第四章茎尖分生组织培养[公开课堂]
组培复习
4 茎尖分生组织培养
概念：
茎尖分生组织：切取茎的先端部分或茎的分生组织部分（小至几十微米）进行无菌培养，使其发育成无菌植株的过程。
体细胞无性系变异：
表观遗传变异、
种质超低温保存
●利用茎尖培养生产无病毒苗木的主要步骤。
●影响茎尖培养脱毒效果的因素
●简述体细无性系变异的概念及变异来源。
●影响植物体细胞无性系变异的因素，如何筛选变异株系。
●植物种质资源离体保存有何意义？比较低温保存和超低温保存的差异。
●超低温保存的原理是什么？它的基本操作程序有哪些？
●影响种质离体保存遗传稳定性的因素有哪些？如何减少种质离体保存过程中的变
异？
5 单倍体细胞培养
●概念：单倍体培养、孤雄生殖、孤雌生殖、单倍体加倍
●单倍体的发生途径及在育种中的作用
●离体培养中小孢子发育途径
●比较花药和花粉培养的特点，说明单倍体产生的关键因素。
●单倍体的加倍途径及在育种中的应用
6 细胞培养
●简述植物单细胞分离的方法
●比较单细胞培养方法的特点。
●悬浮细胞培养的关键技术。
●如何使悬浮培养的细胞同步化？
●简述植物细胞培养的应用。
7原生质体培养与体细胞杂交
8 植物遗传转化
●简述植物转基因方法的主要方法。
●农杆菌介导的转化体系原理与方法。
●以拟南芥为例，设计可行的转基因方案。
●转基因瞬时表达和稳定表达的特点。
●如何进行转基因植物的筛选与鉴定？
9 植物基因克隆
●基因克隆的含义
●简述基因克隆的“分、切、接、转、筛”。
●基因克隆的载体及特点
●基因克隆中的工具酶及用途。
第四章植物器官的培养
第四章植物器官的培养1、器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。
以器官作为外植体进行离体培养。
器官培养的意义:研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成在生产实践上具有重要的应用价值,可在短期内提高繁殖速率,进行名贵品种的快速繁殖;利用茎尖培养可得到脱毒试管苗,解决品种的退化问题,提高产量和质量;将植物器官作诱变处理,用器官培养可得到突变株,进行细胞突变育种等。
第一节营养器官的培养一、茎尖的培养茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分,进行无菌培养。
这是组织培养中用得最多的一个取材部位。
茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥,其长度不超过0.5mm。
普通茎尖指较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽。
普通茎尖培养(1)取材: 挑选杂菌污染少,生长不久的茎尖。
(2)消毒接种: 将茎尖切成0.5-1.Ocm长将茎尖置于流水冲洗2-4h在75%的酒精中处理30s在稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min无菌水冲洗数次接种(3)接种: 为了减少污染,可在接种前再剥掉一些叶片,使茎尖为0.5cm左右大小。
(4)培养的方法和程序①培养基多数茎尖培养采用MS作为基本培养基,常用的其他培养基有White,Heller.培养基中生长素:2,4-D,IAA,NAA,浓度一般用0.1mg/L左右,高于此浓度,往往产生畸变芽或形成愈伤组织。
茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。
生长太慢:接种后茎尖不增大,只是茎尖逐渐变绿,出现绿色小点,细胞逐渐老化而进人休眠状态,或者逐渐变褐死亡。
引起的原因:生长素浓度太低,或是温度过低或过高;生长太快型是接种后茎尖迅速增大,在茎尖基部产生愈伤组织,并迅速增殖,而茎尖不伸长,久之茎尖也形成愈伤组织,从而丧失发育成苗的能力。
引起的原因:一是生长素浓度过高,引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。
简述茎尖分生组织培养脱毒的原理
茎尖分生组织是植物中生长最快的组织之一，可以通过组织培养技术脱毒。其原理是：将带毒的植物茎尖取出，培养在含有植物生长所需营养物质和生长调节物质的无菌培养基上，利用细胞分裂和分化的特性，使茎尖分生组织不断增殖，从而获得大量干净的组织。通过培养一定时间，能够使植物细胞分裂过程中的病毒等有害物质逐பைடு நூலகம்消失，从而达到脱毒的目的。茎尖分生组织培养脱毒技术可以应用于各种作物，是植物繁殖、病毒检测、遗传改良等领域的重要手段。
实验三茎尖培养技术优秀课件
3. 茎尖分离及接种：用镊子和解剖刀在灭菌滤纸上分离 茎尖，用镊子将分离的茎尖组织接种到培养基上，盖 好瓶盖，贴好标签。
不结球白菜茎尖
4. 接种材料的培养：接种后的材料放到培养室，25℃， 12h光照/12h黑暗条件下培养，3-4天可以观察到茎尖开 始萌发生长。
Hale Waihona Puke 大蒜茎尖培养不结球白菜茎尖培养
实验三茎尖培养技术优秀课件
一、概念和意义
▪1.概念
▪ 茎尖培养（shoot tip culture）的含义比较广，包 括小到10－100μm的茎尖分生组织的培养，大到几 十毫米的茎尖或更大的芽的培养。
▪ 一般培养材料体积小（茎尖分生组织），成苗较难， 成苗所需时间较长；而培养材料体积大，成苗速度 快，但污染率也较高。
五、实验步骤：
1. 外植体的准备：
大蒜：剥去蒜瓣的外皮。不结球白菜：去除老化叶片，保 留1-2片幼叶的叶柄；洗净后在流水中冲洗10-20分钟。
2. 表面灭菌：
在超净工作台上将外植体材料放到灭过菌的罐头瓶内，加 入75%的乙醇处理不超过30秒，然后倒出，加入1%的 次氯酸钠灭菌（小白菜10min，大蒜处理20min），处 理后用无菌水洗4-5次。
茎尖培养包括起始培养、增殖培养和生根培养及驯化移栽 等阶段，不同培养阶段要求不同的植物激素和生长调节剂条 件。
起始培养
增殖培养
生根培养
驯化移栽
四、实验材料：
1. 植物材料：大蒜和不结球白菜； 2. 培养基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖 3%+ 琼脂6.5 g/L。 3. 试剂：75%的乙醇，1%有效氯次氯酸钠、无菌水。 4. 器材：酒精灯、培养皿、灭菌滤纸、镊子、解剖刀等。
细胞工程课后题答案
第二章细胞工程实验室组成及无菌操作技术1、目前，常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特点？1）MS培养基特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的平衡溶液。
2）5B培养基其主要特点是含有较低的铵，这是因为铵对不少培养物的生长有抑制作用。
3）White培养基其特点是无机盐数量较低，适于生根培养N培养基其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。
4）65）KM8P培养基其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合培养。
2、简要说明MS培养基的基本组成。
1）大量元素母液配制MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸镁（MgSO4•7H2O）和氯化钙（CaCl2,CaCl2•2H2O）五种化合物。
2）微量元素母液配制MS培养基的微量元素由7种化合物（除Fe外）。
3）铁盐母液配制MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4•4H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2•EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。
4）有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸吡哆素。
5）激素母液配制MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素3、配制培养基时，为什么要先配制母液？如何配制母液？为了避免每次配制时都要称量各种化学药品，常常把培养中必需的一些化学药品，以10倍、50倍或100倍的量，配制成一种浓缩液，这种浓缩液被称为母液。
配制母液不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移去，而且还便于低温保藏。
确定培养基--按照扩大倍数称量--溶解--按顺序混合--定容--母液分装--贴标签--保存于冰箱。
大量元素应配成浓度为10倍的母液，--般将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
配置时化合物应分别称量，分别溶解;混合时注意先后顺序，防止产生沉淀;混合时要边搅拌边混合。
4、常用的灭菌方法有哪些，各有哪些优缺点？（一）物理灭菌1）湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）优点：高温高压蒸汽对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡，是一种最有效的灭菌方法。
植物学第四章 茎PPT课件
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地下茎的变态
1 根状茎（根茎）——横卧地下，肉质膨大
呈根状，节与节间明显，节上有退化的鳞片叶， 具顶芽和腋芽，如芦苇、竹、藕、姜等。
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2 块茎——肉质肥大呈不规则块状，节间很短，节 上具芽，叶退化成小鳞片或早期枯萎脱落（马铃 薯、山药等）。
3 球茎——肉质肥大呈球形或扁球形，节与节间明 显，节上叶片常退化成鳞片状，顶芽发达，腋芽 常生于上半部，基部具不定根，如慈姑、荸荠， 芋。
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1、单轴分枝 ：
主茎顶芽的生长活动始终占优势， 形成直立而明显的主干，各级分 枝依次较小。
裸子植物和部分木本被子植物
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2、合轴分枝：
主茎顶芽生长活动形成一 段主轴后即停止生长或形成 花芽，由下侧的一个腋芽代 替主芽继续生长
反复下去形成的主轴是由 主茎和相继接替的各级侧枝 共同组成，故为合轴分枝。
植物的茎
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一、茎的生理功能
1、支持作用 2、输导作用 3、储藏作用 4、繁殖作用
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二、茎的基本形态
茎：植物体地上部分，是联系根和叶、 花、果实的营养器官
茎的形态变化很大
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3
（一） 茎的形态特征
•节：茎上着生叶和芽的部位
•节间：节与节之间的部分
•叶腋：叶与茎相交的内角； 茎的顶端和叶腋处着生芽
维管形成层 晚材 早材 第二年轮
髓
维管射线 次生韧皮部 次生木质部
三年生椴pp树t精选茎版横切
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2、 木栓形成层、周皮、树皮
表皮 皮层 韧皮薄壁细胞
脱分化
甘薯茎尖分生组织培养的研究进展
甘薯茎尖分生组织培养的研究进展
张雅琼;郭华春
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2005(21)3
【摘要】综述了甘薯茎尖分生组织培养的原理、方法、影响因素及其研究进展,指出了茎尖组织培养存在的未被广泛认识、由于品种差异造成的培养基成分不同、病毒再侵染、生产成本高等问题。
茎尖组织培养前景广阔,具有繁殖系数高、增产幅度大等特点。
【总页数】4页(P74-76)
【关键词】茎尖组织培养;分生组织;甘薯茎尖;增产幅度;繁殖系数;品种差异;侵染;研究进展;病毒;影响因素
【作者】张雅琼;郭华春
【作者单位】云南农业大学薯类研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S531.038;S532
【相关文献】
1.甘薯茎尖分生组织培养及快繁技术的研究 [J], 阮先乐;陈璨
2.生长素类物质对甘薯茎尖分生组织培养成苗的影响 [J], 孔祥生;张妙霞;陈明灿
3.提高甘薯茎尖分生组织培养成苗率的研究 [J], 孔祥生;张妙霞
4.甘薯茎尖分生组织培养 [J], 高书颖;张妙霞
5.甘薯茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究 [J], 关崇梅;秦静远;徐志英;刘玉凤;张西丽;龙金娟
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高唐栝楼茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究
高唐栝楼茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究作者：彭向前李光勇刘辉来源：《安徽农业科学》2018年第25期摘要[目的]采用茎尖分生组织培养脱毒技术培育高唐栝楼的脱病毒试管苗。
[方法]对添加不同浓度外源生长调节剂的培养基进行一系列优化试验，筛选出高唐栝楼脱毒试管苗最佳繁殖培养基。
[结果]在MS+2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA+0.10 mg/L KT培养基中诱导效果较好，技术上达到了快速繁殖规模生产的要求。
经反复的病毒检测，证明脱毒试管苗脱病毒彻底。
[结论]最终获得了高唐栝楼茎尖培养脱毒与诱导、增殖和生根的培养基，及其生长所需要的外部环境条件和相关配套技术。
关键词高唐栝楼；脱毒；茎尖分生组织；组织培养；快速繁殖中图分类号S567.23文献标识码A文章编号0517-6611（2018）25-0081-03Technology System for Stemapex Meristem Culture and Rapid Propagation of Trichosanthes kirilowii Maxim.PENG Xiangqian，LI Guangyong，LIU Hui et al（College of Pharmaceutical Sciences，Liaocheng University，Liaocheng，Shandong 252059）Abstract[Objective]Virusfree seedling in test tube of Trichosanthes kirilowii Maxim. was obtained from stemapex meristem culture in vitro. [Method]A series of optimization experiments for propagative medium composition and concentration of phytohormones were investigated with a view to accelerate the propagation of virusfree seedling in test tube of T. kirilowii Maxim. [Result]The most suitable rapid propagative medium of T. kirilowii Maxim. was MS+2.0 mg/L 6BA +0.1 mg/LNAA+0.10 mg/L KT. These results could meet the technology requirements of rapid propagation in large scale production. Virusfree seedlings in test tube were tested repeatedly，which had no virus completely. [Conclusion]The cultural mediums of detoxification and induction，proliferation and rooting were obtained as well as the external environmental conditions for the plant growth and matching technology.Key wordsTrichosanthes kirilowii Maxim.；Virusfree；Stemapex meristem；Tissue culture；Rapid propagation高唐栝楼（Trichosanthes kirilowii Maxim.）为葫芦科栝楼属多年生攀缘草本植物，有润肺化痰、养胃生津、利气宽胸等作用[1]。
《茎尖培养脱毒技术》课件
05
茎尖培养脱毒技术的发展前景
技术创新与改进
自动化与智能化
通过引入机器人和人工智能技术 ，实现茎尖培养脱毒技术的自动 化和智能化，提高工作效率和准 确性。
高效快速繁殖
研究更高效的繁殖方法，缩短培 养周期，提高脱毒苗的繁殖速度 ，以满足大规模生产的需求。
基因编辑技术
利用基因编辑技术对植物进行精 确的基因改造，提高茎尖培养脱 毒技术的成功率和应用范围。
《茎尖培养脱毒技术》PPT 课件
目录
• 茎尖培养脱毒技术简介 • 茎尖培养脱毒技术的操作流程 • 茎尖培养脱毒技术的优缺点 • 茎尖培养脱毒技术的应用实例 • 茎尖培养脱毒技术的发展前景
01
茎尖培养脱毒技术简介
茎尖培养脱毒技术的定义
茎尖培养脱毒技术是一种利用植物组织培养技术，对植物的茎尖 进行离体培养，诱导产生无病毒的植株，进而实现脱除病毒的目 的。
降低技术难度
简化操作步骤，降低对操作人员的技 术要求。
增强遗传稳定性
研究如何减少茎尖培养脱毒技术获得 的植株在遗传上的变异，提高其后代 的稳定性。
扩大适用范围
进一步探索该技术在更多种类的植物 上的应用，以扩大其适用范围。
04
茎尖培养脱毒技术的应用实例
在马铃薯脱毒中的应用
总结词
茎尖培养脱毒技术在马铃薯脱毒中应用广泛，有效解决了马铃薯病毒病问题，提高了马铃薯产量和品 质。
详细描述
除了马铃薯和草莓，茎尖培养脱毒技术还可应用于其他作物的脱毒处理，如甘蔗、葡萄 、花卉等。该技术的应用能够提高这些作物的抗病性和产量，改善品质，为农业生产和 园艺产业的发展提供有力支持。随着科学技术的不断进步和应用领域的拓展，茎尖培养
脱毒技术将继续发挥重要作用，为农业和园艺产业的可持续发展做出贡献。
茎尖培养与微体快繁(总结)PPT课件
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（一）建立无菌材料
按照离体培养的基本操作方法，对外植体的 选择原则，严格挑选茎尖培养材料，从健康 植株上选取健壮的枝梢，除去叶片，用自来 水冲洗污物，再进行消毒处理。
常用消毒剂：消毒剂既要有良好的消毒效果， 又要易被无菌水冲洗掉或能够自行分解的物 质，而且不会损伤材料，影响生长。
热处理脱毒
为了克服茎尖培养脱毒法带来的弊 病，提高脱毒效率，热处理脱毒法与 茎尖培养脱毒法结合。
植物组织处于高于正常温度的环境 中，组织内部的病毒受热之后部分或 全部钝化，但寄主植物的组织很少或 不会受到伤害。
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愈伤组织热处理
植物组织处于高于正常温度的环境中，组织 内部的病毒受热以后部分或全部钝化，但寄 主植物的组织很少或不会受到伤害。但每种 植物都有其临界温度范围，超过这一临界范 围或在此范围内处理时间过长，都会导致寄 主植物组织受伤。为此可使用变温的处理方 法，高（40℃）和低温（16-20℃）交替处 理，既能保证植物材料不受伤害，又能除去 病毒。
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通常加入一些细胞分裂素和生长素并 调节两者的配比，是调节茎尖发育方向 的关键
采用细胞分裂素KT、6-BA或ZT与IBA、 NAA或2,4-D进行配比试验。茎尖在不 同的处理组合中的有不同发育趋势。据 此，可以确定调节茎尖发育方向及其增 殖的较佳生长调节剂组合。
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消毒剂使用原则
防止伤害材料，经常采用少量 多次，或多种药剂交替使用。
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几种常用的灭菌方法：
茎尖、茎段及叶片等的消毒：流水冲 洗—去污粉洗涤—酒精消毒—无菌水冲 洗—升汞灭菌—无菌水冲洗
器官-组织-细胞茎尖分生组织纤维细胞
要点二
功能
纤维细胞参与构成结缔组织，具有合成和分泌胶原蛋白、 弹性蛋白等细胞外基质的功能，维持组织的结构和功能。
纤维细胞的形态与结构
形态
纤维细胞呈细长或不规则形状，具有较长的突起和薄而 透明的细胞质膜。
结构
纤维细胞含有丰富的细胞器和发达的细胞骨架，包括微 管、微丝和中间纤维等，这些结构对细胞的形态和功能 起着重要的支持作用。
将器官按照其功能进行分类，如消化器官、呼吸器官、运动 器官等。
根据结构分类
将器官按照其结构进行分类，如管状器官、实质器官等。
器官的发育与生长
发育
器官的发育是指细胞按照一定的程序 和规律进行分化和组织形成的全过程 。
生长
器官的生长是指器官在体积和重量上 的增加，通常是通过细胞的增殖和增 大来实现的。
纤维细胞的生长与分化
生长
纤维细胞的生长主要发生在胚胎发育早期和成年后的 损伤修复过程中。在正常生理状态下，成体组织中的 纤维细胞数量保持相对稳定，但当组织受损时，纤维 细胞会迅速增殖并分泌细胞外基质，参与组织的修复 和重建。
分化
在胚胎发育过程中，间充质干细胞会分化为多种类型 的成体纤维细胞，如胶原纤维细胞、弹性纤维细胞、 网状纤维细胞等。这些不同类型的纤维细胞在形态、 功能和分泌的细胞外基质成分上有所不同，共同构成 组织的特定结构和功能。
功能
不同细胞具有不同的结构和功能，如肌肉细胞具有收缩功能，神经细胞具有传导信息的功能等。
细胞的分裂与分化
细胞分裂
细胞分裂是细胞繁殖的基本方式，分为 有丝分裂和减数分裂两种方式。有丝分 裂是细胞正常繁殖的方式，减数分裂则 是生殖细胞形成时所经历的分裂方式。
VS
细胞分化
在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产 生的后代，在形态、结构和生理功能上发 生稳定性差异的过程，叫做细胞分化。细 胞分化是一种持久性的变化，它发生在生 物体的整个生命进程中，但在胚胎时期达 到最大限度。
马铃薯茎尖分生组织培养技术
马铃薯茎尖分生组织培养技术王航,刘江娜,陈英(兵团第六师农业科学研究所,五家渠831300)马铃薯种薯退化主要症状:植株矮小,叶面遍布病斑,结薯数量减少,块茎变小,产量下降,品质变劣,不耐贮藏,马铃薯种薯退化对马铃薯生产影响巨大。
马铃薯种薯退化是因植株体内有马铃薯卷叶病毒、马铃薯A病毒等病毒引起。
研究发现,马铃薯茎尖分生组织病毒含量很少,几乎为零。
所以,可以通过茎尖分生组织培养技术脱除马铃薯病毒,从而有效避免因马铃薯种薯退化带来的损失,恢复品种优良性状和提高产量。
兵团第6师农业科学研究所从事马铃薯脱毒苗生产5年,技术成熟,现将马铃薯茎尖分生组织培养技术总结如下:一、材料选择选择需要的品种,在秋季播种(高温会加速病毒积累),60~70天采收无病害优质薯块。
由于马铃薯纺锤块茎类病毒病很难用植物茎尖剥离法脱掉,应先检测入选的块茎,淘汰带病毒病的薯块。
将剩余薯块放入18±2℃通风良好的室内打破休眠后,在(25±2)℃条件下催芽,直到顶芽长至1厘米左右。
二、热处理热处理是利用温度处理使病毒丧失侵染力,消除马铃薯卷叶病毒。
将经过热处理的材料转入光照气候箱,在光照12小时/天、光照强度3000勒克斯、37℃条件下处理6~8周。
三、茎尖消毒准备好经高温灭菌过的烧杯2个、玻璃棒2个。
切取经高温处理块茎上的芽尖0.5~1.0厘米,放入烧杯中,用纱布封口,清水冲洗30分钟后,转移至超净工作台消毒。
先用0.1%升汞浸泡10分钟,再用蒸馏水冲洗5次,注意前2次冲洗用1套烧杯和玻璃棒,后3次换另1套。
为了防止升汞残留,冲洗过程中要不断搅拌,冲洗完后放入灭过菌的培养瓶内待用。
四、茎尖剥离和接种1.准备无菌培养皿和滤纸,将消过毒的茎尖放到滤纸上,滤纸放进培养皿里,倒几滴蒸馏水保持滤纸湿润,防止茎尖组织被热气流吹干失去活性。
2.在40倍显微镜下,用2根解剖针小心地将茎尖叶片剥掉,直至露出圆亮的生长点,小心切取0.3厘米以下的带有1个叶原基的茎尖,接种至组织脱毒培养基上,要以切面接触琼脂。
果树栽培学：第四章 果树苗木繁殖
微体繁殖的程序
• 无菌培养系的建立（外植体的引入） • 继代增殖培养 • 生根培养 • 组培苗驯化和移栽
1.无菌培养系的建立 （外植体的引入）
（1）培养基制备。
（2）外植体引入（接种）。 外植体:用于组培的材料称为外植体。 茎尖培养:以茎尖分生组织为外植体 茎段培养:成树枝段为外植体 叶片培养:叶片为外植体
性、抗性强，寿命长。 （4）.种子不带病毒，在隔离的条件下育成无毒苗。
2 实生繁殖的缺点：
（1）实生苗后代变异性大,表现型差异大。 优良性状难以保存（异花授粉，后代分 离）。
（2）有童期，结果晚。
3 实生苗的利用 （1） 用作栽培苗。如核桃、板栗、榛子。 （2） 用于砧木。 （3） 培育优良品种。 4 繁殖原理：实生播种（繁殖技术部分)
一、 嫁接苗培育
根据砧木的来源，将果树砧木ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ为实生砧木和自 根砧木两类。
（一）实生砧木的培育
（二）自根砧木的培育
（三）嫁接及接后的管理
（一）实生砧木的培育
1．种子的采集和处理 应注意： （1） 选择优良母本树。 （2） 适时采收。种子成熟一般经历生理成熟和 形态成熟两个阶段 （3）选择果实，合理取种
3． 影响嫁接成活的因子 （1） 亲和力 （2） 砧、穗质量。营养水平、含水量、生活 力
（3） 嫁接技术。平、齐（准）、严、紧、快 。
（4） 环境条件 温度：一般20~28℃较适宜愈伤组织的形成。 湿度：接穗及接口保湿、土壤湿度。
（5） 嫁接时期 （6） 嫁接极性 （7） 伤流、树胶、单宁物质
（五）砧木的选择和利用 1． 砧木的分类： l 依繁殖方法 分为 实生砧木 无性系砧木
第四章 果树苗木繁殖
主要内容
第四章茎尖分生组织培养[公开课堂]
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植物脱病毒方法
物理方法
化学方法
生物方法
高温处理
珠心培养
愈伤脱毒
热处理脱毒 茎尖培养 上课资料
微体嫁接
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三、脱毒的方法
（一）热处理脱毒法
热处理脱毒原理
病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一
起复制。
热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性， 使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传 染能力。
由于采用汁液接种法比较困难，所以通常采用
嫁接接种的方法, 利用嫁接法接种，把待测的植物 接种在敏感植物上，然后视其有无病斑，来判断是否 脱除了病毒。
指
接
示
穗 嫁接后
植 物
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的植物
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指示植物法
定义:将一些对病毒敏感、症状特征显著 的植物作为指示植物(又叫鉴别寄主),利 用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴 别病毒种类的方法.
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优点:方法简单\灵敏\准确\擦方便,仍为一种经济有
效的方法
缺点:枯斑法不能测出病毒总的核蛋白浓度,而只能
测出相对的感染力
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3、电子显微镜鉴定法
小于0.1mm的病 毒颗粒
用电子显微镜直接
观察经脱毒培养的叶 片，检查是否有的病 毒粒子存在，还可测 量病毒颗粒的大小、 形状和结构。
较为先进的方法，但 需一定的设备和技术
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4、酶联免疫法
在血清法的基础上，结合酶反应发展起来。在 抗体上带上某种酶，抗原和抗体结合成的免疫 复合物就有了酶活性，在反应体系中加入酶底 物，底物在酶的催化下，形成有色反应物。从 而使检测的灵敏度大大提高。
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（2）茎尖大小与脱毒
茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生 组织不能合成自身需要，生长素，细胞分裂素， 因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。因此茎 尖越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适 宜的茎尖大小不同。
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2.茎尖培养脱毒的方法 （1）取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。
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茎尖分生组织培养除可以生产脱毒苗外，还具有 方法简便，繁殖迅速，遗传性比较稳定，易保持植株 的优良性状的优点，在基础理论研究和实际应用中具 有重要价值。
2.意义： 1.形态建成研究 茎尖分生组织（不带叶原基，<250um） 2.用于无病株生产 茎尖（带1-3个叶原基，100-1000um） 3.进行营养繁殖 芽培养（>1mm） 4.育种中的应用 与辐射育种结合
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➢其它效果
• 香石竹（康乃馨）在38℃～40℃下经两个 月处理可除去全部病毒。
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马铃薯在37℃下处理10～20天能除去卷 叶病毒。
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（二）茎尖培养脱毒
1.茎尖培养脱毒的原理
（1）病毒在植物体内的分布
病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖 或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。
受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大幅 度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。因此 说，病毒带来极大的危害。
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目前，对细菌和真菌侵染的病害，可以通过药物处 理达到治愈的目的，如多菌灵等。但目前，还没有 药物能治病毒病。
种子一般不带病毒，种子繁殖植物可以得到无菌植 株。但对于无性繁殖植物，必须采用一种有效的方 法，脱去病毒，才能达到提高产量和质量的目的。
作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂， 使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。
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热处理法有：温汤处理（热水浸泡）和热风 处理两种。
具体方法： 第一，热水浸泡处理，适用于切下的材料，在50度
左右的温水中浸渍数分钟至数小时，方法简便易行 但材料易受伤。
第二，热风处理，将生长的盆栽植物移入室内或生 长箱内，处理温度因植物种类、生理状况而异。一 般为35~40度，短则几十分钟，长达数月。
上课中，代谢活动很高， 使病毒无法进行复制。
3、在茎尖中存在高水平内源激素，可以抑制 病毒的增殖。
4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”， 它在分生组织中的活性应最高，因而使分生 组织不受侵染。
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以上是四种可能原因，无论哪种说 法正确，事实是分生组织一般不带病毒。 因此，利用这一原理，进行茎尖培养， 培育无病毒苗。
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热处理的优缺点
优点: 方法简单，效果明显。
缺点:
1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形 病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃 薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病 毒）无效。
2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使 植物材料受热枯死，造成损失
3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时 也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处 理效果。
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（3）培养
接种后材料置25+2℃ ，光照度1500-5000LX，每 日光照10-16h条件下培养。但一般光照培养比暗 培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养 基中BA的浓度可形成大量从生芽。
3.培养基与培养方式 ：
（1）培养基：常用MS， White等培养基。
第四章 茎尖分生组织培养 及脱毒苗生产
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第一节 茎尖分生组织培养
一、概念和意义 1.概念 茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎尖
或几十微米的茎尖进行的培养。 特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间长。 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎
尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易 成活、成苗时间短、繁殖速度快。
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二、病毒侵染的特点
早在40年代，就有科学家(White等)发现病毒在 根上和茎上的分布是不均匀的，离根尖和茎尖越 近，病毒的密度越低。反之，越高。即病毒在植 物体内的分布是不均匀的，分生组织一般无病毒 侵染。
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分生组织之所以能避开病毒侵染，可能有4方面 原因：
1、在植物体中，病毒的移动主要靠两条途径， 一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维 管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒 移动速度非常缓慢，难以追赶上活跃生长的茎 尖和根尖。
采顶芽与侧芽消毒接种。
消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去 大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中 浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7% 的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水 冲洗材料4-5次。
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（2）接种
材料置10～40倍的双筒解剖镜下，解 剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶 原基的茎尖，接种到培养基上。
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植物脱病毒方法
物理方法
化学方法
生物方法
高温处理
珠心培养
愈伤脱毒
热处理脱毒 茎尖培养 上课资料
微体嫁接
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三、脱毒的方法
（一）热处理脱毒法
热处理脱毒原理
病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一
起复制。
热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性， 使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传 染能力。
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二、茎尖分生组织培养一般方法
1.材料的制备 健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水 冲洗 消毒 75%的酒精30秒 0.1%升汞或 20倍次氯酸钠消毒8-10min 无菌水 修剪 剥离茎尖，通常切割下顶端0.2~0.5 mm 叶原基的茎尖（无菌水） 接种。
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2.培养基 多为MS培养基及其改良配方，还有White、
B5等。 3.培养条件 （1）温度：26℃~28℃ （2）光照：光培养的效果通常比暗培养好。
（3）湿度：与其他器官培养相似。
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第二节 脱毒苗的培育和病毒检测
一、病毒的危害
多数栽培植物，尤其无性繁殖植物，都易受 到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如，草 莓感染60多种病毒。并且随着栽培时间的推移，侵 染病毒的种类越来越多。