基因工程实验报告
基因工程转化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解基因工程转化实验的基本原理和方法。
2. 掌握基因工程转化实验的操作步骤和技巧。
3. 通过实验，验证基因转化效果，为后续研究提供基础数据。
二、实验原理基因工程转化实验是将目的基因导入受体细胞的过程。
根据受体细胞的不同，转化方法也有所区别。
本实验采用农杆菌介导转化法，将目的基因导入植物细胞。
三、实验材料1. 受体植物：小麦植株2. 转化质粒：含目的基因的质粒3. 农杆菌：具有转化能力的农杆菌菌株4. 实验试剂：氯化钙、CaCl2溶液、IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）、抗菌素等5. 实验仪器：超净工作台、无菌操作箱、移液器、离心机、培养箱、显微镜等四、实验步骤1. 农杆菌活化与扩大培养（1）将冻存的农杆菌菌株复苏，在含有抗菌素的LB培养基中扩大培养。
（2）将培养好的农杆菌转移到无菌条件下，用移液器吸取适量菌液，加入含有转化质粒的LB培养基中。
（3）将菌液在摇床上振荡培养过夜。
2. 农杆菌转化（1）将小麦叶片进行表面消毒，用无菌移液器吸取适量菌液，滴在叶片表面。
（2）将叶片放入无菌培养皿中，在黑暗条件下共培养3-5天。
3. 农杆菌侵染与再生（1）将共培养后的叶片转移到含有抗菌素的培养基上，进行再生培养。
（2）待再生植株长出后，进行筛选，去除未转化植株。
4. 转化植株PCR检测（1）提取转化植株的总DNA。
（2）设计目的基因的引物，进行PCR扩增。
（3）观察PCR产物，判断转化效果。
五、实验结果与分析1. 农杆菌活化与扩大培养实验中，农杆菌菌株在LB培养基中生长良好，菌液呈均匀浑浊状。
2. 农杆菌转化共培养后，小麦叶片出现明显的不定芽，表明农杆菌已成功侵染植物细胞。
3. 农杆菌侵染与再生再生培养过程中，部分植株长出不定芽，表明农杆菌已成功转化植物细胞。
4. 转化植株PCR检测PCR检测结果显示，部分转化植株扩增出目的基因片段，表明基因转化成功。
六、实验结论本实验采用农杆菌介导转化法，成功将目的基因导入小麦植株。
基因工程复原实验报告
基因工程复原实验报告实验目的：本实验旨在通过基因工程技术复原目标基因的DNA序列，并验证复原的DNA序列是否与目标基因的DNA序列一致。
实验原理：基因工程是一项利用生物技术对基因进行修饰、编辑或复原的技术。
在本实验中，我们使用了PCR技术进行目标基因的复原。
PCR（聚合酶链反应）是一种通过DNA聚合酶酶活性实现的体外DNA复制技术。
PCR技术的步骤包括DNA变性、引物结合和扩增。
首先，将包含目标基因的DNA样品变性，使双链DNA解链成两条单链DNA。
然后，设计两对引物，其中一对称为前向引物，另一对称为反向引物。
这两对引物分别与目标基因的两个末端互补，并在PCR反应中起到定位作用。
引物结合步骤是将引物与单链DNA互补配对，形成DNA引物-模板复合物。
接下来，通过加入DNA聚合酶和适当的反应缓冲液，将复合物暴露于适宜的温度下，使DNA聚合酶在引物模板复合物的作用下开始合成新的DNA链。
这个过程是以引物为模板，由DNA聚合酶从3'端向5'方向合成DNA链，产生两条互补的新DNA链。
这个循环被多次重复进行，每次循环会使目标DNA 的数量扩增一倍。
最后，通过凝胶电泳分析PCR产物。
在凝胶电泳实验中，DNA片段会根据其大小在电场作用下向正电极方向迁移，用染料染色后可以可视化分析。
实验步骤：1. 准备实验所需试剂和仪器。
2. 提取目标基因的源DNA样本。
3. 设计并合成适合的引物。
4. 设置PCR反应条件，并进行PCR反应。
根据目标基因的大小和要扩增的目标数量合理调整PCR反应体系中的模板DNA、引物和酶的浓度。
5. 将PCR产物进行凝胶电泳分析。
将电泳所需试剂配置好，将PCR产物与DNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶中进行电泳，电泳结束后观察结果。
6. 提取目标基因的PCR产物。
7. 进行目标基因PCR产物的测序分析，验证复原的DNA序列是否与目标基因的DNA序列一致。
实验结果与讨论：根据电泳分析结果和测序分析的数据，我们可以判断复原实验是否成功，并验证目标基因的DNA序列是否与目标基因的DNA序列一致。
基因工程实验报告
基因工程实验报告一、实验目的：本实验旨在掌握基因工程的基本操作技能，了解DNA的提取、PCR扩增和基因克隆等基本实验过程，并通过实际操作检测转基因植物的存在。
二、实验原理：1.DNA提取：采用传统的CTAB法提取植物基因组DNA，目的是获得待测植物样品中的基因组DNA。
2.PCR扩增：选用合适的引物，利用PCR技术将待测基因扩增出来。
PCR反应中需要设置阳性对照、阴性对照和试验样品，以确定PCR扩增结果的可靠性。
3.基因克隆：将PCR扩增得到的目标基因与质粒载体进行连接，再将重组质粒导入大肠杆菌进行转化培养，最后通过酶切和测序等方法验证目标基因的克隆成功与否。
三、实验步骤：1.DNA提取：将待测植物样品加入CTAB提取缓冲液中，酶解并脱脂植物细胞，通过乙酰酚/氯仿法提取总DNA。
2. PCR扩增：设计合适的引物，进行PCR反应。
反应条件通常为94℃预变性5min，然后循环20-35次，每次循环包括94℃变性30s、56-68℃退火30s、72℃延伸1-2min，最后72℃延伸10min。
3.基因克隆：将PCR扩增得到的目标基因进行酶切，并与质粒载体进行连接，然后转化大肠杆菌进行培养。
通过PCR重放大和酶切验证目标基因是否成功克隆。
4.验证目标基因：通过测序等方法对目标基因进行验证，判断基因克隆是否成功。
四、实验结果与分析：1.DNA提取：从待测植物样品中成功提取到总DNA，并进行酶切分析，可见DNA带状条带。
2.PCR扩增：通过PCR扩增，得到了目标基因的特异性条带，并且也验证了阳性对照和阴性对照的准确性。
3.基因克隆：通过酶切和重放大等方法验证了目标基因的成功克隆。
4.验证目标基因：通过测序结果，确认目标基因与已知序列一致，说明基因克隆成功。
五、实验结论：通过本实验，我们掌握了基因工程的基本操作技能，成功进行了DNA提取、PCR扩增和基因克隆等实验过程，并通过测序等方法验证了目标基因的克隆成功。
基因工程实验报告
基因工程实验报告姓名：杜琳颖学号：2017051141 学院：生命科学院专业：生化与分子一、实验目的学习并掌握从目的基因克隆到蛋白质表达的实验流程及原理。
二、实验流程实验一、质粒提取载体DNA提取及酶切鉴定一、实验目的学习质粒的酶切及电泳分析。
二、实验原理质粒是一种染色体外的稳定遗传因子，具有双链闭环结构的DNA 分子。
它具有自主复制能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。
目前，经人工改造的质粒已广泛用作基因工程中目的基因的运载工具——载体。
质粒DNA 的提取是依据质粒DNA 分子较染色体DNA 分子小，且具有超螺旋共价闭合环状的特点，从而将质粒DNA 与大肠杆菌染色体DNA 分离。
现在常用的方法有：碱裂解法、密度梯度离心法、煮沸裂解法等。
实验室普遍采用的碱裂解法具有操作简便、快速、得率高的优点。
其主要原理：利用染色体DNA 与质粒DNA 的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA 的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA 氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=4.8 的乙酸钠将其pH 调到中性时，变性的质粒DNA 又恢复到原来的构型，而染色体DNA 不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA 与大分子RNA、蛋白质-SDS 复合物等一起沉淀下来而被除去。
限制性内切酶可以识别双链DNA 特定位点，并产生特异的切割，形成粘性末端或平末端，这样有利于DNA 片段再连接。
限制性内切酶对环状质粒DNA 有多少切点，酶切后就能产生多少个片段。
因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切点的数目；从片段迁移率的大小可以判断酶切片段大小的差别。
用已知相对分子量DNA 为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA 的相对分子质量。
三、实验材料、仪器及试剂（一）实验材料含载体质粒pET28a的大肠杆菌（二）试剂1、LB 液体培养基2、质粒提取试剂盒(天根生物科技)3、TBE 缓冲液4、点样缓冲液Loading buffer（10×）5、琼脂糖6、NcoⅠ酶，XhoⅠ酶(Takara)7、DNA回收纯化试剂盒（天根生物科技）（三）仪器1、Eppendorf 管、离心管架2、10，50，200，1000 μL 微量加样器3、Eppendorf台式高速离心机4、电泳仪系统5、恒温水浴箱6、凝胶成像仪7、摇床等四、实验步骤（一）质粒提取1、柱平衡步骤：向吸附柱CP3 中（吸附柱放入收集管中）加入500μL 的平衡液BL，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
分离目的基因实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过分子生物学技术，学习并掌握目的基因的分离方法，包括基因组DNA提取、目的基因的克隆、扩增和鉴定等步骤。
通过实验，使学生熟悉实验原理、操作步骤和注意事项，提高学生的动手能力和实验技能。
二、实验原理目的基因分离是指从生物基因组中提取出特定的基因片段，并进行克隆、扩增和鉴定。
实验步骤主要包括以下几部分：1. 基因组DNA提取：利用各种方法从生物组织中提取出基因组DNA。
2. 目的基因的克隆：利用PCR技术扩增目的基因，并克隆到载体上。
3. 目的基因的鉴定：通过限制性内切酶酶切、DNA测序等方法对克隆的目的基因进行鉴定。
4. 目的基因的表达：将目的基因导入宿主细胞，进行表达和功能验证。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：大肠杆菌、质粒载体、目的基因DNA模板等。
2. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂、限制性内切酶、DNA连接酶、DNA测序试剂盒等。
四、实验步骤1. 基因组DNA提取（1）取适量生物组织，按照DNA提取试剂盒说明书进行操作。
（2）提取的基因组DNA用琼脂糖凝胶电泳检测，确保DNA提取质量。
2. 目的基因的克隆（1）设计特异性引物，用于PCR扩增目的基因。
（2）按照PCR试剂盒说明书进行PCR扩增，获得目的基因。
（3）将PCR产物与载体连接，转化大肠杆菌。
（4）通过蓝白斑筛选，获得阳性克隆。
3. 目的基因的鉴定（1）对阳性克隆进行酶切鉴定，验证目的基因是否成功克隆。
（2）对阳性克隆进行DNA测序，确定目的基因序列。
4. 目的基因的表达（1）将目的基因克隆到表达载体上，构建表达系统。
（2）将表达载体导入宿主细胞，进行目的基因的表达。
（3）检测目的基因的表达产物，验证目的基因的功能。
五、实验结果与分析1. 基因组DNA提取：提取的基因组DNA在琼脂糖凝胶电泳中呈现清晰的主带，说明DNA提取成功。
2. 目的基因的克隆：通过PCR扩增，获得目的基因片段，大小与预期相符。
基因工程实验报告
基因工程实验报告摘要：提取小麦的总的RNA通过RT—PCR扩增出GAPDH截短体基因ｃDNA，ＰＣＲ扩增ｃDNA获得大量目的基因，对目的基因和表达载体p ＧＥＸ４Ｔ－１进行双酶切，通过电泳分离条带胶回收酶切的目的基因和载体，然后载体和目的基因连接构建表达载体，重组载体转入大肠杆菌top10中大量复制目的基因；提取质粒，转入大肠杆菌bl21，通过ＩＰＴＧ诱导目的基因的表达；通过ＳＤＳ染色和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交检验目的蛋白是否表达。
实验流程：小麦幼苗总ＲＮＡ提取ＲＴ＿ＰＣＲ扩增目的基因表达载体构建表达菌株转化（ｔｏｐ１０）从ｔｏｐ１０转入ＢＬ２１诱导表达Ｗｅｓｅｒｎ杂交一．目的基因的获得１．小麦总ｒｎａ的提取（Ｔｒｉｚｏｌ法）１在研钵中加入液氮，再将小麦剪成小片段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的钥匙取１００ｕｌ粉末于已加入１ｍｌ的ｔｒｉｚｏｌ的ＥＰ管中，充分混匀。
２室温放置５ｍｉｎ，然后加入２ｏｏｕｌ的氯仿，剧烈震荡。
３１２０００ｒｐｍ离心１０分钟，取上清于新的ＥＰ管，加入500ul异丙醇，温和颠倒，室温放置10分钟，12000rpm离心10分钟。
4小心弃上清，加入75%乙醇，混匀，4度12000rpm离心5分钟。
5重复46弃上清，室温干燥5-10分钟，用30uldepc溶解rna。
2.rna电泳检测是否提取出rna（10ulrna+1ul buffer）图中出现明显的亮的条带的即表示提取出rna，其中我们提取的rna比较少条带不明显，可能是操作过程中被污染，所以在提取rna是一定要注意防止rna降解，因为空气中随处都是rna酶，所以要带上手套，快速操作，尽量不要暴露在空气中，使用处理过的试管，器材。
3.RT-PCR扩增目的基因cDNA3.1 rna反转录Total RNA 6ulOligo dt primer 1ulH2o 5ul65℃5min,补加下列试剂5×reaction buffer 4ulRibolock rnase inhibitor 1ul10mM dntp mix 2ulRevertaid m-mulv reverse transcripase 1ul42℃ 60min70℃ 5min3.2 PCR扩增目的基因（表达引物扩增 25ul)2×pcr mix 12.5ul 95℃1mincDNA 1ul 95℃10s引物GAPDH1-1 1ul 58℃ 20s 35cycle引物GAPDH1-2 1ul 72℃45sH2O 9.5ul 72℃10min通过图片的条带可以看出pcr扩增的产物；通过RT-PCR获得的目的片段，为连续表达的基因片段，去除了真核基因中的内含子序列，通过重组质粒载体的构建可以直接在宿主大肠杆菌中克隆和表达。
基因工程实验报告
基因工程实验报告引言基因工程是现代生物技术的一个重要分支，通过对生物体基因的修改和重组，可以创造出具有特定功能的生物体。
本次实验旨在探究基因工程在农业、医学等领域的应用，以及可能带来的潜在风险和争议。
实验方法1. 筛选目标基因：首先，我们在实验中选择了对叶绿体功能有重要影响的一个基因作为目标基因。
2. 基因克隆：通过PCR技术，将目标基因从细菌DNA中放大，然后将其插入载体DNA中。
3. 转化目标生物体：将重组的载体DNA转入植物叶片细胞中，借助几丁质体、热激冲击等方法促使基因转化成功。
4. 筛选阳性转化率：通过筛选培养基中的抗性选择制剂，筛选出转化成功的阳性细胞。
5. 验证目标基因的表达：通过PCR扩增和基因芯片技术验证目标基因在转化植物中的表达情况。
实验结果1. 实验结果显示：我们成功将目标基因插入到植物叶片细胞的染色体中，并且获得了一定比率的阳性转化植株。
2. 鉴定转化植株：对转化植株进行证实鉴定，确保目标基因已经整合到植株基因组中，且稳定表达。
3. 表达验证：通过PCR扩增和基因芯片分析，确定目标基因在转化植物中得到了表达，并且表达量较高。
4. 性状鉴定：对转化植物进行生长发育、形态结构、生理生化等方面的综合性状鉴定，结果显示转化植物与野生型无显著差异。
讨论基因工程技术的应用：本次实验展示了基因工程技术在农业生产中的应用前景，通过将具有耐逆性、抗病虫害等功能基因导入植物，可以提高植物的产量和抗逆性。
潜在风险和争议：但是，基因工程也伴随着一系列争议和风险，如转基因植物可能对环境造成影响，转基因食品可能对人体健康产生潜在影响，因此需要严格的监管和评估。
结论通过本次实验，我们成功地验证了基因工程技术的可行性，展示了其在农业和生命科学领域的广阔应用前景。
然而，我们也要看到基因工程技术所带来的潜在风险和争议，需要谨慎评估和监管。
基因工程是一把双刃剑，只有正确使用才能实现其最大的利益。
愿基因工程技术为人类带来更多福祉。
基因工程实验报告
基因工程实验报告生命学院生技114班摘要：一、本次试验内容概况如下：（1）准备植物材料：小麦幼苗（2）对基因进行双酶切，准备的载体进行双酶切，转移Top10菌株。
（3）进行PCR检测，查看检测结果是否成功，成功则证明转入了BL21菌株，进行表达过程。
（4）进行电泳。
（目的蛋白的大小会知道，高诱导。
证明符合预期结果。
说明此区域该目的基因大量表达，其他区域目的基因没有大量表达。
）（5）用Weatern杂交去证明。
因为载体是已知的，在相应位置杂交出杂带，证明的该目的基因确实克隆到了载体上，并且蛋白质进一步进行了表达。
二、实验流程：用Trizol 法提取小麦总RNA→用RT-PCR技术扩增GAPDH截短体基因→用琼脂糖凝胶电泳进行片段胶回收→表达载体pGEX4T—1的构建→表达菌株转化→诱导表达→Western杂交关键词：RNA提取、RT-PCR扩增目的基因cDNA、琼脂糖电泳、质粒提取、表达载体的目的片段的酶切、载体和外源DNA的连接、感受态细胞的制备及转化、重组质粒的筛选、鉴定及转化、目的基因诱导表达、Western Blotting检测、DNA的传化与回收、培养基制备和细菌培养具体实验过程：一、<一>小麦总RNA提取1、材料设备：小麦幼苗、高速冷冻离心机、低温冰箱、核酸电泳设备、液氮罐、研体、剪刀、镊子。
2、试剂：（1）0.1％的DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯）（2）器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和1.5ml和0.2ml 的EP管等用纱布包裹，在0.1％的DEPC H2O中浸泡过夜（37℃），高压灭菌，80℃烘干备用。
剪刀、镊子和药匙等160℃烘烤6h以上。
（3）无RNA酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶装重蒸馏水，按0.01%的DEPC（体积/体积），处理过后高压灭菌。
（4）Trizol（5）75%乙醇：用新打开的无水乙醇和DEPC处理过的水配制75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。
基因工程实验报告
基因工程实验报告基因工程实验报告引言：基因工程是一门前沿的科学领域，通过对生物体的基因进行编辑和改造，已经在医学、农业、环境保护等领域取得了重大突破。
本实验旨在探索基因工程的原理和应用，并通过实验验证其可行性。
实验目的：本实验旨在通过基因工程技术将一种植物的抗虫基因转移到另一种植物中，以增强其抗虫能力。
通过此实验，我们希望验证基因工程在农业领域的潜力，为农作物的抗虫育种提供新的思路和方法。
实验方法：1. 选择目标基因：通过文献调研，我们选择了一种来源于大豆的抗虫基因。
2. 提取基因：使用PCR技术从大豆中提取目标基因的DNA序列。
3. 载体构建：将目标基因插入一个植物表达载体中，以便在目标植物中进行转基因。
4. 转基因：将植物表达载体导入目标植物细胞中，通过生物转化技术将目标基因导入目标植物的基因组中。
5. 筛选转基因植物：通过对转基因植物进行筛选和鉴定，确认是否成功将目标基因转移到目标植物中。
6. 抗虫性测试：将转基因植物和野生型植物分别暴露在虫害环境中，观察并比较它们的抗虫能力。
实验结果：经过实验，我们成功将大豆的抗虫基因转移到了目标植物中。
通过PCR技术和基因测序，我们确认了目标基因已经整合到目标植物的基因组中。
在抗虫性测试中，转基因植物表现出明显的抗虫能力，相比野生型植物，其受虫害程度明显降低。
讨论与分析：本实验结果表明，基因工程技术可以成功地将抗虫基因转移到目标植物中，从而提升其抗虫能力。
这为农作物的抗虫育种提供了新的思路和方法。
通过基因工程，我们可以将不同物种的有益基因导入到目标植物中，从而增强其抗虫性、抗病性等特性。
这对于农业生产的可持续发展和环境保护具有重要意义。
然而，基因工程也面临一些挑战和争议。
一方面，基因工程技术的应用需要谨慎，确保对环境和生态系统的影响可控。
另一方面，基因工程的伦理和道德问题也需要认真思考和讨论。
因此，在推动基因工程技术的发展和应用时，我们需要综合考虑科学、环境和社会的各种因素。
基因工程实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握基因工程的基本原理和操作技术；2. 熟悉基因克隆、表达、检测等实验操作；3. 培养实验操作技能和科学思维能力。
二、实验原理基因工程是利用分子生物学和生物化学原理，通过人工手段对生物的遗传物质进行改造，以达到改变生物特性、提高生物产量、生产新生物制品等目的的技术。
实验中主要涉及以下原理：1. 限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease）：能够识别特定的核苷酸序列，并在该序列的特定位置切割DNA链；2. DNA连接酶（DNA ligase）：能够将两个DNA片段连接起来；3. 转化：将外源DNA片段导入受体细胞；4. 转录和翻译：将目的基因转录成mRNA，再翻译成蛋白质。
三、实验材料1. 质粒载体：pET-28a、pUC19等；2. 限制性核酸内切酶：EcoRI、HindIII等；3. DNA连接酶：T4 DNA连接酶；4. 转化试剂：钙离子、转染试剂等；5. 实验试剂：Tris-HCl缓冲液、NaCl、KCl、MgCl2、DNA模板、引物、dNTPs、PCR试剂等；6. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、移液器、超净工作台等。
四、实验步骤1. 设计实验方案：根据实验目的，设计实验步骤，包括目的基因的克隆、表达、检测等。
2. DNA提取：采用CTAB法提取质粒DNA。
3. 限制性核酸内切酶酶切：将质粒DNA和目的基因片段分别进行EcoRI、HindIII酶切，酶切产物进行电泳鉴定。
4. DNA连接：将酶切后的质粒DNA和目的基因片段进行连接，连接产物进行电泳鉴定。
5. 转化：将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中，筛选阳性克隆。
6. 阳性克隆的鉴定：通过PCR、测序等方法对阳性克隆进行鉴定。
7. 重组质粒的提取：提取重组质粒，进行电泳鉴定。
8. 重组质粒的表达：将重组质粒转化到大肠杆菌表达系统中，进行诱导表达。
9. 目的蛋白的纯化：采用离子交换层析、亲和层析等方法对目的蛋白进行纯化。
基因工程寒假基因工程实践报告
基因工程寒假基因工程实践报告在寒假期间，我参与了一项关于基因工程的实践项目。
本报告旨在总结和分享我的实践经验，介绍我所进行的实验和所取得的结果。
通过这个实践项目，我对基因工程的概念和技术有了更深入的理解，并且学到了许多实验技巧和科学研究的方法。
一、实验目的在开始实验之前，我们首先明确了我们的实验目的。
我们的目标是探索基因工程在农业领域的应用，特别是通过基因编辑技术改良植物的性状。
我们希望通过实验验证基因编辑技术对于调控植物抗病能力的效果，并且测试不同基因编辑方法的可行性。
二、实验步骤1. 材料准备我们首先准备了实验所需的材料和设备，包括细菌培养基、基因编辑工具、目标基因片段等。
这些材料的选取和准备非常重要，必须确保其质量和纯度。
2. 基因编辑处理接下来，我们使用CRISPR-Cas9系统进行基因编辑处理。
首先设计和合成了特定的基因编辑RNA，然后将其与Cas9载体导入植物细胞中。
通过这种方式，我们实现了特定基因片段的剪接和修复。
3. 细菌培养和筛选为了验证基因编辑的效果，我们接种了含有目标基因片段的细菌，并进行了培养和筛选。
通过筛选过程，我们得到了经过基因编辑的细菌群体。
4. 植物转化和生长观察为了将基因编辑应用到植物中，我们进行了植物转化实验。
我们导入了经过基因编辑的细菌群体到植物体内，并观察了转化植株的生长情况和表型特征。
三、实验结果1. 细菌培养和筛选结果通过细菌培养和筛选，我们成功得到了经过基因编辑的细菌群体。
这些细菌在抗生素培养基上形成了明显的菌落，并且对抗生素具有抗性。
2. 植物转化和生长观察结果经过植物转化实验，我们成功导入了经过基因编辑的细菌群体到植物体内。
转化植株在生长过程中表现出了与野生型植株相比的不同性状，例如更高的抗病能力和更快的生长速度。
四、实验分析通过实验结果的分析，我们可以得出以下结论：1. 基因编辑技术可以成功应用于植物中，实现对目标基因片段的修改和修复。
2. 经过基因编辑的细菌和转化植株具有更高的抗病能力和更快的生长速度，这表明基因编辑可以用于改良植物的性状。
基因工程实验报告的实验步骤
基因工程实验报告的实验步骤引言基因工程是一种通过改变生物体遗传物质的工艺来改变其性状的技术。
基因工程在医药、农业和环境保护等领域有广泛的应用。
本实验旨在通过简单的基因工程实验，介绍基因工程的基本原理和实验步骤。
材料与方法1.实验材料：-选择性培养基：含有特定抗生素、激素或其它附加物质的培养基，以选择或鉴别特定的细胞。
-质粒：小的DNA分子，通常用来将外源基因导入宿主细胞。
-酶：用于限制性内切酶切割DNA。
-细胞培养物：用于细胞培养和基因转染。
-DNA提取试剂盒：用于提取DNA。
-PCR试剂盒：用于DNA扩增。
-DNA凝胶电泳仪：用于分离DNA。
2.实验步骤：（1）提取DNAa.收集样本，如细菌培养物或植物叶片。
将样本细胞裂解并使用DNA提取试剂盒提取DNA。
b.检测DNA浓度和质量，并分装为合适的体积备用。
（2）DNA限制性酶切割a.根据研究目的选择正确的限制性酶。
将DNA与限制性酶一同加入反应管中，按照供应商说明的条件进行酶切反应。
b.将反应产物进行电泳分离，观察并记录DNA切割情况。
（3）DNA连接a.选择合适的酶切产物进行连接实验。
将DNA和相应酶与连接试剂进行反应，在恰当的温度下进行连接反应。
b.将反应产物进行电泳分离，观察并记录连接后的DNA条带。
（4）DNA扩增a.根据连接后的DNA序列设计引物，在PCR试剂盒中将DNA进行扩增反应。
b.将PCR反应产物进行电泳分离，观察并记录扩增结果。
（5）基因转染a.准备转染细胞，并将质粒导入细胞。
按照转染试剂盒说明进行操作。
b.观察转染细胞的表型变化，并进行相关分析。
结果与讨论在本实验中，我们成功完成了DNA提取、限制性酶切割、DNA连接、DNA扩增和基因转染的操作。
通过电泳分离，我们观察到了DNA切割、连接和扩增的结果。
此外，转染细胞的表型变化也支持基因导入的成功。
实验结论本实验展示了基因工程的基本步骤，并介绍了DNA提取、限制性酶切割、DNA连接、DNA扩增和基因转染等关键技术。
基因工程酶切实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握基因工程中常用的酶切技术；2. 掌握DNA酶切实验的基本操作步骤；3. 熟悉DNA酶切反应的原理及影响因素。
二、实验原理DNA酶切实验是基因工程中的重要技术之一，通过限制性核酸内切酶（RE）对DNA 分子进行切割，产生具有特定黏性末端或平末端的DNA片段。
这些DNA片段可用于后续的基因克隆、基因表达等实验。
限制性核酸内切酶（RE）是一种能够识别并切割特定DNA序列的酶，其识别序列通常由4-6个核苷酸组成。
根据酶切位点的不同，RE可分为三类：I类、II类和III 类。
其中，II类RE是最常用的酶切酶，具有高度特异性和稳定性。
三、实验材料1. DNA模板：提取自细菌、动物或植物细胞的总DNA；2. 限制性核酸内切酶（RE）：根据目的基因序列选择合适的酶切酶；3. 10×酶切缓冲液；4. dNTPs（脱氧核糖核苷三磷酸）；5. Taq DNA聚合酶；6. 1×PCR缓冲液；7. 25℃反应体系；8. 灭菌水；9. 1.5%琼脂糖凝胶；10. 电泳仪；11. DNA回收试剂盒。
四、实验步骤1. DNA酶切反应：取2μl DNA模板，加入4μl 10×酶切缓冲液、2μl RE、2μl dNTPs、4μl Taq DNA聚合酶和2μl灭菌水，混匀后置于PCR仪上，进行酶切反应。
反应条件根据酶切酶说明书进行调整。
2. PCR扩增：取酶切反应产物，加入2μl 1×PCR缓冲液、2μl Taq DNA聚合酶、2μl dNTPs、2μl 10×PCR缓冲液和4μl灭菌水，混匀后置于PCR仪上，进行PCR扩增。
扩增条件根据目的基因序列和酶切酶说明书进行调整。
3. 琼脂糖凝胶电泳：将PCR扩增产物加入1.5%琼脂糖凝胶中，进行电泳分离。
根据DNA分子大小，调整电泳电压和时间。
4. DNA回收：将凝胶中的目的DNA片段用DNA回收试剂盒回收，得到纯化的DNA片段。
基因工程实验报告 4 1 最终版
《基因工程》实验报告一、实验目的1.学习并掌握基因工程操作技术中最常用的载体质粒DNA的提取方法。
2.学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法，检测质粒DNA的浓度与分子量。
3.了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。
4.学习利用限制性内切酶切割DNA的方法，并通过电泳检测酶切的效果。
5.学习DNA重组技术中的核心步骤，DNA片段之间的体外连接方法。
6.学习制备感受态细胞并将体外重组DNA引入受体细胞的技术。
7.掌握利用蓝白斑筛选出转化子的方法。
二、实验原理（1）质粒DNA的小量制备在碱性溶液中，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会充分分离，当加入中和缓冲液调时，变性质粒DNA又恢复到原来的构型；而线性的大分子量的细菌染色体DNA则不能复性，与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶性复合物。
通过离心沉淀，细胞碎片、染色体DNA 及大部分蛋白质等可被除去，而质粒DNA及小分子量的RNA则留在上清液中。
混杂的RNA可用RNA酶(RNaseA)消除。
再用酚/氯仿处理，可去除残留蛋白质。
（2）琼脂糖凝胶电泳与凝胶中DNA的检测琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。
不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。
琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。
SYBR GoLd 是一种极敏感的染料。
其可与DNA分子形成SYBR GoLd -DNA 复合物，在紫外光照射下发射荧光，且荧光强度与DNA的含量成正比。
用肉眼观察，可检测到20pg以上的DNA。
基因工程实习报告书
一、实习背景随着生物技术的飞速发展，基因工程已成为现代生物科技的核心领域之一。
为了更好地了解基因工程的相关知识，提高自身的实践能力，我于2021年暑假期间在XX 大学基因工程实验室进行了为期一个月的实习。
在此期间，我参与了实验室的多个科研项目，对基因工程的基本原理、实验操作以及科研流程有了更深入的了解。
二、实习目的1. 熟悉基因工程的基本原理和实验技术；2. 掌握基因工程实验操作，提高实验技能；3. 了解科研项目的开展过程，培养科研素养；4. 提高团队合作能力，增强沟通协调能力。
三、实习内容1. 实验室环境及设备介绍实习期间，我首先了解了实验室的基本环境，包括实验室布局、设备配置、安全操作规程等。
实验室配备了PCR仪、电泳仪、离心机、超纯水系统、生物安全柜等实验设备，为基因工程实验提供了良好的条件。
2. 基因工程基本原理在实习过程中，我学习了基因工程的基本原理，包括基因的克隆、表达、调控、突变等。
通过学习，我对基因的结构、功能以及基因与生物体之间的关系有了更深入的认识。
3. 基因克隆实验在导师的指导下，我参与了基因克隆实验。
实验步骤如下：（1）设计引物：根据目的基因序列，设计合适的引物，以便在PCR反应中扩增目的基因。
（2）PCR扩增：将目的基因的DNA模板、引物、dNTPs、Taq酶等试剂混合，进行PCR扩增。
（3）琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测目的基因的扩增情况。
（4）DNA回收：将电泳检测到的目的基因片段进行回收。
（5）连接：将回收的目的基因片段与载体进行连接。
（6）转化：将连接产物转化到感受态细胞中。
（7）筛选：通过抗生素筛选，得到含有目的基因的阳性克隆。
4. 基因表达实验在导师的指导下，我参与了基因表达实验。
实验步骤如下：（1）构建表达载体：将目的基因克隆到表达载体中。
（2）转化：将表达载体转化到表达系统中。
（3）诱导表达：在适宜的诱导条件下，使目的基因在表达系统中得到表达。
关于实验报告的总结(3篇)
第1篇一、实验背景本次实验是在我国某高校生物实验室进行的，旨在探究生物技术在基因工程领域的应用。
通过实验，了解基因工程的基本原理、操作方法以及在实际应用中的优势。
实验过程中，我们学习了DNA提取、PCR扩增、DNA连接、转化等关键技术，并成功构建了基因表达载体。
二、实验目的1. 掌握基因工程的基本原理和操作方法。
2. 熟悉DNA提取、PCR扩增、DNA连接、转化等关键技术。
3. 通过实验，了解基因工程在生物技术领域的应用前景。
三、实验内容1. DNA提取实验采用酚-氯仿法提取大肠杆菌DNA，通过离心、洗涤、溶解等步骤，获得纯净的DNA。
2. PCR扩增以提取的DNA为模板，设计特异性引物，进行PCR扩增。
通过优化反应条件，获得高质量的扩增产物。
3. DNA连接将PCR扩增产物与载体连接，构建基因表达载体。
实验中采用T4 DNA连接酶进行连接反应。
4. 转化将构建好的基因表达载体转化到受体细胞中，通过抗生素筛选，获得阳性克隆。
5. 阳性克隆的鉴定通过PCR、酶切等手段，对阳性克隆进行鉴定，确保基因表达载体构建成功。
四、实验结果与分析1. DNA提取通过酚-氯仿法提取大肠杆菌DNA，电泳结果显示DNA条带清晰，表明DNA提取成功。
2. PCR扩增PCR扩增产物经电泳检测，可见特异性条带，表明扩增成功。
3. DNA连接DNA连接反应产物经电泳检测，可见与载体大小相近的条带，表明连接成功。
4. 转化通过抗生素筛选，获得阳性克隆。
PCR鉴定结果显示，阳性克隆中含有目的基因。
5. 阳性克隆的鉴定通过PCR、酶切等手段，对阳性克隆进行鉴定，结果与预期相符，表明基因表达载体构建成功。
五、实验讨论1. 实验过程中，DNA提取、PCR扩增、DNA连接等步骤对实验结果至关重要。
在操作过程中，应严格按照实验步骤进行，确保实验结果的准确性。
2. 实验过程中，可能存在DNA降解、PCR扩增效率低等问题。
为提高实验成功率，可优化实验条件，如调整反应体系、反应时间等。
基因工程实验报告
基因工程实验技术实验报告百度ID：龍吟EX炫1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 实验对象实验室提供的小鼠；含pGEX 4T-1质粒的大肠杆菌BL21 (DE3)，大肠杆菌Top10。
1.1.2 试剂LB液体培养基，LB固体培养基，0.1% DEPC水，无水乙醇，氯仿，异丙醇，Trizol，Olig(dT)18，反转录缓冲液，dNTP，M-MULV反转录酶，RNA抑制剂，2×PCR Mix，Olig(dT)18引物，表达引物EB3、EB4，5×TBE缓冲液，10×Loading buffer，核酸染料Super Gel Red，琼脂糖，Bam H I，Sal I，Bam H I buffer，10×ligation缓冲液，T4 DNA连接酶，ddH2O，氨苄青霉素，IPTG，30%丙烯酰胺，1.5mol/L和0.5mol/L Tris-HCl，10% SDS，10%过硫酸铵溶液，染色液，脱色液，TEMED，Tween-20，DAB工作液、显色液，TIANGEN胶回收试剂盒，TIANGEN质粒提取试剂盒。
1.1.3 仪器高速冷冻离心机，核酸电泳设备，PCR扩增仪，恒温水浴锅，凝胶成像系统，蓝光切胶仪，无菌操作台，恒温摇床，蛋白电泳设备，电转移设备，移液枪1.2 方法1.2.1 实验材料的处理对小鼠进行处死，解剖并取出肝脏组织，备用。
1.2.2 Trizol法提取总RNA将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，取50～100mg加入已盛有1ml Trizol离心管中，轻轻混合以排除气体，再充分混匀；室温放置5min，然后加入200μl氯仿，盖紧离心管，并剧烈摇荡15秒钟；12,000rpm离心10min，取上层水相到新的离心管中，加入500μl异丙醇，温和颠倒混匀。
室温放置10min后12,000rpm离心10min；小心地弃去上清液，加入1ml DEPC水配制的75%乙醇，颠倒混匀，12,000rpm离心5min，再重复一次上述操作；弃去上清液，室温或真空干燥3～5min，后用30μl DEPC水溶解RNA。
基因工程与生物技术实习报告
基因工程与生物技术实习报告在这份实习报告中，我将概述我在基因工程与生物技术实习中所获得的经验和发现。
在实习期间，我参与了一系列实验和研究项目，涉及基因编辑、基因表达调控和遗传变异等领域。
以下将对我的实习内容进行详细描述。
实习项目一：基因编辑技术的应用在第一个实习项目中，我加入了一个基因编辑实验室。
我们使用CRISPR-Cas9系统对目标基因进行编辑。
首先，我们选择了一个模型生物，即果蝇(Drosophila melanogaster)。
通过CRISPR-Cas9技术，我们成功地敲除了目标基因并观察到相应的表型改变。
这个实验让我深入了解了基因编辑技术的原理和应用。
实习项目二：基因表达调控研究在接下来的实习项目中，我参与了一个基因表达调控的研究项目。
我们的目标是通过调控特定基因的表达来实现对细胞功能的精确控制。
为了达到这个目的，我们设计并构建了一系列基因表达调控的载体。
通过转染这些载体到细胞系中，我们成功地改变了目标基因的表达水平，并观察到了相关的细胞表型变化。
这个实习项目让我了解到基因表达的复杂性和可能的应用领域。
实习项目三：遗传变异与复杂疾病研究最后一个实习项目是与遗传变异与复杂疾病相关的研究。
我们使用单细胞测序技术对多个疾病样本进行基因组学分析。
我们的目标是发现与疾病相关的遗传变异，并进一步了解这些变异如何导致疾病的发生和发展。
通过对大量数据的分析，我们发现了一些新的候选基因，并验证了它们与特定疾病的关联性。
这个实习项目让我认识到了遗传变异与复杂疾病之间的复杂关系，并为疾病的治疗和预防提供了新的思路。
结论通过这次基因工程与生物技术的实习，我不仅获得了实验操作技能的提升，还加深了对现代生物技术的理解和应用。
在未来，我将继续深入研究基因工程和生物技术领域，为人类健康和生命质量的提升做出贡献。
这次实习经历将成为我科研生涯的重要基石，为我未来的发展提供了宝贵的经验。
通过这次实习，我不仅了解到基因工程与生物技术的最新进展，也学会了如何独立进行科学研究。
基因工程实验报告
基因工程实验报告指导老师：* * *学号：2007083*****姓名：* * *班级：07生物技术班海南师范大学生命科学学院07级2010-10-25实验一植物总DNA的提取、纯化实验目的：掌握从植物的组织（细胞）中提取DNA的方法实验原理：十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物。
在高盐浓度条件下，核酸以稳定形式与去污剂CTAB络合于溶液中，当降低溶液浓度到一定程度时，CTAB与核酸的复合物从溶液中沉淀下来，通过离心就可将该复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB溶于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB溶于乙醇中。
仪器、材料与试剂主要仪器：水浴锅、离心机、研钵、涡旋仪主要试剂和材料：CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）裂解液：2%CTAB（W/V）、20 mmol EDTA(pH8.0)、100 mmol Tris-HCl (pH8.0)、1.4 mol NaCl氯仿：异戊醇（24：1）。
异丙醇，无水乙醇。
TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl(pH8.0)、1mmol/L EDTA实验步骤1. 取2g左右的嫩叶子放入预冷的研磨中，第一次加入较多的液氮，开始先慢慢磨开后研磨中待液氮量较少时快速磨动，如发现液氮挥发完迅速加入液氮（加入时动作要轻，防止粉末溅起），重复两次。
2. 将粉末加入预冷1.5mlEP管中（约1/3）后，加入事先700ul65℃水浴的2%CTAB和30ul室温β-巯基乙醇（剧毒），轻轻摇动混匀。
放入65℃水中水浴40min，每10min取出震荡使沉淀散开。
3. 取出后冷却至室温，加入氯仿/异戊醇（24：1，V/V）至满管（加药品千万注意别让药品污染桌面及手上，有必要可带面罩），剧烈震荡后12000rpm离心10min，取上清加入500µl 氯仿/异戊醇12000rpm 离心10min。
4. 取上清至预冷600µl 异丙醇和20µl 3M KAc中置于-20℃冰箱中15-20min。
基因工程实验报告模板
《基因工程实验》报告姓名学号分院(系)生物与化学工程分院专业班级生物技术08级1班指导教师王进波一、实验项目名称：质粒载体DNA的提取二、实验时间：2011年9月日三、实验目的：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
（注：格式要求在正式报告中删除）四、实验步骤：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
（注：格式要求在正式报告中删除）五、实验结果与讨论：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
本部分内容应当是报告的重点，各位同学在写报告时，一定要将结果写清楚，无论成功还是失败，都必须展开讨论；同组的同学实验结果可以相同，但讨论是绝不可以雷同的！！！（注：格式要求在正式报告中删除）提醒各位同学（正式报告中应当删除该部分提醒内容）：（1）报告必须严格按照格式要求，打印完成。
（2）请各位同学于9月15日前完成报告，由课代表或班长将报告交到NE206办公室。
（3）严禁抄袭，每个人的讨论部分是绝不允许雷同的！一、实验项目名称：目的基因的PCR扩增二、实验时间：2011年9月日三、实验目的：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
（注：格式要求在正式报告中删除）四、实验步骤：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
（注：格式要求在正式报告中删除）五、实验结果与讨论：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
本部分内容应当是报告的重点，各位同学在写报告时，一定要将结果写清楚，无论成功还是失败，都必须展开讨论；同组的同学实验结果可以相同，但讨论是绝不可以雷同的！！！（注：格式要求在正式报告中删除）提醒各位同学（正式报告中应当删除该部分提醒内容）：（1）报告必须严格按照格式要求，打印完成。
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基因工程实验报告、小麦GAPDH截短体的重组与表达摘要：本实验通过基因工程（genetic engineering）手段对小麦总RNA进行提取、PCR扩增及与质粒载体的重组构建的操作，并将重组质粒以氯化钙法导入大肠杆菌感受态细胞，诱导目的基因表达，并在蛋白水平进行Western检测。
通过本对实验的实践，我们对基因工程技术将会有一个比较全面的认识和了解。
关键字：小麦基因；载体；感受态前言基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术。
为在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作。
它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新技术。
它克服了远缘杂交的不亲和障碍。
（一）实验过程1.实验部分流程：2．小麦总RNA提取（Trizol法）2.1 材料小麦幼苗2.2 试剂配制及器具处理① 0.1％的DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯）②器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和1.5ml和0.2ml 的EP管等用纱布包裹，在0.1％的DEPC H2O中浸泡过夜（37℃），高压灭菌，80℃烘干备用。
剪刀、镊子和药匙等160℃烘烤6h以上。
③无RNA酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃×2h）装蒸馏水，然后加入0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。
④Trizol⑤ 75%乙醇：用新打开的无水乙醇和DEPC处理过的水配制75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。
⑥氯仿(最好用新的)。
⑦异丙醇(最好用新的)。
2.3 操作步骤：①先在研钵中加入液氮，再将小麦叶片剪成小段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中（注意研磨粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%），充分混合均匀。
②室温放置5min，然后加入200µL的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。
③ 12000rpm离心10min，取上层水相于一新的EP管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入500µL异丙醇，温和颠倒混匀。
室温放置10min，12000rpm 离心10min。
④小心地弃去上清液，加入1ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12000rpm离心5min。
⑤重复步骤④。
⑥弃去上清液（尽量将残余液体除去），室温或真空干燥5～10min（注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度）。
用30µL DEPC处理过的水将RNA溶解，必要时可55℃～60℃水浴10min。
RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。
3. RT-PCR扩增目的基因cDNA3.1 试剂① RNA模板②Olig（dT）18③反转录缓冲液④dNTP⑤ M-MULV反转录酶⑥ RNA抑制剂（RNasin）⑦Premix EX Taq DNA聚合酶⑧ PCR特异引物3.2操作步骤：3.2.1 RNA的反转录采用Thermo Scientific（Fermentas）RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit Total RNA 6µL（需加入RNA约1μg）OligodT primer 1µLH2O（nuclease-free）5µL12µL65℃ 5min，补加下列试剂：5× Reaction buffer4µLRibolockRNase Inhibitor 1µL10mM dNTP Mix 2µLRevertAid M-MuLV Reverse Transcriptase 1µL20µL42℃ 60min70℃，5min，﹣20℃保存3.2. 2 PCR扩增目的基因用表达引物扩增目的基因（25µL体系）2×PCR Mix 12.5µL 95℃ 1min 95℃ 10s 58℃ 20s 72℃ 45s 72℃ 10min 16℃∞cDNA1µL 引物GA22PDH1-1 1µL 引物GAPDH1-2 1µL H 2O 9.5µL total 25µLPCR 产物经胶回收。
4．核酸琼脂糖电泳分析 4.1 试剂① TAE 缓冲液（50×）：用时需稀释50倍 ② 点样缓冲液Loading buffer （10×）：含0.25%溴酚蓝和40%甘油 ③ 溴乙啶染色液(EB)：10mg/ml 溴乙啶，注意EB 具致癌作用。
④ 琼脂糖 4.2 操作步骤4.2.1 琼脂糖凝胶的制备称1g 琼脂糖加入100ml TAE 缓冲液中加热熔化。
4.2.2 胶板制备将凝胶槽清洗干净，在一端插好梳子。
然后倒入熔化好的琼脂糖，待凝胶完全凝固后，将凝胶槽移至电泳槽（槽中已加入TAE 缓冲液），拔掉梳子。
注意：缓冲液要高出胶面2mm 。
4.2.3 点样每个样品中加入1/10体积Loading buffer （10×），混匀后小心地加入点样孔中，要避免相互污染。
4.2.4 电泳接通电源，80V 电压电泳40min 左右，当溴酚蓝到达凝胶前沿约2㎝处时停止电泳。
4.2.5 观察及照相将凝胶取出，在EB 溶液中浸泡10min 后，用凝胶成像系统照相。
5.pGEX 4T-1质粒的提取5.1 实验材料含质粒的大肠杆菌 5.2 试剂质粒提取试剂盒(天根生物科技)35cycles5.3操作步骤5.3.1培养细菌将带有质粒的大肠杆菌接种于 LB 平板培养基上，37℃培养 24 h，然后从平板上挑取单菌落，接种于 5 mL 液体培养基中，37℃培养 12 h。
5.3.2提取步骤①柱平衡步骤：向吸附柱 CP3 中（吸附柱放入收集管中）加入500µL 的平衡液 BL，12,000rpm（~13,400×g）离心 1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）②取1-5 mL过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心，12,000rpm（~13,400×g）离心 1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
③向留有菌体沉淀的离心管中加入250µL 溶液 P1（请先检查是否已加入 RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
④向离心管中加入250µL 溶液 P2，温和地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。
⑤向离心管中加入350µL 溶液 P3，立即温和地上下翻转 6-8 次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。
12,000rpm（~13,400×g）离心 10min，此时在离心管底部形成沉淀。
⑥将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱 CP3 中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。
12,000rpm（~13,400×g）离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将⑦吸附柱 CP3 放入收集管中。
⑧向吸附柱 CP3 中加入600µL 漂洗液 PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）离心 30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CP3 放入收集管中。
⑨重复操作步骤 7。
⑩将吸附柱 CP3 放入收集管中，12,000rpm（~13,400×g）离心 2min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
⑪将吸附柱 CP3 置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加 50-100µL 洗脱缓冲液 EB，室温放置 2 min，12,000rpm（~13,400×g）离心 2min 将质粒溶液收集到离心管中。
5.3.3琼脂糖凝胶电泳法检测提取的质粒DNA6表达载体和目的片段的酶切6.1试剂①BamHⅠ②SalⅠ③BamHⅠ buffer④质粒提取试剂盒6.2操作步骤6.2.1在 LB 液体培养基中接入带pGEX 4T-1 质粒的菌种，在 37℃下 200rpm 摇菌过夜。
参见实验 8 的方法提取质粒。
7载体和外源 DNA 的连接反应7.1试剂①目标 DNA 片段（PCR 扩增产物）②载体（pGEX 4T-1 酶切回收产物）③10×ligation 缓冲液④T4 DNA 连接酶⑤ddH2O7.2操作步骤取一个200µL 的 EP 管依次加入下列试剂：8感受态细胞的制备及转化8.1实验材料大肠杆菌 Top 10 或 BL21（DE3）PlysS8.2试剂① LB 培养基（液体和固体培养基配置方法参见附录 2）② 氨苄青霉素8.3操作步骤8.3.1感受态的制备①从 LB 平板上挑取单克隆于 5ml LB 培养基中，37℃ 200rpm 摇菌 12～16h。
②将活化过的菌按 1～5％的体积比接种到新的 LB 液体培养基中，37℃ 200rpm 摇菌约 2h，OD 600 约为 0.4。
③取 1.5ml 摇好的菌液于一个1.5ml 的 EP 管中，4℃ 4000rpm 离心 3min，弃上清。
④加250µL 0.1M 的 CaCl2（灭菌预冷）温和悬浮菌体，4℃ 6000rpm 离心 1min 弃上清。
⑤加200µL 0.1M 的 CaCl2（灭菌预冷）温和悬浮菌体，即为感受态细胞。
置于4℃ 存放。
12h 内使用效果最佳。
注意：无菌操作和保持低温。
培养物处于对数生长期是制备感受态细胞的关键。
如果要求高转化效率，不建议使用简单深冻保存的感受态细胞。
8.3.2转化①将盛有感受态细胞的 EP 管放置于冰上 10min，加入10µL 连接产物（若加质粒，则只需加1µL），温和混匀，冰浴 20~30min。
②42℃热激 90S。
冰浴 5~10min。
③加入800µL LB 液体培养基，37℃培养 45～60min。
4000rpm 离心 2min，弃去800µL 上清液，剩余混匀用来涂板。
④取含有 50～100g/ml Amp 的 LB 平板培养基（若进行蓝白斑筛选，在培养皿上先涂布4µL 200mg/ml 的 IPTG 和40µL 20mm/ml 的 X-Gal），涂板。