Fe2+对雄性泥鳅生殖毒性的研究

Fe2+对雄性泥鳅生殖毒性的研究摘要：以泥鳅（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓａｎｇｕｉｌｌｉｃａｕｄａｔｕｓ）精子为受试材料，应用计算机辅助精子分析（ＣＡＳＡ）系统，研究了亚铁离子（Ｆｅ２＋）对雄性泥鳅的生殖毒性。

在预实验的基础上，设置３０、６０和３００μｍｏｌ／Ｌ３个Ｆｅ２＋浓度梯度。

泥鳅精子暴露０、０．５、１.0、２.0和４.0 ｈ后激活，测定运动百分数、时间和速度等精子运动参数。

结果表明，６０ｍｏｌ／Ｌ的Ｆｅ２＋溶液明显影响泥鳅的精子运动时间和相对速度（Ｐ＜０．０５）。

高浓度的Ｆｅ２＋能够抑制泥鳅精子运动，对泥鳅具有潜在生殖毒性作用。

关键词：亚铁离子（Ｆｅ２＋）；泥鳅；精子运动；生殖毒性Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆＦｅ２＋ｏｎｔｈｅｓｐｅｒｍｏｆｌｏａｃｈ（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓａｎｇｕｉｌｌｉｃａｕｄａｔｕｓ）ｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｂｙａCｏｍｐｕｔｅｒ－AｓｓｉｓｔｅｄSｅｍｅｎAｎａｌｙｚｅｒ（ＣＡＳＡ）．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅｌｏａｃｈｓｐｅｒｍｗａｓｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＦｅ２＋（３０，６０，ａｎｄ３００μｍｏｌ／Ｌ）ｆｏｒ０，０．５，１.0，２.0 ａｎｄ４.0 ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ，ｄｕｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｖｅｌｏｃｉｔｙｏｆｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｓａｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｉｒｏｎｉｏｎｏｆｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｕｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｌａｔｉｖｅｖｅｌｏｃｉｔｙｒｅｄｕｃｅｄsignificantly ａｔ６０ｍｏｌ／ＬｏｆＦｅ２＋（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｆｅｒｒｏｕｓｉｏｎｓｗｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄａｍａｇｅｔｈｅｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｌｏａｃｈ，ａｎｄｍｉｇｈｔｈａｖｅｈａｒｍｆｕｌｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｌｏａｃｈｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｅｒｒｏｕｓｉｏｎ；ｌｏａｃｈ；ｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙ；ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｏｘｉｃｉｔｙ铁是动物体内必需的微量元素，是血红素、细胞色素的重要组成部分，可参与多种生命活动过程，机体内的铁代谢平衡是保证生命活动正常进行的基础［１］。

随着现代化进程的加快，铁矿业的膨胀和工业废水排放的增加，水环境中铁离子浓度呈升高趋势［２］。

水环境中铁浓度的升高已对生物的生存及生物多样性产生了严重影响，对敏感物种的危害更大［３］。

对生活在污染水体中的淡水鱼而言，成熟配子排入水中后，直接与水环境中的污染物接触，首先使配子受到伤害，进而降低受精率和孵化率，还会对幼体发育产生重大影响。

近年来，以动物的精子为靶细胞，通过计算机辅助精子分析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ－ＡｓｓｉｓｔｅｄＳｅｍｅｎＡｎａｌｙｚｅｒ，ＣＡＳＡ），对水体中的多种重金属的毒性进行了研究，发现汞、锡、铅、镉和铝等重金属均能诱导精子细胞发生过氧化反应、降低精子活力和受精率，并影响子代的正常发育［４－１０］。

到目前为止，人们更多关注铁离子对哺乳动物和人类生殖毒性的研究［１１，１２］，尚未见对淡水鱼精子细胞毒性的报道。

我们首次应用ＣＡＳＡ技术来研究不同Fe2+浓度处理对泥鳅（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓａｎｇｕｉｌｌｉｃａｕｄａｔｕｓ）精子运动参数的影响，为进一步了解Fe2+对淡水硬骨鱼的生殖毒性作用及对水生态环境的影响提供理论依据。

１材料与方法１．１实验材料实验用泥鳅购于聊城市交运大市场，运回实验室后，先在１０ｍｇ／Ｌ的ＫＭｎＯ４溶液中浸泡１０min杀菌消毒，在玻璃缸（６０ｃｍ×２５ｃｍ×３５ｃｍ）内饲养两周后用于实验。

实验用水为曝气３ｄ以上的自来水，连续充气，每天换约１／５体积的水。

１．２试剂与仪器实验用硫酸亚铁（ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ）、氯化钾（ＫＣｌ）和氯化钠（ＮａＣｌ）等化学试剂均为分析纯，购买于南京南奥科技有限公司。

实验参照Ｍáｒｒｉáｎ等［１３］的方法并加以改进，用双蒸水配制精子保存液和激活液母液。

精子保存液母液含１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ、１０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ、１ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２和１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ６．５），渗透压为３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ。

精子激活液母液含６０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ、１０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ、１ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２和１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ６．５），渗透压为１５０ｍＯｓｍ／ｋｇ。

分别用保存液和激活液母液配制Ｆｅ２＋终浓度为３０、６０和３００μｍｏｌ／Ｌ的保存液和激活液。

１．３精子的收集与处理取健康的性成熟泥鳅，先在清水中冲洗，然后用吸水纸吸去鱼体表面的水。

称重和测体长后，解剖取精巢。

实验用鱼的平均体重是（８．６２±０．５４）ｇ，平均体长为（１２．８８±０．４４）ｃｍ，精巢平均重量（０．０６３２±０．００２８）ｇ。

按１∶１０（Ｗ∶Ｖ，g∶mL）将精巢放在保存液中，用眼科剪剪碎，让精液溢出，然后离心１ｍｉｎ（２００ｒ／ｍｉｎ），弃去组织碎块加入少量保存液、计数，制成精子悬液（密度约为１０７个／ｍＬ）。

按实验设计暴露０、０．５、１.0、２.0和４.0 ｈ后检测精子运动参数。

１．４精子运动参数检测分别取５μＬ精子悬液，置于干净载玻片上，迅速用４５μＬ相应浓度的铁离子激活液混合，混合１０ｓ后，精子已被充分激活。

在光学显微镜（ＯｌｙｍｐｕｓＩＸ８１，Ｊａｐａｎ）下观察（×４００）和记录精子运动参数。

①精子运动时间：从激活开始，到精子运动百分数减少到２０％时所用的时间；②精子运动百分数：同一视野中，运动精子数与全体精子总数的百分比；③精子运动速度：精子细胞位移与时间比；④相对平均速度：不同浓度处理的精子运动速度与对照组精子速度的比。

精子激活后每隔１ｍｉｎ记录一次运动百分数，并拍摄。

每组实验至少重复３次，每次随机选择３个视野，在对照组中，最大精子运动百分数低于９０％的精子悬液样本，不作记录。

１．５统计分析所得数据以平均值±标准差表示，用Ｅｘｃｅｌ和ＳＰＳＳ１３．０统计软件进行分析，采用ｔ检验进行差异显著性检验，显著差异水平为Ｐ＜０．０５。

２结果２．１不同Ｆｅ２＋浓度对泥鳅精子运动百分数的影响在对照组中，精子运动百分数是９５％，暴露２.0和４.0 ｈ后激活，精子运动百分数分别是９５％和９０％。

在６０μｍｏｌ／Ｌ的Ｆｅ２＋溶液中暴露１.0、２.0和４.0 ｈ后激活，泥鳅精子的运动百分数分别为９２％、９０％和８６％；在３００μｍｏｌ／Ｌ的Ｆｅ２＋溶液中激活，运动百分数是９１％，暴露０．５、１.0、２.0和４.0 ｈ后激活，运动百分数分别变为９０％、８６％、８５％和６５％。

由图１知，Ｆｅ２＋对泥鳅精子运动百分数影响较小，仅在高浓度组（３００μｍｏｌ／Ｌ）出现显著差异；随暴露时间的延长，精子运动百分数在４.0 ｈ（６０μｍｏｌ／Ｌ暴露组）时出现明显降低。

２．２不同Ｆｅ２＋浓度对泥鳅精子运动时间的影响在对照组中，泥鳅精子运动时间为３３０ｓ；暴露０．５、１.0、２.0和４.0 ｈ后激活，精子运动时间分别为３６０、３２５、３１８和２９５ｓ。

在３０μｍｏｌ／ＬＦｅ２＋溶液中的运动时间是３１６ｓ，暴露０．５、１.0、２.0和４.0 ｈ后激活，分别是３０８、２８５、２８０和２７０ｓ。

在６０μｍｏｌ／ＬＦｅ２＋的溶液中的运动时间是２７０ｓ，暴露０．５、１.0、２.0和４.0 ｈ后激活，分别是２７５、２６５、２４０和２５８ｓ。

在３００μｍｏｌ／ＬＦｅ２＋的溶液中的运动时间是２５５ｓ，暴露０．５、１.0、２.0和４.0 ｈ后激活，分别是２５９、２３３、２３８和１８５ｓ。

由图２可知，随暴露浓度的升高，泥鳅精子运动时间呈缩短趋势，并随暴露时间的延长而缩短。

２．３不同Ｆｅ２＋浓度对泥鳅精子运动相对速度的影响由图３可知，在所有暴露时间中，６０和３００μｍｏｌ／Ｌ的Ｆｅ２＋明显降低了泥鳅精子的相对速度，并随着暴露浓度的增高而显著降低；而３０μｍｏｌ／ＬＦｅ２＋仅在暴露４.0 ｈ后对相对速度影响明显。

在２.0 ｈ的暴露时间内，所有实验组泥鳅精子的相对速度没有发生明显变化；但当暴露时间延长到４.0 ｈ时，经Ｆｅ２＋暴露的所有泥鳅精子的相对速度显著降低。

３讨论一般认为，重金属对动物的毒性作用与细胞质膜过氧化有关。

机体内的铁主要以化合物的形式存在，当体内游离的铁过量时，会通过Ｆｅｎｔｏｎ反应产生氧自由基［１４，１５］，过量的自由基不仅会损伤蛋白质、脂质和ＤＮＡ等生物大分子［１６，１７］，还对线粒体进行攻击。

在本研究中，６０μｍｏｌ／Ｌ及以上浓度的Ｆｅ２＋溶液明显影响了泥鳅精子的运动时间和速度。

精子运动速度和持续时间的长短，是影响受精率的重要参数。

可见，Ｆｅ２＋对泥鳅精子具有生殖毒性。

暴露时间较短时，低浓度组精子各运动参数的变化较小，４.0 ｈ后精子运动能力才明显降低。

可见在短时间内，低浓度Ｆｅ２＋的毒性是较弱的。

在暴露０．５ｈ时，泥鳅精子表现出最强的活力，其产生原因及对受精和发育的影响有待进一步研究。

《煤炭工业污染物的排放标准》中对铁的要求是低于１２５μｍｏｌ／Ｌ（７ｍｇ／Ｌ），高于我们研究中显著影响精子运动能力的浓度。

工业废水在没有经过进一步处理直接排入河流和湖泊时，处于排放口附近的鱼类的生殖和发育很可能会受到严重的影响。

近期，刘时东［１８］对河南某矿井调查时发现，当地矿井排放的废水中铁离子浓度严重超标（达１１６００μｍｏｌ／Ｌ），已使湄水河受到严重污染。

总之，过量的Ｆｅ２＋能降低泥鳅精子的运动能力，对泥鳅的生殖具有潜在的毒性作用。

因此，Ｆｅ２＋对水环境的污染和其潜在的生殖毒性需要引起人们足够重视和关注，其对淡水硬骨鱼精子细胞的毒性作用机制更需深入研究。

参考文献：［１］ＯＥＸＬＥＨ，ＧＮＡＩＧＥＲＥ，ＷＥＩＳＳＧ．Ｉｒｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｃｈａｎｇｅｓｉｎｃｅｌｌｕｌａｒｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Iｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｃｉｔｒｉｃａｃｉｄｃｙｃｌｅｏｘｉｄａｔｉｖｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ，１９９９，１４１（３）：９９-１０７．［２］ＡＨＴＩＡＩＮＥＮＭ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｆｏｒｅｓｔｃｌｅａｒ－ｃｕｔｔｉｎｇａｎｄｓｃａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｗａｔｅｒｑｕａｌｉｔｙｏｆｓｍａｌｌｂｒｏｏｋｓ［Ｊ］．Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ，１９９２，２４３／２４４：４６５-４７３．［３］ＳＯＵＣＥＫＤＪ，ＣＨＥＲＲＹＤＳ，ＺＩＰＰＥＲＣＥ．Ａｌｕｍｉｎｕｍ－ｄｏｍｉｎａｔｅｄａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙｔｏｔｈｅｃｌａｄｏｃｅｒａｎＣｅｒｉｏｄａｐｈｎｉａｄｕｂｉａｉｎｎｅｕｔｒａｌｗａｔｅｒｓｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｏｆａｎａｃｉｄｍｉｎｅｄｒａｉｎａｇｅｄｉｓｃｈａｒｇｅ［Ｊ］．ＣａｎａｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｉｓｈｅｒｉｅｓａｎｄＡｑｕａｔｉｃＳｃｉｅｎｃｅｓ，２００１，５８（１２）：２３９６-２４０４．［４］ＹＯＵＳＥＦＭＩ，ＫＡＭＥＬＫＩ，ＧＵＥＮＤＩＭＩＥ，ｅｔａｌ．Ａｎｉｎｖｉｔｒｏｓｔｕｄｙｏｎｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆａｌｕｍｉｎｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｏｎｒａｂｂｉｔｓｐｅｒｍ：Ｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｒｏｌｅｏｆｓｏｍｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００７，２３９（３）：２１３-２２３．［５］ＫＡＳＰＥＲＣＺＹＫＡ，ＫＡＳＰＥＲＣＺＹＫＳ，ＨＯＲＡＫＳ，ｅｔａｌ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｓｅｍｅｎｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎａｍｏｎｇｌｅａｄｅｘｐｏｓｅｄｍｅｎ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００８，２２８（３）：３７８-３８４．［６］ＤＩＥＴＲＩＣＨＧＪ，ＤＩＥＴＲＩＣＨＭ，ＫＯＷＡＬＳＫＩＲＫ，ｅｔａｌ．Ｅｘｐｏｓｕｒｅｏｆｒａｉｎｂｏｗｔｒｏｕｔｍｉｌｔｔｏｍｅｒｃｕｒｙａｎｄｃａｄｍｉｕｍａｌｔｅｒｓｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙｐａｒａｍｅｔｅｒｓａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｓｕｃｃｅｓｓ［Ｊ］．ＡｑｕａｔｉｃＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１０，９７（４）：２７７-２８４．［７］ＧＲＺＹＢＫ，ＢＩＥＧＮＩＥＷＳＫＡＡ，ＳＫＯＲＫＯＷＳＫＩＥＦ，ｅｔａｌ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅｒｅｌｅａｓｅｆｒｏｍｈｅｒｒｉｎｇ（Ｃｌｕｐｅａｈａｒｅｎｇｕｓ）ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｒｉｂｕｔｙｌｔｉｎ［Ｊ］．ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＰａｒｔＣ：Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ＆Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００３，１３４（２）：２０７-２１３．［８］ＯＫＥＳＯＮＣＤ，ＲＩＬＥＹＭＲ，ＳＡＸＴＯＮＥＲ．Ｉｎｖｉｔｒｏａｌｖｅｏｌａｒｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｓｏｌｕｂｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆａｉｒｂｏｒｎｅｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｍａｔｔｅｒ：Eｆｆｅｃｔｓｏｆｓｅｒｕｍｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｍｅｔａｌｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙｉｎＶｉｔｒｏ，２００４，１８（５）：６７３-６８０．［９］ＲＯＤＧＨＥＲＳ，ＬＯＭＢＡＲＤＩＡＴ，ＭＥＬ?魨ＯＭＧ，ｅｔａｌ．ＣｈａｎｇｅｉｎｌｉｆｅｃｙｃｌｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓａｎｄｆｅｅｄｉｎｇｒａｔｅｏｆＣｅｒｉｏｄａｐｈｎｉａｓｉｌｖｅｓｔｒｉｉＤａｄａｙ（Ｃｒｕｓｔａｃｅａ，Ｃｌａｄｏｃｅｒａ）ｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｄｉｅｔａｒｙｃｏｐｐｅｒ［Ｊ］．Ｅｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００８，１７：８２６-８３３．［１０］ＭＥＥＫＥＲＪＤ，ＲＯＳＳＡＮＯＭＧ，ＰＲＯＴＡＳＢ，ｅｔａｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｍｅｔａｌｓａｎｄｍａｌｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｈｏｒｍｏｎｅｓ：Cｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅｉｓｉｎｖｅｒｓｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｂｌｏｏｄｍｏｌｙｂｄｅｎｕｍ［Ｊ］．ＦｅｒｔｉｌｉｔｙａｎｄＳｔｅｒｉｌｉｔｙ，２０１０，９３（１）：１３０-１４０．［１１］ＦＲＡＧＡＣＧ，ＬＵＣＥＳＯＬＩＦ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｔｅｓｔｅｓｏｆｒａｔｓｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｃｈｒｏｎｉｃｉｒｏｎｉｎｔｏｘｉｃａｔｉｏｎａｎｄɑ－ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９９９，１３２（２，３）：１７９-１８６．［１２］ＨＵＡＮＧＹＬ，ＴＳＥＮＧＷＣ，ＬＩＮＴＨ．Ｉｎｖｉｔｒｏｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｅｔａｌｉｏｎｓ（Ｆｅ２＋，Ｍｎ２＋，Ｐｂ２＋）ｏｎｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙａｎｄｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｓｅｍｅｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈ，ＰａｒｔＡ，２００１，６２（４）：２５９-２６７．［１３］Ｍ?魣ＲＩ?魣ＮＴ，ＫＲＡＳＺＮＡＩＺ，ＢＡＬＫＡＹＬ，ｅｔａｌ．ＲｏｌｅｏｆｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｎｄｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐＨｉｎｃａｒｐｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙａｎｄｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｂｙｈｙｐｅｒｏｓｍｏｓｉｓｏｆｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＮａ＋／Ｈ＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，１９９７，２７：３７４-３８２．［１４］ＥＡＴＯＮＪＷ，ＱＩＡＮＭ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｅｓｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｉｒｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙ［Ｊ］．ＦｒｅｅＲａｄｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ，２００２，３２（９）：８３３－８４０．［１５］ＦＯＲＥＳＴＩＥ，ＦＯＲＭＥＲＯＥ，ＬＥＳＣＩＩＧ，ｅｔａｌ．Ａｓｂｅｓｔｏｓｈｅａｌｔｈｈａｚａｒｄ：ＡｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃｓｔｕｄｙｏｆｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｅｏｉｎｓｐｉｒｅｄＦｅ－ｄｏｐｅｄｃｈｒｙｓｏｔｉｌｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨａｚａｒｄｏｕｓＭａｔｅｒｉａｌｓ，２００９，１６７（１-３）：１０７０-１０７９．［１６］ＭＥＮＥＧＨＩＮＩＲ．Ｉｒｏｎｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ａｎｄＤＮＡｄａｍａｇｅ［Ｊ］．ＦｒｅｅＲａｄｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ，１９９７，２３（５）：７８３-７９２．［１７］ＶＡＬＥＮＴＩＮＥＪＳ，ＷＥＲＴＺＤＬ，ＬＹＯＮＳＴＪ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｄａｒｋｓｉｄｅｏｆｄｉｏｘｙｇｅｎｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＣｈｅｍｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙ，１９９８，２（２）：２５３-２６２．［１８］刘时东．煤矿开采水污染调查与控制对策［Ｊ］．环境保护，２０１０（９）：４９－５０．。