一般生殖毒性试验方法原则

受试动物：多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔 剂量分组：一般设立三个剂量组和两个对照组 高剂量组产生轻微毒性症状，但其死亡率不大于 10% ，也 不能完全丧失生育能力。相当于1/10LD50。 低剂量组则不应产生任何可观察到的损害效应。相当于高 剂量组的1/30。 中剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。 如果 1000mg/kg 体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂 量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利 影响，则可不进行其他剂量实验。
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染毒途径:动物接触受试物的方法应参照人类实际接触途径。 交配前雄性动物应染毒4-10周，雌性动物2周 一般可混入饲料或饮水中，也可采用灌胃或胶囊法。

动物:至少采用一种动物，推荐用大鼠；每组雌雄各 20只； 雌性动物妊娠13-15天处死，雄性交配成功处死。
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评价方法
1. 雄性生殖毒性评价（动物试验）

过去半个世纪震惊全球的系列中毒或灾难事件的发生， 在世界范围内提高了人们对用药的安全意识，高度关注 新的化学物对生殖内分泌系统或妊娠结局的不良影响， 促进了与生殖内分泌系统安全相关法律的产生和研究方 法指南的问世。

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一、生殖毒性表现
外源化学物对生殖的过程的损害作用可以 表现为性淡漠，性无能或各种形式的性功能减 退。雌性可出现排卵规律改变，月经失调或失 经，卵巢萎缩，受孕减少，胚胎死亡，生殖能 力的降低不孕或不育等。雄性可表现为睾丸萎 缩或坏死，精子数目减少。
21 天断乳后给予受 试物8到12周
F ２a
观察三个月，喂饲普通饲料， 观察其生长发育情况
F ２b
21 天 断 乳 后 给 予 受 试 物8 到12 周
F ３a
F ３b
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两代一窝(和一代一窝)生殖试验
出生第８周给予受试物（F０）
第１６-１９周 雌雄交配 F１（每窝选留幼仔８只，雌雄各半） 断奶，给予受试物 F１交配 F２出生，每窝留８只幼仔 F２断奶，检查发育情况

神经系统对内分泌功能也有调节作用，通过下 丘脑-垂体-睾丸轴(下丘脑-垂体-卵巢轴)两条 途径作用于生殖发育过程 。
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外源化学物对生殖发育损害作用的特点

生殖发育过程较机体其他系统更为敏感； 外源化学物对生殖发育过程影响的范围较为广 泛和深远。不仅直接涉及雌雄两性个体，同时 还对其第二代甚至以后世代的个体产生影响。
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Ⅰ段：生育力和早期胚胎发育毒性试验 （一般生殖毒性试验）
目的：评价受试物对配子成熟、交配行为、生育力、胚 胎着床的影响（前述生殖周期的A和B阶段）。
给药期：雄性从交配前4周开始染毒，并持续至交配成功
；雌性交配前2周开始染毒（以覆盖3～4个动情周期），
至妊娠第6天受精卵着床。
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一般生殖毒性试验方法原则
精子生成分析（精子计数、形态学及其活率） 精子功能检测 睾丸标志酶活性检测 交配实验 显性致死试验
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2. 雌性生殖毒性评价

三代两窝
F０
第一次交配 第二次交配
（断奶或出生8 周） 给予受试物 8 到12 周
F １a
观察三个月，喂饲普通饲料， 观察其生长发育情况
F １b
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三段生殖毒性试验
主要是根据发育阶段的区别来设计的，每一段试验 大致相当于上述两个阶段。
Ⅰ段：生育力和早期胚胎发育毒性试验（一般生殖毒性试验） 主要反映妊娠前及妊娠初期的情况
Ⅱ段：肧体-胎体毒性试验（致畸试验）
Ⅲ段：出生前后发育毒性试验（围生期毒性试验） 反映外源化合物对胚胎发育后期、母代分娩过程、 哺乳期的影响。
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第二节 生殖毒性及其评价


生殖毒性的表现
生殖毒性的评价方法
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1950年美国霍普金斯大学医院发现，怀孕期间服用黄 体酮，先后有600多名女婴出现生殖器男性化畸形 。

1956年用于治疗妊娠反应的反应停，1961年后出现近 万例短肢畸形儿(海豹畸形)。

二恶英(TCDD)造成的大面积污染及其与人群生殖危害 的关系至今仍不清楚 。
第八讲 生殖发育毒性及其 试验与评价方法
第一节 概 述

哺乳动物的生育繁殖过程
外源化学物对生殖发育的影响
外源化学物对生殖发育损害作用的特点
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哺乳动物的生育繁殖过程
生殖发育是哺乳动物繁衍种族的生理过程， 其中包含生殖细胞发生（即精子发生和卵细胞 发生）、配子的释放、性周期和性行为、卵细 胞受精、受精卵的卵裂、胚泡的形成、植入或 着床、胚胎形成、胚胎发育、器官发生（或称 器官形成）、胎仔发育、分娩和哺乳过程。
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对雄性生殖系统的毒作用
直接损伤睾丸中的细胞群 继发性的影响精子发生 对wenku.baidu.com子发生的有害作用
改变下丘脑-垂体功能
直接影响睾丸细胞功能
• 精子生成障碍 • 性欲异常，丧失生育能力 • 引起生殖细胞突变，造成可遗传损害
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对雌性生殖系统的毒作用
对卵巢的损害：卵母细胞数下降/突变；
生长卵泡和成熟卵泡降低，排卵抑制，受孕力下降； 干扰卵巢内分泌，影响受精/着床/胚胎发育
E.从出生到断乳：检查成年雌性生殖功能、新生仔对宫外生活 的适应性、断乳前的发育与生长。 F.从断乳到性成熟：检查断乳后的发育与生长、对独立生活的 适应、达到完全的性功能。
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外源化学物对生殖发育的影响

干扰生殖发育的任何环节，并造成损害作用。 可以通过对内分泌系统，特别是对性腺的作用， 发生间接的影响。
生殖发育也可称繁殖过程。
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连续、完整的生殖发育过程的六个阶段
A.从交配前到受孕：检查成年雄性和雌性生殖功能、配子的发 育与成熟、交配行为、受精。 B.从受孕到着床：检查成年雌性生殖功能、胚胎着床前发育、 着床。 C.从着床到硬腭闭合：检查成年雌性生殖功能、肧体发育、主 要器官形成。 D.从硬腭闭合到妊娠结束：检查成年雌性生殖功能、胎体的发 育与生长、器官的发育与生长。
生殖道的损害：影响运送卵子/受精/受精卵发育
对下丘脑-垂体系统的损害：闭经，受孕力降低。
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二、生殖毒性的评价


是检查外源化学物对动物生育繁殖机能有无 损害作用的试验。 评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受 孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子 代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳 哺育（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。