生物制品无菌检验 操作及其注意事项共17页
无菌试验操作检验规程
1 范围适用于本规程规定的医疗器械的无菌试验方法。
无菌检查法系用于检杳要求无菌的医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。
2 引用标准GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法。
第2部分:生物学试验方法。
《中华人民共和国药典（2015年版）》菌片标准按生物菌片供应商提供的方法进行3器材及试剂3.1器材:a)试管b)酒精灯c)75%乙醇棉d)灭菌刻度吸管(1mL)e)灭菌平皿(9cm)f）勺锥形瓶g)三角烧瓶h)灭菌剪刀、镊子i)恒温培养箱j)生化培养箱k)高压蒸汽灭菌器l)电热千燥箱3.2培养基及试剂:a)流体硫乙醇酸盐培养基b)改良马丁培养基c)营养琼脂培养基3.3稀释液、冲洗液及其制备方法:3.3.1 质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液;3.3.2 0.1%蛋白胨水溶液:取蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1 ± 0.2，分装、灭菌。
3.3.3 pH7.0氯化钠一蛋白陈缓冲液:取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解、滤清、分装、灭菌。
4实验操作:4.1实验前准备:4.1.1培养基要求:用于培养需(厌)气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合《中国药典(二部)》附录中《无菌检查法》的规定。
培养基可按药典的处方制备，也可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
制备后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境。
培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用;若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.1.2器具灭菌:与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器内121℃30min,或置电热干燥箱内160℃——2h。
无菌检查操作规程 (2)
无菌检查操作规程1.目的建立无菌检查标准操作规程，确保检查结果准确、可靠。
2.使用范围本公司无菌产品的无菌检查3.职责质量部QC4.依据2015版《中国药典》通则1101GB/T 19973.2-2005（ISO11737-2:1998）《疗器械的灭菌微生物学方法第2部分：确认灭菌过程的无菌试验》GB/T 14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法》5.内容5.1.无菌检查环境保障5.1.1.无菌检査的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，即无菌检査应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。
5.1.2.操作环境的无菌保障程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境定期监测并采取合理的措施保证洁净环境符合要求。
5.1.3.无菌检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
5.1.4.洁净区的温度、湿度等参数必须符合相应洁净级别的要求。
5.1.5.无菌检查操作还需要对检查环境进行监控，5.2.培养基、稀释液、缓冲液5.2.1.硫乙醇酸盐流体培养基，市售培养基干粉。
除另有规定，接种后应置30~35℃培养。
5.2.2.胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。
接种后应置20~35℃培养。
5.2.3.中和或灭活用培养基，按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。
5.2.4.胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。
5.2.5.沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。
5.2.6.沙式葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。
5.2.7.PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。
5.2.8.0.9%无菌氯化钠溶液。
5.2.9.培养基使用性检查无菌检査用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。
无菌检查(薄膜过滤法)SOP
无菌检查SOP（薄膜过滤法）1.目的为规范无菌检查方法及无菌检查全过程的操作，最大限度防止试验操作过程造成的污染，确保结果准确。
2.范围本SOP适用于生物制品的中间产品（包括原液、纯化产物、半成品、生产中的液体、辅料等）、成品的无菌检查。
只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。
3.定义无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6.材料6.1.无菌检查用物品、物料要求：所有物品、物料进入无菌室前，均应经过高压蒸汽灭菌（121℃40分钟，放灭菌指示卡）或180℃干烤2小时或其它经过验证的方法消毒后传入无菌室；如不能用前者消毒方式消毒的物品，须经消毒液浸泡、擦拭后传入无菌室。
6.2.无菌检查环境要求：应在环境洁净度万级下的局部洁净度百级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
6.3.仪器、设备与设施集菌仪、显微镜、台式灭菌器、无菌试验室（万级）、超净工作台（万级背景下的局部百级）：每月环境检测（沉降菌、浮游菌、尘埃粒子）合格后，方可使用。
20-25℃培养房或培养箱、30-35℃培养房或培养箱。
6.4.试验用具：洁净工作服（洁净底服、十万级工作服、万级工作服、鞋套）、工作鞋、口罩及帽子；无菌医用手套或一次性乳胶医用手套：试验前及试验过程中用消毒液浸泡消毒；封闭式集菌培养器（双针头、三联及单针头、三联）：薄膜孔径不大于0.45μm，直径约为 50mm。
根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。
无菌检查法标准操作程序要点
1目的建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。
2范围适用于原料、辅料及成品的无菌检查。
3职责微生物检验员遵照执行。
4内容无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.1 培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
4.1.1 培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2〜25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.1.1.1 硫乙酵酸盐流体培养基胰酪胨15. 0g 氯化钠 2. 5g酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0mlL-胱氨酸0. 5g 琼脂0. 75g硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml(或硫乙醇酸）（0.3ml)除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节p H , 使灭菌后在25℃的p H 值为7.1 土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。
无菌检查法及其验证
无菌检查法及其验证
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培养基储存
• 制备好培养基应该保留在2-25℃、避光环 境，若保留于非密闭容器中，普通在3周内 使用；若保留于密闭容器中，普通可在1年 内使用。
※应结合实际情况进行验证，以确定培养基 使用期。
无菌检查法及其验证
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培养基适用性检验
本检验可在供试品无菌检验前或与供试品 无菌检验同时进行。 • 无菌性检验
无菌检查法及其验证
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阳性对照试验
• 目标：①验证供试品经灭活后或用其它方式（稀 释、冲洗等）处理后是否仍有抑菌或杀菌作用， 确保检验条件符合要求，预防出现假阴性。②培 养条件是否符合要求。
• 应依据供试品特征选择阳性对照菌。 ①无抑菌及抗革兰阳性-金黄色葡萄球菌 ②抗革兰阴性-大肠埃希菌
③抗厌氧菌-生孢梭菌 ④抗真菌-白色念珠菌
无菌检查法及其验证
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• 对无菌检验试验所用设备及环境微生物监控结果不 符合无菌检验法要求；
• 回顾无菌试验过程，发觉有可能引发微生物污染原 因；
• 供试品管中生长微生物经判定后，确证有微生物生 长是因无菌试验中所使用物品和（或）无菌操作技 术不妥引发。
无菌检查法及其验证
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试验若经确认无效，应重试。重试时，重 新取同量供试品，依法重试，若无菌生长， 判供试品符合要求，若有菌生长判供试品 不符合要求。
2支
1 ml 5天
※其中硫乙醇酸盐及改良马丁培养基都有 1支不接种作为空白 ※接种量 ＜100cfu（不能多）
无菌检查法及其验证
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培养基适用性检验
⑤结果判断
• 空白对照应无菌生长，若加菌培养 基管均生长良好，判该培养基灵敏 度检验符合要求。
生物制品无菌实验规程
生物制品无菌实验规程（WHO 1995修订讨论稿）前言《生物制品无菌实验规程》自1973年发表后又有了一些新进展，因此，将检查支原体的无菌实验要求修订如下：检查支原体的无菌实验（WHO TRS和No．530，1973，Annex 4）该节以下文取代：检查支原体采用琼脂和肉汤培育基培育法或指示细胞培育DNA染色法。
在要求基础细胞库、生产用细胞库、病毒种子批（或库）、或对照细胞进行支原体检查时，采用培育法和指示细胞培育法。
在要求病毒收获液、疫苗原液或成品批进行支原体检查时，采用培育法。
必要时，亦可用指示细胞培育法挑选培育基。
培育法和指示细胞培育法见附录。
其他方式，只要列出详细步骤，井用本法验证过，亦可采用。
附录检查支原体培育法和指示细胞培育法1．培育法1．1培育基的选择实验采用足量固体和液体培育基，以确保在选定的培育条件下检出产品中可能存在的少量支原体。
液体培育基应含酚红。
培育基的营养性能最少应用下列支原体验证：口腔支原体（M．orale）（人用疫苗）；肺炎支原体（M．pneumoniae）（人用疫苗）；猪鼻支原体（M．hyorhinis）（非禽类兽用疫苗，例如DBS 1050）；鸡败血支原体（M．gallisepticum）和滑液支原体（M. Synoviae）（在生产进程中采用禽类材料或疫苗拟供家禽利用）。
采用低代实验菌株，冻存或冻干保留。
菌种经克隆后，应以适当方式确认是规定的菌种。
有些国家进行嵌入支原体检查。
1·2培育条件将已接种的培育基分成两份，一份置需氧条件下培育，另一份置厌氧条件下培育。
需氧条件是在含5—10％CO2和适当湿度的空气环境中培育。
厌氧条件是在含5－10%CO2和适当湿度的氮气环境中培育。
1．3营养性能用适宜的实验菌接种选定的培育基，每支固体培育基干皿很多于200CFU，不超过400CFU，每支液体培育基容器很多于20CFU，不超过40CFU。
每种菌株单独接种一支平皿和液体培育基。
无菌微生物限度检查及方法验证.ppt
• 实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、戴手表、戒指等首饰；不得 吃东西。应严格按更衣程序更衣。
• 记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微 生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将 报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌 室前，至少开启机房运转1小时以上。
菌种的传代和保藏
菌种的保藏方法
• 使菌种的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，从而在一定时间内 不发生变异并保持生命活力。
• 一般来说，低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的三个 重要因素
• 无论使用那种菌种保藏方法，都应进行验证，以确保在相应保存条 件下的菌种不会变异并且性能稳定。
• 菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代（GMP，药 典）
微生物实验室应制定菌种的保藏管理规程来规范菌种的来源、申购、保 管、转种传代、存储和领用等方面的要求，确保菌种的溯源性和稳定性； 防止试验用菌种因多次传代而失去典型生物学特征发生变异或死亡，保 证菌种长期正确、稳定，从而确保实验的灵敏度和重现性。
微生物实验室的质量管理
•菌种保存应有专人负责，加锁保存于冰箱中。 •实验室的标准菌株应来自CMCC（中国药品生物制品检定所医学菌种保 藏中心或ATCC（美国菌种保藏中心）等国际法定菌种保藏机构。有接 收、确认记录。 •菌种的转种等均应在超净工作台进行，以防污染。 •各种菌种应按规定时间接种，所有保藏的菌种均应贴有相应的标签，有 菌种清单。
• 培养箱、冰箱需在设备的每个腔室内放置经校准过的玻璃温度计，每天 检查设备腔室内的温度状况并且在日志上做好相应的记录。定期回顾每 个设备的温度记录数据，以考察设备的运行状态。
(完整版)无菌检验标准操作规程(SOP)
目的:制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围:本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容:1、标准依据：《中国药典》2010年版二部附录XI H.2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法.检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查.若供试品符合该项检查方法的有关规定,仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。
3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作.防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出.操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控.5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4、人员要求:无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
6、检验数量及检验量：6。
1、接种每种培养基所需的最少检验数量：2％或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法,应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。
6。
2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量(100ml≤V≤500ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤.7、细菌培养温度为30~35℃，真菌培养温度为23~28℃。
8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头)、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、HTY智能全封闭集菌仪、一次性使用集菌培养器.9、消毒剂配制：9。
1、75%乙醇溶液（配制酒精棉球用).9。
2、0。
2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
9。
3、2％来苏尔溶液(配制消毒棉球用）。
无菌检查标准操作规程
无菌检查标准操作规程无菌检查法是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。
事实上，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
无菌检查法有薄膜过滤法、直接接种法两种方式。
细菌培养温度32.5℃±2.5℃，真菌培养温度25.5℃±2.5℃。
1 无菌检查的环境无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可考性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。
无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向留空气区域内或隔离系统中进行，其全过程笔削严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。
面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。
由1～2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。
在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。
操作间内不应安装下水道。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。
缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。
无菌检查操作规程 (2)
无菌检查操作规程1.目的建立无菌检查标准操作规程，确保检查结果准确、可靠。
2.使用范围本公司无菌产品的无菌检查3.职责质量部QC4.依据2015版《中国药典》通则1101GB/T 19973.2-2005（ISO11737-2:1998）《疗器械的灭菌微生物学方法第2部分：确认灭菌过程的无菌试验》GB/T 14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法》5.内容5.1.无菌检查环境保障5.1.1.无菌检査的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，即无菌检査应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。
5.1.2.操作环境的无菌保障程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境定期监测并采取合理的措施保证洁净环境符合要求。
5.1.3.无菌检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
5.1.4.洁净区的温度、湿度等参数必须符合相应洁净级别的要求。
5.1.5.无菌检查操作还需要对检查环境进行监控，5.2.培养基、稀释液、缓冲液5.2.1.硫乙醇酸盐流体培养基，市售培养基干粉。
除另有规定，接种后应置30~35℃培养。
5.2.2.胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。
接种后应置20~35℃培养。
5.2.3.中和或灭活用培养基，按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。
5.2.4.胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。
5.2.5.沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。
5.2.6.沙式葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。
5.2.7.PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。
5.2.8.0.9%无菌氯化钠溶液。
5.2.9.培养基使用性检查无菌检査用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。
微生物实验操作注意事项
微生物实验注意事项一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5. 在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
中检所无菌检查和微生物限度检查操作规范
中检所无菌检查和微生物限度检查操作规范无菌检查和微生物限度检查操作规范（中国药品生物制品检定所）一、无菌室的要求：无菌室是无菌检查、微生物限度检查的重要设备，面积不小于6平米，高度2.4-2.8m为宜。
建筑材料要光洁，不吸潮，无凸起，耐腐蚀，易清洗。
无菌室内部应六面光滑，无缝隙，里面连接处应呈凹凸形，不留死角。
操作间和缓冲间的门不应直对，缓冲间两个。
无菌室内采光面积要大，照明灯应镶嵌在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300lux，电源开关应设在室外。
无菌室、缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯，每立方米2-2.5瓦，距实验台高度不超过1米，并应定期检查辐射强度，距1米处应不低于70微瓦/平方厘米，无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置，控制温度18-26℃，相对湿度40%-60%，操作间或净化工作台的洁净空气应保持与相临环境形成正压，不低于4.9帕。
操作区洁净度100级，操作间洁净度10000级，洁净度定期检查。
无菌室及缓冲间不得存放其他杂物，如培养箱。
用消毒液清洁无菌室操作台面，开启无菌室紫外灯和层流空气过滤30分钟以上。
无菌室的无菌程度，常用的沉降菌测定方法为：取营养肉汤琼脂平板3个，置无菌室的操作区台面左、中、右位置上，开盖暴露30分钟，在30-35℃培养2天后，计算菌落数。
用于无菌检查的无菌室或微生物限度检查的无菌室，细菌总数应小于3个，浮游菌每立方米应小于5个，否则，不能用于无菌检查和微生物限度检查。
二、培养基的准备1、培养基的制备：配制培养基的蒸馏水或去离子水应符合规定。
再称取需气菌、厌气菌培养基、真菌培养基的干燥培养基，加水溶化后，调节PH值，使灭菌后需气菌、厌气菌培养基的PH值为7.0-7.3，真菌培养基的PH值为6.2-6.6，分装、盖塞、灭菌，待用。
2、培养基灵敏度试验：培养基是无菌试验的基准物质，关系到无菌试验结果的科学、准确、可信度，因此，培养基灵敏度试验是无菌试验的重要组成部分。
生物制品无菌检验规程
生物制品无菌试验规程生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。
在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。
各种生物制品的无菌试验除有专门规定者外，均应按照本规程的规定进行。
1 抽样1.1原液及半成品原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为0.1%，但不得少于1.0ml。
1.1.1 大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。
1.1.2 原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。
1.2 成品每亚批均应进行无菌试验，样品应随机抽取，应具有代表性（包括分装过程的前、中、后样品）。
1.2.1分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于5支，101～500支（瓶）者抽检不少于10支（瓶），501～10000支（瓶）者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）。
1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。
6～20ml抽检量加倍。
5ml和5ml以下者按1.2.1项抽检。
1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品可不再做。
2 无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）2.1 检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品时检查，有专门规定者除外）。
2.2 检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。
检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。
检查霉菌和腐生菌应采用改良马丁培养基。
检查混浊制品可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。
检查活菌苗时可加大琼脂含量，做成斜面。
2.3 检查支原体应采用猪胃消化液半固体或牛心消化液半固体培养基。
2.4 生物制品无菌试验用培养基亦可用经检定合格的干燥培养基配制。
2.5 无菌试验培养基的灵敏度，乙型溶血性链球菌（32210株）应达到10-8，短芽胞杆菌（7316株）和生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）应达到10-7，白色念珠菌（ATCc 10231）和腊叶芽枝霉应达到10-6。
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程无菌检查是一种非常重要的操作，它用于检测无菌状态下的物品或环境是否存在微生物污染。
无菌检查操作规程的编写对于保障实验室和生产环境的洁净度以及产品的质量至关重要。
下面是一个1200字以上的无菌检查操作规程的示例：一、目的本操作规程的目的是规范无菌检查操作的步骤和要求，确保无菌状态下的物品或环境不受微生物污染。
二、适用范围本操作规程适用于实验室和生产环境中进行的无菌检查操作。
三、术语定义1.无菌：指没有含有活的微生物的状态。
2.无菌状态下的物品或环境：指通过严格的操作和控制，确保物品或环境中没有微生物的存在。
3.微生物污染：指物品或环境中存在无菌状态下不应该存在的微生物。
四、操作要求1.操作前准备(1)检查无菌检查设备和器材的完好性和清洁度，确保无菌检查设备和器材不受污染。
(2)准备好所需的培养基和培养液，确保培养基和培养液的质量符合要求。
(3)检查工作区的洁净度，确保工作区处于洁净状态。
2.操作步骤(1)双手消毒：先保持双手清洁干净，然后涂抹适量的酒精手消毒剂，按照正确的双手消毒方法进行双手消毒。
(2)无菌装具准备：使用酒精棉球或火焰灯进行灭菌处理，确保无菌装具的无菌状态。
(3)物品准备：将待检物品放置在清洁、无菌的工作区，并进行表面消毒处理。
(4)无菌条件下操作：在无菌条件下进行操作，避免物品再次受到污染。
(5)取样：使用无菌吸管或无菌棉签取样，注意避免取样器具受到污染。
(6)培养基接种：将取样液均匀涂布于无菌培养基上，确保接种均匀。
(7)培养：将接种的培养基放置于适宜的温度和湿度条件下进行培养。
(8)结果记录：根据培养基上微生物生长的情况，记录结果。
3.操作注意事项(1)操作前必须了解无菌检查的操作流程和要求，保证操作的准确性和可靠性。
(2)操作过程中要保持无菌条件，避免物品受到污染。
(3)操作完毕后要对无菌装具进行正确的处理，以确保无菌装具的再次使用。
(4)操作完毕后必须对工作区进行清洁和消毒处理，保证工作区的洁净度。
生物制品无菌检验 操作及其注意事项17页PPT
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