薄层色谱标准操作规程

依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求

目的：建立一个薄层色谱鉴别的标准操作规程

范围：各种检验中薄层鉴别的操作

1．定义：薄层色谱法，系将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料板或铝基片上，成一均匀薄层，经点样、展开与显示以后，再与适宜的对照物质按同法所得的色谱图作对比,用于进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。

2．仪器与材料

2.1 展开室：可选用适合薄层板大小的玻璃缸,并有严密的盖子、底部平整。必要时在展开槽盖处可涂抹少量凡士林增加密闭性，但需注意勿沾污薄层板或溶入展开剂。

2.2 玻璃板：除另有规定外,用5cm×20cm、10cm×20cm或20cm×20cm的规格。也可用载玻片进行预试验。各种薄层板要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

玻璃板的质量有一定要求，厚度为2mm或3~4mm，预制板一般使用1mm的玻璃板。应有良好的平面性，可用镜面玻璃或浮法玻璃，还应有一定的耐热性，以使在烘烤时不致破裂。

2.3 涂布器：有手工涂布器和自动涂布器(用于定量分析),均应能使吸附剂或载体在玻璃板上涂开层符合厚度要求的均匀薄层.

2.4 点样器：玻璃毛细管

2.5 吸附剂或载体首选为硅胶G、硅胶GF254.硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求为直径10~40μm。其比表面积可达约600m2/g。

由于硅胶的质量、颗粒大小、分布均匀程度直接影响分离度及检出限度。而且不同厂家生产的硅胶，其质量也有差别，甚至同一厂家生产的不同批号也会有分离效果不同的差

别。因此要使薄层分离的结果比较稳定，应严格控制硅胶质量。

3．薄层板的制备

薄层板分为无粘合剂(软板)和有粘合剂(硬板)两种.前者系将吸附剂直接放在洗净干燥的玻璃板一端,置涂布器上并调节好一定的涂布厚度,一般为0.25～0.5mm(供分析用).由于使用中易被分散,现多采用含有粘合剂的薄层板。

3.1 吸附剂(硅胶G)匀浆的制备

除另有规定外,将1份吸附剂和3份水在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后,备用。一般水应少些为好,以能调制成适当的稠度,使涂层均匀一致为度,这样制成的薄层板较紧密,分离效果好.

硅胶CMC板是取羧甲基纤维素钠粉(一般0.25%～0.75%)适量,加热煮沸溶解,放冷,备用.铺板时取其上清液使用。

3.2 铺板

3.2.1 倾注法

取适量调制的吸附剂浆,倒入准备好的玻璃板上,用洗净玻棒涂铺成一均匀的薄层再稍加振动,使整板薄层均匀.本法简便,但板面一致性差。

3.2.2 平铺法

在水平台面上，依次放置适量的玻璃板，另在玻璃板两边加上玻璃条做成框边（框边的厚度稍高于中间玻璃板约0.25～1mm）,然后将吸附剂匀浆倒入中间玻璃板上,用有机玻璃板或玻璃棒向一定方向均匀地将吸附剂刮平,再逐片轻轻振动,使整板薄层均匀.本法可以一次平铺多块薄层板,简便易行,缺点同上,上述两种方法制成的薄层板,只适用一般定性分离。

3.2.3 涂铺器法

取适量调制的吸附剂匀浆,倒入涂布器中,在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2～0.3mm),取下涂好薄层的玻璃板于室温下,置水平台上晾干,即得。

用涂布器制备薄层时涂布器移动的速度会影响薄层的厚度.移动快薄层就薄,反之则厚。因此操作者需要熟练掌握移动的速度.此外,薄层的厚度与水的比例、匀浆稠度等有关。本法可一次铺成几块薄层板，且分离效果和重现性好，可用于定量分离。

3.3 薄层的干燥(活化)

涂布好的薄层板应先平置于室温晾干,然后再在110℃烘0.5h.立即置有干燥剂的干燥箱中,备用.使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。

涂布后的薄层不可立即进行干燥,否则表面易产生凹点.烘干的温度和时间对薄层板的活度有关，应严格控制.烘好的薄层板保持时间不宜太长，最好随用随制。

4．检定方法

4.1 点样

用点样器(一般用平头微量注射器)点样于薄层板上,速度应平稳,点样原点的大小对最后色点面积影响较大,必须减少原点样品向深层扩散,使原点集中,一般为圆点,直径2~4mm的范围,可根据各品种的点样量进行选择,防止造成原点"超载"或使展开时产生"绕行"现象,会使斑点拖尾或重叠.点样量一般不超过10μL(在空气中点样以不超过10min为宜).点样基线距底边约2.0cm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为度.点样时必需注意勿损伤薄层表面。

4.2 展开

4.2.1 展开室如需预先用展开剂饱和,可在室中加入足够量的展开剂,并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封展开室的盖，使系统平衡。

4.2.2 由于对饱和的要求不同,如有的需用展开剂将展开室饱和,有的需将薄层板置展开室中先一并用展开剂饱和,有的需先用一种溶剂饱和后,再用展开剂展开,有的可不必饱和等,故需按各品种要求操作,避免产生"边缘效应"。

4.2.3 将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中),密封室盖,待展开至规定距离(一般为10～15cm),取出薄层板,晾干,按各品种项下的规定检测。

4.2.4 常用上行法展开,此外,也可使用下行展开法,径向展开法、单向多次展开法、双向展开法等。

4.3 显色

展开后的薄层板须将溶剂挥尽后,按各品种项下规定条件显色.但本法可采用具腐蚀性试剂如硫酸等喷雾显色.无粘合剂薄层板,宜采用湿态显色等.所用喷雾器应不为试液腐蚀并能将试液均匀喷雾。

5．结果判定：

除另有规定外,薄层色谱法鉴别可在薄层板上进行对比的方法.供试品在色谱中所显主

斑点的颜色(或荧光)与位置,应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。