物学功能观察：（1）血清生化指标检测：检测各组小鼠的血糖、血脂、肝功能等指标。
（2）组织病理学观察：观察肝脏和肾脏组织的病理变化。
（3）行为学观察：观察小鼠的活动能力、体重等指标。
五、实验结果1. 基因表达水平检测：（1）荧光定量PCR结果显示，基因敲除组小鼠的基因表达水平显著低于野生型组和基因过表达组（P<0.05）。
（2）Western blot结果显示，基因敲除组小鼠的蛋白表达水平显著低于野生型组和基因过表达组（P<0.05）。
ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定
ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定周仁鹏;吴小山;王志森;葛金芳;陈飞虎【摘要】To breed and identify acid sensing ion channel 1(ASIC1) gene knockout mice, so as to lay the founda-tion for studying ASIC1 protein. The heterozygote mice were bred and reproduced. Genome DNA extracted from the murine tail was subjected to PCR test for genotype identification. Breeding and reproducing of ASIC1 knockout mice were both successful,and the genotypes of the offspring mice were heterozygous( ASIC1+/ -) ,homozygous( ASIC1-/ -) ,and wild-type( ASIC1+/ +) . Appropriate methods of breeding,reproducing and identifying can effective-ly obtain ASIC1-/ - mice.%饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应( PCR)方法鉴定子代小鼠基因型. ASIC1 基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子( ASIC1+/-)、纯合子( ASIC1-/ -)和野生型( ASIC1+/ +).【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2015(050)009【总页数】3页(P1341-1343)【关键词】ASIC1;基因敲除小鼠;PCR【作者】周仁鹏;吴小山;王志森;葛金芳;陈飞虎【作者单位】安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽医科大学药学院,合肥230032;安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽医科大学药学院,合肥 230032【正文语种】中文【中图分类】R-332酸敏感离子通道（acid sensing ion channels，ASICs）是一类胞外H+激活的阳离子通道，属于阿米洛利敏感的上皮钠通道/退变素（epithelialNa+channels/degenerin，ENaC/DEG）超家族［1］。
小鼠基因型鉴定结果
小鼠基因型鉴定结果引言基因型鉴定是通过对生物体的基因进行分析，确定其基因组的具体构成。
小鼠是一种常见的实验动物，在科学研究中广泛应用。
基因型鉴定结果可以为科学家提供关于小鼠遗传特性的重要信息，有助于深入研究小鼠的生物学特性以及与人类疾病之间的关联。
小鼠基因型鉴定方法小鼠基因型鉴定的方法有很多种，其中常用的方法包括PCR（聚合酶链式反应）、限制性片段长度多态性分析（RFLP）、单核苷酸多态性分析（SNP）等。
这些方法可以通过特定的试剂和实验步骤，对小鼠的基因进行扩增、分离、测序等操作，最终得到基因型鉴定结果。
PCRPCR是一种常用的基因型鉴定方法，通过扩增目标基因片段，从而得到足够的DNA样本进行后续分析。
PCR的原理是利用DNA聚合酶酶解DNA双链，然后引物与目标序列特异性结合，DNA聚合酶在引物的作用下合成新的DNA链。
通过多轮循环反应，可以在短时间内扩增出大量目标基因片段。
RFLPRFLP是一种通过酶切DNA片段的方法进行基因型鉴定。
在RFLP分析中，首先将DNA样本进行限制性内切酶消化，然后通过凝胶电泳将酶切后的DNA片段进行分离。
由于不同基因型的DNA片段长度存在差异，因此可以通过凝胶电泳的结果判断小鼠的基因型。
SNPSNP是单核苷酸多态性分析的缩写，是一种通过检测DNA序列中单个碱基的变异来进行基因型鉴定的方法。
SNP分析可以通过PCR扩增目标区域的DNA片段，然后利用测序技术对扩增产物进行测序，最终确定小鼠的基因型。
小鼠基因型鉴定结果的意义小鼠基因型鉴定结果对于科学研究具有重要意义。
首先，基因型鉴定可以帮助科学家确定小鼠的遗传特性，包括其携带的基因突变和变异，这些特性对于深入研究小鼠的生物学功能至关重要。
其次，基因型鉴定结果可以为研究人员提供关于小鼠模型的有效性和可靠性的信息，有助于确定小鼠是否适合作为特定疾病模型的研究对象。
最后，基因型鉴定结果还可以为研究人员提供有关小鼠与人类疾病之间的关联的线索，有助于揭示疾病的发病机制和寻找新的治疗方法。
PTP1B基因敲除小鼠的繁育及基因鉴定
PTP1B基因敲除小鼠的繁育及基因鉴定何凤霞;徐莹;徐琛【摘要】[目的]探讨PTP1B基因敲除小鼠的繁殖和鉴定方法,为进一步研究蛋白酪氨酸磷酸酶的功能奠定基础.[方法]将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合予以及纯合子3种基因型.提取子鼠鼠尾基因组DNA,利用PCR方法扩增野生型和敲除基因片段,并根据基因片段长度来判断小鼠的基因型.[结果]PTP1B基因杂合子小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,PTP1B基因缺失纯合子小鼠无繁殖能力.[结论]利用PCR方法能够准确鉴定PTP1B基因突变小鼠基因型.%[Objective] The research aimed to discuss the propagation and identification methods of PTP1B gene knockout mice and lay the foundation for further study on the function of protein tyrosine phosphatase. [ Method] The introduced heterozygous mice were fed and propagated. After successful propagation,there were threegenotypes(wild-type,heterozygote and homozygote) in the offspring. The genomic DNA was extracted from the tail tissue of each genotype mice and the wild type and knockout-gene fragment were amplified by using PCR method. And the genotypes of mice were judged according to the length of gene fragment. [ Result ] The intercrossing results of heterozygous mice with PTP1B gene were basically accordant with Mendelian inheritance laws and PTP1B gene-loss homozygous mice had no propagation ability. [ Conclusion ] The genotype of PTP1B gene mutant mice could be accurately identified by using PCR method.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)024【总页数】3页(P14907-14908,14977)【关键词】PTP1B;基因敲除;基因型鉴定【作者】何凤霞;徐莹;徐琛【作者单位】南京大学生命科学学院,医药生物技术国家重点实验室,江苏南京210093;南京大学生命科学学院,医药生物技术国家重点实验室,江苏南京210093;南京大学生命科学学院,医药生物技术国家重点实验室,江苏南京210093【正文语种】中文【中图分类】S814.1PTP1B是胞内PTPs(蛋白酪氨酸磷酸酶)的代表，是第一个被鉴定并纯化的哺乳动物PTP，通过逆转胰岛素、瘦素的信号传导通路中的磷酸化反应从而阻断胰岛素和瘦素的信号传导，因此PTP1B是体内能量平衡、胰岛素敏感性和体脂贮存的主要调节因素［1－2］。
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碱法提取小鼠总DNA及基因鉴定：
一、实验器材：加样枪（1ml、200ul、20ul、10ul）、枪头（大中小一套）、EP管（20ul、1.5ml、
10ml）、试管架、浮标、温度计、胶布、手套、记号笔、锥形瓶、称量匙、冰盒
二、实验试剂：A液、B液、引物、mix、双蒸水、三蒸水、琼脂糖、TBE（5x、1x、回收液）、
核苷酸染料、Marker
三、母液配置：
1.10M NaOH: NaOH 40g加双蒸水至90ml，待NaOH完全溶解冷却后定容至100ml
2.0.5M EDTA：EDTA.Na2盐18.61g, NaOH 1.5g, 加双蒸水至80ml,逐滴加入10M NaOH
至EDTA完全溶解后加双蒸水定容至100ml
3.1M TrisHCl（pH8.0）：Tris碱12.1g，加水至70ml，边搅拌边加入浓盐酸4ml，然后
边逐滴加入1M HCl边测PH值，直至PH升至8.0（+\-0.05），定容至100ml（pH=8.8
的TrisHCl中边加入浓盐酸边测PH值至PH=8.0（+\-0.05）为止）
四、实验步骤：
1.剪取鼠尾（约芝麻大小）储存于-20度冰箱（-20度冰箱，主要是防止DNA降解，4度不
行）
2.提取DNA：
1)配置工作液——20ml体系A液：50ul 10M NaOH 加双蒸水至20ml
8ul 0.5M EDTA
B液：800ul 1M TrisHCl（pH8.0）加双蒸水至20ml
2)加150ulA液（液体应完全浸没标本），95度水浴锅煮1.5h（将EP管插入浮标
中后用胶布缠好防止EP管在加热过程中爆开）
3)加150ulB液，混匀（上下颠倒3-5下）
4)12000r/min 4度离心5分钟（可储存于-20度冰箱）
3.PCR（冰上操作）：P1 0.5ul（P为AC3I，G为AAA）
1)配置PCR体系——15ul体系P2 0.5ul
Mix 7.5ul
三蒸水4.5ul
DNA 2ul
2)加2ul上述离心后的上清液至PCR体系，瞬离
3)PCR仪扩增，参数设定：预变性：94度——3min
变性：94度——30s
退火：55度——30s 30个循环
延伸：72度——24s
72度——5min
4度——∞
4.琼脂糖凝胶电泳：
1)制胶——2%琼脂糖凝胶配方：
总体积（ml）20 30 40 50 60 120
琼脂糖（g）0.4 0.6 0.8 1 1.2 2.4
TBE 1x（ml）20 30 40 50 60 120
Tris-base 13.6g
TBE 5x配方：硼酸 6.56g
EDTA 0.73g
双蒸水up to 250ml
Eg：50孔大胶的配置：琼脂糖2.4g 微波炉加热5min左右冷却至适温后
加染料7.5ul
TBE 1x 150ml（需考虑蒸发量）
2)加样——Marker 0.5ul，样品8ul（加样前吹打2次，从右向左加样）
3)电泳——150V，300mA，20min（加样孔在近负极侧）
5.成像分析：Image lab 新建核酸凝胶（第一项）最后一项滤光片拨至中间
放置凝胶运行保存图像编辑拍照保存
6.结果及分析：
1)AAA分子量为700+？
2)AC3I分子量为400+？
3)AAA型——只出现AAA一条带
AC3I型——只出现AC3I一条带
双阳型——两条带都出现
野生型——AAA型老鼠没出现AAA条带或AC3I型老鼠没出现AC3I条带
或双阳型两条带均未出现
4)出现浅带的原因？判定为阴性还是阳性？我觉得阴性更多。
可能是上
样量的问题，可能是剪尾太少，还有就是没跑好。
（上样量不够？）
5)出现双浅带的原因？原因类似吧（PCR扩增有问题？）
6)个别条带出现弥散或拖尾的原因？未混匀啦，加样时间太久，还没跑
就弥散啦等等（加样前未混匀？）
7.注意事项：
1)实验开始前，首先打开水浴锅进行加热，至95度时改为恒温，水浴锅中应
加双蒸水，至线上3cm左右，煮的过程中要随时观察温度及是否有EP管爆
开
2)切忌过早拔梳子
3)放置凝胶时需将胶倒过来放置（加样孔向机器内侧）。