第八章分枝杆菌属细菌检验
微生物检验学之分枝杆菌属及检验
分枝杆菌属及检验分枝杆菌属是一类细长或略带弯曲、为数众多（包括54个种）呈分支状生长的需氧杆菌。
因其繁殖时呈分支状生长故称分枝杆菌。
本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂类，可占其干重的60%，这与其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。
耐受酸和抗乙醇，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗3%盐酸乙醇的脱色作用，故又称抗酸杆菌。
需氧生长，无鞭毛，无芽胞和荚膜。
引起的疾病均为慢性，有肉芽肿病变的炎症特点。
分枝杆菌的种类较多，包括结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌和麻风分枝杆菌。
非典型分枝杆菌是一大群分枝杆菌的总称，与人类有关的非典型分枝杆菌主要有堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、戈分枝杆菌、鸟分枝杆菌、蟾分枝杆菌、龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌和耻垢分枝杆菌等。
本属细菌无内外毒素，其致病性与菌体某些成分如索状因子、蜡质D及分枝菌酸有关。
根据国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）的方案将本属细菌分为三类，即缓慢生长菌、迅速生长菌和不能培养菌。
一、结核分枝杆菌在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。
（一）生物学特性1.形态与染色结核分枝杆菌为细长或略带弯曲的杆菌。
在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。
抗酸染色时因菌体含有大量脂类而不易着色，无论是否经碘液处理，着色后均不易被盐酸乙醇脱色，所以使菌体呈红色。
本菌无芽胞、无鞭毛，近年发现有荚膜。
2.培养特性本菌专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%～10%CO2环境中可刺激其生长。
烛缸不适合本菌培养，需用二氧化碳培养箱。
培养温度适应范围较大，35～40℃均可生长，最适温度为35～37℃。
最适pH为6.5～6.8。
兼性胞内寄生菌，在细胞内外均可发育繁殖，强毒株可长期生存于巨噬细胞内。
生长时还需适当的湿度。
本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18小时一代。
在固体培养基上，一般需2～6周才能长出菌落。
菌落呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。
高级卫生专业资格正高副高临床医学检验临床微生物专业资格(正高-无答案(64)2682
高级卫生专业资格（正高副高）临床医学检验临床微生物专业资格(正高副高)模拟题2021年(65)(总分97.XX99,考试时间120分钟)多项选择题1. 衣氏放线菌的特点是A. 抗酸染色阳性B. 在病灶组织中形成“硫磺样颗粒”C. 在感染部位常形成瘘管D. 口腔中正常菌群E. 厌氧培养2. 分枝杆菌属细菌A. 不产生内毒素B. 产生外毒素C. 致病性与菌体成分索状因子有关D. 致病性与菌体成分蜡质D有关E. 致病性与菌体成分分枝菌酸有关3. 分枝杆菌属细菌的特征是A. 形态细长或略带弯曲，呈分枝状生长的需氧杆菌B. 细胞壁含有很少量脂质C. 具有抗酸性D. 无鞭毛、无芽胞、无荚膜E. 引起急性疾病4. 关于非典型分枝杆菌，叙述正确的是A. 具有抗酸性，故也可被称为非结核抗酸菌B. 可侵犯全身脏器和组织，以肺最多见C. 感染后出现的临床表现与肺结核病完全不同D. X线检查结果与肺结核病相似E. 近年在我国的发病率极低5. 结核分枝杆菌A. 经金胺“O”染色，在荧光显微镜下菌体可发生荧光B. 为兼性胞内寄生菌C. 在一般情况下，分裂速度为18小时一代D. 在液体培养基中多为表面生长，形成菌膜，且干燥易碎而沉于管底E. 在固体培养基表面多数形成光滑菌落6. 关于结核分枝杆菌，叙述正确的是A. 少量铁质可促进结核分枝杆菌生长，铁质可使其产生结核分枝杆菌生长素B. 在结核分枝杆菌选择培养基中，一般要加入抗菌药物，抑制杂菌生长C. 结核分枝杆菌为杆菌D. 触酶试验阴性E. 耐热触酶试验阳性A1/A2题型1. 结核分枝杆菌分裂一次所需的时间约为A. 20分钟B. 1小时C. 10小时D. 18小时E. 20小时2. 不属于分枝杆菌属特点的是A. 有分枝生长趋势B. 胞壁有大量脂质C. 一般不易着色D. 革兰染色呈阴性E. 能抵抗酸性酒精脱色3. 通常用于结核分枝杆菌分离培养的痰液，预处理时常用的消化液是A. 1％KOHB. 2％KOHC. 1％NaOHD. 4％NaOHE. 0.5％NaOH4. BCG属于A. 死菌苗B. 减毒活疫苗C. 类毒素D. 抗毒素E. 荚膜多糖疫苗5. 衣氏放线菌感染的最常见部位是A. 肠道B. 中枢神经系统C. 泌尿道D. 呼吸系统E. 面颈部软组织6. 人型结核分枝杆菌强毒株与弱毒株的区别是前者有A. 分枝菌酸B. 蜡质DC. 蛋白质D. 磷脂E. 索状因子7. 痰标本涂片找到抗酸杆菌，错误的是A. 95％是结核分枝杆菌B. 5％是非结核分枝杆菌C. 5％是麻风杆菌D. 是耻垢分枝杆菌E. 病人多为开放性肺结核8. 不能引起脑膜炎的细菌是A. 麻风分枝杆菌B. 结核分枝杆菌C. 肺炎链球菌D. 大肠埃希菌E. 流感嗜血杆菌9. 罗氏培养基适用于培养下列哪种细菌（）A. 霍乱弧菌B. 肠道细菌C. 白喉杆菌D. 破伤风梭菌E. 结核杆菌10. 淡黄、微混的胸腔穿刺液，渗出液，可初步考虑感染的细菌是A. 金黄色葡萄球菌B. 结核分枝杆菌C. 化脓性链球菌D. 流感嗜血杆菌E. 铜绿假单胞菌11. 结核分枝杆菌复合群不包括A. 人结核分枝杆菌B. 牛分枝杆菌C. 坎纳分枝杆菌D. 非洲分枝杆菌E. 麻风分枝杆菌12. 结核分枝杆菌常用的染色法是A. 吉姆萨染色法B. 革兰染色C. 抗酸染色D. 瑞氏染色法E. 墨汁染色法13. 对疑为结核患者标本进行分离培养，若为阴性，弃去前应观察的时间是A. 2天B. 5天C. 15天D. 4周E. 4～8周14. 关于结核快速诊断方法，叙述错误的是A. PCR技术鉴定DNAB. 标本直接涂片抗酸染色C. 标本集菌后涂片抗酸染色D. 标本涂片荧光染料金胺染色E. 动物试验15. 体外人工培养尚未获得成功的细菌是（）A. 军团菌B. 流感嗜血杆菌C. 放线菌D. 麻风分枝杆菌E. 白喉棒状菌16. 人型结核分枝杆菌与牛型结核分枝杆菌的区别主要在于（）A. 前者发酵糖类，后者不发酵B. 前者可合成烟酸和还原硝酸盐，后者不能C. 前者生长缓慢，后者生长迅速D. 前者对紫外线敏感，后者不敏感E. 前者耐药严重，后者未发现耐药17. 结核分枝杆菌为专性需氧，营养要求较高，生长在固体培养基上多久可出现肉眼可见的菌落A. 2～5周B. 1周C. 3天D. 10周以上E. 1天18. 分枝杆菌属细菌又称（）A. 抗酸杆菌B. 梭状杆菌C. L－型细菌D. 肠球菌E. 棒状杆菌19. 细菌培养时，营养要求特殊的细菌是A. 霍乱弧菌B. 痢疾志贺菌C. 伤寒沙门菌D. 变形杆菌E. 结核分枝杆菌20. 属胞内寄生菌的是A. 大肠埃希菌B. 痢疾志贺菌C. 麻风分枝杆菌D. 破伤风梭菌E. 霍乱弧菌21. 分枝杆菌萋－尼抗酸染色阳性结果是A. 菌体呈蓝色B. 菌体呈黄色C. 菌体呈绿色D. 菌体呈红色E. 菌体呈紫色22. 关于结核分枝杆菌的培养特性，叙述正确的是A. 专性需氧B. 30～42℃时均可生长C. 营养要求不高D. 菌落表面光滑，边缘整齐E. 在液体培养基中呈浑浊生长23. 分枝杆菌的细胞壁结构中含量最多的固体成分是A. 糖类B. 脂类C. 蛋白质D. 水E. 固醇类24. 男，36岁，反复发作咳嗽、咳痰，经抗炎治疗3～4周仍无改善。
用于拟分枝杆菌属细菌鉴定的分子标记、特异性引物和方法与设计方案
本技术涉及微生物分子生物学检测技术领域，具体涉及用于拟分枝杆菌属细菌鉴定的分子标记、特异性引物和方法。
本技术发现位于葡萄糖6磷酸异构酶pgi基因到乙酰辅酶A乙酰转移酶ACAT基因的基因组区段内的2个基因排列区及16个单基因具有拟分枝杆菌属特异性，可用于拟分枝杆菌属水平的鉴定，其中部分单基因还具有拟分枝杆菌种水平特异性，可用于拟分枝杆菌种水平的鉴定。
基于此，本技术建立了利用PCR技术鉴定拟分枝杆菌的方法，可直接根据PCR扩增结果进行判断而无需测序，更适用于临床样本的特异性快速检测，可广泛应用于拟分枝杆菌的临床检测和鉴定以及结核病的辅助诊断和流行病学监测等相关领域。
技术要求1.葡萄糖-6-磷酸异构酶基因pgi至乙酰辅酶A乙酰转移酶基因ACAT的基因组区段内的基因排列区、基因或其编码蛋白在作为拟分枝杆菌属细菌分子标记中的应用，所述基因排列区为以下（1）和/或（2）：（1）磷酸半乳糖磷酸转移酶基因sugtrans - 糖基转移酶GT4-1-糖基转移酶基因GT4-2-RfbX -糖基转移酶基因GT1-1-转运子基因YdcF -糖基转移酶基因GT1-2-假想蛋白基因hypothetic2388；（2）ABC转运透性酶基因- ABC转运透性酶基因-哺乳动物细胞侵入蛋白基因MCE1-MCE2-MCE3-MCE4-MCE5-MCE6-假想蛋白基因hypothetic690- DUF3298结构域蛋白基因DUF3298；所述基因为选自XRE、pdxH、tetR654、hypothetic246、hypothetic129、imm63、hypothetic900、tetR603、GT4-1、GT4-2、RfbX、GT1-1、YdcF、GT1-2、hypothetic2388、ACAT中的一个或多个。
2.葡萄糖-6-磷酸异构酶基因pgi至乙酰辅酶A乙酰转移酶基因ACAT的基因组区段内的基因排列区、基因或其编码蛋白、或所述基因排列区、基因或所述编码蛋白的检测试剂在制备用于检测拟分枝杆菌属细菌的试剂或试剂盒中的应用，所述基因排列区和所述基因同权利要求1所述。
微生物检验实验室分枝杆菌属检验标准操作规程
微生物检验实验室分枝杆菌属检验标准操作规程微生物检验实验室分枝杆菌属检验标准操作规程1. 概述分枝杆菌属是一类细长的、具有分枝生长趋势的需氧杆菌，因具有耐受或抵抗酸和乙醇脱色的特点，又称为耐酸或抗酸菌。
分枝杆菌属至今已发现80多个种，除结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌外，其他分枝杆菌，如堪萨斯分枝杆菌、耻垢分枝杆菌等，统称为非结核分枝杆菌。
2. 标本类型痰液、体液（包括脑脊液、腹水、胸水）组织，粪便等标本。
3. 鉴定3.1 形态与染色：菌体细长，或稍弯曲，两端钝圆，大小为（0.2~0.5um）×（1~5um）。
革兰染色不易着色，抗酸染色呈红色。
以痰液直接涂片，结核分枝杆菌多为单个存在，有时呈V、Y、人字形排列，痰菌量多时可排列为束状或集聚成团。
荧光染料金胺“O”染色，在荧光显微镜下观察呈金黄色荧光。
3.2 培养特性：结核分枝杆菌生长缓慢，繁殖一代约需18h，因此在罗氏固体培养基上需要培养2~6星期方可见到菌落。
菌落多为粗糙型，不透明，乳白为米黄色，呈干燥颗粒状，形似菜花。
液体培养基中结核分枝杆菌生长较快，可形成表面菌膜或沉于管底。
3.3 生化反应：不发酵糖类，耐热触酶、耐热磷酸酶和吐温80水解试验均阴性，尿素酶、中性红、结核分枝杆菌烟酸、烟酰胺酶和硝酸盐还原试验均阳性。
3.4鉴别要点：3.4.1 本菌特征：菌体细长，抗酸染色呈红色；生长缓慢，菌落乳白或米黄色，呈干燥颗粒状，形似菜花状；不发酵糖类，尿素酶、中性红试验阳性。
3.4.2 与牛分枝杆菌的鉴别：结核分枝杆菌菌体细长，烟酸、烟酰胺酶、硝酸盐还原试验均为阳性；牛分枝杆菌菌体较短、较粗，烟酸、烟酰胺酶、硝酸盐还原试验均为阴性。
3.5 操作步骤3.5.1 中性培养基3.5.1.1 标本的处理痰液：挑取约5ml痰液至已标记的50ml离心试管中，加等量的2%N-乙酰半胱胺-氢氧化钠前处理液（去污染）；漩涡振荡20秒；静置15分钟，勿超过20分钟；加无菌PBS（pH6.8）至约50ml,盖紧盖子；离心3000r/min，15分钟；倒掉上清液；添加1-3mlPBS(pH6.8)以中和pH至6.8.体液（包括脑脊液、腹水、胸水）：无菌体液直接接种；标本量>10ml,离心3000r/min，15分钟，取沉淀物接种；污染标本，须同痰液处理方法后再接种。
第八章 分枝杆菌属
微生物学检查 1 直接涂片染色观察，菌数少时需浓缩集菌 2 分离培养鉴定及快速诊断
防治 1 应用卡介苗预防接种（最有效） 2 治疗原则：早期、足量、规范、联合、全程用
药
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第二节 麻风分枝杆菌
一、 生物学特点
其大小、形态、染色均与结核杆菌类似，但菌体略
粗，多存在于细胞内——麻风细胞（有大量麻风杆菌存
试剂
旧结核菌素（OT） 两种
纯蛋白衍生物（PPD）—PPD—C，BCG—PPD
方法：前臂皮肤注射，48-72h后观察结果
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结果：
红肿硬结＞5mm，阳性（ ＞ 15mm，强阳性） 红肿硬结＜5mm，阴性
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阳性： 过去/BCG成功，有免疫力 强阳性：现在 活动性结核感染 阴性： 无/未接种BCG，或细胞免疫功能低
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(二)培养特性
专性需氧
营养要求高，常用罗氏培养基（蛋黄、甘油、 天门冬素、马铃薯、无机盐、孔雀绿等）
生长缓慢，“菜花样菌落”，乳白色干燥不透 明，表面呈颗粒结节，边缘不整
在液体培养基中呈粗糙皱纹状菌膜生长。
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结核杆菌培养的菌落
（三）抵抗力
“
”：抗干燥、
第八章 分枝杆菌属
——医学检验技术教研室
学习目标：
1、掌握：结核分枝杆菌的生物学性状、致病性与 免疫性、标本采送的注意事项，防治原则。 2、熟悉：结核分枝杆菌的微生物学检查方法。 3、了解：麻风分枝杆菌。
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第一节 结核分枝杆菌
生物学性状 致病性与免疫性
实验室检查 防治原则 知识小结 布置作业&预习新课
分枝杆菌属及检验
• 全球性卫生问题
– 是艾滋病高发区人群的首要死因
• 世界防治结核病日
– 3月24日
结核分枝杆菌 －－形态染色
• 细长略弯，丝状或分 枝生长
• 无芽孢，无鞭毛，无 荚膜,无菌毛
• 革兰染色阳性，不易 着色
• 抗酸染色阳性,菌体被 染成红色
• 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～ 4X0.4μm。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的 细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特 别是有大量分枝菌酸(mycolic acid)包围在肽聚糖层
※液体培养基：形成菌膜， 有毒株呈索状生长
• 初次分离需要营养丰富的培养基。常用的有罗氏 （Lowenstein-Jensen）固体培养基，内含蛋黄、 甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑
制杂菌生长，便于分离和长期培养。蛋黄含脂质
生长因子，能刺激生长。根据接种菌多少，一般 2～4周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜 状，乳白色或米黄色，不透明。在液体培养基中
教学大纲
• 掌握内容
– 结核分枝杆菌主要生物学性状；致病物质及 致病机制；结核菌素试验原理及应用；微生 物学检查法
• 了解内容
– 麻风分枝杆菌的形态染色特性、致病性及微 生物学检查法
• 全世界有1/3人口，19亿人已感染结核分枝杆 菌，15岁以下儿童感染者达1.8亿，每秒种就有一 人感染，全球有2 000万活动性患者，新发病例 1 000万人，每年有300万人死于结核，死于结核的 人数超过AIDS疾病、腹泻及热带病死亡人数的总 和，是传染病死亡最多的。近年来AIDS的发病率 上升，伴随结核病上升。我国解放前结核严重流 行，发病率大于1%，有十痨九死之称，建国后人 民生活水平提高，卫生条件的改善，抗痨药物的 发现，特别是积极开展防痨工作，接种BCG，发 病率和死亡率大大降低，但近年来有抬头趋势。
分支杆菌属细菌检验PPT课件
结核 分枝 杆菌 复合群
迅速生长菌
迅速生长分菌（Runyon IV群）
非 结 核 分 枝 杆 菌
不能培养菌
第一节、结核分枝杆菌 核分枝杆菌简称结核杆菌，是引起结核病的病原 菌。对人致病的主要有人型、牛型和非洲型分支 杆菌。其中人型结合分支杆菌的发病率最高。结 核分枝杆菌经多途径感染，侵入全身多个器官， 但以肺结核为最多见。
分枝杆菌属分类
缓慢生长菌
光产色菌 （Runyon I群）
分 枝 杆 菌 属
暗产色菌 （Runyon II群） 不产色菌 （Runyon III群）
结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 非洲分枝杆菌 坎纳分枝杆菌 田鼠分枝杆菌 卡介苗 鸟分枝杆菌复合群 堪萨斯分枝杆菌 戈登分枝杆菌 „„ 龟脓肿分枝杆菌群 偶发分枝杆菌 „„ 麻风分枝杆菌
其中以肺结核最常见。
※结核分支杆菌可经淋巴-血液播散，引起脑结核、肾 结核、结核性胸膜炎等
3.免疫性
• 抗体无保护作用，临床辅助诊断有意义。细胞免疫发 挥重要抗感染作用
•
TB菌的感染率很高，发病率却较低。抗结核的免疫称 为有菌免疫，菌体及其成分消失，免疫力也随之消失
4、结ห้องสมุดไป่ตู้菌素试验
结核菌素即结核杆菌蛋白质，目前常用结核菌素制剂是纯
种所致。
4）用途：①选择卡介苗的接种对象和测定接种效果；② 辅助诊断婴幼儿结核病；③在流行病学中，作为调查人群 感染结核杆菌的一个指标；④测定肿瘤患者的细胞免疫功 能。
结核菌素试验
纯蛋白衍生物 (PPD)，是用三氯醋酸沉淀结核分枝杆菌培养 滤液后的纯化物。注入皮内后如受试者已感染结核，则结核 菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，形成迟发型超敏反应性炎 症
的减毒变异株
分枝杆菌属及检验考点总结
分枝杆菌属及检验考点总结一、结核分枝杆菌引起人和动物结核病的病原菌。
目前已知在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。
（一）生物学特性1.形态与染色G+，细长或略带弯曲的杆菌，在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。
抗酸菌。
既往在组织中曾发现革兰阳性的非抗酸颗粒，接种动物可产生典型的结核病变，后被称为Much颗粒。
2.培养特性◆专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%～10%C02环境中可刺激其生长。
需适当的湿度。
本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18h一代。
◆固体培养基：2～6周才能长出菌落，呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。
◆液体培养基中生长较快，多为表面生长，形成菌膜，且干燥易碎而沉于管底。
有毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长，无毒株则无此现象。
◆营养要求较高，必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能生长。
3.生化反应◆不发酵糖类，能产生过氧化氢酶，耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性，脲酶试验和中性红试验均为阳性。
◆人型结核分枝杆菌：烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性；牛型结核分枝杆菌均阴性。
4.抵抗力：对酒精敏感。
5.变异性：形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变异。
毒力变异：卡介苗（BCG）——将有毒的牛型结核分枝杆菌培养。
于含有甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年传种230代，获得减毒菌株，再接种动物，不能致病而使其获得免疫力。
用于预防结核病。
（二）临床意义1.致病性◆不产生内毒素和外毒素，也无荚膜和侵袭性酶。
◆主要致病物质：脂质。
索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）、磷脂（形成结核结节）、硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）、蜡质D（引起迟发性过敏反应）。
◆主要通过呼吸道、消化道和受损伤的皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起的肺结核最多见。
◆肺外感染可发生在脑、肾、肠及腹膜。
结核分枝杆菌菌种鉴定
结核分枝杆菌菌种鉴定
结核分枝杆菌是一种引起结核病的病原菌，它是一种革兰氏阳性的杆状细菌，属于分枝杆菌科。
结核分枝杆菌是一种非常重要的病原菌，因为它可以引起结核病，这是一种严重的传染病，可以影响人类的健康和生命。
结核分枝杆菌的鉴定是非常重要的，因为它可以帮助医生确定病人是否感染了结核分枝杆菌。
鉴定结核分枝杆菌的方法有很多种，其中最常用的方法是通过培养和生化试验来鉴定。
通过培养可以将结核分枝杆菌从样本中分离出来。
这个过程需要将样本放入含有营养物质的培养基中，然后在适当的温度和湿度下进行培养。
如果样本中存在结核分枝杆菌，它们将开始生长并形成菌落。
这些菌落可以被用来进行进一步的鉴定。
通过生化试验可以确定菌落中的细菌种类。
这个过程需要将菌落放入含有特定化学物质的试剂中，然后观察它们的反应。
不同种类的细菌对不同的化学物质会有不同的反应，这可以帮助确定细菌的种类。
除了培养和生化试验，还有其他的鉴定方法，如PCR和免疫学方法。
这些方法可以更快速和准确地鉴定结核分枝杆菌，但它们需要更高的技术和设备。
结核分枝杆菌的鉴定是非常重要的，因为它可以帮助医生确定病人
是否感染了结核分枝杆菌。
通过培养和生化试验等方法，可以确定细菌的种类，从而帮助医生制定更好的治疗方案。
分枝杆菌属、诺卡菌属、放线菌属鉴定—结核分支杆菌(微生物检验课件)
变异性
❖ 形态结构变异：
结核杆菌的L型：颗粒状、丝状、Much颗粒
❖ 毒力变异：
卡介苗BCG：Calmette和Guérin将牛分枝杆菌经13年 230次传代而获得的减毒活疫苗株
❖ 耐药性变异：
耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多
二、致病性
荚膜 与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用） 致
病
保护（阻止有害物质的进入菌体）
物 脂质
质
索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）
磷脂（形成结核结节）
硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）
蜡质D（引起迟发性过敏反应）
蛋白质 引起迟发性过敏反应
所致疾病
❖ 感染方式
呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体
❖ 所致疾病
结核病，以肺结核常见
肺部感染
❖ 原发感染：外源性感染 多发生于儿童（无免疫力） 原发综合征 ( 肺门淋巴肿大等) 形成结核结节（即结核肉芽肿），少数病灶扩散，引起全身TB 转归
4、动物试验 :取经浓缩集菌处理的标本1.0毫升注射于豚鼠腹股沟皮 下，经3～4周饲养观察，如出现局部淋巴结肿大，消瘦或结核菌 素试验阳性，可及时剖检； 若观察6～8周后，仍未见发病者，也要剖检。剖检时应注意观 察淋巴结、肝、脾、肺等脏器有无结核病变。
5、基因诊断：涂片检查需 5×103-4/ml，培养需1×102/ml，标本 中菌数少于此值不易被检出，PCR技术用于快速检测，少至每ml 几个细菌均能检出，且速度很快，因此应用前景比较广泛。但由 于实验器材的污染易出现假阳性。
培养
❖ 特点
专性需氧 生长缓慢 营养要求高，常用罗氏培养基
❖ 生长现象
液体：表面生长（菌膜） 固体：颗粒、结节、花菜状菌落，乳白
结核分枝杆菌实验室检测方法
高会霞等，五种结核病实验室检测方法对结核病诊断价值的效果评价.实用检验医师杂志，2012，4（3）：157-160.
五种结核检测方法效果评价
结核组：1260例
非结核组：100例
改良罗氏培养
荧光PCR
涂片法
萋尼染色法—红色—普通显微镜（高倍）
3
涂片镜检--抗酸染色
联染法：敏感性高，特异性好，速度快！
敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条菌时可检出，而培养可检出>10-100条菌.
04
不能区分活菌和死菌
抗酸染色对分枝杆菌非特异，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（红球菌属）、Legionella micdadei（军团菌）、cryptosporidium（隐孢子虫）、Isospora（等孢球虫）等有抗酸菌特点
1
结核分枝杆菌属于缓慢生长分支杆菌
2
结核分枝杆菌群
偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟/脓肿、胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶然分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、浅黄分枝杆菌、土分枝杆菌、草分枝杆菌、不产色分枝杆菌、海-溃疡分枝杆菌、金色分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌等
偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌脓肿亚种属于迅速生长型，鸡蛋培养基上3-5天可见菌落
发光二极管荧光显微镜（LED）
结核菌培养仍是目前诊断的金标准．尤其是药敏试验结果在指导临床用药及耐药性检测等方面具有重要作用, 是鉴定是否为活菌的可靠方法．
传统的固态培养法 需要4～6周才能检测到结核菌的生长．而且阳性率也只有30％-40％；特异性差．各种分枝杆菌均可生长。要确定是否为结核菌．需结合分枝杆菌菌种鉴定和药物敏感性试验。
分枝杆菌(检验)
（三）标本直接检查 1、形态学检查 ▪ 直接涂片染色镜检
痰厚涂片，抗酸染色后，观察至少100个 视野，结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色，其 他细菌和细胞为蓝色。结果应报告“找到或 未找到抗酸性杆菌”，而不能报告“找到结 核分枝杆菌”。
第二十八页，共44页。
2、核酸检测 PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染 3、抗PPDIgG的检测 ELISA 4、抗原检测 ELISA
➢老年人 ➢患严重结核病或其他传染病（如麻疹等）的患者 ➢获得性免疫功能低下，如艾滋病患者或使用免疫
抑制剂治疗者
第三十七页，共44页。
▪ 应用： ①选择BCG接种对象及测定接种效果； ②诊断婴幼儿结核病； ③在末接种BCG的人群中作结核分枝杆菌感染
的流行病学调查； ④测定肿瘤病人的细胞免疫功能。
第三十八页，共44页。
第三页，共44页。
全球结核病疫情现状
据世界卫生组织报道，目前全球有近1/3的人 已感染结核杆菌，也就是20亿人口感染了结核菌。 全球有活动性肺结核病人约2000万，每年新发结核 病人约800-1000万，每年约有300万人死于结核病。 结核病已成为全世界成人因传染病而死亡的主要疾 病之一。我国是全球22个结核病高负担国家之一， 活动性肺结核病人数居世界第二位。
第三十一页，共44页。
(五)药物敏感性试验 将纯培养物菌悬液，接种含各种浓度药
物的固体培养基上，同时做不含药物的对照 组。经过培养，含有药物的培养基上菌落数 目是对照组的75％以上，则认为该菌对该药 物浓度为完全耐药，如无菌落生长则为敏感。
第三十二页，共44页。
（六）免疫学诊断 1、结核菌素试验 ▪ 原理：纯蛋白衍生物(PPD) 注入皮内后，
第十五页，共44页。
分枝杆菌属细菌检验ppt课件
（3）结果 48h-72h ,根据注射部位是否出现红肿判5mm为强阳性
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第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
（4）结核菌素试验意义 选择卡介苗接种对象、测定卡介苗接种后的免疫效果 了解人群结核菌的自然感染率 作为婴幼儿结核病的辅助诊断 测定肿瘤患者的细胞免疫功能
第一节 分枝杆菌属
检验程 序
涂片抗酸 染色镜检
标本 标本前处理
核酸 检测
抗体 检测
接种液体 培养基
接种固体培养基 可疑菌落
慢性生长菌
快速生长菌
接种小白鼠 豚鼠
脏器涂片 镜检
菌种鉴定
抗酸染色
鉴定试验
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第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
4.形态学检查 （高压灭菌后进行）
（1）直接涂片染色镜检 （2）浓缩集菌涂片检查法 （3）荧光染色：观察形态 黄绿色、橙色荧光 （4）初步报告：检出抗酸分枝杆菌（结核杆菌？）
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第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
（2）蛋白质 诱发超敏反应 （3）糖类 抵抗吞噬作用 2.所致疾病 （1）经多途径感染，引起全身各组织结核病，以肺结核最多见 （2）类型 原发感染和继发感染 3.免疫性 抗结核免疫以细胞免疫为主
※抗结核免疫属带菌免疫或称传染性免疫 ※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现
微生物学检验
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分枝杆菌属、诺 卡菌属、放线菌属鉴定
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本章内容
1 第一节 分枝杆菌属 2 第二节 诺卡菌属 3 第三节 放线菌属
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分枝杆菌微生物学查验
分枝杆菌1. 分枝杆菌属(Mycobacterium)：（1）一类细长、略带弯曲、呈分枝状生长细菌，革兰染色阳性，无芽胞、无荚膜；（2）抗酸染色阳性，故又称抗酸杆菌；（3）营养要求较高，常常利用罗琴培育基；（4）生长缓慢，2~8周后方可见菌落；（5）G+C mol%为62%~70%；（6）由于结核分枝杆菌的耐药和AIDS发病率呈上升趋势，结核病成为危胁人类健康的一个严峻的全世界性公共卫生问题。
2. 主要致病种类：人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌3. 分枝杆菌属分类（1）典型结核分枝杆菌：人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌（2）非典型分枝杆菌：（3）其他：副结核分枝杆菌、麻风杆菌、鼠麻风杆菌4. 结核分枝杆菌（1）临床意义A. 本菌抵抗力强，可存活6~8月，随着漂浮于空气中的微滴核被吸入呼吸道，植入肺泡发育繁衍致使结核发生；B. 引发结核病，随社区人群生活状况不同发病率有所不同，全世界约有1/3人感染，有人类死亡之首和白色瘟疫之称；C. 免疫性：有菌免疫或称传染性免疫，细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用。
D. 细菌可经血、淋巴，在骨、关节、肾、脑膜等处引发相应的结核病（2）致病物质荚膜：抗吞噬；细胞壁脂质；磷脂：刺激单核细胞增生、结核结节形成、干酪样坏死；分枝菌酸：抗酸性；索状因子：破坏线粒体膜；蜡质D：诱发IV型超敏反映；硫酸脑苷脂：抑制吞噬细胞；蛋白质；致病机制：胞内寄生，细胞免疫为主，在巨噬细胞中存活，引发Ⅳ型超敏反映。
（3）结核结节的形成：A. 是单核细胞参与的炎性肉芽肿反映，是细胞免疫和IV型变态反映平衡的结果；B. 细菌的脂质抵抗吞噬，巨噬细胞被破坏，形成原发感染。
3~6周后，细胞变形，IV 型变态反映产生；C. 磷脂刺激巨噬细胞转化为上皮样细胞融合成多核巨细胞。
抑制蛋白酶对组织溶解，产生干酪样坏死；（4）Koch现象（郭霍现象）和IV型变态反映：有毒结核分枝杆菌被第一次接种豚鼠10－14天，局部产生末节，形成肿块→坏死溃疡侵入周围淋巴结→淋巴血流全身播散，经久不愈→动物死亡。
结核分枝杆菌的检验及鉴别
结核分枝杆菌的检验及鉴别【摘要】分枝杆菌属是一类细长略弯曲的细菌，有分枝生长趋势，可呈丝状或菌丝样生长。
无鞭毛，无芽孢。
本属细菌的主要特点是细胞壁脂质含量高，其主要成分是分枝菌酸。
本菌需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢，个别菌种目前尚不能人工培养。
结核分枝杆菌复合群是人类结核病的主要病原体，包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌。
【关键词】分枝杆菌；检验1生物学特性1.1形态染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，单个、成堆或呈束状排列，大小（0．3～0．6）μm×（1～4）μm，形态如球状、串珠状或丝状，革兰染色不易着色，抗酸染色阳性，一般分枝杆莴采用齐-尼（Ziehl-Neelsen，E-N）抗酸染色后，结核分枝杆菌呈红色，非抗酸菌染色呈蓝色。
1.2培养特性本菌为专性需氧菌。
最适生长温度为37℃，低于30℃不能生长。
pH 6．5～6．8。
营养要求较高，但生长缓慢。
必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能良好生长。
本菌在培养基上缓慢生长，一般2～4周才能生长出菌落。
菌落表面干燥、粗糙、隆起、呈颗粒状、结节状或菜花状、乳A色或淡黄色，不透明。
结核分枝杆菌在5％～l0％的C02条件下对其生长有促进作用。
其对营养要求高，对一些营养成分有特殊的要求。
例如，结核分枝杆菌专嗜甘油为碳源，而牛分枝杆菌则以丙硐酸盐为碳源。
天冬酰胺是结核分枝杆菌生长最好的氮源，钾、镁、铁、磷等无机离子对其生长有促进作用。
1.3生化反应结核分枝杆菌的生化反应不活泼。
不发酵糖类。
多数菌株触酶试验阳性，但68℃加热后酶活性消失即热触酶阴性，借此可与非结核分枝杆菌区别，后者热触酶试验大多阳性。
结核分枝杆菌硝酸盐还原试验、烟酸试验和烟酰胺酶试验阳性，而牛分枝杆菌则为阴性，可有助于两菌的鉴别。
2细菌学检验结核病的症状和体征往往都不典型，虽可借助x线摄片诊断，但确诊仍依赖于细菌学检验。
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4.结核菌素试验
（1）原理 用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核 杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反应的试验。
（2）结核菌素试剂 （PPD 5单位）旧结核菌素（old tuberculin，OT)，纯蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD) （3）结果 48h-72h ,根据注射部位是否出现红肿判断结果 ＜5mm为阴性
第二节 诺卡菌属
一、诺卡菌属
（二）生物学特性
1.专性需氧
2.菌体内含分枝菌酸 3.分布：土壤中，多数为非致病菌
4.常见致病菌：
星形诺卡菌（N. asteroides） 巴西诺卡菌（N. brasiliensis）
豚鼠诺卡菌（N. caviae）
5.培养：菌落表面多皱、致密、干燥或湿润，呈黄、黄绿、橙红等色。 用接种环一触即碎
第二节 诺卡菌属
（三）星形诺卡菌
4.鉴定：
（1）“硫磺样颗粒”压片 （2）取痰、脑脊液、脓汁 涂片→革兰染色及抗酸染色
（3）分离培养 沙保弱或普通琼脂培养基
（4）生化试验
第二节 诺卡菌属
（四）巴西诺卡菌
• 巴西诺卡菌及星形诺卡菌因侵入皮下组织，引起慢性化脓性
肉芽肿，表现为皮下肿胀、脓肿及多发性瘘管，如发生于足 部或腿部，称足分枝菌病（Mycotoma）。 本病也可能由马 杜拉放线菌及某些真菌引起 • 该菌七叶苷、黄嘌呤、肌醇、甘露醇均阳性，可与星形诺卡
第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
（2）蛋白质 诱发超敏反应
（3）糖类 抵抗吞噬作用 2.所致疾病
（1）经多途径感染，引起全身各组织结核病，以肺结核最多见
（2）类型 原发感染和继发感染 3.免疫性 抗结核免疫以细胞免疫为主 ※抗结核免疫属带菌免疫或称传染性免疫 ※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现
第一节 分枝杆菌属
3.培养：
•营养要求：不高（沙氏或普通琼脂培养基） •气体环境：需氧，有气生菌丝 •培养温度：室温或37℃
•生长速度：缓慢生长，约1w
•色素：星形诺卡菌：黄色或深橙色，无白色菌丝 巴西诺卡菌：有白色菌丝
•菌丝断裂： 5d后→链球状或链杆状（放线菌属：24h开始)
•培养特征：菌落：有皱褶、颗粒状 •液体：菌膜
•对干燥、酸（3% HCl或6% H2SO4) 或碱（4% NaOH)、碱性染料（孔雀 绿、结晶紫）、青霉素等抗生素等有抵抗力
第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
５.变异性
（１）形态结构变异：
结核杆菌的L型：颗粒状（Much颗粒——病灶中革兰阳性非 抗酸性）、丝状
（２）毒力变异：
卡介苗(BCG)：Calmette和Guérin将牛型分枝杆菌经13年 230次传代而获得的减毒菌株——活疫苗
第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
（5）报告方式
报告方式 抗酸染色镜检结果 仔细检查300个视野未发现抗酸杆菌
±
＋ 2＋
300个视野内发现1~2条抗酸菌
100个视野内发现1~9条抗酸菌 10个视野内发现1~9条抗酸菌
3＋
4＋
每个视野内发现1~9条抗酸菌
每个视野内发现9条以上抗酸菌
第一节 分枝杆菌属
•脓肿诺卡菌 •新星诺卡菌 •豚鼠耳炎诺卡菌 •巴西诺卡菌 •短链诺卡菌 星形诺卡菌 非洲诺卡菌 少食诺卡菌 假巴西诺卡菌 南非诺卡菌
•肉色诺卡菌
•皮瘟诺卡菌
老兵诺卡菌
诺卡菌属主要形成基内菌丝，菌丝纤细，一般无气生菌丝。少 数菌产生一薄层气生菌丝，成为孢子丝。基内菌丝和孢子丝均有横 隔，断裂后形成不同长度的杆形
（３）耐药性变异：
耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多
第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
（二）微生物检验
1.标本：根据感染部位的不同来采集不同的标本，最常用痰液 标本 2. 标本前处理
目前有酸（4%HCl）处理和碱（4%NaOH）处理两种方法
3.检验程序
第一节 分枝杆菌属
检验程 序 标本 标本前处理
•犰狳是动物感染模型
第一节 分枝杆菌属
麻 风 分 枝 菌
犰狳
第一节 分枝杆菌属
二、麻风分枝菌
2.所致疾病:
传播途径：主要是密切接触
麻风：侵害皮肤、粘膜和神经系统
临床分型：（临床表现、病理特征和菌检结果） •瘤型麻风（占20%~30%，传染性强）
•结核样型麻风（占60%~70%，传染性弱）
•界线类综合症（占5%，可转化为以上两型）
第一节 分枝杆菌属
分枝杆菌属（Mycobacterium）概述
•是一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名主要特 点 •细长弯曲，分枝状生长 •细胞壁含有大量脂质（分枝菌酸）
•常用抗酸染色鉴定，呈抗酸染色阳性（红色）
•引起疾病多呈慢性，且伴肉芽肿
第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
(一)生物学性状
为正常菌群，如无并发感染一般为慢性无痛性经过（放线菌病）
常可引起脓肿和瘘管
脓肿或瘘管内容物可检出“硫磺样颗粒”
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3.防治原则：早发现（检验时，标本通常采用刮片），早隔离、
早治疗，治疗药物主要有砜类（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福 平、氯苯吩嗪及丙硫异烟胺
第一节 分枝杆菌属
麻风“狮面”
第一节 分枝杆菌属
三、非典型分枝菌
1.非典型分枝杆菌：除人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌与麻风 分枝杆菌以外的分枝杆菌菌群，也称为非结核分枝杆菌 2.致病性：多存在于自然界，为条件致病菌 3.分类：根据菌落色素和生长速度分为4组 •第Ⅰ组（RunyonⅠ群）：光产色菌 •第Ⅱ组（Runyon Ⅱ群）：暗产色菌
试验(－)(黏液放线菌除外)
第三节 放线菌属
放线菌菌落特点
第三节 放线菌属
5.鉴定
（1）形态染色 G+、非抗酸性丝状菌
（2）培养困难，厌氧或微需氧
（3）生化反应 不典型 （4）硫磺样颗粒（菌落） 压片或组织切片，镜下见颗粒呈菊花状
硫磺样颗粒(sulfur granule)
第三节 放线菌属
6.临床意义
(Mlvium complex ,MAC) 、玛尔摩分枝杆菌、溃疡分枝杆菌
第 Ⅳ 组（ Runyon Ⅳ 群）：迅速生长菌：龟分枝杆菌、脓肿分 枝杆菌、偶发分枝杆菌
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第二节 诺卡菌属
一、诺卡菌属
（一）种类：诺卡菌属（Nocordio ）中有22个种，广泛分布于土壤， 与医学有关的13个菌种：
•第Ⅲ组（Runyon Ⅲ群）：不产色菌
•第Ⅳ组（Runyon Ⅳ群）：迅速生长菌
光产色菌
第一节 分枝杆菌属
4.代表菌种
第Ⅰ组（RunyonⅠ群）：光产色菌：堪萨斯分枝杆菌、猿猴分
枝杆菌 第 Ⅱ 组（ Runyon Ⅱ 群）：暗产色菌：蟾蜍分枝杆菌、苏加分 枝杆菌、瘰疬分枝杆菌 第 Ⅲ 组 （ Runyon Ⅲ 群 ） ： 不 产 色 菌 ： 鸟 分 枝 杆 菌 复 合 群
第二节 诺卡菌属
（三）星形诺卡菌
1.形态：球形、丝状（与以色列放线菌相 似，但末端不膨大） 革兰染色：阳性
美蓝染色
抗酸染色：阳性 脱色时间延长→阴性(与TB区别)
2. 类似“硫磺样颗粒”（称色素颗粒）
渗出液、痰或脓汁中有时可见淡黄、 红色或黑色小颗粒
G+丝状，弱抗酸性
第二节 诺卡菌属
（三）星形诺卡菌
微生物学检验
国家卫生和计划生育委员会规划教材
《微生物学检验》
第十章 分枝杆菌属、诺 卡菌属、放线菌属鉴定
张加林 楚雄医药高等专科学校
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本 章 内 容
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第一节 分枝杆菌属 第二节 诺卡菌属
第三节 放线菌属
学习目标及重点
学习目标：
1.掌握结核分枝杆菌生物学特征，痰涂片抗酸染色及报告。
菌区别
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第三节 放线菌属
一、放线菌属
1.致病：放线菌能引起牛和人的放线菌病（Actinomycosis）的病
原菌，属于内源性感染。因菌落生长呈放射状而得名。
2.常见种类： 衣氏放线菌(A.israelii) (最多见) 牛放线菌(A.bouis) 内氏放线菌（A.naeslundii)
黏液放线菌(A.viscous)
2.熟悉结核菌素试验的临床意义；结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌； 星形诺卡菌的鉴别要点，诺卡菌与分枝杆菌、棒状杆菌的鉴别。 3.了解结核分枝杆菌的致病物质；麻风分枝杆菌致病性；放线菌 属的生物学特性、致病及免疫性
本章重点： ★结核分枝菌的生物学特性、培养特性
★结核分枝菌的微生物学检验 ★结核分枝菌与其他分枝菌的鉴别
≥ 5mm为阳性
＞15mm为强阳性
第一节 分枝杆菌属
一、结核分枝菌
（4）结核菌素试验意义 选择卡介苗接种对象、测定卡介苗接种后的免疫效果 了解人群结核菌的自然感染率
作为婴幼儿结核病的辅助诊断
测定肿瘤患者的细胞免疫功能
第一节 分枝杆菌属
二、麻风分枝菌
1.生物学特性
•1873年挪威学者Armauer Hansen从麻风患者皮肤结节中发现， 又名Hansen杆菌，具抗酸性 •细胞内寄生，有麻风杆菌寄生的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞 •体外人工培养尚未成功
龋齿放线菌（A.adontolyticus)
第三节 放线菌属
3.培养：厌氧或微需氧
• 气体环境：5％ CO2 • 培养基：脑心浸液琼脂平板 • 温度与时间：37℃，24h～48h • 菌落:灰白色蜘蛛状、不规则结节状或臼齿状菌落, 初次分离时 (粗糙) 4.生化特性：葡萄糖(＋) 甘露醇(＋)吲哚(－) 溶血(－) 触酶
一、结核分枝菌
5.分离培养 L-J斜面或平板：生长缓慢，涂片抗酸染色 快速培养系统：自动报告 6.核酸检测：PCR法