锌对不同动物金属硫蛋白表达的影响
微量元素锌的吸收、代谢及金属硫蛋白基因表达
Ｔｈ ｌ ｔ ｎ ｈ ｐ Ｂｅ ｗｅ ｎ ｔ ｂ ｏ ｐ ｉ ｎ ａ ｄ Ｍ ｅ ａ ｏ ｉｍ ｆ Ｚｉ ｃ ａ ｄ Ｍ Ｔ ｎ ｐ ｅ ｓｏ ｅ Ｒｅ ａ ｉ ｓ ｉ ｔ ｅ ｈｅ Ａ ｓ ｒ ｔｏ ｎ ｏ ｔｂ ｌ ｓ ｏ ｎ ｎ Ｇｅ ｅ Ｅｘ ｒ ｓ ｉ ｎ
摘 要 ： 文 通 过 分析 锌 吸 收 、 谢 与 金 属 硫 蛋 白 （ ） 关 系， 明 锌 可 以 直接 调 控 空 属 硫 蛋 白基 因表 达 ， 金 属 本 代 ＭＴ 的 表 而
硫蛋 白的生物合成谤导也将调节体 电锌的吸收 、 Ｉ， 代＿ 维持 雄内锌的穗态， ｊ ｝ 为从 分子 水平研究锌的营养挺供参考 。 关键词 ： 锌；奎属琉蛋 白（Ｉ ） ／Ｔ ；基因表达 ＇ ，
传统营养研究中所使用的营养指标几乎都是黑箱指标。如 何打破黑箱 ． 进一步揭示体内的动态变化 ． 明确养分 的吸收、 代 谢 规 律 等 就 迫 切 需 要 利 用 分 子 生 物学 技 术 来 解 决 营 养 学 上 的 相美问题 。微量元素锌 是人和动 物所必需 的一种微量元 素 ， 锌 几乎涉及新陈代谢 的每 一方 面 ， 因此对锌 的吸 收 、 谢机制研 代 究极其重要 有关锌 的研究报道较多 ， 在深人探讨锌 的吸 收、 代
日循环高温对肉鸡组织锌离子浓度及金属硫蛋白含量的影响
动
物
营
养
学
报
肉鸡 １ｍｉ ｎ内的呼 吸 次数 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 试 验 设 计 与饲 养 管 理 ．
表 １ 基础饲 粮组成及 营养水平 （ 物质 基础 ） 干
Ｔａ ｅ ｌ Ｃｏｍｐｏｓｔｏｎ ａ ｔｉｎｔｌ ｖ ｌ ｂｌ ｉ ｉ ｎｄ ｎｕｒｅ ｅ ｅ ｓｏｆ
行 。饲 粮 参 照 Ｎ Ｃ（ ９ ４）肉 鸡 饲 养 标 准 配 制 。 Ｒ １９ 基 础 饲 粮组 成 及 营养 水 平 见 表 ｌ 。试 验 开 始 前 对 饲 粮 随 机 采 样 ２ｋ ｇ左 右 ， 用 四 分 法 取 出 约 并 ２ ０ｇ 用 国 标 ＧＢ Ｔ １ ８ ５ ２ ０ ５ ， ／ ３ ８ － ０ ３推 荐 的 原 子 吸
蛋 白基 因 ｍＲ ＮＡ 表 达 量 （ ０ ０ ） 高 温 ４ｄ可 显著 降低 肉鸡肝 脏 和 十 二 指 肠 金 属 硫 蛋 白含 量 Ｐ＜ ． ５ ；
及其基 因 ｍ Ｎ Ｒ Ａ表达量（ ０ ０ ） 高温 ８ｄ均恢 复至正 常水 平， Ｐ＜ ．５ ， 但显 著降低 了肉鸡胰腺金 属 硫 蛋 白含 量 （ Ｐ＜０ ０ ） 适 温组 与 配 对 组锌 离子 浓度 、 属硫 蛋 白含 量及 金 属 硫 蛋 白基 因ｍＲ ．５ ； 金 ＮＡ
Ｖ ｌ０ ０ ， Ｂ ２ ． ３ｍｇ 生物素 ｂｏ ｎ０ ２ｍｇ 泛 酸钙 ｃ ｌｕ ａ ｔ— ｉｔ ． ， ｉ ａ ｉｍ ｐｎｏ ｃ
ｔ ｎ ｔ １ ， 酸 ｎ ｏｉｉ ６ ， 酸 ｆｌ ｃｄ１ ５ｍｇ ｈ ａ ６ｍｇ 烟 ｅ ｅ ｉ ｔ ｃ ０ｍｇ 叶 ｃ ｎ ｏｉ ａｉ ． ， ｃ
季 持 续 高温 ， 究 日循 环 高 温 对 肉鸡 肝 脏 、 腺 及 研 胰
金属硫蛋白对仔猪抗氧化功能及SOD基因表达的影响
金属硫蛋白对仔猪抗氧化功能及SOD基因表达的影响【关键词】金属硫蛋白；抗氧化酶；基因表达；仔猪【Abstract】 AIM: To inverstigate the effects of exogenous Znmetallothionein (ZnMT) on antioxidative function and gene expression of SOD in weaning piglets. METHODS: Eighteen piglets(Duroc×Landrace×Yorkshire) were selected and pided into 3 groups (1，2 and 3) randomly. The piglets were sport to produce stress. ZnMT of piglet liver dissolved in physiological saline were then injected into the piglets of group 1， 2 and 3 with the concentrations of 0， 0.8，1.6 mg/kg， respectively. Three and 6 h later， 3 piglets were selected from each group randomly and slaughtered to get liver samples. The biochemical indexes related to antioxidation and the level of SOD gene expression in liver were determined. RESULTS: After ZnMT injection， the activities of SOD and GSHPX increased significantly (P<0.05)， the content of MDA decreased significantly (P<0.05)， and the level of antireactive oxygen species and antisuperoxide anion had the trend of improvement. Six hours after ZnMT injection， the level of SOD gene expression in group 2 and 3 increased significantly as compared withthat in group 1 (P<0.05). The level of SOD gene expression in group 2 and 3 at 6 h enhanced significantly as compared with that at 3 h. Thus，our data indicated that ZnMT treatment stimulated SOD mRNA expression in a time and dosedependent manner. CONCLUSION: Activity of antioxidase can be increased by supplement of ZnMT， thereby improving the power of antistress.【Keywords】 metallothionein; antioxidative enzyme; gene expression; piglet【摘要】目的：用仔猪作模型，研究经锌元素诱导的外源性金属硫蛋白（ZnMT）对机体抗氧化功能和超氧化物歧化酶(SOD)基因表达的影响. 方法：选用杜长大杂交仔猪18头，随机分为3组(1，2和3）. 分别肌肉注射经生理盐水溶解的猪肝ZnMT 0 mg/kg (1组），0.8 mg/kg （2组）， 1.6 mg/kg （3组），让仔猪运动产生应激. 注射MT后3 h和6 h，分别从每组取3头仔猪屠宰取肝脏，测定肝脏中与抗氧化有关的生化指标，检测肝脏SOD基因表达水平. 结果：在应激条件下，补充外源性ZnMT一段时间后，仔猪肝脏SOD，GSHPX活性显著升高(P<0.05)，MDA含量显著降低(P<0.05)，肝脏抗活性氧和抗超氧阴离子水平也有提高的趋势. 在注射ZnMT后6 h，0.8 mg/kg，1.6 mg/kg组仔猪肝脏SOD基因表达水平比对照组显著提高(P<0.05). 0.8 mg/kg组和1.6 mg/kg组6 h SOD基因表达水平比3 h显著增加，表明MT对SOD基因表达的诱导与时间和剂量关系密切. 结论：补充外源性ZnMT可提高应激机体的抗氧化物酶活性，从而提高机体的抗应激能力.【关键词】金属硫蛋白；抗氧化酶；基因表达；仔猪0引言应激可使机体脂质过氧化反应增强，继而通过产生自由基造成组织损伤，致生物体病变，生产力下降，甚至死亡［1］. 金属硫蛋白（metallothionein，MT）是分子量低、富含半胱氨酸的金属结合蛋白. 研究表明，MT具有显著的清除自由基、抗脂质过氧化和增强机体免疫力的作用［2-3］. 因此，MT通过清除自由基，可增强抗氧化酶的活性，阻断脂质过氧化链式反应，减少膜脂质过氧化损伤，减少DNA损伤. 因而将MT应用于动物，完全有可能达到缓解氧化应激，提高生长速度，减少疾病的发生，减缓鲜肉氧化速度，延长动物利用年限，提高经济效益的目的. 但以往有关金属硫蛋白的抗氧化、抗应激研究以内源性为主，而且大都仅从抗氧化酶的活性变化来探讨金属硫蛋白清除自由基、抗氧化的作用. 有关MT在猪体内的研究鲜见报道. 基于此，我们以杜长大杂交仔猪为对象，通过注射外源性ZnMT，测定肝脏与自由基有关的生化指标以及肝脏中SOD基因表达水平，从蛋白和基因水平探讨外源性ZnMT在应激状态下对抗氧化酶的影响.1材料和方法1.1材料选用胎次、日龄相同并且体质量相近的杜长大三元杂交雄性仔猪18头，14 d一次性断奶，单栏饲养，自由采食和饮水. 试验前体质量（4.42±0.24）kg. 屠宰前1 d停食，不断水. 梯度PCR仪：德国Eppendorf生产，型号为5331055888；稳压稳流电泳仪：北京六一仪器厂生产，型号为DYY6B；凝胶成像系统：美国UVP Biolmaging System生产，型号为GDS8000；紫外分析仪：北京六一仪器厂生产，型号为WD9403B；紫外分光光度计：德国Eppendorf生产，型号为603105430；超低温冰箱：青岛海尔股份有限公司生产，型号为BD396LT65W；台式离心机：德国Eppendorf生产，型号为Centrifuge 5415D；低温离心机：德国Eppendorf生产，型号为Centrifuge 5810R；微波炉：青岛海尔股份有限公司生产，型号为HR6702DW. 猪肝ZnMT：本课题组提取的产品；BIOXYTECH SOD525TM试剂盒：购自OXIS公司；谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)活力测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒、活性氧(ROS)测定试剂盒、超氧阴离子(SOA)自由基测定试剂盒：购自南京建成生物工程研究所；ISOGEN总RNA抽提试剂盒：购自日本基因株式会社；RTPCR试剂：购自Amersham Pharmacia Biotech公司；琼脂糖及Tris：购自Roche公司；Gene RulerTM 100 bp DNA Ladder：购自MBI Fermntas公司.1.2方法1.2.1试验设计将18头供试仔猪，随机分为3组，每组6头. 驱赶仔猪使其产生应激，然后3组分别肌肉注射经生理盐水溶解的猪肝ZnMT 0 mg/kg（1组），0.8 mg/kg（2组），1.6 mg/kg（3组）. 在注射MT后3 h和6 h，分别从每组随机抽取3头仔猪，从前腔静脉放血屠宰，取肝脏，测定肝脏中与抗氧化有关的生化指标，检测肝脏SOD基因表达水平.1.2.2样品采集解剖时取两份1 g左右的肝脏迅速用无菌锡铂纸包好并编号于液氮中速冻，再转移至-70℃冰箱中以备总RNA的抽提和肝脏上清液的制备.1.2.3肝脏上清液的制备取0.2 g左右经低温保存的肝组织在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称质量，放入玻璃匀浆管中，然后用移液管量取预冷的生理盐水(8.6 g/L)，生理盐水的体积是组织块质量的9倍. 将匀浆管下端插入盛有冰水混合物的器皿中，上下转动捣杆数10次，充分研碎，使组织匀浆化. 将制备好的100 mL/L的匀浆在4℃，3000 r/min离心15 min，取上清液.1.2.4肝脏中与抗氧化有关的生化指标的测定肝脏上清液中SOD活性，GSHPX， MDA， ROS和SOA自由基水平的测定按各试剂盒说明书操作.1.2.5基因表达分析采用半定量RTPCR方法，以3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内标［4］.1.2.5.1总RNA的提取采用ISOGENLS总RNA抽提试剂盒，按说明书操作，提取的总RNA经紫外分光光度计测得A260/A280在1.8~2.0之间，可作为逆转录反应的模板.1.2.5.2引物设计根据网上(/)发表的基因序列（SOD：E06791， GAPDH：AF017079 ）采用引物设计软件进行设计，SOD上游引物：5′ ATTCATGGCGACGAAGGC 3′，下游引物：5′ TCAATTACACCACAGGCCA3′，扩增长度453 bp；内标GAPDH上游引物5′ TGAACGGATTTGGCCGCAT3′，下游引物5′ TTCTCCATGGTCGTGAAGA3′，扩增长度297 bp；引物均由日本株式会社DNA合成事业部合成.1.2.5.3RTPCR反转录聚合酶链式反应(RTPCR)用ReadtoGo RTPCR beads试剂采用一步法进行.1.2.5.4RTPCR产物定量取15 μL PCR扩增产物于20 g/L琼脂糖凝胶上电泳（含溴化乙锭），在凝胶成像系统下观察结果并拍照. 采用图像处理系统对PCR产物条带进行密度扫描，以3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为RTPCR的质控，将待测SOD基因表达与其对应GAPDH表达的比值进行比较后得出一相对量，从而计算出各组的基因表达量的相对变化量.统计学处理：计量数据以x±s表示. 采用SAS6.12统计软件进行方差分析(GLM过程)，并用Duncan法进行多重比较.2结果2.1MT对仔猪肝脏抗氧化能力的影响仔猪应激时注射外源性ZnMT一段时间后，仔猪肝脏SOD，GSHPX活性升高，MDA含量降低，抗活性氧和抗超氧阴离子水平也有提高的趋势. 尤其在注射ZnMT后6 h，肝脏SOD，GSHPX活性，MDA含量各组比较差异具有统计学意义(P<0.05，表1).同时由表1知，注射相同剂量ZnMT，6 h SOD，GSHPX活性比3 h提高，且Ⅲ组6 h SOD，GSHPX活性比3 h提高(P<0.05)，MDA含量降低(P<0.01). 各组肝脏抗活性氧和抗超氧阴离子水平6 h与3 h相比也有提高的趋势.表1不同剂量的MT 对仔猪肝脏中与抗氧化有关的指标的影响2.2MT对仔猪肝脏SOD基因表达水平的影响由表2和图1，2可知，注射MT后3 h各组相比，肝脏SOD基因表达水平差异不显著(P>0.05). 注射MT后6 h各组相比，Ⅲ组肝脏SOD基因表达水平比Ⅰ组显著提高(P<0.05). 注射相同剂量ZnMT 在不同的时间，第1组3 h与6 h肝脏中SOD基因表达水平相比差异不显著(P>0.05). 第2组和第3组6 h肝脏中SOD基因表达水平比其3 h的显著提高(P<0.05).表2不同剂量的MT对仔猪肝脏中SOD基因表达水平的影响3讨论正常情况下，机体存在一个完整的包含酶系和非酶系的抗氧化系统，抗氧化酶有SOD，GSHPX等，非酶系有VE、还原性谷胱甘肽等，均有清除自由基的作用. 在他们的协同作用下，使体内过多的自由基转变为无害的水，起到抗氧化的作用. 羟自由基是最活跃，也是毒性较大的含氧自由基. 由于至今体内尚未发现羟自由基的清除酶系，MT有效地抗羟自由基作用显得重要. Adel等［5］比较了MT与谷胱甘肽抗羟自由基保护DNA的作用，发现当MT浓度为13 μmol/L时，DNA的降解几乎完全被抑制，而10 mmol/L的GSH才能达到此作用. 而且在某些应激情况下，GSH 水平下降，而MT合成增加. 本试验结果表明，注射外源ZnMT后，在一定的时间和浓度下，可显著提高仔猪肝脏SOD，GSHPX的活性，降低肝中MDA的含量. 肝脏抗活性氧和抗超氧阴离子的水平也有提高的趋势，从而提高机体的抗应激能力.本结果同时表明，仔猪应激时，外源性补充ZnMT一段时间后，SOD mRNA表达水平提高，SOD的活性增加. Sugino等［6］研究小鼠的黄酮细胞发现SOD活性还受精胺的调控，这种调控是发生在转录水平. ZnMT中半胱氨酸含量丰富，在巯基化合物生成的同时，并有精氨酸残基，这样提供了SOD活性增强的物质基础.【参考文献】［1］祁克宗.内毒素性微循环山羊氧自由基代谢的研究［J］.中国农业科学，1999，32(3): 90-95.［2］ Zhou ZB. Effect of Zn7metallothionein on oxidative stress in liver of rats with severe thermal injury［J］. Acta Pharmacol Sin，2003，24(8): 764-760.［3］郑军恒，李海洋，茹刚，等.金属硫蛋白清除羟自由基的研究［J］.北京大学学报:自然科学版，1999，35(2):573-576.［4］ Hou DX， Fukuda M， Fujii M， et al. Transcriptionalregulation of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate: quinone oxidoreductase in murine hepatoma cells by 6(methylsufinyl)hexyl isothiocyanate， an active principle of wasabi (Eutrema Wasabi Maxim.)［J］. Cancer Lett， 2000， 161: 195-200.［5］ Adel J， de Ruiter N. Inhibition of hydroxyl radicalgenerated DNA degradation by metallothionein［J］. Toxicol Lett， 1989，47: 191-196.［6］ Sugino N， Telleria CM. Differntial regulation of copperzinc superoxide dismutase and manganese superoxide dismutase in the ratcorpus luteum induction of manganese superoxide dismutase messenger ribonucleic acid by inflammafory cytokines ［J］. Biol Reprod， 1998，59: 599-605.。
金属硫蛋白基本知识
金属硫蛋白1、MT命名及定义根据与 MT结合的金属的不同，对只舍一种金属，例如 Cd或 Cu等，可分别定名为镉金属硫蛋白或铜金属碗蛋白等；还可根据结合金属的摩尔含量写成Cd7–MT、Zn7–MT等 (表示每分子结合7个分子Cd或Zn)。
对于含一种以上金属，如同时含 Cd和Zn时，可写成Cd，Zn-MT。
对其分子结构上的差别，可用罗马数字和小写字母标出，例如MT-Ⅱ、MT-Ⅰ、MT-Ⅱa等。
经典MT定义：根据金属硫蛋白命名委员会（Thecommitteeon the Nomenclature of Metallothionein）的建议，1988年，Kagi将具有以下特征的蛋白质或多肽定义为MT（Kagi & Schaffer, 1988）。
1.低分子量，一般为6,000－7,000道尔顿，含60-63个氨基酸残基；2.高金属含量，每分子蛋白质可结合7个二价金属离子，或多至18个一价金属离子；3.特有的氨基酸组成，无芳香族氨基酸及组氨酸；4.富含Cys残基(约23-33%)，无二硫键；特征的氨基酸序列，Cys残基在氨基酸序列中占据相当保守的位置；5.所有的Cys残基均以还原态存在；并通过巯基以硫酯键结合金属离子；从而具有金属巯基化合物的特征吸收光谱。
实际上，这只是对经典MT的一个定义。
现在MT家族所包括的成员远远超出以上定义的范围。
※ Cys半胱氨酸2、MT的分类1.1 根据 MT的结构差异，一般将其分3类第1类：MT的氨基酸序列中的半胱氨酸位置与最先从马肾中分离的 MT的氨基酸序列中的半胱氨酸位置紧密相关的多肽。
所有哺乳动物的 MT都属于这一类。
其它来源的 MT只要其基本结构与哺乳动物的MT相似亦归这一类。
第2类：MT氨基酸序列结构中的半胱氨酸位置与马肾 MT关系较远，与哺乳动物 MT没有或很少有相似的进化关系。
如酿酒酵母和某些高等植物的 MT属于这一类。
第 3类：非典型的 MT。
是一类由非转译合成的金属硫醇盐多肽，由γ-谷氨酰半胱氨酰基单元组成。
金属硫蛋白在动物营养学上的应用
金属硫蛋白在动物营养学上的应用吴力专;李丽立;张彬【摘要】综述了金属硫蛋白(MT)在动物的健康、疾病以及生长性能等方面的重要作用.MT能参与畜禽体内微量元素Cu、Zn等的代谢,可利用MT来评价动物机体Zn的营养状态;MT具有抗应激的作用;MT有重金属解毒作用,在高铜、高锌日粮的促生长机理中发挥重要作用;MT促进动物机体生长发育;此外,MT在Se对动物机体的各种生理作用中发挥重要作用.【期刊名称】《长江大学学报（自科版）农学卷》【年(卷),期】2006(003)001【总页数】5页(P156-160)【关键词】金属硫蛋白(MT);微量元素;高铜高锌日粮;硒【作者】吴力专;李丽立;张彬【作者单位】长江大学动物科学学院,湖北,荆州,434025;中国科学院亚热带农业生态研究所,湖南,长沙,410125;湖南农业大学动物科技学院,湖南,长沙,410128【正文语种】中文【中图分类】R151.2;S811.3金属硫蛋白(Metallothionein，MT)是一类广泛存在于生物体内的低分子量富含半胱氨酸、能被金属结合的蛋白。
自1957年美国哈佛大学的Marsgoshes和Vallee从马肾中首次发现MT以来，人们对不同来源的MT进行了系统的研究[1]。
MT的生物学意义涉及生物机体微量元素贮存运输和代谢、重金属解毒、拮抗电离辐射、清除自由基以及机体生长发育、生殖衰老、肿瘤发生、免疫应激反应等各个方面，其研究涉及农业、医药保健、生物工程、环境保护等各个领域[2]。
以前许多研究大多数着眼于MT对机体的金属自身平衡或解毒方面的作用，而分子生物学则侧重于对MT基因表达调控的研究，最近MT的研究又有了新的进展，一个崭新的研究领域—金属硫蛋白在动物营养学上的应用诞生了，由于这方面的研究与人类生活质量息息相关，因而成为当今MT在动物营养学研究的一大亮点。
1 畜禽体内MT的代谢过程激素、干扰素和多种炎症因子及金属离子等都能诱导MT基因转录合成大量的MT-mRNA。
锌的营养作用及其在反刍动物中的应用
日增重 （ADG） 和饲料利用率得到显著改善 （P ＜ 0.05），且推荐在产毛期，羊日粮干物质中锌的水平 以 52.3 mg/kg 为宜。 Mandal 等（2007）通过对公牛 饲料中添加丙酸锌和硫酸锌研究发现，饲料中添加 两种锌源中的任何一个都能提高饲料的消化率，均 能促进饲粮中钙、磷等矿物质的吸收，丙酸锌中的 锌元素在肝脏、脾脏和肾脏等部位的沉积更多。 韩 新燕和郭勇（2000）研究报道，奶牛的味觉和食欲受 饲料中锌的影响，锌与味觉素有关，味觉素是影响 口腔黏膜上皮细胞结构功能的重要物质，当奶牛缺 锌后，口腔黏膜增生，造成食物和味蕾的接触受阻， 加上蛋白质的分化和消化酶的活性降低，味蕾的结 构和功能发挥受影响，从而使味觉退化甚至丧失而 影响食欲。 郑颖（1999）研究发现，缺锌会引起母牛 饲料利用率降低、绒毛质量下降。 2.3 锌对反刍动 物生 长 的 影 响 锌 对 动 物 的 生 长发育有促进作用，能够提高动物食欲，增进消化 机能，提高饲料利用率。 Puchala 等（1999）研究表 明，在 1 周龄羊饲粮（日粮锌水平 为 20 mg/kg）中 添加 1 g 的蛋氨酸锌可以提高平均日增重（ADG） 和马海毛的产量，另外，还能提高羊的血浆锌水平 且不影响血浆蛋氨酸的浓度。 朱世海（2010）在羔 羊饲养试验中指出， 蛋氨酸锌的添加水平为 0.2 g/d·只时 ，育肥羔羊的 增重、日增 重、料肉比、钙 、 磷、粗蛋白质的表观消化率最高。卢春莲等（2001） 研 究 表 明 ， 在 奶 牛 饲 料 中 添 加 20、40、60 mg/kg 锌，干物质、粗蛋白质、粗脂肪、酸性洗涤纤维、中 性洗涤纤维在全消化道的表观消化率呈不同程度 增加的趋势，但差异不显著（P ＞ 0.05）。 董玉珍等 （1998）研究报道，在绵羊饲料中添加锌可激 活多 种酶，参与体内物质和能量的代谢过程，调节机体 机能，提高绵羊生长阶段的增重。 Spears 等（1994） 研究报道， 肥育杂交牛日粮中补充 25 mg/kg 锌， 可以提高日增重和饲料利用率， 并使肉质得到改 善。 姚军虎和刘进（1996）报道，日粮中添加 10.1 mg/kg 的锌， 能够促进青年牛的生长和饲料的有 效利用。俞渭江等（1986）研究报道，在羔羊日粮中 添加适量的锌，能有效刺激羔羊生长。 2.4 锌对反刍动 物繁 殖 性 能 的 影 响 锌 通 过 影 响性腺活动和性激素的分泌而对动物的性器官正 常发育等表现出重要的作用， 它能直接作用于生 殖器官，影响组织细胞的功能形态，从而影响生殖
锌金属硫蛋白对小鼠免疫功能的影响
锌金属硫蛋白对小鼠免疫功能的影响
吴烽;董胜璋;林忠宁;杨巧媛
【期刊名称】《卫生毒理学杂志》
【年(卷),期】2002(16)2
【总页数】3页(P91-93)
【关键词】锌;锌金属硫蛋白;细胞免疫;白细胞介素;体液免疫;动物实验
【作者】吴烽;董胜璋;林忠宁;杨巧媛
【作者单位】增城出入境检验检疫局;中山医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R392.3
【相关文献】
1.二甲基苯蒽对金属硫蛋白基因敲除小鼠免疫功能的影响 [J], 雷志明;阮明;邱飞婵;魏雪涛;李雪婷;贾凤兰;尚兰琴;张宝旭
2.金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠海马锌和铜含量的影响 [J], 马飞煜;张艳梅;王虎;田贤先
3.缺锌对生长期小鼠肾脏金属硫蛋白-1表达的影响 [J], 许长录;田娟;李洪秀;郭敏
4.锌、硒对镉中毒小鼠金属硫蛋白合成及脂质过氧化损伤的影响 [J], 聂晓兰;林波;温坤;张永雪
5.钙、锌对小鼠肝金属硫蛋白合成及肝锌、钙水平的影响 [J], 戴建国;杨森;陈景衡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
硫酸锌对肉兔血液生理生化指标的影响
1． 1 材料 伊拉肉兔： 陕西澄城同腾生物有限公司兔场
提供。 UＲIT － 870 型半自动生化分析仪： 桂林优利
特医疗电子有限公司。 可调微量移液器 法国 Gilson SAS。
试剂盒： 北京生化康泰临床试剂有限公司。 其它试剂均为分析纯。 1． 2 血样的制备［8］ 将 40 只健康成体肉兔随机分为 8 组，每组 5 只，其中 一 组 为 对 照 组，其 余 7 组 参 考 Onosaka 等［9］的方法进行，给肉兔隔日腹部皮下注射已灭 菌的硫酸锌，注射次数分别为 l 至 7 次，每次剂量 呈梯度上升，依次为 10 mg·kg － 1 ，20 mg·kg － 1 ， 50 mg· kg － 1 ，100 mg · kg － 1 ，150 mg · kg － 1 ，200 mg·kg － 1 和 250 mg·kg － 1 。于每次给药 24 h 后 耳缘静脉采血，取约 2 mL 血液加抗凝剂，用于生 理指标的测定； 另取约 5 mL 血液离心分离血清， 保存于 4℃ 冰箱，用于生化指标的测定。 1． 3 血液生理指标的测定 血球计数法测定血液的红细胞（ ＲBC） 、白细 胞（ WBC） 、血小板（ PCT） ，比色法测定血红蛋白 含量（ HGB） ，离心法测定红细胞压积（ HCT） 等 5 项指标。 1． 4 血液生化指标的测定 用半自动生化分析仪进行测定。测定项目为 血糖（ Glu，葡萄糖氧化法） 、总蛋白 （ TP，双缩脲 法） 、白 蛋 白 （ ALB ，溴 甲 酚 绿 法 ） 、总 胆 固 醇 （ CHO，胆固醇氧化酶法） 、甘油三脂（ TG，甘油磷 酸氧化酶法） 、尿素氮（ BUN，尿素酶法） 、门冬氨 酸氨基转移酶 （ AST，酶法） 、丙氨酸氨基转移酶 （ ALT，速率法） 、碱性磷酸酶（ ALP，AMP 法） 、钙 （ Ca，邻甲酚酞络合铜法） 、铁（ Fe，铬天青 B 法）
重金属镉锌联合胁迫下鲫鱼组织中金属硫蛋白的动态变化.
Freshwater Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Aquiculture Sciences, W uxi 214081, China ) Abstract: I mpact of combined stress of heavy metals, cadm ium and zinc in water was studied on content of metallothio2 nein (M T) in liver and kidney of Ca rassius au ra tus living therein under a given experim ental condition. Results indicate that after exposure to 0. 005, 0. 010, 0. 050, 0. 100, 0. 500 mg・L
-1
Cd & 1. 0 mg・L
-1
Zn, the fishes showed a sim ilar
trend of M T content in their livers and kidneys, rising2falling2rising, w ith a peak value appearing at the 12 th hour of expo2
脏中 M T增加速率为 0. 83 ～1. 67 μg・g - 1 ・h - 1 。在 0 —12 h 内鲫鱼肝脏和肾脏组织中 M T增加量与镉含量呈正 相关 ,表现出一定的剂量 - 效应关系 ,表明水体中镉锌联合可诱导鲫鱼组织中 M T的合成与表达 ,且诱导时间主要 在 0 —12 h之内 。研究表明 ,鲫鱼肝和肾组织中 M T可作为评价外源重金属污染的指标 。 关键词 : 鲫鱼 ; 组织 ; 金属硫蛋白 ; 联合胁迫 ; 重金属 中图分类号 : X174 文献标识码 : A 文章编号 : 1673 - 4831 ( 2010 ) 01 - 0063 - 05
微量元素锌在动物营养上的研究进展
自从Ｔｏｄｄ等人于１９３４年首次证明锌是高等动物营养所必需的元素以来，人们研究发现微量元素锌在动物和人体内具有广泛的生理生化功能，被称为“生命元素”和人类的“智慧元素”。
近年来，锌在畜牧生产和医学领域中得到了广泛的应用。
１锌在动物体内的分布锌分布于机体的所有组织器官中，各种动物体内锌的含量差异不大，正常动物体内锌的总含量为３０ｍｇ·ｋｇ－１左右，大致的分布为：骨骼２８％，肝脏和皮肤８％，血液２％～３％，其他器官０．６％～１％。
血浆中的锌３０％～４０％参与酶活性和功能，６０％～７０％与白蛋白松散结合，是体内锌的主要运输形式。
肌肉中锌的含量因其色泽和功能活性的不同而异，牛的腹侧巨肌平均含锌量为２４７ｍｇ·ｋｇ－１干脱脂物质，背最长肌为６９ｍｇ·ｋｇ－１。
猪奶中锌含量为４．９４ｍｇ·ｋｇ－１，奶中的锌与酪蛋白盐类结合存在，初乳中锌的含量是常乳的３４倍。
母猪、母牛、山羊及绵羊奶中锌的含量大约为５ｍｇ·ｋｇ－１。
毛、羽中锌的含量能客观反映日粮锌的水平，蛋中锌的含量也受日粮锌水平的影响。
动物在性成熟前，前列腺中锌的含量特别丰富，精液中也含有较多的锌［１］。
２锌在动物体内的吸收与代谢锌的吸收部位因畜种而有所不同，在单胃动物，锌主要在小肠远端被吸收；在反刍动物，约有１／３的锌在真胃吸收，其余在小肠；鸡在腺胃和小肠吸收锌。
动物体内锌的平衡状态、锌含量和吸收细胞内束缚锌的物质对锌的吸收起调节作用，动物体对锌的吸收率与日粮锌水平成反比。
被吸收的锌与血液转运蛋白结合，运送到肝脏和其他组织器官。
锌在体内以小分子可溶性物质参与代谢，吸收过程包括快速进入黏膜细胞和比较缓慢地进入血流两个阶段。
锌还可以通过胎盘从血浆转移到胎儿体内，所以胎儿的骨骼和肝脏中锌含量较高。
不同组织器官锌的累积和代谢、周转速率不同，肝脏是锌贮存和代谢的主要场所，骨骼和神经系统中的锌周转代谢速率较慢，而毛中的锌基本上不存在分解代谢。
锌对水稻金属硫蛋白基因家族的表达以及重组酵母细胞耐受性的影响.pdf
!第!"卷!第"期!#$$"年"月锌对水稻金属硫蛋白基因家族的表达以及重组酵母细胞耐受性的影响"徐玉凤!周功克!李一勤!刘进元""清华大学生命科学与技术系分子生物学与蛋白质科学实验室!北京&’’’%(!!’’*$&’$!(收稿!!’’*$&!$!#收修改稿!"国家重点基础研究发展计划"批准号#!’’*H 9&’&"’*$和国家自然科学基金"批准号#)’!"’"#)!)’)"’%’($资助项目!""通信作者!+$,-./#/.@1]!,-./4C <.78^@-4?[@457!摘要!!采用>6:C ^?:7杂交和酵母功能互补实验!分析了&’个水稻I 类金属硫蛋白基因%_:8W 1?:&在水稻幼苗和重组酵母细胞中与‘7!U 的应答反应4‘7!U处理后样品的杂交结果显示"在幼苗的地上部分!除了)个(型_:8W 1?基因%_:8W 1?1‘G !_:8W 1?1‘L !_:8W 1?1‘2&的表达不受‘7!U的影响外!其余*个基因的表达都有不同程度的增加#而在根中!‘7!U 明显增加了_:8W 1?1X L 和_:8W 1?1a 2的转录!但_:8W 1?1X G 和_:8W 1?1[G 的转录却受到了抑制4将_:8W 1?:转化‘7!U敏感酵母突变体并获得异源表达后!&’个成员都可以在一定程度上提高酵母细胞的‘7!U耐受力!而且表现出重组酵母体内‘7!U 积累的增加4上述结果表明a <AP $I 家族的成员均能够对外加的‘7!U 产生反应!可能是通过螯合‘7!U 来增加了生物体对‘7!U 耐受性4关键词!!水稻!金属硫蛋白!诱导表达!锌离子!耐受性!!锌是生物体所必需的微量元素!是许多酶的辅因子!也是许多蛋白质活性的构成要素&&’4在缺乏锌的培养基上!当细胞内的‘7!U水平下降到每个细胞约为’4!0,6/时!细胞就会停止生长&!’4但如果细胞内游离的‘7!U 浓度过高!它又会造成对细胞的毒性4一般认为锌的毒性机理可能是由于抑制了关键代谢酶的活性!或干扰了蛋白质的正常折叠&&’4体内过量的游离‘7!U 必须被隔离或者储存起来!直到能被新合成的锌结合蛋白所利用!这样才不会造成对生物体的伤害4因此!生物在进化过程中!已经形成了一整套平衡体系来严格控制体内‘7!U 水平4生物体内普遍存在的金属硫蛋白",?C -//6C ^.6$7?.7!AP $是一类低分子量-富含半胱氨酸-具有金属结合能力的蛋白质4研究表明这类小分子蛋白质在哺乳动物控制‘7!U动态平衡中起重要作用&)’4当细胞内‘7!U 过量时!AP 能与‘7!U 结合从而解除‘7!U 的毒性%而当细胞内‘7!U 缺乏时!AP 又可作为锌的储存库释放出‘7!U或者作为锌的供体!释放给其他锌结合蛋白如锌指蛋白利用&)’4对植物AP 的研究则相对比较落后4第一个植物AP 于&3%"年才从小麦中分离出来!是一种‘7!U结合蛋白"+5$&(’4此后随着分子克隆技术的进步!从许多植物包括单子叶!双子叶植物中都克隆到了AP 基因&#(&%’4并且发现这类AP 基因的表达受到金属离子-氧化胁迫-植物激素等因子以及发育时期的调控!其表达特征随着植物的种类-AP类型的不同而表现出特异性&#(&%’4例如!‘7!U 对香蕉8W [基因表达有明显的诱导作用&%’!菊芋F 518W a 基因表达受到‘7!U 的抑制&&&’!而豌豆AP 的表达则不受‘7!U 的影响&#’4虽然植物AP 的研究大都集中在其表达特征的分析方面!但是也有一些研究发现将植物AP 转化微生物细胞!异源表达的植物AP 具有提高重组细胞对重金属离子如H @或H [的耐受性&&*(&%’4但是在植物‘7!U的动态平衡和耐33%受过程中植物AP所起作用的报道却很少!尤其是还未见有关于同一植物AP家族的各成员在‘7!U的代谢过程中所起作用的报道4在水稻基因组中!我们发现了一个由&&个AP 基因组成的AP基因家族!其中的&’个基因属于I 类AP&&(’4序列比对与表达特征分析结果表明这些基因不仅有不同的氨基酸序列!而且表达的组织特异性也不相同!暗示这些基因可能在不同的组织中行使不同的功能&&(!&#’4由于I I类AP基因"_:8W1 ??1X G$不受金属离子的诱导!在本文中我们重点研究了‘7!U对I类AP基因各成员"_:8W1?:$表达的诱导特征!并且将&’个水稻I类AP基因转化‘7!U敏感的酵母突变体!测定了表达_:8W1?:的重组酵母细胞对过量‘7!U的耐受性及其体内的锌含量4结果表明水稻I类AP基因不但受‘7!U诱导表达!而且能赋予转化酵母细胞一定程度的‘7!U耐受性!其结果将有助于更好地了解水稻AP家族不同成员在锌离子的平衡和耐受过程中的作用4!!材料与方法!"!!植物材料$生长条件和胁迫处理水稻"_"E U G:G54<H T45=4中花&’号$种子经表面消毒后!浸入稀释的A@:-<^.8?和D Y668液体培养基"&.!nA D$中!在光照培养箱中培养&![4水稻幼苗的生长条件为#&(^光照.!#h H!&’^黑暗.!’h H循环4进行‘7!U处理时!将&![的水稻幼苗的根浸泡在不同浓度的‘7H/!水溶液中!(^!然后分别收集根和地上部分!液氮速冻!贮存于G"’h H4!"’!酵母菌株$培养基和转化本研究所用的酵母菌株分别是野生型9d("(& "AF P-F4:[-X A H I a-Q$H5X Z-QI"G[-Q$和‘N H X$缺失的突变体-U"2X"AF P-F4:[-X A H I a-Q$H5X Z-Q I"G[-Qb J.X###G%8Y‘$+培养酵母细胞的培养基为d L M或含有!f葡萄糖或半乳糖的D M"<]7$ C^?C.5[?0.7?[$培养基!并根据需要补充所需营养成分&&3’4一种含有@’-X启动子"受半乳糖诱导$的穿梭载体R d+D!"I7=.C:68?7!D-7M.?86!K D F$用作目标基因在酵母中表达的载体!携有该质粒的酵母细胞可在缺乏尿嘧啶的D M固体培养基"D M$K:-)$上生长4!"(!水稻总B3C的分离与3A D P F N D@杂交使用N>?-<]L/-7C A.7.试剂盒"W.-8?7! J./[?7!V?:,-7]$提取水稻组织的总N>F!具体操作按试剂盒的说明书进行4>6:C^?:7杂交按文献&&(!&#’所述方法进行4!",!酵母功能互补实验&’个水稻I型AP基因&&(’由本室保存4为了将_:8W1?基因插入表达载体!采用外加;G$J I和M2K N I酶切位点"其中对_:8W1?1a G引入的酶切位点为c4%[I I I$的引物对克隆基因进行L H N扩增4扩增产物克隆到R d+D!载体的相应酶切位点!经测序验证后采用常规方法转化酵母细胞4转化后的酵母细胞在含有!f葡萄糖缺乏尿嘧啶的D M固体培养基"D M$K:-)$上进行选择性培养!!()[后挑取克隆!提取质粒进行L H N验证!正确的重组菌株于G"’h H保存备用4为了对重组菌株进行‘7!U耐受性测定!将重组酵母菌株在含!f葡萄糖的D M$K:-)液体培养基中培养至_B*’’S&4’!经梯度稀释后取!4#%T点样于含有不同浓度‘7!U的D M$K:-)"含!f半乳糖$固体培养基上!于)’h H培养)(([!观察菌落生长状况并照相4在用液体培养基进行测定时!将重组酵母细胞在D M"!f半乳糖$液体培养基中培养至_B*’’S’4!#!加入不同浓度‘7!U!并选取不同时段测量培养液的_B*’’值!以观测‘7!U对重组酵母细胞生长的影响4!"5!酵母细胞中R@’S含量的测定重组酵母细胞在!f半乳糖D M$K:-)液体培养基上培养到_B*’’S’4!#!加入‘7H/!到最终浓度",,6/5T G&!!(^后收集细胞!用冰冷的#’",,6/5T G&P:.<$J H/"R J*4#$!&’,,6/5T G& +M P F洗#次菌体细胞!最后用去离子水洗一次!然后用体积比#m!的硝酸#高氯酸!’’%T在%’h H 消化菌体细胞&^4消化后的样品用灭菌的去离子水稀释成&4’,T!使用质子偶联的原子发射光谱仪"I H L$F+D#a R C.,-))’’N T%T F9D!J@[<67! K D F$进行样品中‘7!U含量的测定4取)个独立的酵母样品进行检测并取平均值4’’3!第!"卷!第"期!#$$"年"月’!结果与讨论’"!!R@’S对45(678基因在水稻幼苗中表达的影响为了分析‘7!U对_:8W1?基因家族成员表达的影响!将培养&![的水稻幼苗用不同浓度"’!’4!#!’4#!&4’!!4’,,6/5T G&$‘7!U的水溶液处理!(^!然后分别提取根和地上部分的总N>F进行>6:C^?:7杂交分析4‘7!U的最高浓度的选择是依据植物研究中常用的‘7!U处理浓度&&&!!’’来确定的%而选择_:8W:基因的)e末端的非翻译序列作为基因特异性的探针4>6:C^?:7杂交结果如图&所示4在水稻幼苗的地上部分!除了(型_:8W1?基因的)个基因"_:8W1?1‘G!_:8W1?1‘L!_:8W1?1‘2$的表达不受‘7!U的影响外!_:8W1?基因家族其他*个成员的表达水平都有不同程度的上调!特别是_:8W1?1X L和_:8W1?1a G的表达还呈现出‘7!U浓度依赖的上调模式4_:8W1?1[G是在地上部分中响应‘7!U胁迫应答最强的基因!在!#’%,6/5T G&‘7!U处理!(^后即被强烈诱导4虽然‘7!U对于地上部分(型_:8W1?基因,N>F的水平没有影响!但是在根中(型_:8W1?基因的表达在!#’%,6/5T G&‘7!U处理!(^后也被诱导表达4在根中‘7!U处理还明显增加了_:8W1?1X L和_:8W1?1a2的转录!但却明显抑制了_:8W1?1X G和_:8W1?1[G的转录4而‘7!U对_:8W1?1a G!_:8W1?1a L和_:8W1?1[L 基因在根中的表达要么没有影响要么仅有轻微影响4这些结果一方面揭示了‘7!U对_:8W1?:基因的表达调控是一个复杂的过程!也说明了家族成员之间在水稻不同组织‘7!U的动态平衡和耐受过程中!所起的作用既有差别!又有重叠4在水稻幼苗的地上部分!‘7!U可以增加大部分_:8W1?家族成员的表达!说明它们可能参与水稻‘7!U的耐受!储存和地上部分组织之间的转运过程4而在根中! _:8W1?1X G和_:8W1?1[G在根中的表达受‘7!U的下调!表明它们可能参与‘7!U从土壤中的吸收!而其他的_:8W1?:"除了_:8W1?1[L外$!在根中的表达受‘7!U的正向调控!暗示它们可能参与了根中‘7!U的贮存和耐受过程4图!!R@’S对45(678基因家族成员表达的影响每泳道上样量为!’%8总N>F%所用探针分别为&’个_:8W1?基因的)e末端特异序列4溴化乙锭"+9$染色的凝胶":N>F$作为指示上样量的对照’"’!水稻45(678基因互补酵母R@’S敏感细胞的功能研究基因功能的方法通常是制作基因缺失或过量表达的稳定转基因株系或者植物细胞来进行的!然而单个AP基因缺失的重组植物与野生型植物之&’3 !第!"卷!第"期!#$$"年"月间在表型上并没有差别&"’!给a<AP功能的检测带来了困难4在已经获得了许多金属离子敏感的酵母突变体的基础上!人们常常用酵母作为分析金属离子平衡和耐受相关基因功能的模式系统&!&’4b J.X 编码了一个阳离子转运蛋白!参与酵母细胞‘7!U向图’!重组酵母菌株所含质粒的%7B验证经营养缺陷筛选出的酵母菌株中的重组质粒和空载体R d+D!"依次标记为a<A P$I$&-!&;!!-!!;!!5!)-!);!(-!(;!(5!d+D!$的扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图4引物采用材料与方法中所述的各基因的特异引物4A为M T!’’’M>F标准图(!转化45(678基因的重组#9"0:酵母突变体细胞对R@!U耐受性&’个_:8W1?基因分别插入载体R d+D!!并转入-U"2X突变体细胞4野生型"9d("(&$细胞和转化R d+D!空质粒的-U"2X重组细胞作为对照4当细胞生长到_B*’’S&4’时!经系列稀释!分别取!4#%T点到含有!f半乳糖且缺失尿嘧啶的D M平板上!并加入&’,,6/5T G&的‘7H/!!于)’h H培养([后照相4每个重组质粒选取两个独立的转化子重复)次进行锌耐受性实验液泡运输的过程&!!’%而缺失b J.X基因会导致酵母突变体对‘7!U敏感!其原因可能是敲除‘N H&后使细胞内游离的‘7!U增多!从而对酵母突变体细胞产生毒性!使其生长受阻&!&’4在本研究中!我们分别将_:8W1?克隆到受半乳糖诱导表达的酵母R d+D!载体上!经序列分析确定插入序列的正确性4然后将确认插入正确序列的重组载体导入‘7!U敏感的酵母突变株-U"2X中!在添加!f葡萄糖并缺乏尿嘧啶的D M固体培养基上行选择性培养!对长出来的克隆提取质粒并进行L H N鉴定!结果如图!所示!所有扩增片段与目标片段的长度一致4最后将得到确认的重组菌株在添加不同浓度‘7!U的D M$K:-)固体培养基"!f半乳糖$上进行了功能互补实验4结果在添加&’,,6/5T G&‘7!U的培养基上!转化_:8W1?:的突变体细胞比只转化空载体R d+D!突变体细胞生长状况要好"图)$!说明所有a<AP$I<可以在一定程度上提高细胞锌的耐受能力4在‘7!U 浓度超过&#,,6/5T G&的培养基上!野生型酵母能够生长!突变体细胞则不能生长!而转化有_:8W1?的突变体在这种条件下也不能生长!说明a<AP$I<只能在一定程度上提高细胞‘7!U的耐受性"结果未显示$4这一结果与另一种植物AP"P5AP)$也只能部分缓解‘7!U对酵母细胞的毒性&!)’的报道是一致的4为了进一步验证互补实验!我们对重组细胞在添加不同浓度‘7!U的液体培养基中的生长速率和细胞内锌的含量也进行了测定4因为_:8W1?:不同家族成员表达的酵母细胞在固体培养基上的表型相似!所以本实验只选取了_:8W1?1X G和_:8W1?1X L 作为代表进行了分析4在添加有#,,6/5T G&‘7!U 的液体培养基中!-U"2X细胞生长良好!不同重组酵母之间的生长并没有差别4但是当‘7!U浓度提高到",,6/5T G&时!可以明显地观察到含有_:8W1 ?1X G和_:8W1?1X L的-U"2X重组细胞生长明显好于转化空载体的-U"2X对照细胞!这个结果和固体培养基的结果一致"图("-$$4同时对细胞内锌含量的测定结果表明含有_:8W1?1X G或者_:8W1?1X L的重组细胞内的锌浓度!比对照细胞有略微的增加"图(";$$4这些暗示出表达a<AP$I<酵母细胞的‘7!U耐受性的提高可能是由于AP蛋白螯合了细胞内游离‘7!U的结果!或者参与了‘7!U向细胞器比!’3!第!"卷!第"期!#$$"年"月如液泡的区域化隔离过程!而不是促进了‘7!U的外排4另外!有研究报道豌豆中的&型AP"7:8W’$基因和拟南芥的!型AP"8W a$基因在细菌中与@>W基因融合表达时能以不同的亲和力与锌离子结合&!(!!#’%我们对水稻&&个成员的蛋白序列进行了生物信息学分析!并没有找到它们含有定位于亚细胞器的信号肽4这个预测结果和B678等通过实验将a<AP!;"a<AP$I$!;$定位于植物细胞的细胞质的结果一致&!*’4T??等人将拟南芥F C AP)和V X L 融合在保卫细胞中表达!证明F C AP)也定位在细胞质中&&"’4这些都暗示AP有可能在植物的细胞质中与锌离子结合4因此我们相信a<AP$I<与细胞质中‘7!U的结合可能是其参与水稻体内锌的动态平衡和耐受的机制之一4但是_:8W1?:家族成员在水稻‘7!U动态平衡中的确切生理学和生物化学机制还需要做进一步研究4图,!45(678基因对#9"0:酵母突变体细胞中积累R@’S的影响不同转化细胞在添加",,6/5T G&‘7!U"黑柱$和不添加‘7!U"白柱$的D M$K:-)液体培养基"!f葡萄糖$中培养到_B*’’S&4’!随后用D M$K:-)"!f半乳糖$稀释这些细胞以达到起始密度约为_B*’’S’4!#!然后培育!(^后!检测_B*’’"-$和用I H L$F+D测量酵母内‘7!U的含量";$!!近年来!分析基因家族内成员之间的功能差异已成为解析基因功能研究的热点4本文分析了_:1 8W1?基因家族各成员在水稻幼苗应答‘7!U的表达特征!虽然_:8W1?家族成员之间的序列高度相似!但家族各成员的表达不仅具有不同的组织特异性&&(’!而且对‘7!U的应答反应也有所不同"图)$4但有意思的是这些基因在酵母中的异源表达却表现出相似的‘7!U耐受性4这些结果进一步提供了植物AP蛋白在应答‘7!U和提高生物体‘7!U耐受性的证据!也为进一步研究a<AP$I<参与了水稻体内‘7!U的平衡和耐受的过程的分子机理打下了坚实的基础4致谢!作者感谢法国J?7:.L6.75-:?大学的A.5^?/H^-/6C博士为本实验提供酵母菌株%9d("(&野生型!U"2X突变体&!感谢清华大学分子生物学实验室的部分成员所给予的帮助与有意义的讨论4参!考!文!献&!9?:8\A!D^.d4P^?8-/=-7.E-C.6760;.6/68]#F8:6Z.78-R R:?$5.-C.6706:C^?:6/?<60E.754D5.?75?!&33*!!"&#&’%&(&’%#!!L-/,.C?:N M!X.7[/?]D M4H/67.78-7[0@75C.67-/5^-:-5C?:.E-$C.6760-,-,,-/.-7E.75C:-7<R6:C?:C^-C5670?:<:?<.<C-75?C6E.754+A9a\!&33#!&(#*)3(*(3)!H6]/?L!L^./56Q\H!H-:?]T H!?C-/4A?C-//6C^.67?.7#P^?,@/C.R@:R6<?R:6C?.74H?//A6/T.0?D5.!!’’!!#3#*!"(*(" (!T-7?9V!b-1.6Y-N!b?77?[]P M4P^?Z^?-C8?:,+5R:6C?.7 .<-E.75567C-.7.78,?C-//6C^.67?.749.65^?,H?//9.6/!&3%"!*##&’’&(&’’##!X6:[^-,$D Y?/C67F L!T.//?]H!K:Z.7L+!?C-/4V K D?Q R:?<$ <.67.7’"G L4!K C:4:[.:?5C?[;]#e:?8.67<60C^?R?-,?C-//6C^.6$ 7?.7$/.Y?8?7?L<AP F4L/-7CA6/9.6/!&33"!)(#*#3(**%*!N-@<?:B+4D C:@5C@:?-7[0@75C.6760,?C-/5^?/-C6:<R:6[@5?[ ;]R/-7C<#P^?5-<?606:8-7.5-5.[<!-,.76-5.[<!R^]C.7-7[ ,?C-//6C^.67?.7<4H?//9.65^?,9.6R^]<!&333!)&#&%((%"!H6;;?C C H!V6/[<;:6@8^L4L^]C65^?/-C.7<-7[,?C-//6C^.6$ 7?.7<#N6/?<.7^?-=],?C-/[?C6Q.0.5-C.67-7[^6,?6<C-<.<4F7$ 7@N?=L/-7C9.6/!!’’!!#)#(&%!%!T.@L!V6^H\!T6^H D!?C-/4M.00?:?7C.-/?Q R:?<<.67-7[5^-:$)’3 !第!"卷!第"期!#$$"年"月-5C?:.E-C.6760C^:??,?C-//6C^.67?.7$/.Y?8?7?<.75-=?7[.<^;-$ 7-7-"8I:G G2I$4%G5G$4L^]<.6/L/-7C!!’’!!&&(#!(&(!#’3!H^?7J\!J6@B H!d-78H d!?C-/4A6/?5@/-:5/67.7860C Z6 ,?C-//6C^.67?.7$/.Y?R:6C?.78?7?<Z.C^[.00?:?7C.-/?Q R:?<<.67 R-C C?:7<0:6,<Z??C R6C-C6"?C K$K H GL G5G5G:$/?-=?<4\L/-7C L^]<.6/!!’’)!&*’##("(###&’!A-A!T-@L D!\.-d P!?C-/4P^?.<6/-C.67-7[5^-:-5C?:.E-C.67 60C]R?&,?C-//6C^.67?.7"AP$5M>F0:6,-^?-=]$,?C-/$C6/?:$ -7C R/-7C!P H:5I2G"I L"G5=4$H"A4%4L/-7CD5.!!’’)!&*("&$# #&(*’&&!H^-78P!T.@_!_@J!?C-/4F,?C-//6C^.67?.7$/.Y?8?7?^C$A P!<C:678/]?Q R:?<<?[.7.7C?:76[?<-7[76[?<60c H A4G%5F I:5I L H"K:I:-7[?00?5C<60,?C-/.67C:?-C,?7C67.C<?Q R:?<<.674 L/-7C-!!’’(!!&%#((3((##&!!A.:V!M6,?7?5^\!J@8@?CV!?C-/4F R/-7C C]R?!,?C-//6$ C^.67?.7"A P$0:6,56:YC.<<@?:?<R67[<C66Q.[-C.=?<C:?<<4\ +Q R96C!!’’(!###!(%)(!(3)&)!A@:R^]F!‘^6@\!V6/[<;:6@8^L!?C-/4L@:.0.5-C.67-7[.,$ ,@76/68.5-/.[?7C.0.5-C.6760,?C-//6C^.67?.7<&-7[!0:6,’"G1 L4!K C:4:5F G A4G%G4L/-7C L^]<.6/!&33"!&&)#&!3)(&)’&&(!‘^6@V!_@d!T.\!?C-/4A6/?5@/-:-7-/]<?<60C^?,?C-//6$ C^.67?.78?7?0-,./].7:.5?"_"E U G:G54<G T4$4\9.65^?,A6/9.$ 6/!!’’*!)3##3#(*’*&#!‘^6@V b!_@d X!T.@\d4H^-:-5C?:.E-C.6760-:.5?5/-<<I I ,?C-//6C^.67?.78?7?#P.<<@??Q R:?<<.67R-C C?:7<-7[.7[@5C.67.7 :?<R67<?C6-;.6C.50-5C6:<4\L/-7CL^]<.6/!!’’#!&*!#*%*( *3*&*!=-7J660>F T A!J-<<.7?7O J!J-Y=66:CJ!?C-/4+7^-75?[ 56R R?:C6/?:-75?.7>4A H%H<I A0G"4:"A6?75^$0G"2#H R6R@/-C.67< 0:6,56R R?:,.7?<.<-<<65.-C?[Z.C^.75:?-<?[C:-7<5:.R C/?=?/<60 -!;$C]R?,?C-//6C^.67?.78?7?4L/-7C L^]<.6/!!’’&!&!*#&#&3$ &#!"&"!T??\!D^.,M!D678Bd!?C-/4F:-;.[6R<.<,?C-//6C^.67?.7<!--7[)?7^-75?:?<.<C-75?C65-[,.@,Z^?7?Q R:?<<?[.7\424G/G1 L G8@-:[5?//<4L/-7CA6/9.6/!!’’(!#(#%’#(%&#&%!N66<?7<>J!9?:7-:[H!T?R/-?N!?C-/4+=.[?75?06:56R R?: ^6,?6<C-<.<0@75C.6760,?C-//6C^.67?.7"AP)$.7C^?^]R?:-55@$ ,@/-C6:W F A G:C42G H"I A H:2H%:4X+9DT?C C!!’’(!#""#3(&*&3!D^?:,-7X4V?C C.78<C-:C?[Z.C^]?-<C4A?C^6[<+7E],6/!&33&!!%#)(!’!’!T.7H B!H^-78J9!J@-78J\4‘.75.7[@5?<,.C68?7$-5C.=-C?[ R:6C?.7Y.7-<?-5C.=-C.67,?[.-C?[;]:?-5C.=?6Q]8?7<R?5.?<.7 :.5?:66C<4L/-7C L^]<.6/9.65^?,!!’’#!()#3*)(3*%!&!M?X:?.C-<\!B.7C EJ!b.,\J!?C-/4d?-<C!-,6[?/6:8-7.<, 06:.:67-7[56R R?:,?C-;6/.<,<C@[.?<9.6,?C-/<4!’’)!&*# &%#(&3"!!!A-5M.-:,.[H B!A./-7.5YAF!+.[?M\49.65^?,.5-/R:6R?:C.?< 60=-5@6/-:E.75C:-7<R6:C<]<C?,<60>G22F G"K$E2H:2H"H<4:4G H4\9.6/H^?,!!’’!!!""#)3&%"()3&3(!)!N66<?7<>J!9?:7-:[H!T?R/-?N!?C-/4+=.[?75?06:56R R?: ^6,?6<C-<.<0@75C.6760,?C-//6C^.67?.7"AP)$.7C^?^]R?:-55@$ ,@/-C6:W F A G:C42G H"I A H:2H%:4X+9DT?C C!!’’(!#""#3(&*!(!N6;.7<67>\!B./<67\N!P@:7?:\D4+Q R:?<<.6760C^?C]R?!,?C-//67C^.67?.7$/.Y?8?7?AP!0:6,’"G L4!K C:4:5F G A4G%G.7‘7!U$,?C-//6C^.67?.7$[?0.5.?7C>E%H2F K2K22I:L H H"3(!#L@C-$C.=?:6/?06:A P!.7‘7!U,?C-;6/.<,4L/-7C A6/9.6/!&33*!)’#&&*3(&&"3!#!P6,,?]FA!D^.\!T.7[<-]B L!?C-/4+Q R:?<<.6760C^?R?-8?7?L<A P-.7M+2K A4,?C-/;.7[.78R:6R?:C.?<60C^??Q R:?<<?[ R:6C?.74X+9DT?C C!&33&!!3!#(%(#!!*!B678J T!D-Y-,6C6P!b-Z-<-Y.P!?C-/4M6Z7$:?8@/-C.6760 ,?C-//6C^.67?.7!-:?-5C.=?6Q]8?7<5-=?78?:!;]C^?<,-//V P$ L-<?_:J G2X.7:.5?4L/-7CL^]<.6/!!’’(!&)##&(("(&(#*(’3!第!"卷!第"期!#$$"年"月。
金属硫蛋白(MT)在农业动物养殖业中的应用研究进展
金属硫蛋白（MT）在农业动物养殖业中的应用研究进展薛元勋，孙建华，王慧*(山东省山东农业大学动物科技学院，山东，泰安，271018)摘要：金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在于生物中的低分子量、富含金属和半胱氨酸，且能被金属或其它因素诱导生成的金属结合蛋白。
是一种具有天然生物活性的物质，具有广泛的生物学功能，其主要作用是：参与微量元素的储存、运输和代谢，重金属解毒，清理自由基，拮抗电离辐射，增强机体的免疫力和抗应激等，参与DNA的复制、转录和能量代谢的调节过程。
因此，MT对提高动物的抗应激能力和健康生长，以及提高畜产品的质量等都具有重要意义。
另外，MT 还可作为模型系统，应用于基因表达调控和基因工程研究领域。
本文综述了MT的结构、代谢特点、生物学功能和在养殖业中的应用，启示金属硫蛋白在养殖业中具有诱人的应用前景；MT在临床、重金属中毒与环境监测、临床应用和功能食品等方面也将有广阔的应用前景。
关键词：金属硫蛋白；养殖业；抗应激；诱导生成；应用前景金属硫蛋白(Metallothionein，MT)也称为金属硫氨酸甲基内盐，在正常生理条件下，金属硫蛋白主要是Zn或Zn、Cu结合蛋白，主要存在于动物的肝脏、肾脏、胰脏和小肠中，是一类低分子量、富含半胱氨酸、可被金属诱导的特异蛋白质。
1957年哈佛大学的Margoshes和Valee等在研究马肾脏蓄积镉的过程中首次发现并分离出MT，此后，在真核微生物、高等植物、原核生物等均发现有MT存在并能被分离出来。
在1997年的第四届国际MT会议上，被发现并确定氨基酸序列的MT共有170多种。
MT是一种具有天然生物活性的物质，具有广泛的生物学功能，涉及生物有机体的生长、发育、生殖、衰老、肿瘤发生、免疫、应激等各个方面。
其主要作用是：参与动物体内微量元素的储存、运输和代谢，解除重金属的毒性，清理体内自由基，拮抗电离辐射，增强机体的免疫力和抗应激能力，参与DNA的复制、转录和能量代谢的调节过程。
家兔口服锌-金属硫蛋白后的血锌浓度变化
家兔口服锌-金属硫蛋白后的血锌浓度变化
孟铭伦;王玉萍;刘先珍;王增录;高双斌
【期刊名称】《营养学报》
【年(卷),期】1997(19)1
【摘要】家兔口服锌－金属硫蛋白后的血锌浓度变化ＣｈａｎｇｅｓｏｆＺｎＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎＲａｂｂｉｔｓａｆｔｅｒＴａｋｉｎｇＺｎ－Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ孟铭伦＊王玉萍刘先珍１王增录２高双斌３（第四军医大学唐都医院营养科，西安７１００３８）Ｍｅ...
【总页数】3页(P97-99)
【关键词】锌;金属硫蛋白;血清;锌浓度;家兔;锌缺乏
【作者】孟铭伦;王玉萍;刘先珍;王增录;高双斌
【作者单位】第四军医大学唐都医院营养科;第四军医大学西京医院实验外科;第四军医大学生物技术中心;第四军医大学军队卫生教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R591.105;R151.2
【相关文献】
1.无水磺胺嘧啶锌应用于烧伤创面后血锌和尿锌的含量变化研究 [J], 刘敏;王泽君;张恒术;石崇荣;贺光照
2.缺锌儿童口服补锌口服液后发锌、铜、铁、钙、镁的变化 [J], 郭艳萍;戴博;袁丽杰
3.母体锌水平与胎儿畸形相关性研究──Ⅱ．有畸胎史妇女口服复方锌制剂后体内微量元素含量的变化 [J], 王芳;朱国伟;张广存;祝培明;董云玲;姜会敏
4.急性鼻窦炎模型大鼠服用鼻渊舒口服液后血清中锌离子浓度的变化研究 [J], 曾秀燕;袁晓辉;许必芳;朱天民
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同补锌剂量对大鼠海马nNOS蛋白表达影响
不同补锌剂量对大鼠海马nNOS蛋白表达影响王秀云;李积胜;朱虹;刘公望【期刊名称】《中国公共卫生》【年(卷),期】2006(22)10【摘要】目的探讨补锌对临床亚健康干预的合理剂量以及高锌对脑功能的影响及机制。
方法采用Y-型迷宫行为学测试结合免疫组化卵白素-生物素-过氧化酶复合物法(ABC)法,分别观察大鼠海马结构不同亚区内神经元型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白表达的变化。
结果适量补锌〔200 mg/(kg.bw)饲料锌水平〕可使大鼠海马结构CA1、CA3、齿状回的nNOS表达增加(P<0.05),促进动物的学习记忆功能。
而超高剂量补锌〔≥600 mg/(kg.bw)饲料锌水平〕,可使大鼠海马结构CA1、CA3、齿状回的nNOS表达减少(P<0.05),损害动物的学习记忆能力。
结论适量补锌对大鼠学习记忆功能有促进作用,其机制可能与海马nNOS蛋白表达水平上调有关。
【总页数】2页(P1259-1260)【关键词】锌;神经元型一氧化氮合酶(nNOS);学习记忆功能;海马【作者】王秀云;李积胜;朱虹;刘公望【作者单位】天津中医药大学针灸系;武警医学院军事预防医学研究所【正文语种】中文【中图分类】R151【相关文献】1.慢性氟中毒对大鼠海马nNOS蛋白表达的影响 [J], 朱建忠;王国明;李积胜;张戟风;周红军2.低剂量伽玛刀照射对致(癎)大鼠皮质及海马神经元c-fos和nNOS表达的影响[J], 梁军潮;徐波涛;杨红军;杨传红;赖显文;吴小莉;王伟民3.海人藻酸损伤成年大鼠纹状体后Nestin表达的变化/NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B在生后大鼠海马的免疫组织化学表达/MK-801对海马脑片培养缺氧缺糖损伤中bcl-2、bax蛋白质表达的影响/局灶性脑缺血后修复蛋白表达与细胞凋亡影响的实验研究 [J],4.侧脑室注射7-硝基吲唑对大鼠抑郁样行为及海马nNOS蛋白表达的影响 [J], 沈非儿;姜劲峰5.不同剂量补锌对大鼠学习记忆功能及海马一氧化氮合酶活性的影响 [J], 王秀云;李积胜;朱虹;刘公望因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。