盐酸克伦特罗的免疫检测技术
酶联免疫法测定猪尿中克伦特罗残留的检测与分析
酶联免疫法测定猪尿中克伦特罗残留的检测与分析
作者：曹忠君
来源：《新农业》2022年第14期
摘要：应用酶联免疫法对来自某地区屠宰厂100批次猪尿样品进行克伦特罗的检测。结果显示，检测猪尿中克伦特罗含量试验的回收率范围为74.3%～109.7%。该方法具有简单、快速、灵敏、准确的特点，适合检测人员操作和推广。检测数据没有克伦特罗残留检出，表明该地区屠宰厂所屠宰的生猪其克伦特罗残留符合屠宰要求。本研究对屠宰企业产品检测和基层检测机构业务开展有一定的参考价值。
关键词：酶联免疫法；克伦特罗；猪尿
在现代化畜牧业养殖过程中，普遍存在着用于提高经济动物产品产量的药物及违禁品被广泛滥用的现象，盐酸克伦特罗就是其中最常用的一种。它属于拟肾上腺素类药物，被人们意外发现盐酸克伦特罗可明显促进经济动物生长，显著提高瘦肉率。能够促进动物肌肉生长，特别是机体蛋白质的合成，阻碍脂肪的形成，从而改善肉品质，所以盐酸克伦特罗又称为“瘦肉精”。大量试验证明，盐酸克伦特罗在动物体内蓄积残留的主要器官和组织是，肝、眼睛、肌肉、肺、毛发、肾和脂肪组织。药物残留对环境、人体健康、畜牧业健康发展等方面影响极大。近年来，我国政府及相关部门对兽药的科学用药和残留检测极为重视，因此应重视对盐酸克伦特罗的检测。
本研究旨在探讨应用酶联免疫法检测猪尿中克伦特罗残留的方法，同时也为了监测某地区屠宰的生猪克伦特罗残留的现状。结果表明，该方法具有快速、简单、准确、检测成本不高的特点，本次试验检测数据全部合格。本方法适用于大批量检测，便于基层检测机构以及屠宰企业应用，能够起到监测经济动物药物使用情况的作用。
酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法
酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法
作者：张清超
来源：《现代食品》 2017年第11期
盐酸克伦特罗俗称瘦肉精，是人工合成类的β- 肾上腺素兴奋剂的一种，在治疗支气管
扩张方面有显著效果，用量适当时，是防治哮喘、肺气肿等肺部疾病的有效物质；但当其用量
为正常治疗量的5 ～ 10 倍时，在能量重分配的作用下，将导致脂肪沉积异常减少、肌肉合成
异常增加，部分非法使用者往往将其添加到动物饲料中，用以改善动物胴体品质。当动物食用
盐酸克伦特罗后，其体内将残留不同程度的盐酸克伦特罗，用其制作的食品一旦被人们食用，
将引发一系列中毒症状，严重危害人体生命安全。调查显示，盐酸克伦特罗一次摄入量过大，
人体将产生呕吐、心跳骤然加速等异常生理反应，严重者甚至直接死亡，因此被世界上大多数
国家禁用。近年来，在我国的严厉打击下，非法生产销售添加盐酸克伦特罗食品的现象显著减少，但畜产品抽检的实际工作显示，瘦肉精仍时有检出，加强对畜产品中盐酸克伦特罗的检测
势在必行。在多种检测方法中，胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附法较为常见，广泛应用于畜
牧业中，具有准确率高、操作简便、耗时短等优点。下面本文将就酶联免疫吸附法测定猪肉中
盐酸克伦特罗的方法进行进一步分析和总结。
1 原料与方法
1.1 原料
到附近市场随机抽取一批剔除杂质、脂肪的无皮精肉，使用高速捣碎机对无皮精肉进行处理，彻底捣碎后将所有精肉混合均匀并置于冰箱冷冻备用。检测时，从冰箱冷冻室抽取5 g 捣
碎样品，将25 mL 的50 mmol/L HCl与样品混合，持续摇动至均质。在离心管中加入5 g 均质物，以10 000 r/min 的速度高速离心15 min，分离血清，提取上清液，在上清液中加入300
盐酸克伦特罗残留物的定性定量检测方法
Ｉ］ 刘 维红 动 物产 品中盐酸 克伦特 罗残 留危 害及检 测方 法Ｕ 安徽 农 学通 ２ 】
报， ０， （ ）６— ７． ２ ９１ ３ ： ８ １ ０ ０ ５ ０１
方便 ， 作简单 ，适合于 基层动 物防疫 监督机构 在监管现 操
场作 为快 速筛选 法使用 ，但不 能得 出准 确的检验 结果 。酶
生物传 感器技术 是一 门由 多种 学科互相 渗透形 成的新 Ｎ ／ ４ ８ ２ ０ 动物组 织 中盐 酸克伦特 罗测定 ，已将 气相 ＹＴ６ — ０６ 兴学科 ，其 基本原 理 为待 测物 与分子识 别元件 特异 性结合 色谱质 谱串联 法定 为畜产 品中盐酸克 伦特 罗的最终确 认方
后 ，产 生 的复合物 通过信 号转 换器转换 为可识 别 的电信 号 法。但其成本高 ，前处理操作繁琐 ，仪器 昂贵 ，只有通过认
志 ， ０ ，８ ） ６ ７ １ ８ ． ２ ８ （ ： ８— ６９ ０ １ ８１
发挥 盐酸 克伦 特罗快速 试纸和 酶免疫传 感器 ，携带方便 ， 操作 简单 的特 点 ，在 现场初步 定性分 析的基础 上 ，进 行实 验室 酶联免疫 法和色 谱分析检 测法精确 定量检 测。将 生物
工程 技术 、杂交瘤技 术 、传感 技术等 互相渗透 融合 以实现
图２ 试纸 检测 法 【 ４ 】
根据 显色 的深浅来 判断样 品 中克伦 特 罗含 量。检 测时设置
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗的检测方法
科技信息职教与成教
盐酸克伦特骂硇楦测方法
河南科技大学林业职业学院刘荣森
[摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱
法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向.
[关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展
中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥
用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称:
Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯
苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式:
]}H31.
l
盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减
少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该
药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦
特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉
精已成为重大的食品安全问题.
中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情
况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒
事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在
检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速,
方便,精确的检测方法.
检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高
效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗（Clonidine hydrochloride）是一种中枢神经系统镇静剂，可以用于治疗高血压、焦虑症、戒烟等疾病。在药品生产和医药研究中，需要对盐酸克伦特罗进行定量测定，以确保药品质量和研究成果的准确性。下面就介绍几种盐酸克伦特罗的检测方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）
高效液相色谱法是一种常用的药物定量分析方法。对于盐酸克伦特罗的检测，可以使用反相高效液相色谱法。反相柱中的固定相是疏水性的，可使化合物在流动相中移动速度较快，从而提高分离效率。在蒸馏水-甲醇-磷酸盐缓冲液的混合溶液中，以流速1.0 mL/min进行分离，检测波长为266 nm，可获得很好的分离效果。
二、气相色谱法（GC）
气相色谱法用于盐酸克伦特罗的检测，需要经过提取纯化和甲氧基化处理。首先，采用乙腈提取，得到原始样品。然后，将样品中的酸性部分用硫酸进行提取，氯化物离子用银离子处理，与苯钠作用以除去酸性物质。最后，采用甲氧基化处理，将克伦特罗转化为具有良好挥发性的甲氧基克伦特罗。将处理后的样品注入气相色谱仪中进行检测，可获得良好的检测结果。
三、电化学法
电化学法是利用化学反应中的电荷转移过程对物质进行分析的方法。对于盐酸克伦特罗的检测，可以使用溶液中的电荷转移反应来进行定量分析。通过将盐酸克伦特罗的溶液与铁离子等离子体反应，并将反应后的电荷表现为电流，以此来测定盐酸克伦特罗的浓度。
以上为盐酸克伦特罗的三种常见的检测分析方法。这些方法均已经得到广泛的验证和应用，可以为药品的生产和研究提供准确、可靠的数据基础。
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展
盐酸克伦特罗是一种临床常用的药物，常用于治疗心血管疾病和高血压。克伦特罗也被用于研究细胞的信号传导途径。为了定量检测盐酸克伦特罗的含量，需要建立可靠的分析方法。本文将综述盐酸克伦特罗检测方法的研究进展。
盐酸克伦特罗的检测方法主要包括物理化学方法和生物化学方法两大类。物理化学方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等；生物化学方法主要包括酶联免疫吸附法、免疫荧光法、生物传感器等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的分析方法之一。该方法具有分离能力强、分析速度快、检测灵敏度高等优点。HPLC检测盐酸克伦特罗的条件包括流动相的选择、柱温的控制、流速和检测波长等参数的优化。近年来，研究者通过改进色谱柱材料和液相色谱柱填料，进一步提高了方法的分离能力和分析速度。
毛细管电泳法（CE）是一种电分离技术，其分离效率取决于使用的毛细管和电场强度。CE检测盐酸克伦特罗的关键是控制pH值和缓冲液浓度，以增强样品的分离效果。研究人员还通过改进偏析电泳、等温电泳等技术，提高了方法的分离效率和检测灵敏度。
酶联免疫吸附法（ELISA）是一种高度选择性和灵敏度的生物化学方法。通过将特异性抗体固定在酶标板上，可以与盐酸克伦特罗结合并形成可检测的复合物。ELISA检测盐酸克伦特罗的关键是选择适当的抗体和酶，以及优化反应条件。近年来，研究人员采用改进的ELISA技术，如发光ELISA和荧光ELISA，提高了方法的检测灵敏度和准确性。
生物传感器是一种新兴的生物化学方法，可以直接测量盐酸克伦特罗与生物分子的相互作用过程。生物传感器检测盐酸克伦特罗的关键是选择合适的生物分子，如酶、抗体或DNA探针，以及优化传感器的构建和检测条件。研究者近年来发展了多种类型的生物传感器，如电化学传感器、光学传感器和电子传感器。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定—气质联用技术
2 液质联用法检测瘦肉精
2.2实验方法与主要步骤
2.2.3主要步骤
2. 净化 （1）首先活化MCX固相萃取柱 ，具体操作方法为向MCX柱中依次 加入3ml甲醇，3ml水， 3ml 0.1mol/l 盐酸 ，注意需要等甲醇完全过柱后加水，水完全过柱后加盐酸。 （2）上样：将离心所得上清液过柱。 （3）淋洗 ：先加3ml 0.1mol/L 盐酸，再加3ml水，然后加3ml甲醇水（1:1），注意， 淋洗的顺序和活化固相萃取柱时所加试剂的顺序完全相反，也是依次完全过柱。 （4）洗脱：用6ml(乙酸乙酯＋甲醇＋氨水)混合液 洗脱（10：9：10）。
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.3主要步骤
（5）浓缩--用氮吹仪吹干样液，吹到似干非干干为止； （6）用1ml 0.1 甲酸/水—甲醇定容； （7）超声后放沃悬器沃悬30s-1min； （8）用注射器吸需要样液，经0.22微米滤膜除杂，转入进样瓶 3.液相色谱串联质谱测定
2.1原理
试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节pH值，沉淀蛋白后离心， 上清液用异丙醇-乙酸乙酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱串联质谱法测定，内标法定量。
2 液质联用法检测瘦肉精
2.2实验方法与主要步骤
2.2.1主要试剂 甲醇（液相色谱纯） 乙酸钠 高氯酸 氨水甲醇溶液 标准储备溶液； 混合标准储备溶液； 同位素内标物:克仑特罗-D9， 沙丁胺醇-D3，纯度大于98%等
酶联免疫吸附法（ELISA）检测猪肉中盐酸克伦特罗
B
B 0
×100%百分吸光度值（%）=酶联免疫吸附法（ELISA ）
检测猪肉中盐酸克伦特罗
薛金英
（山东省诸城市畜牧兽医管理局山东诸城262200）
盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精）为一种人工合成的β-肾上腺素兴奋剂，具有扩张支气管的作用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。当其应用量达到治疗量的5～10倍时，其有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此俗称为“瘦肉精”。在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种和生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质，同时也造成食品中盐酸克伦特罗（瘦肉精）的残留。当人们食用盐酸克伦特罗残留的产品后会出现一系列的中毒症状。动物源性食品药物残留问题逐渐引起人们的重视。本法用于定量、定性检测猪肉中盐酸克伦特罗的残留。1试验原理采用间接竞争ELISA 法，在微孔板上包被抗盐酸克伦特罗检测抗原，样品中的盐酸克伦特罗将和酶标板上的盐酸克伦特罗检测抗原竞争结合盐酸克伦特罗抗体，盐酸克伦特罗检测抗原结合的盐酸克伦特罗抗体再与同时加入的酶标二抗结合，洗涤后，用TMB 底物系统显色，微孔板吸光值与样品中盐酸克伦特罗含量成负相关，与标准曲线比较再乘以浓度比值即可得出盐酸克伦特罗在样品的实际含量。
2试验方法（稀释倍数为4倍）称取1.0g （±0.05g ）均质样品于50mL 聚苯乙烯离心管中，加入1mL 0.1M 盐酸，再加入2mL 提取工作液，充分振荡混匀5min ，4000rpm （20～25℃）离心10min 。取1mL 上清液加入约25μL 1M 氢氧化钠调节pH 至6.5～7.5之间，充分振荡混匀，取50μL 用于分析。如果上层中存在白色脂肪层，取样时应避开。试剂准备：将10×浓缩洗涤液和蒸馏水（或去离子水）按1∶9充分混匀，即为1×洗涤液。编号：将盐酸克伦特罗标准溶液和待测样品对应微孔按序编号，建议每个标准溶液和待测样品均做重复孔。
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展
盐酸克伦特罗是一种重要的药物原料，广泛应用于医药、化工、农药等领域。其质量的检测是非常重要的，因为不良的质量可能会导致产品的安全性和有效性问题。随着科学技术的发展，盐酸克伦特罗检测方法也在不断地得到改进和完善。本文将对盐酸克伦特罗检测方法的研究进展进行介绍和总结。
一、传统的盐酸克伦特罗检测方法
传统的盐酸克伦特罗检测方法主要包括物理性质检测法和化学性质检测法。物理性质检测法包括外观和溶解度测定，这在一定程度上可以反映出盐酸克伦特罗的纯度和结晶形态。而化学性质检测法则主要包括红外光谱法和紫外分光光度法，通过研究其在特定波长下的吸光度和吸收峰的变化来进行分析。
传统的检测方法虽然简单、便捷，但往往存在着准确性不高、重现性差、专业设备要求高等问题。需要不断地对盐酸克伦特罗检测方法进行改进和优化。
二、近年来的盐酸克伦特罗检测方法研究进展
1. 色谱法
色谱法是一种常用的化学分析方法，可以对物质进行快速、高效的分离和检测。近年来，人们在盐酸克伦特罗的检测方法中，引入了高效液相色谱法和气相色谱法。这些方法具有分离效果好、准确性高等特点，能够更加准确地检测盐酸克伦特罗的含量和纯度。
2. 质谱法
质谱法是一种能够测定物质分子量、结构和组成的分析方法，近年来被广泛应用于盐酸克伦特罗的检测中。包括质子磁共振质谱法、质子谱法和质子化学位移谱等不同的质谱方法，能够对盐酸克伦特罗的结构和组成进行精确的分析和测定。
3. 生物传感技术
生物传感技术是一种将生物学和传感技术相结合的新兴技术，近年来也得到了在盐酸克伦特罗检测中的应用。通过改变生物材料的电化学特性，来检测盐酸克伦特罗的含量和纯度。这种方法具有快速、灵敏度高、成本低等优点，成为了盐酸克伦特罗检测领域的新热点。
酶联免疫吸附法检测瘦肉精
酶联免疫吸附法检测瘦肉精
摘要:介绍了竞争酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的方法。利用盐酸克伦特罗试剂盒,对猪肉组织中残留的盐酸克伦特罗经抽提、竞争后,用酶标仪进行检测分析。此法较适用于现场检验,检测速度快、灵敏度高,是保证肉品卫生安全的较好监控方法。
酶联免疫吸附法是目前最佳的检测方法。ELISA 检测方法有双抗体夹心法测抗原、间接法测抗体、竞争法测抗体等。该文是利用酶联免疫吸附法中的竞争法测抗体,其原理是利用多克隆抗体既能与盐酸克伦特罗结合,也能与包被抗原结合。这些包被抗原被固定在酶标板孔壁上,当样品中含有瘦肉精时,它与包被抗原竞争结合抗体中有限量的结合位点。由于每一个孔中抗体的结合位点数相同,当样品中瘦肉精浓度低时,就有更多抗体的位点与包被抗原结合,更多的抗体被固定在酶标板壁上,就会与更多的酶标二抗结合,所以结果就呈现深兰色。相反,样品的瘦肉精浓度高,结果就呈现浅兰色。加入终止液后,兰色相应变成黄色,然后用酶标仪进行测定。利用竞争酶联免疫吸附法检测瘦肉精,具有速度快,灵敏度高的特点,适用于现场检测,对以后瘦肉精检测工作的发展具有指导作用。
1 实验材料与方法
1.1 原料的准备
抽取具有一定批量的有代表性的无皮猪肉,剔除杂质、脂肪。
将精肉用高速捣碎机捣碎混合均匀,放置冰箱冷冻备用。取捣碎的样品5g ,加入25mL ,50mmolHCl 振动1.5h ,以达到均质。称取5g均质物(相当于1g 肝脏或肌肉),加入离心管中,10000r/min 离心15min。取上清液至另一个离心管中, 加1mol NaOH 300ul , 混合15min。加入4mL ,500mmol KH2PO4 (pH3.0),迅速混匀置于4摄氏度的冰箱内保存至少1.5h。10000 r/min 离心15min ,分离上清液。
盐酸克伦特罗 检测方法
盐酸克伦特罗检测方法
盐酸克伦特罗是一种常用的抗抑郁药物，在临床上应用广泛。为了确保其药效和安全性，需要对其进行检测。
目前常用的盐酸克伦特罗检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。其中，高效液相色谱法是最常用的方法之一，其优点是操作简单、准确性高、重现性好，可以同时检测多种成分。气相色谱法则可以提高检测的灵敏度和选择性，但对样品的纯度要求较高。质谱法则可以快速确定化合物的结构和含量，但设备和技术门槛较高。
在进行盐酸克伦特罗检测时，需要注意样品的制备、选取合适的检测方法和仪器，以及严格控制实验条件和质量控制。同时，还需要根据药物的特性和使用情况，结合临床数据进行分析和解释，确保检测结果的准确性和可靠性。
总之，盐酸克伦特罗的检测方法是一个复杂的过程，需要综合考虑多种因素并采用有效的措施来确保检测结果的准确性和可靠性。
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盐酸克伦特罗检测方法的研究进展获奖科研报告论文
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展获奖科研报告论文摘要：近年来，食品安全受到社会高度重视，盐酸克伦特罗在临床上用于支气管扩张，可用于临床哮喘治疗，支气管炎症治疗等，属于肾上腺素兴奋剂。在动物饲料中加入该物质能够提高瘦肉率，因此很多不法商家利用该物质提高肉畜的品质，然而残留于动物体内的该物质会导致食用人群出现不同程度的中毒，甚至会出现中毒死亡。目前，国内外针对盐酸克伦特罗的含量研究，包括高效液相色谱法，气质联用，气相色谱法，酶联免疫测定法等多种方法。在本次研究中我们针对近几年常用的检测方法对该物质进行方法检测研究。
关键字：盐酸克伦特罗;检测;方法;进展
近年来，随着社会经济建设的发展使得畜牧业也得到了相应的发展，在生产过程中由于非法添加药物而导致兽药残留问题严重，而兽药残留会严重危害到人们的身体健康，因此人们高度重视食品安全问题。在畜牧业中过量使用盐酸克伦特罗能够提高饲料转化率、提高瘦肉率，但该物质属于兴奋类药物，如果长期服用该药物可能会使人体出现头晕、四肢麻木、恶心等症状，甚至危及生命。因此，我国明文规定畜牧业养殖不允许采用此物质，但很多商家为牟取非法利益，过量使用该物质导致消费者出现中毒的现象，因此有必要针对盐酸克伦特罗的残留量进行检测分析，在本次研究中我们
针对几种检测方法进行比较，能够对今后发展进行展望。
一、盐酸克伦特罗性质分析
首先该物质是属于肾上腺素的激动剂，也被称为是瘦肉精。从药学上认为是双氯醇胺，分子量為313.65，在常温状态下是白色或微黄色的粉末状结构，无臭，味苦，极易溶于水、乙醇、甲醇、微溶于丙酮、氯仿、不溶于苯。其化学性质活泼，可通过多种化学反应形成化合物。
盐酸克伦特罗的免疫检测技术
新疆农业大学
专业文献综述
题目: 肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术姓名: 郑峰
学院: 食品科学与药学学院
专业: 食品科学
班级: 2013级研究生
学号: 1340020279
成绩：
指导教师: 王子荣职称: 教授
200 年4月24日
新疆农业大学教务处制
肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术
郑峰指导老师：王子荣教授
摘要：本文介绍了盐酸克伦特罗的理化特性和生理作用，分析了它在肉制品中残留对人体造成的危害，同时综述了肉品中残留盐酸克伦特罗的胶体金免疫检测技术和酶联免疫检测技术的原理和操作要点，分析了两种免疫检测技术的特点，总结了两种免疫检测技术的技术优势并提出自己的观点。
关键词：盐酸克伦特罗；生理；胶体金检测；酶联免疫
The detection of Clenbuterol hydrochloride residues Absttact:This paper describes the effects in physiology of the clenbuterol hydrochloride remained in meat products,and analyzes the harms which caused by the residues in meat; The artical also summarizes the characteristics of technology principles with gold and enzyme-linked immunoassay to analyze the residues in meat and the operation points in immunoassay technique,contrasting the two immunoassay techniques.Finally the advantages of both immunoassay techniques were summarized and views were put forward on.
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定—酶联免疫快速测定法
2 酶联免疫法检测瘦肉精 2.2.1酶联免疫法（ELISA) )实验方法与步骤
(4)结果计算
2 酶联免疫法检测瘦肉精
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.004ng～0.054ng
2 酶联免疫法检测瘦肉精
2 酶联免疫法检测瘦肉精
2.2.1酶联免疫法（ELISA) )实验方法与步骤
(3)测定 ① 提取肌肉、肝脏及肾脏试样 ② 准备竞争酶标记物、克伦特罗抗体、包被有抗抗体的微孔板条试样；
准备试样：提取物取20ul进行分析。高残留的试样用蒸馏水进一步稀释。
测定：详细过程参考实训指导书或国标GB-T5009.192-2003。
酶联免疫法测定激素（盐酸克伦 特罗、莱克多巴胺）-初筛
目录页
检测依据 酶联免疫法检测瘦肉精
1 检测依据
检测标准： GB-T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的
测定第三法酶联免疫ห้องสมุดไป่ตู้（ELISA筛选法）
2 酶联免疫法检测瘦肉精
2.1酶联免疫法（ELISA)原理
基于抗原抗体反应进行竞争性抑制测定。微孔板包被有针对克仑特罗IgG的包被抗体。 克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标记物、标准或试样溶液。 克仑特罗与竞争性标记物竞争克仑特罗抗体，没有与抗体连接的克伦特罗标记酶在洗涤步 骤中被除去。将底物（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中孵育，结合的 标记酶将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。在 450nm处测量吸光度值，吸光度比值与克伦特罗浓度的自然对数成反比。
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗的检测方法
科技信息职教与成教
盐酸克伦特骂硇楦测方法
河南科技大学林业职业学院刘荣森
[摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱
法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向.
[关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展
中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥
用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称:
Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯
苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式:
]}H31.
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盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减
少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该
药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦
特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉
精已成为重大的食品安全问题.
中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情
况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒
事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在
检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速,
方便,精确的检测方法.
检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高
效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法
盐酸克伦特罗快速检测方法的研究进展
盐酸克伦特罗快速检测方法的研究进展
程 政
（河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳４７１０００）
中图分类号：Ｓ８１６．７９ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００５－７３０７（２０２３）０４－００１１－００４
盐酸克伦特罗（ＣＬＢ）作为一种β受体激动剂类药物，多用于临床，又因其具有促进畜禽生长、提高畜禽瘦肉率等作用而用于畜禽养殖。人食用后易造成心悸、心慌、胸闷、心律失常等并发症，因此国内外多数国家已严禁使用，我国也明令禁止在饲料中添加。
盐酸克伦特罗作为一种能在短期内迅速提升畜禽瘦肉率的肾上腺素类药物，其有效快速的检测手段一直被学者广为研究。吕睿研究出利用混合铱／硅纳米线基质，可将质谱信号提高１０倍，灵敏检测克伦特罗和其他小分子。刘文光建立了包括克伦特罗在内的１６种β 受体激动剂类药物在猪、牛、羊毛发及尿液中的超高效液相色谱串联质谱的多残留检测方法。周珊珊通过ＥＬＩＳＡ方法检测猪尿中克伦特罗残留量，分析此方法定性检出限为０．１４７μｇ／Ｌ，定量检出限为０．４９０μｇ／Ｌ。马璐瑶开发了一种基于微流纸的酶联免疫吸附测定牛奶中的盐酸克伦特罗含量，检测极限为０．２μｇ／Ｌ。张雪娇则研究了山羊体内盐酸克伦特罗的检测靶标，结果表明肝脏和尿液更为适合作残留检测靶标。而近期更有研究发现使用硼碳氧氮化物（ＢＣＮＯ）纳米片作为传感介质用于电化学检测猪血清和药片中盐酸克伦特罗有良好的稳定性和分析性，该传感器有１７ｎｇ的低检测限，为盐酸克伦特罗的检测提供了新策略。结合近年来相关的快速检测方法，如色谱法、传感器分析法、免疫分析法为盐酸克伦特罗新型检测技术提供新的思路和参考，将检测条件优化、检测效率提高，为食品及其他类别中盐酸克伦特罗残留量做出更精准的测定。
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新疆农业大学
专业文献综述
题目: 肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术姓名: 郑峰
学院: 食品科学与药学学院
专业: 食品科学
班级: 2013级研究生
学号: 1340020279
成绩：
指导教师: 王子荣职称: 教授
200 年4月24日
新疆农业大学教务处制
肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术
郑峰指导老师：王子荣教授
摘要：本文介绍了盐酸克伦特罗的理化特性和生理作用，分析了它在肉制品中残留对人体造成的危害，同时综述了肉品中残留盐酸克伦特罗的胶体金免疫检测技术和酶联免疫检测技术的原理和操作要点，分析了两种免疫检测技术的特点，总结了两种免疫检测技术的技术优势并提出自己的观点。
关键词：盐酸克伦特罗；生理；胶体金检测；酶联免疫
The detection of Clenbuterol hydrochloride residues Absttact:This paper describes the effects in physiology of the clenbuterol hydrochloride remained in meat products,and analyzes the harms which caused by the residues in meat; The artical also summarizes the characteristics of technology principles with gold and enzyme-linked immunoassay to analyze the residues in meat and the operation points in immunoassay technique,contrasting the two immunoassay techniques.Finally the advantages of both immunoassay techniques were summarized and views were put forward on.
Key words:Clenbuterol;DIGFA;ELISA
目前食品安全问题已经成为国内最为关注的问题，其关系到每个人的将抗发展。畜产品在人类饮食结构中占有重要的地位，如何确保畜产品的安全是目前急需解决的问题。市面上畜肉产品的安全卫生主要由两方面因素决定，即宰前因素和宰后因素，宰前因素主要是由动物的养殖方式和病害控制对肉品质产生的影响；宰后因素主要表现在宰后检验、运输、加工、包装等方面。随着一系列由饲料问题引起的肉品安全问题的发生（二噁英、疯牛病、苏丹红和瘦肉精），人们渐渐认识到饲料安全在保障畜产品安全中的重要性。饲料安全性关系到畜产品的质量与人类的健康。
盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride，CL）俗称瘦肉精是国家违禁药物中的一种[1]。盐酸克伦特罗是一种β-肾上腺素受体激动剂，曾作为药物用于治
疗人的呼吸系统疾病（哮喘等），1984年被发现其具有提高动物胴体瘦肉率的效果，所以CL被违规添加到动物饲料中，尤其在猪的养殖中。饲料中添加CL喂养畜禽会导致其在动物组织中残留蓄积，食用此类的肉制品会引起急性或慢性的中毒反应[2]。因此，世界上许多国家都禁止在畜禽的饲养中使用CL，中国农业部1997年发文禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用，商务部自2009年12月9日起，禁止进出口盐酸克伦特罗，2001年12月27日—4月9日，农业部分别下发文件禁止使用β-激动剂类药物作为饲料添加剂[1]。但是受到利益的驱使，CL 的滥用现象仍屡禁不止。2011年3月15日河南“瘦肉精”案件被央视曝光，不仅使公众持续高度关注，也暴露出监管中出现的问题。
1 盐酸克伦特罗的理化特性及作用机理
2.1 盐酸克伦特罗的理化特性
盐酸克伦特罗(Clenbuterol，CL)，俗名瘦肉精，是β2-肾上腺素受体激动剂的一种[3]，呈白色结晶状，略苦，易溶于水、甲醇、乙醇等溶剂，不易溶于氯仿，其化学性质比较稳定，超高温度下才能发生缓慢分解现象。研究表明，含有CL 的畜禽产品经100℃沸水煮过后，所含该药的残留物基本不变。动物食用后在消化吸收系统内迅速吸收，20min内起效，2.5h后血液浓度达到峰值，其作用时间长达5h，消除半衰期时间较长，一个半衰期大约一天，其主要残留在动物眼睛、毛发和内脏中，其中动物肝脏中残留最多[4]。在CL的应用数年内国际上发生多起食用残留CL肉制品的中毒事件，人们逐渐注意到CL的毒副作用。
1.2 CL的作用机理
CL作为一种β2-受体激动剂，起到拟交感神经的作用。最初，它作为治疗疾病的药剂被使用，医学研究表明其可用于治疗支气管炎、哮喘性慢性支气管炎以及呼吸系统疾病所导致的支气管痉挛[4]。这是由于其具有松弛支气管肌肉的作用，明显增加支气管纤毛运动促进粘液溶解，有利于病人痰液的顺利排出。
其生化机理表现在CL首先能促使细胞内环状腺苷酸(cAMP)的合成，激活cAMP参与的蛋白激酶，被激活的激酶在细胞脂肪组织内可以抑制乙酰辅酶A、羟化酶和甘油三酯合成酶的活性，提高了脂肪分解酶的活性，参与调节三羧酸循环，加快脂肪的分解[5]。CL在动物饲养中提高了动物胴体品质，使瘦肉率增加12%左右，骨骼肌内脂肪降低10%左右。另一方面，CL可以降低动物血液中的Mg+的浓度提高肌肉的兴奋度，并改变细胞膜的通透性，抑制脂肪的合成和蛋白
质的分解，从而使大量的氮转化为蛋白质（瘦肉）。其作用图如下：
克伦特罗
↓
受体→修饰受体
↓
腺苷酸环化酶（无活性）→腺甘酸环化酶（无活性）蛋白质激酶（无活性）
↓ ↓
ATP → cAMP → 蛋白质激酶（有活性）
激素敏感酯酶（无活性）→↓
激素敏感酯酶（有活性）
甘油三酯→↓
脂肪酸+甘油[5]
2 盐酸克伦特罗的危害
少量的盐酸克伦特罗可以用于治疗呼吸道疾病，大量使用CL对动物有害，如果动物饲料中含有CL，动物会表现为：血管急剧扩张、心率加快、呼吸速度加快、体温的上升、心脏和肾脏负担加重等反应，长期将其喂食动物会大量减少机体内受体数量，对CL敏感性降低，导致动物自身体内促肌肉生长激素减少从而自生生长效应逐渐丧失[6]。
人食用了含有CL残留的肉制品会出现类似于动物甚至比动物更严重的症状，人类使用超过标准的肉后会出现急性中毒症状发生头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等一系列不良反应。血液检查可见白细胞增多、血钾偏低、血液中丙酮酸含量升高。长期食用含有盐酸克伦特罗的肉和内脏会引起人体心血管系统和神经系统的疾病，降低血管壁弹性、血管周围的神经被扩张的血管压迫产生心肌收缩加强、心跳加快、呼吸加剧等不良反应，严重了还能引起机体代谢紊乱。
研究表明，盐酸克伦特罗能使大鼠SOD活性显著降低，MDA含量明显升高，使大鼠胸腺和脾脏发生一系列的病理损伤，说明该物质能破坏动物的免疫器官，对动物机体有较大的危害[7]。
3免疫分析技术在检测肉品中残留盐酸克伦特罗的应用