盐酸克伦特罗检测方法的研究进展获奖科研报告论文

合集下载

盐酸克伦特罗的检测方法研究进展

盐酸克伦特罗的检测方法研究进展
朱童心;黄曼曼
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2013(000)025
【摘要】近年来,食品安全问题受到越来越多的社会关注.盐酸克伦特罗(CL)最初作为临床上支气管扩张剂用于治疗哮喘、支气管炎等.CL属于β-肾上腺素类兴奋剂,在动物饲料中加入CL可以明显提高动物的瘦肉率,因此不少商家大量使用它来提高肉畜的品质.然而,残留在动物体内的CL会使食用的人出现不同程度的中毒情况,严重时可导致食用者死亡.目前国内外检测CL残留含量的常用方法有气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GS)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、毛细管电泳法(CE)、胶体金免疫测定法(CGIA)等.综述了近年来国内外几种检测CL残留含量的方法.
【总页数】3页(P10341-10342,10345)
【作者】朱童心;黄曼曼
【作者单位】珠海出入境检验检疫局,广东珠海519015;亨氏联合有限公司,广东广州510507
【正文语种】中文
【中图分类】S816
【相关文献】
1.盐酸克伦特罗检测方法研究进展 [J], 丁晓东;黄显涉;林养招;张伟平;林泽雄
2.盐酸克伦特罗在肉制品中的危害及其检测方法研究进展 [J], 陈启佳
3.动物源性产品中盐酸克伦特罗检测方法的研究进展 [J], 张瑞华;李芳;康怀彬;邹良亮;蔡超奇
4.盐酸克伦特罗检测方法的研究进展 [J], 王秋平;哈婧;刘硕;张佳丽;苏萌
5.盐酸克伦特罗残留检测方法研究进展 [J], 李庆华;陈肖;彭道和;肖幼荣
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的研究

摘要 :建立猪肉中盐酸克伦特罗的高效液相色谱检测方法 , 得到最佳色谱条件 :流动相为甲醇 ∶水 = 26 ∶74,色谱柱采用 ODS2C18柱 ,检测波长为 244 nm。该方法检测线性良好 ,操作简单、快速 ,峰形理想 ,重现性好 ,结果准确可靠。关键词 :猪肉 ;盐酸克伦特罗 ;高效液相色谱法
第 23卷第 5期 2 0 0 7年 1 0月
Vol. 23, No. 5 Oct. 2 0 0 7
高效液相色谱法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的研究
Study on the detection of Clenbuterol Hydrochloride in pork by high2performance liquid chromatography
2 结果与讨论
2. 1 提取条件的确定盐酸克伦特罗在酸性溶液中易溶于水和乙醇 ,不溶于乙
醚、甲苯、二氯甲烷等 ,而在碱性溶液中可溶于乙醚、苯等有机溶剂。本试验用 GB / T5009. 192———2003高氯酸法提取动物样品中盐酸克伦特罗 ,然后用 1 mol/L 氢氧化钠碱化 ,调 pH至 11,再用乙醚作萃取溶剂。 2. 2 检测波长的选择
丁芳林
张朝辉
谭胜国廖三赛
D IN G Fang2lin ZHAN G Z hao2hu i TAN S heng2guo L IAO S 长沙 410127)
( Hunan B iolog ica l and E lectrom echan ica l Polytechn ic, Changsha, Hunan 410127, Ch ina)
in mane and tail hair of horses [ J ]. Equine Vet. J. , 2004, 36 ( 2 ) : 118 ～122. 6 王选年 ,康晓迪 ,潘耀谦. 盐酸克伦特罗的残留及检测 [ J ]. 动物医学进展 , 2002, 22 ( 3) : 41～46. 7 肖红玉 ,刘国艳 ,史贤明. 盐酸克伦特罗的检测方法 [ J ]. 中国饲料 , 2005 ( 12) : 31～33. 8 林奕芝 ,刘奋 ,戴京晶. 高效液相色谱法测定肉与肉制品中盐酸克伦特罗残留量 [ J ]. 中国卫生检验杂志 , 2002, 12 (2) : 180～181. 9 陈尚卫. 高效液相色谱法同时测定蛹虫草中四种核苷类活性成分 [ J ]. 食品与机械 , 2006 (6) : 107～109.

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展盐酸克伦特罗是一种临床常用的药物，常用于治疗心血管疾病和高血压。

克伦特罗也被用于研究细胞的信号传导途径。

为了定量检测盐酸克伦特罗的含量，需要建立可靠的分析方法。

本文将综述盐酸克伦特罗检测方法的研究进展。

盐酸克伦特罗的检测方法主要包括物理化学方法和生物化学方法两大类。

物理化学方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等；生物化学方法主要包括酶联免疫吸附法、免疫荧光法、生物传感器等。

高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的分析方法之一。

该方法具有分离能力强、分析速度快、检测灵敏度高等优点。

HPLC检测盐酸克伦特罗的条件包括流动相的选择、柱温的控制、流速和检测波长等参数的优化。

近年来，研究者通过改进色谱柱材料和液相色谱柱填料，进一步提高了方法的分离能力和分析速度。

毛细管电泳法（CE）是一种电分离技术，其分离效率取决于使用的毛细管和电场强度。

CE检测盐酸克伦特罗的关键是控制pH值和缓冲液浓度，以增强样品的分离效果。

研究人员还通过改进偏析电泳、等温电泳等技术，提高了方法的分离效率和检测灵敏度。

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种高度选择性和灵敏度的生物化学方法。

通过将特异性抗体固定在酶标板上，可以与盐酸克伦特罗结合并形成可检测的复合物。

ELISA检测盐酸克伦特罗的关键是选择适当的抗体和酶，以及优化反应条件。

近年来，研究人员采用改进的ELISA技术，如发光ELISA和荧光ELISA，提高了方法的检测灵敏度和准确性。

生物传感器是一种新兴的生物化学方法，可以直接测量盐酸克伦特罗与生物分子的相互作用过程。

生物传感器检测盐酸克伦特罗的关键是选择合适的生物分子，如酶、抗体或DNA探针，以及优化传感器的构建和检测条件。

研究者近年来发展了多种类型的生物传感器，如电化学传感器、光学传感器和电子传感器。

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展包括物理化学方法和生物化学方法两大类。

未来的研究方向包括提高方法的分析速度、灵敏度和选择性，并探索新的检测技术和应用领域。

盐酸克伦特罗残留检测研究进展

＊
收稿日期：２０１４ —０３ —２０
基金项目：浙江省公益性应用研究计划“ 分析测试” 项目（２０１２Ｃ３７０２７）．通讯作者：孙来玉，实验师，研究方向：生物医药与食品安全．Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｕｎｌｙ＠ｈｕｔｃ．ｚｊ．ｅｎ
试方法衔接配套的样品前处理技术非常重要．
关键词：克伦特罗；样品前处理；残留检测
中图分类号：Ｏ６５
文献标识码：Ａ
文章编号：１００９ —１７３４（２Ｏ１４）０４ — ００２７ —０６
２８
湖州师范学院学报
第３６卷
乙酸乙酯一水调节ｐＨ，以萃取动物组织中的ＣＬＢ＿５］．该方法的优点是技术经典、容易操作、设备器材简单．
０引言
盐酸克伦特罗是克伦特罗（ｃｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌ，ＣＬＢ）的盐酸盐，在药理学上属Ｂ受体激动剂，作为药物可用于治疗支气管哮喘，其商品名为 “ 克喘素、氨哮素、氨必妥、双氯醇胺” 等．２０世纪８Ｏ年代初，美国Ｃｙａｎａｍｉｄ公司发现ＣＬＢ具有促进动物生长、提高瘦肉率及减少脂肪的效果，故俗称 “ 瘦肉精” ．研究显示，ＣＬＢ能耐受１００℃高温，１７２℃才分解，２６０℃油煎５ｍｉｎ，才破坏减半［１］．因此，常规烹调对ＣＬＢ残留起不到破坏作用．ＣＬＢ属中度蓄积性药物，在动物组织内的蓄积与其剂量和给药持续时间有关，其残留量随停药期的延长逐渐下降．ＣＬＢ

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展盐酸克伦特罗是一种重要的药物原料，广泛应用于医药、化工、农药等领域。

其质量的检测是非常重要的，因为不良的质量可能会导致产品的安全性和有效性问题。

随着科学技术的发展，盐酸克伦特罗检测方法也在不断地得到改进和完善。

本文将对盐酸克伦特罗检测方法的研究进展进行介绍和总结。

一、传统的盐酸克伦特罗检测方法传统的盐酸克伦特罗检测方法主要包括物理性质检测法和化学性质检测法。

物理性质检测法包括外观和溶解度测定，这在一定程度上可以反映出盐酸克伦特罗的纯度和结晶形态。

而化学性质检测法则主要包括红外光谱法和紫外分光光度法，通过研究其在特定波长下的吸光度和吸收峰的变化来进行分析。

传统的检测方法虽然简单、便捷，但往往存在着准确性不高、重现性差、专业设备要求高等问题。

需要不断地对盐酸克伦特罗检测方法进行改进和优化。

二、近年来的盐酸克伦特罗检测方法研究进展1. 色谱法色谱法是一种常用的化学分析方法，可以对物质进行快速、高效的分离和检测。

近年来，人们在盐酸克伦特罗的检测方法中，引入了高效液相色谱法和气相色谱法。

这些方法具有分离效果好、准确性高等特点，能够更加准确地检测盐酸克伦特罗的含量和纯度。

2. 质谱法质谱法是一种能够测定物质分子量、结构和组成的分析方法，近年来被广泛应用于盐酸克伦特罗的检测中。

包括质子磁共振质谱法、质子谱法和质子化学位移谱等不同的质谱方法，能够对盐酸克伦特罗的结构和组成进行精确的分析和测定。

3. 生物传感技术生物传感技术是一种将生物学和传感技术相结合的新兴技术，近年来也得到了在盐酸克伦特罗检测中的应用。

通过改变生物材料的电化学特性，来检测盐酸克伦特罗的含量和纯度。

这种方法具有快速、灵敏度高、成本低等优点，成为了盐酸克伦特罗检测领域的新热点。

三、未来的发展方向随着科学技术的不断发展，盐酸克伦特罗检测方法也将不断地得到改进和完善。

未来的发展方向主要包括以下几个方面：1. 多种方法的综合应用：在盐酸克伦特罗检测中，可以将色谱法、质谱法、生物传感技术和光谱法等多种方法进行综合应用，从而得到更加准确和全面的检测结果。

基于便携式血糖仪快速检测肉中盐酸克伦特罗方法的研究

13.2
13.6
13.9
14.0
14.3
每个试验点平行做3次
明德博学日新
笃行
（2）胶体金/二抗-转化酶复合物最佳工作浓度的确定
血糖仪信号值（mM）
18.6
19
18
17
16
15
14 1/800
1/700
1/600
1/500
1/400
胶体金/二抗-转化酶复合物稀释浓度
1/300
结果选择1:500稀释度
6：2% OVA+2% 甘氨酸
PGM信号值（mM）
4
1
2
3
4
5
6
图不同封闭剂对磁珠封闭效果的影响
结果表明：最佳封闭效果的是2% OVA+2% 脱脂奶粉。
明德博学日新笃行
1.2 酶标二抗复合物的制备
1.2.1 胶体金的制备
方法
柠檬酸三钠还原法制备胶体金
1%氯金酸
超纯水定容
恒温磁力搅拌，冷凝回流加热至沸腾
550
600
波长 / nm
胶体金标记前
胶体金标记后
明德博学日新笃行
1.3 基于血糖仪检测CLB残留方法的构建
1.对各试验条件进行优化 2.标准曲线的绘制 3.方法的验证
明德博学日新笃行
1.3.1 对各试验条件进行优化
（1）免疫磁珠用量及最佳抗体工作浓度的选择（棋盘法）
不同免疫磁珠用量及盐酸克伦特罗抗体工作浓度下的血糖仪信号值
硕士研究生中期检查报告
基于便携式血糖仪快速检测肉中盐酸克伦特罗方法的研究
汇报人：张瑞华导师：康怀彬专业：农产品加工及贮藏工程

盐酸克伦特罗检测方法研究及在基层畜牧生产中应用探讨

盐酸克伦特罗检测方法研究及在基层畜牧生产中应用探讨作者：王利宾来源：《畜牧兽医科学》 2018年第3期摘要：本文对盐酸克伦特罗的检测方法进行综述，并对检测方法在基层畜牧生产中的应用做了以下探讨。

关键词：盐酸科伦特罗；瘦肉精；检测；基层中图分类号：S816 文献标识码：B doi：10. 3969/j. i ssn. 2096-3637. 2018. 03. 029盐酸克伦特罗又称咳喘素，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，在医学上被应用于治疗支气管哮喘病，后来发现副作用太大而被停用。

在20世纪80年代初被美国科学家发现在动物体内可以改变新陈代谢，基本原理是抑制脂肪的合成，促进骨骼肌中蛋白质合成。

并且可以利于动物生长速度加快，瘦肉率提高10%以上，因此有了新的名称“瘦肉精”。

瘦肉精在动物体内代写缓慢，积累于肝脏、毛发、视网膜等组织当中。

化学性质极其稳定，需要加热至172℃才能分解。

故一般的烹饪方法很难将其破坏。

瘦肉精对人体的危害极大，主要中毒的症状表现为：心跳加快、肌肉颤动、头晕目眩、呕吐恶心、四肢麻木等。

有心脏病的人反应更加强烈，会引起心室早搏等，危害极大。

患有高血压、青光眼、糖尿病、前列腺肥大的人容易产生急性中毒症状。

1瘦肉精的检测方法由于瘦肉精的巨大危害，学者们一直在研究适合时代发展需要的瘦肉精检测方法。

经过多年的技术积累目前瘦肉精的检测形成了多种有效的检测方法。

归纳起来主要有高效液相色谱法、气相色谱一质谱法、毛细管区带带电泳法、酶联免疫法等。

11高效液相色谱法（HPLC)高效液相色谱法是根据各组分的物理或化学性质的差异，将混合物进行分离。

是现今化学分析检测中常用的方法。

具有专一性强、检出限低、准确度高的优点，但也有一些局限性，例如仪器设备昂贵、操作困难、维护运行成本高、检测时间长等缺点。

目前主要是将此方法作为半确定性方法。

1 2气相色谱一质谱法( GC-MS)气相色谱法指的是用气体作为流动相的色谱法。

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

（广东省食品质量安全重点实验室，华南农业大学食品学院，广东广州５１０６４２）
摘要：为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（ＣＬ）的胶体金免疫层析方法，用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金，将
其标记抗ＣＬ单克隆抗体，制备了金标抗体；以ＣＬ一人血清白蛋白（ＨＳＡ）为包被抗原、羊抗鼠ＩｇＧ为质控线二抗，制成胶体金试纸。
ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｌａｂｅｌｅｄＭＡｂ．ＴｈｅＣＬ－ｈｕｍａｎｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ（ＨＳＡ１ｎｄｇａｏａｔｎｔａｉ－ｍｏｕｓｅＩｇＧｗｅｒｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｏｎｔｈｅｌａｔｅｒａｌｌｆｏｗｍｅｍｂｒａｎｅｔｏ
优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和ｐＨ值等各项参数，最终确定胶体金粒径为１５ｎｌＴｌ、每毫升胶体金溶液中添加２０抗体、胶体金溶液ｐＨ值为７．４、金标抗体稀释液为添加０．１％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的０．０５ｍｏＵＬ磷酸盐缓冲液（ｐＨ７．４）、金标抗体喷涂量
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｔｈｅａｒｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＣｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌ（ＣＬ），ｃｏｌｌｏｉａｌｄｇｏｌｄｗａｓ

盐酸克伦特罗的危害及其检测技术

ｂｔｏｈＣｅｕｅｌｙｎｒ
高残留、严重的毒副作用的披露．盐
酸克伦特罗的危害引起社会的广泛关注。本文详细介绍了盐酸克伦特罗的
ｄｏｈｒｅＬ）ｒｃｌｉ，ＣＢ，俗称瘦肉精，又名ｏｄ
后，极有可能发生急性或慢性中毒，
对人体健康造成潜在的威胁。由于盐酸克伦特罗（肉精）在动物生产中瘦
其机理为：在传神经系统，Ｂ受体一主要分布于血管、支气管、骨骼和平滑肌等部位，盐酸克伦特罗与Ｂ受体一
床上主要用于防治人、畜支气管哮喘
和痉挛。研究证明．作为药物，盐酸克伦特罗对呼吸、生殖、泌尿、骨骼、神经等系统疾病具有较好治疗作用。
酸结合反应，但反应率低。肝脏是瘦
盐酸克伦特罗于１６９４年首次在美国合成，属于Ｂ类兴奋剂，最初在临一
产量．人们有意或无意地添加各种各
样的药物，造成不同程度的药物残留。当人们在食用这些残留超标的畜产品
相当于肝脏的ｌ５在肝脏和肾脏中的，。
心悸、头痛、头晕、乏力、恶心、呕
吐等中毒症状，甚至引发高血压、心

盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附_ELISA_检测方法的研究

盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的研究*陈存社吕会田(北京工商大学化学与环境工程学院,北京,100037)摘要建立了间接EL ISA 检测盐酸克伦特罗的方法,并对其参数进行了分析计算。

在该检测方法中,抗盐酸克伦特罗(CL )抗体最适稀释度为1B 1000,羊抗兔酶联抗体(HRP -I gG)的最适稀释度为1B 1500。

该检测方法的检测灵敏度可达011046L g/L,生物检测限为11452L g/L,线性检测范围为7126~90175L g/L 。

关键词盐酸克伦特罗,酶联免疫吸附检测(EL ISA ),检测方法第一作者:博士,副研究员。

*国家高技术研究发展计划(863)资助项目(No.2002AA248051)收稿日期:2006-02-14,改回日期:2006-05-11盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride,CL),异名克喘素、氨哮素,俗名/瘦肉精0,化学名为A -[(叔丁胺基)甲基]-4-氨基-3,5-二氯苯甲醇盐酸盐。

临床上用于治疗哮喘和支气管痉挛的药物。

当其应用剂量达治疗剂量的5~10倍[即大于1g /(kg #d)]时,CL 可增强肌肉发育,降低脂肪沉积,因此又称/瘦肉精0,作为一种非法饲料添加剂被许多专业饲养户和饲料加工企业所使用,已经成为了重大的食品安全问题[1]。

CL 屡禁不止的原因之一就是目前的检测方法)))高效液相色谱-质谱联用法(HPLC -MS)和气相色谱-质谱联用法(GC -MS)不能适应市场监督需要的快速、简便、价廉要求。

若想彻底禁止CL 的非法使用,就必须加快快速检测方法的研究。

酶联免疫吸附检测法(ELISA)是当前盐酸克伦特罗残留检测方法中最为常用的一种方法,具有简便、快速、灵敏、高特异性等优点[2]。

德、美等国都已将ELISA 用于CL 残留检测中,并已有ELISA 商品化试剂盒问世,大大加强和方便了动物性食品中CL 残留的检测。

猪肝中盐酸克伦特罗的快速检测研究

样品
图２不同地区、货渠道盐酸克伦特罗的提取量供
３２不同地区、货渠道的样品对盐酸克伦特罗含．供
量的影响
（）２四份样品各自平均分成２份样品，生样标记为Ｎ、２、Ｈｌ、２；样标记为Ｎ、２、１ＮＯＨＯ熟ＯＯ１Ｎｂｂ
２３ＥＩＡ测定．ＬＳ
根据酶联免疫试剂盒方法操作。
“ 兴奋型 ” 状。因此，了确保人类的健康和安全，症为
加强食品中“ 肉精 ” 留的监督和检测显得尤为重瘦残
３结果与分析
３１标准曲线．
要。目前国内外用于检测动物性食品中盐酸克伦特罗的方法主要有色谱检测技术，这类方法对检测但
关键词猪肝盐酸克伦特罗酶联免疫甲醇
ＳｔｙｏａｉｙｄｅｅｔｏｏｌｎｕｄｎｒｐｄｌｔｃｉｎｆｃｅｂｕｔｒｌｉｏｒｌｖｒｅｏｎｐｋｉｅＡｂｓｒｃＩｒｅｏｓｌｅｔｅｐｏｌｍｈｔｃｅｂｔｒｌｉｏｋｐｏｕｔｘｅｄｄｔｅｉｔｒａｉｎｌｔａｔｎｏｄｒｔｏｖｈｒｂｅｔａｌｎｕｅｏｎｐｒｒｄｃｓｅｃｅｅｈｎｅｎｔａｏｓａｄｒｔｎａｄ，ＥＬＳｗａｓｄｔｅｅｍｉｅｃｅｂｅｏｏｋｌｖｒＩＡｓｕｅｏｄｔｒｎｌｎｕｔｒｌｐｒｉｅ．Ｅｘｒｃｉｎｂｌｏｌａｄｃｌ —ｈａｒａ．ｔａｔｏｙａｃｈｏｎｏｄｅｔｔｅｔ

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展盐酸克伦特罗是一种常用的抗抑郁药物，广泛应用于临床治疗。

随着对该药物的研究和应用不断深入，其检测方法的研究也变得愈发重要。

本文将介绍盐酸克伦特罗检测方法的研究进展，以及目前存在的问题和未来的发展方向。

一、传统的盐酸克伦特罗检测方法传统的盐酸克伦特罗检测方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、质谱法等。

这些方法具有灵敏度高、准确性好的优点，可以满足大部分的检测需求。

这些方法在操作复杂、耗时长、昂贵等方面存在一定的局限性，尤其是对于一些临床医学实验室和药企来说，需要更加简便、快速、经济的检测方法。

随着科学技术的不断进步，新的克伦特罗检测方法也随之不断涌现。

近年来，一些学者提出了基于光学传感技术的盐酸克伦特罗检测方法。

这种方法利用光学传感器对克伦特罗进行高灵敏度、实时监测，操作简单，且不需要昂贵的仪器设备，因而备受关注。

一些学者还提出了基于电化学传感技术的盐酸克伦特罗检测方法，这种方法具有快速、灵敏度高、可实现在线监测等优点，为克伦特罗的检测提供了新的途径。

纳米材料在盐酸克伦特罗检测中的应用也引起了研究人员的广泛关注。

一些学者利用纳米材料构建传感器，可以实现对盐酸克伦特罗的高灵敏度检测，同时降低了检测的成本和时间，取得了良好的效果。

目前存在的盐酸克伦特罗检测方法虽然各有优势，但仍然存在一些问题。

一些新方法尚未在实际样品中得到验证，其准确性和稳定性还需要进一步的研究；一些方法的灵敏度有待提高，以满足更加苛刻的检测需求。

由于盐酸克伦特罗是一种潜在的药物滥用物质，因此对于其快速、准确的检测方法尤为重要。

针对这些问题，未来的研究方向可以从以下几个方面展开：一是进一步完善新的盐酸克伦特罗检测方法，提高其准确性和稳定性，使其能够在实际样品中得到可靠的应用；二是开发更加快速、灵敏度更高的盐酸克伦特罗检测方法，满足不同领域对克伦特罗检测的需求；三是加强纳米材料在盐酸克伦特罗检测中的应用研究，进一步提高检测方法的性能和降低成本。

盐酸克伦特罗快速检测试剂盒的研制与开发

华中科技大学硕士学位论文盐酸克伦特罗快速检测试剂盒的研制与开发姓名：***申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：***20080529摘要盐酸克伦特罗（CL）是ß-兴奋剂的一种，具有促进动物生长，提高饲料利用率，改善瘦肉率的作用。

但该药排泄速率慢，易蓄积在动物组织中，引起消费者发生急性中毒，目前已被大多数国家列为违禁药，然而，CL滥用和残留的问题仍然存在，灵敏、有效的残留检测方法是控制残留的基本手段。

目前国际上多使用ELISA方法作为CL快速检测的筛选方法，国内检测机构一般采用进口试剂盒进行检测，成本高，到货周期长，售后没有保证，但是在这一领域的国产试剂盒产品又存在着稳定性差，假阴性、假阳性率高等缺点，从而使国产试剂盒在这方面迟迟未打开市场。

本实验着力于研制出稳定性好，假阴/阳性率低，能够与国外产品相媲美的CL快速检测试剂盒。

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，通过优化条件得到最终反应条件为：包被抗原约0.2µg/mL，抗体工作浓度约为0.059µg/mL，总体反应时间为90min，酶标二抗的稀释倍数为1：1000。

建立的标准曲线的线性范围为0-8ng/mL，IC50平均为1.0ng/mL，最低检测限（LOD）达0.1ng/mL，标准点批内变异系数为1.28-13.19%，批间变异系数在5-15%之间，试剂盒保存期在1年以上。

与荷兰（ED）试剂盒比对实验表明，本试剂盒的回收率在80%-120%之间，高于ED试剂盒的50%-80% 的样品回收率，同时本试剂盒可以保持稳定1年以上，这与ED试剂盒相当，领先于国内试剂盒。

总之，在标准点符合程度、曲线参数、实际样品回收率等方面与ED试剂盒的测量结果相当，部分指标甚至优于ED试剂盒，从而证明了本试剂盒的可用性和替代国外试剂盒的可能性。

关键词：盐酸克伦特罗，间接竞争ELISA，条件优化，试剂盒，保护剂，回收率AbstractClenbuterol（CL）is a ß-agonist registered as a veterinary bronchospasmolytic drug in some countries. It was well known that CL can be used as a growth-promoting and repartitioning agent in several livestock species at comparatively high doses, as it can improve lean meat deposition and production efficiency. However, there have been several reported incidences resulted from consumption of CL-tained edible tissues of bovine and swine. Its use as a feed additive has been banned within most countries. It is necessary to develop a sensitive and applicable assay for effective surveillance of the illicit use of CL.At present, most countries use ELISA as a rapid screen method for CL. Testing organizations in China almost all use the import kits for the testing wrok. The import kits are high in price and poor at the after sale service. The domestic kits of CL have the price advantage and can give good after sale service, but the quality problems such as poor stability, high false positive/negative rates etc are so ubiquity that the home-made kits still cannot take place of the import kits. This reseach aims at developing a self-made kit for CL which is of good stability, low false positive/negative rates and can compare with the import kits.The development of this kit bases on the principle of indirect competitive ELISA, by condition optimization，final reaction parameters are achieved: the concentration of coating antigen is 0.2µg/mL, that of antibody is 0.059µg/mL, dilution rate of IgG-HRP is 1：1000, whole reaction time is 90min. Linear range of the standard curve is 0-8ng/mL, IC50 with an average of 1.0ng/mL, LOD can reach to 0.1ng/mL on avenage, which is the same as the import kits. The self-made kit shows high sensitivity with CL and almost no cross-activity with Salbutamol, Chioramphenicol, Ractopamine and other ß-adrenergic receptor agonists. The standard variation coefficients of intra-assay and inter-assay are 1.28-13.19% and 5-15%, respectively. Compared with the import kits(ED kits), theextraction recoveries of self-made kits are ranged from 80% to 120%, which is higher than the import kits(50%-80%); the self-made kits can also keep stable and provide reproductive result for more than 1 year, which is one-up in China and the same as the import kits. In all, on the aspects of extraction recoveries, RE of standards and veracity, the self-made kit act the same or even better than ED kits, which means the self-made kit can possiblily replace the import kits.Key words：Clenbuterol, indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay, condition optimization, Kit, protective agent, recovery rate独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

盐酸克伦特罗综述

摘要盐酸克伦特罗酶联免疫反应适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的量检测，是一项筛查盐酸克伦特罗残留的新技术。

克伦特罗作为一种主要的β- 兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中, 用以提高肌肉和脂肪的比例并加快生长速度。

由于克伦特罗可作为肌肉舒缓剂用于人类疾病治疗, 在畜禽中过量残留可能会对消费者造成危害, 为此, 被禁止在食品生产中应用。

由于该检测方法技术性强，对试验环境要求特殊，因此影响ELISA检测质量的因素有很多，如试剂因素、标本因素和操作因素等。

试剂的质量固然是影响检测结果准确性的关键因素,然而检测人员的操作是否规范合理对ELISA检测结果的影响也不可忽视。

本论文就ELISA法检测猪的肝脏中盐酸克伦特罗含量以及试剂的选择、温育条件、洗涤次数、准确加样、显色时间等多个操作因素对检测结果产生的影响进行了分析并针对性的提出了相应的控制对策，从而为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速的检测盐酸克伦特罗残留的方法。

关键词：酶联免疫；检测；盐酸克伦特罗；关键控制因素摘要应该改为：本论文就ELISA法检测猪的肝脏中盐酸克伦特罗含量以及试剂的选择、温育条件、洗涤次数、准确加样、显色时间等多个操作因素对检测结果产生的影响进行分析，针对性的提出了相应的控制对策，从而为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速的检测盐酸克伦特罗残留的方法。

试验结果表明，、、、、、、AbstractClenbuterol hydrochloride enzyme-linked immune response is applicable to urine, fodder and other groups and the amount of clenbuterol residues in the sample testing, clenbuterol hydrochloride residue is a screening of the new technology. Clenbuterol, as a main beta stimulants used in products production, to increase the proportion of muscle and fat and speed up the growth. Because of clenbuterol can be used as a muscle relieving agent in human disease treatment, in livestock and poultry excessive residues may cause harm to consumers, therefore, have been banned in food production in the application. Because the test method of technical and special requirement to the test environment, so that the influencing factors on the quality of the ELISA detection has a lot of, such as reagents, specimen and operating factors. Reagent is the quality of the key factors influencing the accuracy of the test results, however, check whether the operation of the personnel specification is reasonable on the result of ELISA detection also cannot be ignored. This thesis just ELISA method to detect clenbuterol hydrochloride content in pig's liver, as well as the choice of reagent, temperature condition, washing frequency, accurate sample and chromogenic time multiple operating factors on the impact of test results are analyzed and put forward the corresponding control countermeasures, which provides the farmers and the government supervision and regulation department more accurate rapid detection of clenbuterol hydrochloride residue method.Key words:enzyme-linked immune；Detection；Clenbuterol hydrochloride；The key control factors一、引言1.1 文献综述盐酸克伦特罗酶联免疫反应测试盒适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的量检测。

盐酸克伦特罗在肉制品中的危害及其检测方法研究进展

ＣＥｉｉＨＮＱｄａ
（ｏｅｅｆｏｄｃｎｅＮｒｅｓＡｒｕｔａＵｉｅｓｙＨａｂｎ１０３，ｈｎ）Ｃｌｇｏｉｃ，ｏｔａｔｇｃｌｒｌｎｖｒｉ，ｒｉ５００ＣｉａｌｏＦＳｅｈｉｕｔ
摘要：盐酸克伦特罗抑制脂肪合成，增加瘦肉率，被非法作为饲料添加剂使用。人食用含有盐酸克伦特罗的肉制品会危害身体健康。介绍盐酸克伦特罗的理化性质及中国、欧盟、日本对其残留量的要求，总结残留在肉及肉
制品中的盐酸克伦特罗的检测方法。
关键词：盐酸克伦特罗；残留；危害；检测
ｉｔｏｕｅｈｓｏｈｍｉａｒｐｒｅｆｌｎｕｅｏｙｒｃｌｒｅａｄｔｅｅｕｒｍｅｔｆｈｎ，ＵｄＪｐｎｆｒｔｓｄｅｎｒｄｃｓｙｉｃｅｃｐｏｅｔｓｅｂｔｒｌｄｏｈｏｉｎｑｉｐｃｌｉｏｃｈｄｈｒｅｎｓｏｉａＥａａｒｉｕＣｎａｏｉｅｓｎａｄｓｍｍａｉｅｕｒｎｔｏｓｆｒｅｅｔｇｃｅｂｔｒｌｙｒｃｌｒｅｕｒｚｓｒｅｔｃｍｅｈｔｃｎｌｎｕｅｏｄｏｈｏｉ．ｄｏｄｉｈｄＫｅｒｓｙｗｏｄ：ｃｅｂｔｒｌｙｒｃｌｒｄ；ｒｓｄｅｈｚｒ；ｄｔｃｉｎｌｎｕｅｏｄｏｈｏｉｅｅｉｕ；ａａｄｈｅｅｔｏ
费者误认为是上好的猪肉。

盐酸克伦特罗的免疫层析检测方法研究

盐酸克伦特罗的免疫层析检测方法研究盐酸克伦特罗（CL）,是一种β-肾上腺素受体激动剂。

由于其可以改变动物体内的代谢途径,加快脂肪的分解和转化,加速蛋白质合成,20世纪80年代开始盐酸克伦特罗被用作饲料添加剂以提高动物的瘦肉率。

然而,盐酸克伦特罗性质稳定、半衰期长,很容易在动物体内造成积累,人一旦食用残留过多CL的动物制品,就会造成食物中毒,严重者甚至导致死亡,世界各国已纷纷禁止将CL用作兽用饲料添加剂。

尽管如此,目前仍有许多不法分子违规使用,对食品安全造成了重大隐患。

因此,为确保食品安全,维护消费者的健康,急需建立快速、可靠的CL检测方法。

本研究以CL为检测目标物,制备了抗盐酸克伦特罗单克隆抗体,基于该抗体建立了两种免疫层析检测方法,实现了猪肉、培根、牛奶等食品中CL的快速检测。

本论文的研究成果如下:（1）抗CL单克隆抗体的制备及性能评价:采用小鼠体内诱生法制备含有抗盐酸克伦特罗单克隆抗体（mAb）的腹水,纯化后得到单克隆抗体。

之后对抗体进行鉴定,结果表明抗体的效价为1:32000,抗体对CL 的50%抑制浓度(IC50)为0.69 ng mL-1,该抗体为后续免疫层析试纸条的制备提供了核心材料。

（2）基于金纳米颗粒的盐酸克伦特罗免疫层析试纸条的研制及性能鉴定:将制备的金纳米颗粒（15 nm）作为信号标签,标记抗盐酸克伦特罗单克隆抗体,从而制备GNP-mAb探针。

通过一系列的优化,确定了探针中抗体的最佳标记量,NC膜上抗原的最佳包被浓度,样品垫的最佳封闭液成分和探针的最佳使用量。

在最佳状态下,该试纸条对盐酸克伦特罗标准溶液的可视化检出限（VDL）为5 ng mL-1,特异性测定表明试纸条与其它五种盐酸克伦特罗结构类似物无交叉反应,特异性强。

将该试纸条用于实际样品（猪肉、培根和牛奶）中盐酸克伦特罗的残留监测,结果发现,其可视化检出限分别为10 ng g-1、10 ng g-1和10 ng mL-1。

盐酸克伦特罗快速检测方法的研究进展

盐酸克伦特罗快速检测方法的研究进展程　政（河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳４７１０００）中图分类号：Ｓ８１６．７９　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００５－７３０７（２０２３）０４－００１１－００４盐酸克伦特罗（ＣＬＢ）作为一种β受体激动剂类药物，多用于临床，又因其具有促进畜禽生长、提高畜禽瘦肉率等作用而用于畜禽养殖。

人食用后易造成心悸、心慌、胸闷、心律失常等并发症，因此国内外多数国家已严禁使用，我国也明令禁止在饲料中添加。

盐酸克伦特罗作为一种能在短期内迅速提升畜禽瘦肉率的肾上腺素类药物，其有效快速的检测手段一直被学者广为研究。

吕睿研究出利用混合铱／硅纳米线基质，可将质谱信号提高１０倍，灵敏检测克伦特罗和其他小分子。

刘文光建立了包括克伦特罗在内的１６种β 受体激动剂类药物在猪、牛、羊毛发及尿液中的超高效液相色谱串联质谱的多残留检测方法。

周珊珊通过ＥＬＩＳＡ方法检测猪尿中克伦特罗残留量，分析此方法定性检出限为０．１４７μｇ／Ｌ，定量检出限为０．４９０μｇ／Ｌ。

马璐瑶开发了一种基于微流纸的酶联免疫吸附测定牛奶中的盐酸克伦特罗含量，检测极限为０．２μｇ／Ｌ。

张雪娇则研究了山羊体内盐酸克伦特罗的检测靶标，结果表明肝脏和尿液更为适合作残留检测靶标。

而近期更有研究发现使用硼碳氧氮化物（ＢＣＮＯ）纳米片作为传感介质用于电化学检测猪血清和药片中盐酸克伦特罗有良好的稳定性和分析性，该传感器有１７ｎｇ的低检测限，为盐酸克伦特罗的检测提供了新策略。

结合近年来相关的快速检测方法，如色谱法、传感器分析法、免疫分析法为盐酸克伦特罗新型检测技术提供新的思路和参考，将检测条件优化、检测效率提高，为食品及其他类别中盐酸克伦特罗残留量做出更精准的测定。

１　快速检测盐酸克伦特罗的方法１．１　色谱法１．１．１　液相色谱质谱联用法　盐酸克伦特罗测定的国家标准《动物源性食品中多重β 受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》曾于２００８年出台，并将于２０２３年２月１日废止。

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展盐酸克伦特罗（Clenbuterol hydrochloride）是一种常用于家畜生产中促进生长的禁用药物。

由于其具有潜在的危害性，如导致肌肉颤抖、心脏病、甚至死亡，各国纷纷禁止其在畜禽养殖中的使用。

准确检测盐酸克伦特罗的方法具有重要意义。

本文将对盐酸克伦特罗的检测方法的研究进展进行综述。

目前，盐酸克伦特罗的检测方法主要包括生物学方法、免疫学方法和化学方法。

生物学方法是最早应用于盐酸克伦特罗检测的方法之一。

其原理是利用生物学特性，如细胞生长抑制、酶活性变化等来间接检测盐酸克伦特罗。

生物学方法的优点是简单、快速且成本较低，但缺点是操作复杂、结果受到干扰因素较多，如微量元素的影响等。

免疫学方法是一种高灵敏度、高特异性的检测方法。

常用的免疫学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫荧光法。

这些方法基于克伦特罗与抗体之间的特异性结合，通过测定克伦特罗与标记物质之间的信号变化来检测克伦特罗的存在。

免疫学方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单等优点，但也存在标记物质稳定性差、批号差异等问题。

化学方法是通过分析克伦特罗的化学性质来进行检测的方法。

常用的化学方法包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）等。

这些方法通过对样品进行提取、分离和定量分析，可以精确、快速地确定克伦特罗的含量。

化学方法具有灵敏度高、精确度高等优点，但也存在样品处理过程繁琐、耗时长等问题。

除了以上三种方法外，近年来还出现了一些新的检测方法。

质谱法结合气相色谱法（GC-MS）、液相色谱法（LC-MS）等，可以在分子水平上检测克伦特罗，并具有高灵敏度、高特异性的优点。

近红外光谱法、表面增强拉曼光谱法等也被应用于克伦特罗的检测领域。

盐酸克伦特罗的检测方法研究取得了一定的进展。

不同的方法各有优缺点，应根据具体情况选择合适的方法。

未来的研究方向可以进一步提高检测方法的灵敏度、特异性和准确性，以满足不断提高的检测需求。