细胞内过氧化物酶的显示
细胞内过氧化酶的显示
实验九细胞内过氧化酶的显示【目的要求】1、了解显示细胞内过氧化酶的方法的原理。
2、熟悉过氧化物酶在细胞中的一般分布。
【实验原理】细胞中存在的过氧化物酶系能将许多胺类氧化成有色化合物。
例如联苯胺便可被细胞中的过氧化酶氧化成蓝色或棕色的物质（蓝色物质为中间产物联苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙），从而显示出细胞内过氧化物酶的存在和分布。
另外，细胞的代谢过程中会产生对机体有害的过氧化氢（H2O2），可被细胞中存在的过氧化氢酶分解成氧气和水。
通过植物块茎与过氧化氢相遇后所发生的反应可间接证实该酶的存在。
【器材与试剂】1、器材：光学显微镜、剪刀、镊子、刀片、染色缸、牙签、载玻片、盖玻片。
2、材料：大白鼠（或豚鼠）、马铃薯。
3、试剂：3%过氧化氢溶液、0.5%硫酸铜溶液、联苯胺混合液、1%番红水溶液。
4、试剂的配制：（1）3%的过氧化氢溶液：量取H2O21.5ml加入到48.5ml蒸馏水中。
（2）0.5%硫酸铜溶液：称取硫酸铜0.5g溶于100ml蒸馏水中，再加3%的过氧化氢溶液2滴。
（3）1%番红水溶液：称取番红O（Safranine O）染料粉1.0g溶于100ml蒸馏水中。
【内容与方法】一、大白鼠（或豚鼠）骨髓细胞过氧化物酶的显示1、将大白鼠置于装有乙醚棉球的标本缸中，使其麻醉后断颈处死，剪开其大腿上的皮肤和肌肉，取出股骨，用剪刀剪断或折断，再用牙签挑取骨髓制备骨髓涂片，晾干。
注意：涂片时要薄而均匀，否则无法观察结果。
2、将涂片放入盛有0.5%硫酸铜的染色缸中固定30秒钟。
3、取出涂片直接转入盛有联苯胺混合液的染色缸中处理3分钟。
4、清水冲洗。
5、放入1%番红溶液中处理1分钟。
6、清水冲洗，室温下晾干。
7、观察。
光镜下可见骨髓细胞中存在一些被染成蓝色或棕色的颗粒，便是过氧化氢酶存在的部位。
注：该项实验也可用小鼠的血液为材料，观察血液中巨噬细胞所呈现出的蓝棕色颗粒。
二、植物细胞中过氧化氢酶的间接显示取马铃薯块茎一个，用徒手切片法切取一小薄片放于载玻片上，滴加3%的过氧化氢溶液，稍等片刻，可见组织四周出现大量的气泡，提示植物细胞中有过氧化氢酶的存在，用煮熟的马铃薯重复上述过程，结果应该如何？【作业与思考】1、绘图表示细胞内过氧化物酶的分布。
动物细胞的基本形态观察和显微测量
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
吸取小鼠股骨骨髓时，要事先吸取少量生理盐水或PBS润湿注射器；介绍复染的概念和作用。
思考题
1.用彩色笔绘出Brachet反应及PAS反应的镜下所见。
2.说明着色的碱性蛋白可能是什么物质?
细胞核与线粒体的分级分离
（3）了解细胞松弛素B对微丝的作用及原理。
（4）了解考马斯亮蓝染料在细胞生物技术中的应用。
教学内容提要及时间分配
1.教师：
（1）讲述和提问微丝的作用及组装，细胞松弛素B的作用（15分钟）。
（2）讲解实验的具体操作和注意事项，正常对照在实验中的作用及Triton，M-缓冲液，戊二醛的作用（15分钟）。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
板书
使用的教材及参考资料
a)医学细胞生物学实验（第四版）
b)细胞生物学（主编：凌治萍，七年制教材）
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
强调台盼兰在细胞活细胞计数中的染色原理与本实验中的的染色原理的区别，避免学生理解混淆。
2.熟悉小鼠腹腔注射和颈椎脱位处死方法。
3.进一步掌握临时装片技术和显微镜的使用方法。
教学内容提要及时间分配
内容提要：1.小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察；
2.暗视野显微镜观察细胞的纤毛和鞭毛运动。
时间分配：1.讲解细胞吞噬运动的基本原理和鞭毛、纤毛
运动的基本机制。（30分钟）
2.同学亲手做实验，期间讲解或提问实验操作
d)蟾蜍血涂片及人血涂片的制备与观察
e)人口腔上皮细胞观察
细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告
细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告细胞是生命的基本单位，其中包含着各种复杂的分子和结构。
多糖是一种重要的生物大分子，它在细胞中起着多种重要的功能，如提供能量和结构支持等。
而过氧化物酶则是一类酶类蛋白质，其主要功能是参与氧化还原反应，保护细胞免受氧化损伤。
本实验旨在探究多糖和过氧化物酶在细胞中的定位情况，以揭示它们在细胞内的功能和作用机制。
我们选择了小麦胚芽细胞作为实验材料，这是一种常用的植物细胞模型，便于我们观察和研究。
我们采用了荧光共聚焦显微镜技术，结合荧光标记的抗体和荧光探针，对细胞中多糖和过氧化物酶进行了定位分析。
实验结果显示，多糖主要定位在细胞质和细胞壁中。
在细胞质中，多糖以颗粒状或线状分布，形成一种网状结构，可能与细胞的代谢活动和结构支持有关。
而在细胞壁中，多糖则以纤维状的形式存在，参与细胞壁的形成和细胞的保护。
这些结果表明，多糖在细胞中起着重要的结构和功能作用，对维持细胞的正常生理活动至关重要。
与此同时，过氧化物酶主要定位在细胞质和细胞膜中。
在细胞质中，过氧化物酶呈现出斑点状或颗粒状的分布，可能与其在氧化还原反应中的作用有关。
而在细胞膜中，过氧化物酶则以环状或斑块状的形式存在，可能参与细胞膜的修复和保护。
这些结果提示，过氧化物酶在细胞内起着重要的保护作用，保护细胞免受氧化损伤的影响。
综合以上实验结果，我们可以得出结论：多糖和过氧化物酶在细胞中的定位具有明显的特异性，分别在细胞质、细胞壁和细胞膜中发挥着重要的功能。
多糖参与细胞的结构支持和代谢活动，过氧化物酶则保护细胞免受氧化损伤。
这些研究结果对于我们进一步了解细胞的生理活动和疾病发生机制具有重要意义，也为相关药物和治疗方法的研发提供了理论依据。
本实验通过荧光共聚焦显微镜技术对细胞中多糖和过氧化物酶的定位进行了研究，揭示了它们在细胞内的分布和功能。
这些研究结果对于深入理解细胞生物学和病理生理学具有重要意义，为未来的研究工作和临床应用提供了有益的参考。
超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶_概述说明
超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶概述说明1. 引言1.1 概述：在细胞内，氧化还原反应是生物体正常代谢过程中不可或缺的部分。
然而，在这些氧化还原反应中产生的活性氧种（ROS）却可能对细胞结构和功能造成损害。
为了保护细胞免受活性氧物质的侵害，细胞内存在着一系列抗氧化酶系统。
其中包括超氧化物歧化酶（SOD），抗坏血酸过氧化物酶（APX）和过氧化物酶（POD）。
这些抗氧化酶通过催化活性氧的转化和清除，起到维持细胞内稳态、减少氧自由基对生物体的伤害的重要作用。
1.2 文章结构：本文将分为五个部分来探讨超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶的定义、功能、结构、机制以及其在生理作用和临床意义方面的研究。
在第二部分，我们将详细介绍超氧化物歧化酶。
首先，我们将解释其定义和功能，包括其在生物体内的重要作用。
然后，我们将探讨其结构和催化机制，揭示超氧化物歧化酶如何通过催化超氧阴离子（O2.-）的转化来清除活性氧物质。
第三部分将聚焦于抗坏血酸过氧化物酶。
我们将解释该酶的定义和功能，并探究它在细胞中是如何通过消除过氧化氢（H2O2）来保护细胞免受氧自由基的损伤。
第四部分将涵盖过氧化物酶。
我们将描述该酶的定义、功能和结构，并讨论其通过催化有机底物或无机底物的转变来减少细胞内活性氧物质积累的机制。
最后，在第五部分结论中，我们将总结本文提到的要点，并展望未来对这些抗氧化酶系统研究的方向。
1.3 目的：本文旨在增进读者对超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶这些重要抗氧化酶系统的认识。
通过了解它们的定义、功能、结构和机制，以及在生理作用和临床意义方面的研究进展，我们可以更好地理解细胞对抗活性氧物质的保护机制，并为未来的研究提供一定的指导和启示。
2. 超氧化物歧化酶:2.1 定义和功能:超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，简称SOD）是一种重要的抗氧化酶，它参与细胞内超氧阴离子（O2-）的清除，以保护细胞免受过氧化损伤。
实验三、细胞内过氧化物酶的显示『目的要求』1、掌握原位
骨髓细胞
红细胞 淋巴细胞 粒细胞 非造血细胞 巨核细胞
中性粒细胞 （绝大部分的粒细 胞是性粒细胞） 嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
过氧化物显色反应主要染中 性粒细胞和嗜酸性粒细胞
小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。
1．捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后 拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头 顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
就是过氧化物酶的部位。
骨髓细胞内可见蓝色或者棕色的颗粒，即过氧化物酶所在的部位
洋葱鳞片表皮细胞内可见蓝色或者棕色的颗粒， 即过氧化物酶所在的部位
实验三、细胞内过氧化物酶的显示
『目的要求』 1、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 2、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。
『实验用品』 光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖 器械、0.5%CuSO4、 0.2%联苯胺、1%番红、生理盐 水、小白鼠
『实验原理』
细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成 有色化合物，联苯胺可被细胞内的过氧化物酶氧化 成蓝色或棕色产物（蓝色物质为中间产物联苯胺 蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙）， 因而显示出细胞内过氧化物酶的分布。
2．给药方法：
小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、 尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱 和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿 腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。 针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或 肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／ 10克体重。
nadph氧化酶2过氧化物酶
nadph氧化酶2过氧化物酶NADPH氧化酶2过氧化物酶（NADPH oxidase 2，NOX2）是一种重要的细胞色素P450底物，是一种作为催化剂的蛋白质，它对氧化还原反应起到了至关重要的作用。
它的功能是将一个原子的氧引入到一种有机分子中，或者是将一种有机分子的氢取出，并且在这个反应中还原了一个另一个物质。
这种酶类在细胞负责缺陷发挥着重要的作用。
NOX2是一种多亚基膜蛋白酶，可以在细胞膜上产生超氧化物自由基，并且在多种生物过程中发挥作用。
这种酶类通常被认为是一种由三种细胞质亚基和两种膜部多肽组成的异质性酶，受到配体信号激活。
NOX2是一种重要的细胞信号分子，能够通过多种途径传播细胞应激信号，并且在机体炎症和氧化应激等过程中起关键作用。
NOX2在机体中是一种非常重要的酶类，其功能主要是产生细胞外超氧化物，这种超氧化物是一种强氧化剂。
在机体内，NOX2主要通过启动异位酶产生超氧化物，这种超氧化物在机体内主要用于杀灭寄生在细胞内外的一些厌氧菌和防御机体的免疫细胞。
NOX2主要通过催化还原O2产生超氧氧离子（O2-）。
在许多疾病中，包括心血管疾病、慢性阻塞性肺疾病、癌症、和神经退行性疾病，NOX2的过度活化已被广泛研究。
目前已有多种NOX2的抑制剂进行了研究，这些抑制剂对NOX2的过度活化能够得到较好的抑制作用，为相关疾病的治疗提供了新的方向。
NOX2在抗感染、炎症反应、细胞凋亡和增生过程中发挥了重要的作用。
确实，组织和血管细胞中的NADPH氧化酶家族成员发挥重要作用。
其中的NOX2可以在细胞增殖和细胞死亡中发挥调节作用。
在数量得到控制的情况下，NOX2可以调节细胞凋亡和增生过程。
当不受控制时，NOX2可能导致不同类型的炎症反应和细胞凋亡。
所以NOX2的控制是非常必要的。
NOX2在多种疾病发作时会得到过分激活，包括慢性阻塞性肺疾病和心血管疾病。
抑制NOX2活性已被广泛研究，众多的研究成果表明NOX2的高活性与多种慢性疾病的发病有关。
实验五、细胞内过氧化物酶的显示
• （二）方法 • 1．用注射器从鱼尾柄血管抽取血液。 • 2．将一滴血滴于载玻片一端，用另一玻片或30 度倾斜推血涂片，待其稍干。 • 3．将涂片放入0.5％硫酸铜中浸30秒-1分钟。 • 4．倾去硫酸铜水液，直接放入联苯胺混合液中反 应6分钟。 • 5．蒸馏水冲洗，室温晾干。 • 7．镜检或封片后镜检。
• （三）结果
?细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物用联苯胺处理标本细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝进而变为棕色产物因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少
实验五、细胞内过氧化物酶的显示 实验目的：通过实验学习，显示过氧化物酶的细胞 化学方法，了解过氧化物酶在鱼血白血球中的分布 及形态。
• 实验原理： • 细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为 有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内 的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联 苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根 据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多 少。
• 中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶 的参加即可氧化为棕色化合物。 • 实验仪器及设备：联苯胺混合液配法：0.2克联苯胺 加100毫升蒸馏水再加3%双氧水2滴。
细胞生物学实验报告(3篇)
细胞生物学实验报告（3篇）细胞生物学实验报告（精选3篇）细胞生物学实验报告篇1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100_）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
吖啶橙染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
实验三细胞化学成分的显示
㈠掌握血涂片及骨髓涂片制作方法。 ㈡掌握碱性蛋白、过氧化物酶及核酸显示的原理。 ㈢熟悉上述化学成分在细胞中的分布。 ㈣了解上述化学成分显示的方法。
二、实验内容和实验方法
➢ 细胞内碱性蛋白的显示 ➢ DNA和RNA的显示 ➢ 过氧化氢酶的显示
➢ 细胞内碱性蛋白的显示 ㈠实验原理 标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，
㈡实验方法－家兔骨髓细胞中 过氧化氢酶的显示
• 取材。 • 2. 固定：0.5%硫酸铜，30s～1分钟。 3. 氧化： 联苯胺，3～6分钟。 4. 清水冲洗。 5. 染色： 1%番红，1～2min。 6. 清水冲洗。 7. 晾干镜检。
3. 70℃～90℃ ，5%三氯醋酸， 晾干。
15分。
3. 染色：甲基绿—派洛宁，
4. 清水冲洗。
10min。
5. 染色：碱性固绿染色5min。 4. 清水冲洗。
6. 清水冲洗。 7. 风干，镜检。
5. 分化：纯丙酮。
6. 镜检。
➢ 过氧化氢酶的显示 ㈠实验原理
过氧化氢酶系能把许多胺类物质氧化为 有色化合物，若用联苯胺混合液处理标本， 细胞内的过氧化氢酶能把联苯胺氧化为蓝色 的联苯胺蓝，进而变为棕色的联苯胺腙。
用不同pH值的快绿染液分别染色，使细胞 内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。
㈡实验方法
1. 临时装片的制备。 2. 固定：70%乙醇，10min。 3. 70℃～90℃ ，5%三氯醋酸， 15分。 4. 清水冲洗。 5. 染色：碱性固绿染色5min。 6. 清水冲洗。 7. 晾干，镜检。
➢ DNA和RNA的显示 ㈠实验原理 利用碱性染料甲基绿和派洛宁处理细 胞，可使其中的DNA和RNA呈现出不同 的颜色，这种颜色上的差异是由DNA和 RNA聚合程度的不同所引起。
07级实验二：DNA和RNA和过氧化物酶原位显示 (恢复)
方法： 方法：
骨髓涂片，要求涂薄 骨髓涂片， 0.5%硫酸铜溶液固定 分钟 0.5%硫酸铜溶液固定0.5分钟 硫酸铜溶液固定0.5 玻片晾干后，37° 玻片晾干后，37°C 水浴锅联苯胺混合染液 染色3 染色3分钟 1%番红染液复染1分钟 1%番红染液复染 番红染液复染1 细水冲， 细水冲，晾干后镜检
请班长安排今天做清洁的 同学，谢谢。 做完实验后，清理好自已 的桌面，交实验报告后 才能离开。
对于同学们参与这次教学活动的考核， 对于同学们参与这次教学活动的考核，本 着客观、公正的原则， 着客观、公正的原则，主要依据选题的合 理性和难度，展示方案的完整性、合理性、 理性和难度，展示方案的完整性、合理性、 正确性，演讲的实际效果， 正确性，演讲的实际效果，由任课教师评 出优秀及良好项目，作为平时成绩加分。 出优秀及良好项目，作为平时成绩加分。
方法： 方法： （1）制备蟾蜍血涂片 要求血膜较薄， 要求血膜较薄，充分晾干 70%酒精固定5 （2）70%酒精固定5分钟 玻片晾干或用吹风吹干后， （3）玻片晾干或用吹风吹干后，染 15分胞内过氧化物酶的原位显示 • 原理： 原理： 过氧化物酶能将联苯胺氧化为 蓝色或棕色产物， 蓝色或棕色产物，由此显示细胞内 过氧化物酶的存在和分布。 过氧化物酶的存在和分布。
细胞内DNA、RNA 实验二 细胞内 、 及过氧化物酶的原位显示 实验目的： 实验目的： 了解原位显示细胞内DNA、 了解原位显示细胞内 、 RNA、过氧化物酶的方法；熟悉血 、过氧化物酶的方法； 液涂片、骨髓涂片及固定染色方法。 液涂片、骨髓涂片及固定染色方法。
实验内容： 实验内容：
一、 细胞内DNA和RNA的原位显示 细胞内DNA和RNA的原位显示 原理： 原理： DNA和 RNA因聚合程度的不同 DNA 和 RNA 因聚合程度的不同 ， 可被甲基绿— 可被甲基绿 —哌洛宁混合染液染成不 同的颜色，DNA聚合程度高 聚合程度高， 同的颜色，DNA聚合程度高，被甲基 绿染成蓝绿色；RNA聚合程度低 聚合程度低， 绿染成蓝绿色；RNA聚合程度低，被 哌洛宁染成红色。 哌洛宁染成红色。
细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告
细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告实验名称：细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验实验目的：通过荧光标记技术，确定细胞中多糖和过氧化物酶的分布和定位。
实验原理：1.细胞多糖定位实验多糖是细胞外基质的主要成分之一，在细胞外起着保护、支持和凝胶化作用。
多糖含有大量的负电荷，能与染料结合，形成复合物，在荧光显微镜下通过观察荧光信号的强度和分布，可以确定多糖的分布和定位。
2.细胞过氧化物酶定位实验细胞内的过氧化物酶是一种氧化还原酶，能够通过降解过氧化物等有害物质，起到维护细胞内稳态的作用。
过氧化物酶可以与特异性活性荧光探针结合，形成特定的复合物，并在荧光显微镜下观察复合物的强度和分布，确定过氧化物酶的定位。
实验步骤：1. 细胞处理：将培养好的细胞分别定植在培养皿中，使其在生长至合适密度时，进行后续实验。
根据实验目的，选择合适培养基，添加药物或抑制剂等。
2. 标记药物制备：多糖和过氧化物酶分别用特定的活性荧光探针标记，制备成浓度适宜的荧光标记药物。
3. 荧光标记：分别用多糖和过氧化物酶标记药物对细胞进行标记处理。
在标记液中静置一定时间，等待荧光探针充分进入细胞并结合到目标分子。
4. 洗涤：用PBS缓冲液充分洗涤标记细胞，去除多余荧光分子，并使其在显微镜下表现出精细的细胞形态。
5. 显微镜观察：将标记后的细胞放入显微镜中，用适宜荧光滤片观察不同荧光信号的强度和分布情况。
实验结果：在荧光显微镜下观察，标记了多糖的细胞表现出充分的荧光信号，主要分布在细胞外基质和细胞膜上，且信号强度较为均匀。
标记过氧化物酶的细胞同样表现出荧光信号，荧光分布主要在细胞质和核内，且在一些固定区域的分布较为集中，同时与染色体相关位置的荧光强度明显更强。
实验结论：细胞中多糖主要分布在细胞外基质和细胞膜上，过氧化物酶主要在细胞质和核内，且在一定的空间位置分布较为集中。
此次实验通过荧光标记技术，成功确定了细胞中多糖和过氧化物酶的分布和定位，为后续研究细胞的生理功能提供重要的参考依据和实验基础。
实验七过氧化物酶的显示
【观察与成果】
骨髓细胞内能够见到蓝色或者棕色旳颗粒， 即过氧化物酶所在旳部位。
【试验环节】
用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开大腿上旳皮肤和肌肉， 取出股骨；
剪断或者折断股骨，用牙签挑取骨髓，放置于载玻片 上制成涂片，晾干；
将涂片上滴加几滴0.5% CuSO4，固定1分钟； 倾去CuSO4溶液，滴加0.1%联苯胺混合液，染色6分
钟； 用自来水或蒸馏水冲洗，滴加1%番红染液（染色细胞
试验7 细胞内过氧化物酶旳显示
联苯胺反应
【试验目旳】
掌握联苯胺反应法显示细胞内过氧化物酶旳原 理和措施。
过氧化物酶 - 定义
利用过氧化氢作为电子受体来催化底物氧化作 用旳酶。
【试验原理】
细胞内旳过氧化物酶能够催化过氧化氢氧化联 苯胺成蓝色或者棕色产物，蓝色为中间产物联 苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色旳联苯 胺腙，经过产物颜色间接显示出细胞内过氧化 物酶旳分布。
【试验仪器、材料和试剂】
光学显微镜；小白鼠、剪刀、镊子、载玻片、 牙签、吸管。
0.5% CuSO4（0.5克CuSO4溶于100ml蒸馏 水中）、联苯胺混合液（0.1克联苯胺在研钵 中加少许蒸馏水研成细浆，加入100ml蒸馏水， 过滤后加入2滴3%双氧水，放棕色瓶中备用）、 1%番红[1克番红O（Safranine O）染料溶于 100ml蒸馏水中]。
南开大学细胞生物学实验-实验三细胞化学—联苯胺反应
实验用显色反应
联产生苯新胺生反氧应,：后过者氧再化将物无酶色分的解联H苯202胺。 氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化 合物。
实验内容和目的
通过联苯胺反应, 掌握过氧化物 酶的显示方法及联苯胺反应原理
概述
显示过氧化物酶的联苯胺反应
超氧化物歧化酶（SOD） 、过氧化物酶 （POD）和过氧化氢酶（CAT）是构成机 体防御脂质过氧化系统的内源成分，它 们构成了生物体内重要的酶促反应防御 体系，从而维护生物体内细胞正常的生 理代谢和生化反应。
实验原理
显示过氧化物酶的联苯胺反应
细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化 为蓝色（或棕色）产物。因而,可根据 颜色反应判断酶的有无或多少。 联苯 胺被氧化后，脱下的H再与H2O2作用生 成水。 为了验证实验的准确性可用煮 沸杀死组织法,或用呼吸抑制剂抑制酶 的活性。
0.85% 生理盐水洗1min ↓
10% 甘油封片 ↓
镜检
油菜叶柄徒手切片
实验结果
蓝色沉淀指示有过氧化物酶存在。 注意观察细胞内蓝色沉淀的存在 部位，大小，形状和数量。
实验结果
实验报告要求
摘要及关键词 实验原理 材料和方法 结果与分析苯胺反应
(必做，综合性实验，4学时）
前言
细胞化学染色 （cytochemical staining）是 利用染色剂可同细胞的某种成分发生反 应而着色的原理，对某种成分进行定性 或定位研究的技术。利用这种方法对细 胞的各种成分几乎都能显示，包括有无 机物、 醛、 蛋白质、糖类、脂类、核 酸、酶等。
常用显色反应
细胞生物学实验手册：细胞组分的化学反应
实验七细胞组分的化学反应【实验目的】了解核酸、蛋白质、糖及酶的细胞化学反应原理，掌握Brachet反应及碱性蛋白、酸性蛋白、糖原和过氧化物酶的细胞化学染色方法。
【实验用品】一、材料和标本蟾蜍、小白鼠各一只、肝脏石腊切片、培养的Hela细胞。
二、器材和仪器光学显微镜、解剖器材、蜡盘、载玻片、吸水纸、染色缸、盖玻片、水浴箱。
三、试剂PBS缓冲液(pH7.2)、甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液、纯丙酮、l/2丙酮+1/2二甲苯、纯二甲苯、70％乙醇、5％三氯醋酸、0.1％碱性固绿、0.1％酸性固绿、0.5％硫酸铜、联苯胺混合液、1％番红、无水乙醇、过碘酸酒精液、Schiff 氏酒精液、亚硫酸水、Ehrlieh苏木精、95％乙醇、Carnoy固定液(甲醇：冰醋酸=3:1，体积比)【实验内容】细胞的组织化学方法，是研究细胞成分常用的方法之一。
它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。
一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA(一)原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后，其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应，一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力，且这两种染料的作用有选择性，甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色，呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。
由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。
(二)方法l．接种Hela细胞于盖片上并培养24～48小时，使长成单层。
2．取出盖片，用PBS(pH7.2)轻轻冲洗盖片表面去除残渣。
3．放入Carnoy固定液中固定l小时。
4．浸入甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液中30分钟染色。
死活细胞的鉴别
（一）、死活细胞的鉴别生活细胞近似无色透明，用普通光镜无法观察其形态，需用相差显微镜来观察。
染色排除法：组织培养中检查死活细胞最常用的是“染色排除法”这类方法简单但不甚严格，它只能判断细胞的代谢死亡，不反映细胞能否增殖。
由于未经过固定、专门染色，所以看不到死活细胞的形态差别。
所用染料的分类：一般的生物染料不能穿过活细胞膜只有细胞被固定或细胞膜被破坏，染料才能进入细胞膜。
第一类：死细胞着色，使死细胞着色的大部分是酸性染料。
它们不容易穿透活细胞的质膜，进入胞内，但却能渗透死亡的细胞，使之着色。
如①台盼兰（Trypan blue）：0.5-1%的台盼兰，pH7.0-7.2，每毫升细胞悬液加0.1ml 染液，2分钟后镜检，活细胞没有染上，死细胞全部被染成蓝色。
②苯胺兰(Aniline’ black)：0.05%的苯胺黑以1：10 的量与细胞悬液混匀，1-2 分钟后，死细胞被染成黑色。
③伊红Y：细胞悬液与细胞悬液混喝，2 分钟后死细胞被染成桃红色。
等。
第二类：活细胞着色，多为碱性染料，如中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。
它们是一些无毒或毒性很小的染料，由于电性吸引而堆积在细胞中某一特定的结构上从而显色，即它们解离后带正电，其中有的染料可与胞内某些结构专一性的结合。
①1%结晶紫染色生理1%结晶紫盐水与细胞悬液1：2 混合，立即镜检，或细胞被染成蓝紫色，而死细胞不着色。
属于活细胞染料。
活细胞染料无毒，无物理、化学变化，基本上不影响细胞的生命活动。
②用呀啶橙染色可以鉴别出细胞固定前的死活状态。
丫啶橙是一种与DNA 和RNA 都能结合的荧光染料，在兰光或紫外光激发下，DNA 可激发出530nm 的荧光发射峰，RNA 可激发出640nm 的荧光发射峰，它与双链DNA 的结合方式是潜入双链之间，而与单链DNA 和RNA 则由静电吸引堆积在磷酸根上。
在蓝光的激发下，细胞核发亮绿色荧光，核仁和胞质RNAPage 9发桔红色荧光。
过氧化物酶体
过氧化物酶体
过氧化物酶体（peroxisome）又称 微体（microbody）：真核细胞中由单层 膜围绕的含有一种或几种氧化酶类的细 胞器，能够利用分子氧氧化有机物。 1954年，Rhodin首次在鼠肾的肾小 管上皮细胞中观察到。 。
鼠肝细胞超微切片所示的过氧化物酶体和其 他细胞器（如线粒体）
（一）、过氧化物酶体与溶酶体的区别
• 与溶酶体一样也是一种异质性的细胞器，但在酶的种 类、功能和发生等方面都与溶酶体有很大区别
（二）、过氧化物酶体的功能
• 过氧化物酶体是一种异质性细胞器，不同生物的细胞 中，甚至单细胞生物的不同个体中所含酶的种类及其 行使的功能都有所不同。 • 过氧化物酶体是真核细胞直接利用分子氧的细胞器， 其中常含有2种酶：一是依赖于FAD的氧化酶，其作用 是将底物氧化形成H2O2；二是H2O2酶，其作用是将H2O2 分解，形成水和氧气。二酶偶联，消除H2O2的毒害。 • 过氧化物酶体可降解生物大分子；分解脂肪酸等高能 分子向细胞直接提供热能。 • 在植物细胞中过氧化物酶体参与光呼吸作用；在油料 种子萌发时，特殊过氧化物酶体即乙醛酸循环体将脂 肪转化成糖。 • 乙醛酸循环体（glyoxysome ）：植物细胞中的一种细 胞器，是将储存的脂肪酸转变成糖类的酶促反应的部 位。
（三）、过氧化物酶体的发生
• 过氧化物酶体的发生有2种途径：一是细胞内已有的 成熟过氧化物酶体经分裂增殖而产生子代氧化物酶 体；二是在细胞内重新发生。 • 过氧化物酶体重新发生包括3个阶段的装配过程：① 过氧化物酶体的装配起始于内质网，即由内质网出 芽衍生出前体膜泡，然后过氧化物酶体的膜蛋白掺 入，形成过氧化物酶体雏形；②具有过氧化物酶体 靶向信号PTS1（Ser-Lys-Leu）和PTS2（Arg/LysLeu/Ile-5X-His/Gln-Leu）分选信号的基质蛋白， 在膜蛋白的介导下完成基质蛋白的输入，产生成熟 的过氧化物酶体；③成熟的过氧化物酶体经分裂产 生子代过氧化物酶体。构成过氧化物酶体的膜脂可 能在内质网上合成后，通过磷脂交换蛋白（PEP）或 膜泡运输方式完成其转运。
《细胞生物学》过氧化物酶体
过氧化物酶体 (Peroxisome)
1954年—Rhodin—电镜— 小鼠肾小管上皮细胞—微体
过氧化物酶体
主要内容：
一、过氧化物酶体的理化特征 二、过氧化物酶体的功能 三、过氧化物酶体的发生
(二)内质网在过氧化物酶体形成过
程中的作用
※ 构成过氧化物酶体的膜脂，在 内质 网上合成，再通过磷脂交换蛋白或膜 泡运输的方式完成转运；
※ 构成过氧化物酶体的膜整合蛋白在胞 质中游离核糖体上合成，通过与内质 网相关的不同途径嵌入过氧化物酶体 的脂质膜中。
四、过氧化物酶体异常与疾病
1.原发性过氧化物酶体缺陷所致的遗
一、过氧化物酶体的理化特征
（一）形态结构
※ 一层单位膜包裹而成的具有高度异 质性的膜性球囊状细胞器
※ 多呈圆形或卵圆形，偶见半月形和 长方形
※ 直径变化于0.2--1.7μm之间
类核体
Endomembrane System
突出特征：
类核体：内含电子致密 度较高、排列规则的 晶格结构。
边缘板：界膜内表面的 一条高电子致密度的 条带状结构。与形态 相关。（二）过氧化物酶体所含的酶
1.氧化酶类：占酶总量的50%-60%
特征：氧化底物的同时，将氧还原成
过氧化氢。
RH2＋O2
R+H2O2
2.过氧化氢酶类(标志酶)：40%
作用：使形成的过氧化氢还原成水。
2H2O2
2H2O +O2
３.过氧化物酶类 仅存在于如血细胞等少数几种
细胞类型的过氧化物酶体之中，其 作用与过氧化氢酶相同。
细胞生物学实验二 脂类细胞化学—山东大学苏丹Ⅲ染色法
实验二脂类细胞化学——苏丹Ⅲ染色法13生物基地 201300140059 刘洋 2015-03-16同组者：吕赞孙佳孟何娟一、实验目的1.了解脂肪染色的原理以及脂类标本制片的原理。
2.学习用苏丹Ⅲ染色脂肪细胞的方法。
3.学习用断头法处死小白鼠以及小白鼠的解剖方法。
二、实验原理脂类包括的范围很广，有单纯脂、复合脂、衍生脂等。
脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。
脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV、苏丹黑或者苏丹红等溶于脂类，苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：（1）冰冻切片；（2）明胶包埋冰冻切片；（3）铺片法。
三、实验材料和用品1.材料小鼠肠系膜。
2.试剂苏丹Ⅲ染液，70%乙醇溶液，甲醛钙。
3.器材显微镜，载玻片，盖玻片，胶头滴管，镊子，剪刀，解剖盘。
四、实验步骤1.断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，在肠系膜的另一侧盖一盖玻片，将肠系膜连同小肠一同剪下。
2.滴加甲醛钙于有标本的载玻片处，使标本润湿，固定20分钟。
3.吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以去除固定液。
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小鼠的脱臼处死法
常用手术器械及操作方法： 1．解剖针：用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法 如执笔法。 2．解剖刀(即外科手术刀)：用于各种皮肤切口和组织切 除等。持法有执弓法与执笔法两种。前者用于较大力量 切开较长距离的坚韧的组织，如大动物的皮肤切口等； 后者则用于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。 3．大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。 4．眼科剪刀：用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。 5．眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。 6．钝头镊子：用于提取脏器、组织等。 7．有钩镊子：用于提取皮肤切口等。
本染色法最主要用于鉴别急性白血病细胞 类型，急性粒细胞性白血病呈强阳性，单核 细胞性白血病呈弱阳性，急性淋巴细胞性白 血病呈阴性反应。 临床上通常将染色阳性率3%作为淋巴与非 淋巴的分界标准。若能结合其他化学染色、 细胞免疫标记、遗传学和分子生物学检测则 更好。
小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。
3．处死方法：
处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速 死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧 化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧 化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内 即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食 指按住小白鼠的头部，右手捉住其尾巴迅速向后 猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。
实验三、细胞内过氧化物酶的显示
『目的要求』 1、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 2、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。 『实验用品』 光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖 器械、0.5%CuSO4、 0.2%联苯胺、1%番红、小白鼠
『实验原理』
细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成 有色化合物，联苯胺可被细胞内的过氧化物酶氧化 成蓝色或棕色产物（蓝色物质为中间产物联苯胺 蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙）， 因而显示出细胞内过氧化物酶的分布。
『实验内容和方法』 1、取材：处死小白鼠取股骨，剪断两头，用微量注射 器吹出骨髓细胞于载玻片上，涂片，晾干。 2、固定：将涂片放入0.5%硫酸铜染缸中固定30s— 1min。 3、氧化：取出涂片直接转入0.2%联苯胺染缸中氧化 3—6min。 4、冲洗：蒸馏水或自来水冲洗。 5、染色：滴1、2滴1%番红溶液于涂片上，染色1min。 6、冲洗：蒸馏水或自来水冲洗，晾干。 7、镜检：可见骨髓细胞内有被染成蓝色或棕色的颗粒， 就是过氧化物酶的部位。
1．捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后 拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头 顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
2．给药方法：
小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、 尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱 和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿 腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。 针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或 肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／ 10克体重。
过氧化物酶染色意义
过氧化物酶主要存在于粒细胞系，除原粒细胞外， 随细胞成熟，阳性反应增强（嗜碱性粒细胞反应阴性）。 单核细胞系从幼单核细胞起呈弱阳性反应，淋巴细胞 系、红细胞系及巨核细胞系则任何阶段均呈阴性反应。 1.中性粒细胞 强阳性 2.嗜酸粒细胞 强阳性 3.单核细胞 弱阳性或阳性（弥散状） 4.淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞等 阴性