淋巴瘤基因克隆性重排检测PPT课件

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淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义
5%～15%的病例表现复杂，即使做了大量的免疫标志也可能难以鉴别其良恶性，需要进一步的手段区分。 利用分子生物学手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公认为该疾病诊断手段的重要补充。
▪ 鉴别诊断：明确是淋巴组织反应性还是淋巴细胞恶性增殖 ▪ 辅助诊断：少见类型淋巴瘤，如肝脾T细胞淋巴瘤 ▪ 亚类分析：明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖 ▪ 区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤，包括复发与继发淋巴瘤 ▪ 微小残留病灶监测，评估治疗效果或复发风险（NGS方法） ▪ 细胞免疫治疗监测，监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿瘤细胞清除效果（NGS）
分子检测 检测基因
方法
IG/TCR 基因重排
IGH，IGK， • GEL (PAGE) IGL，TRB， • ABI (CE) TRD，TRG • NGS
• GEL (PAGE)
IGHV超突变
IGH
• ABI (CE)
• NGS
基因突变
EZH2, DNMT3A, IDH2…
• Sanger • NGS
淋巴细胞克隆性基因重排检测的目标分子Ig和TCR--单一 基因重排，即恶性淋巴细胞
B-Cell Receptors (BCR) /Immunoglobulins (Ig)
T-Cell Receptor (TCR)
蛋白 Ig重链 Ig轻链 Ig轻链
基因
染色体定位
IGH
14q32
IGK
2p12
IGL
22q11
血液 肿瘤
细胞遗传学（Cytogenetics）
• 荧光原位杂交（FISH）
辅助诊断
预后分析 指导用药 MRD检测
Focus On Molecular Diagnosis . | Leading Precision Medicine
分子检测-淋巴瘤
Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962.
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van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
结果分析
▪ （单）克隆性：扩增产物电泳在预期大小范围内一或双条带（峰） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为单一性。表明组织中存在单克隆性增生的细胞群。
从Biomed-2到Invivoscribe-唯一授权
Invivoscribe 公 司 的 IdentiCloneTM 系 列 产 品是基于PCR的克隆性检测产品，是BIOMED2唯一授权的商品化试剂，获得CE认证，以其 高度的灵敏性和特异性，成为可疑淋巴组织增 生性疾病克隆性分析的“金标准”。
IdentiCloneTM系列产品具有精心优化的标 准化试剂组成，具有最丰富的阳性对照，涵盖 各种T\B细胞重排类型，经过了超过400例的临 床样本验证，按照临床产品的标准进行质检和 质控，反应体系稳定，结果可靠。
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基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公司
基于PCR检测技术，简便、快 速、成本较低，所需DNA量少， 对DNA质量要求不高。灵敏度 高于10%，需配制胶，安全清 洁性较差。
基于PCR-毛细管电泳检测技术， 敏感性高，检测周期较长，结 果更加直观可靠
目前市场最被接受的检测方法。 灵敏度无法满足MRD要求，难 以定量和得到序列。
淋巴瘤基因克隆性重排和 IGHV体细胞超突变检测
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血液肿瘤（常规肿瘤）检测方案-MICM综合分子检测 (旌准方案)
形态学 （Morphology）
免疫学 （Immunology）
• 免疫组化（IHC） • 流式细胞术（FCM）
分子生物学 （Molecular）
• 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) • 毛细管凝胶电泳(CE) • 荧光实时定量PCR(RTQT-PCR) • 一代测序(Sanger) • 二代测序(NGS)
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淋巴细胞克隆性基因重排检测产品特点
1
BIOMED-2唯 一授权的商品
化试剂
2
3
4
5
全面涵盖各种 T\B细胞重排类
型
超过400例的临床样本验 证，反应体系稳定，结
果可靠
可疑淋巴组织增 生性疾病克隆性 分析的“金标准”
最丰富的阳性 对照
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新兴技术，更高灵敏度（10-6），更 高分辨率，更高的通量，更广泛的应 用。但成本高，仪器贵，操作复杂， 时间长。
（IGH, IGK,）（IGL）（TRB ,TRD,）（ TRG）BIOMED-2方 案，唯一授权）
IGHV（依据ERIC指南）
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IGH, IGK, TRB , TRG IGHV
▪ 多克隆性：扩增产物电泳呈弥散涂抹状(smear)或阶梯状(高斯分布） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为多样性。表明组织中不存在单克隆性增生的细胞群。
▪ 无扩增产物：PCR扩增后电泳未见产物 送检组织中的细胞，抗原受体基因无重排（NK，非淋巴细胞）或DNA质量过差。
marker P M H2O S1 S1 S2 S2
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蛋白 TCRα TCRβ TCRγ TCRδ
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基因
TRA TRB TRG TRD
染色体定位 14q11 7q32 7p15 14q11.2
多样性与克隆性
正常淋巴细胞成熟过程/良性病变ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ多克隆性
多种形式的基因重排
恶性淋巴瘤发生的过程
单克隆性
突出单一形式的基因重排
IGH, TRB & TRD: V, D, and J IGK, IGL, and TRG: V and J regions
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Biomed-2研究项目
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Biomed-2研究项目（IGH为例）
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van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
Biomed-2研究项目（IGH为例）
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